锁阳对大鼠肝纤维化干预作用的实验研究

目的：观察锁阳对四氯化碳（CCl4）诱导的大鼠肝纤维化模型的预防及逆转作用。方法将SD大鼠按照随机数字表法分为正常对照组、模型组、锁阳干预Ⅰ组、锁阳干预Ⅱ组和锁阳对照组5组,每组各10只。CCl4与花生油混合液造模,根据分组在不同时间给予锁阳灌胃。实验结束后,取血清和肝组织,检测血清肝功能,HE染色和M asson染色,观察肝组织病理改变,流式细胞仪测大鼠血浆 CD3＋、CD4＋和CD8＋水平。结果模型组大鼠肝组织纤维化分级主要以＋＋＋＋级为主,锁阳干预Ⅰ组分级主要以＋＋、＋＋＋级为主,锁阳干预Ⅱ组分级主要以＋、＋＋为主。与正常对照组比较,模型组大鼠血清AST、ALT活性明显升高,CD3＋、CD4＋水平降低,CD8＋水平升高,肝脏指数升高。与模型组相比,锁阳干预Ⅰ组大鼠血清中ALT活性降低,CD3＋、CD4＋水平升高,CD8＋水平降低;锁阳干预Ⅱ组中大鼠血清中AST、ALT活性明显降低,CD3＋水平升高,CD8＋水平降低;两组大鼠肝脏指数均降低,差异均有统计学意义（P＜0．05）。结论锁阳对肝纤维化有一定的预防和逆转作用,同时能影响肝纤维化大鼠外周血T淋巴细胞亚群,在一定程度上拮抗免疫功能低下。     

锁阳通过抑制炎症因子的表达对抗CCL4导致的小鼠肝纤维化

目的 初步探索中药锁阳的粗提取物对抗CCL4诱导的小鼠肝纤维化的效果和可能机制.方法 将C57BL/6J小鼠分为正常组、模型组、秋水仙碱组、锁阳低剂量组和锁阳高剂量组,正常组给予生理盐水,其余4个组给予橄榄油和CCL4混合物,按1∶3比例,4 mL/kg剂量腹腔注射,2次/周,直到第4周,复制肝纤维化模型,从第5周开始每组给予相应的药物至第6周,分别检测小鼠肝脏指数,血清中ALT、AST指标以及炎症因子TGF-β1、TNF-α、IL-1的表达,Masson染色观察小鼠肝脏病理学变化,最后用Image J软件,分析各组中肝纤维化程度.结果 相比正常组,模型组小鼠的肝脏指数增加,说明小鼠肝脏受到严重损伤;相比模型组,用药组小鼠的肝脏指数明显减轻,肝脏血清中AST、ALT的水平以及TGF-β1、TNF-α、IL-1的浓度均比模型组降低(P＜0.05);同时,相比锁阳低剂量组,锁阳高剂量组纤维化降低更明显.结论 中药锁阳粗提取物通过抑制炎症因子TGF-β1、TNF-α、IL-1的表达减弱了CCL4诱导的小鼠肝纤维化.     

化纤丸对肝纤维化大鼠模型的影响

目的探讨民间验方化纤丸对CCL。所致肝纤维化大鼠模型的保护及治疗作用。方法用40％CCL。制备大鼠纤维化模型,应用不同剂量化纤丸进行干预,分别于第4、8w末观察其肝功能指标及肝纤维化指标的变化。用大黄蛰虫丸作对照研究。结果与模型组比较,4w末高剂量治疗组大鼠CIV明显降低（P〈0．05）,高、中、低剂量治疗组大鼠LN、HA均显著降低（P〈0．01或P〈0．05）;与模型组比较,8W末低剂量治疗组大鼠PCHI显著降低（P〈0．01）,LN、HA明显降低（P〈0．05）,高、中、低剂量治疗组大鼠CIV明显降低（P〈0．05）。结论化纤丸对CCL4所致的大鼠肝纤维化有明显干预和治疗作用。     

慢性肝病肝纤维化程度与周围血细胞计数的关系

目的探讨慢性肝病肝纤维化程度与周围血细胞计数的关系。方法对479例经病理确诊的慢性肝炎患者及112例临床诊断失代偿性肝硬化患者的周围血细胞计数进行统计分析,比较慢性肝炎纤维化程度分期(S0、S1、S2、S3、S4)及失代偿性肝硬化的周围血细胞计数,观察其与纤维化程度的关系。结果随纤维化程度的加重,周围血WBC、RBC、Hb及PLT计数逐渐降低,S1、S2组与S0组比较,P>0.05;S3、S4组与S1、S2组比较,P<0.001及P<0.05,肝硬化组与S3、S4组比较,P<0.001。轻度纤维化(S1、S2)时,周围血细胞计数无明显降低,显著纤维组织增生(S3、S4)及早期肝硬化时,周围血细胞计数可明显降低,特别是失代偿性肝硬化,周围血细胞计数降低更明显。结论脾功能亢进致周围血细胞计数减少与肝纤维化程度密切相关,肝硬化脾功能亢进的发生是一个渐进的过程。     

肝纤维化大鼠性激素的变化及己烯雌酚对大鼠肝纤维化影响的实验研究

目的：探讨肝纤维化大鼠性激素的变化及己烯雌酚对大鼠肝纤维化的影响，以期对肝纤维化的治疗提供一种新的途径。方法：Wistar大鼠按性别分为两大组，各大组随机分为空白对照组，肝纤维化模型组，已烯雌酚（DES）干预组。对照组：腹腔注射生理盐水（NS）0．5ml/只／次，2次／周，共12周；模型组：腹腔注射猪血清（PS）0．5ml/只／次，2次／周，共12周；干预组：腹腔注射猪血清0．5ml/只／次，2次／周，共12周，并于第9周始腹腔注射已烯雌酚1．2mg/kg／次，2次／周，共4周。于12周末处死全部实验动物，留血清采用放射免疫法检测各组大鼠血清性激素（雌二醇、睾酮、孕酮)水平及透明质酸（HA）、Ⅲ型前胶原（PCⅢ）、Ⅳ型胶原（Ⅳ-c）、层粘连蛋白（LN）等纤维化指标；取肝组织进行HE染色、Masson染以及I、Ⅲ型胶原的免疫组化染色，对肝纤维化进行病理分期，对免疫组化结果进行半定量分析。结果：肝纤维化模型组的纤维化程度明显较空白对照组为重（P＜0．05），DES干预组的纤维化程度与肝纤维化模型组比较明显减轻（P＜0．05）。此外，肝纤维化模型组的雌二醇（E2）、睾酮（T）浓度较空白对照组明显下降（P＜0．05），孕酮（P）的浓度无明显改变（P＞0．05）。E2、T、P三者与肝纤维化指标（I、Ⅲ型胶原的免疫组化）间的直线相关系数无显著性（P＞0．05）。结论：一定量的雌激素具有抑制肝纤维化进展的作用。肝纤维化时，血清雌二醇、睾酮的浓度是下降的，孕酮的浓度无明显改变。血清雌二醇、睾酮、孕酮浓度与肝纤维化程度间未发现直线相关关系。     

外源性硫化氢对大鼠肝纤维化的影响

目的探讨外源性硫化氢对四氯化碳(CCl4)诱导大鼠肝纤维化的预防作用。方法将24只Wistar雄性大鼠随机分为3组,每组8只,即正常对照组、模型组、硫化氢(H2S)预防组。H2S预防组除腹腔注射40%CCl4外,还给予NaHS腹腔注射,1次/d,至第8周,所有大鼠均被处死,收集大鼠血液,检测肝纤维化指标;取肝组织检测脂质过氧化指标及观察肝脏病理变化;应用RT-PCR和Western blot方法检测肝组织NF-κB的表达。结果外源性H2S能降低血清HA、LN、PCⅢ及肝组织MDA含量(P<0.01或P<0.05),增加肝组织SOD、GSH-Px活性(P<0.01),减轻肝纤维化程度(P<0.05),而且能使NF-κB表达明显减少。结论外源性硫化氢对CCl4诱导的大鼠肝纤维化具有保护作用,其机制可能与硫化氢抑制NF-κB表达有关。     

硒对实验性大鼠肝纤维化的影响

目的:观察不同剂量补硒对大鼠血清硒含量及实验性肝纤维化的影响。方法:将Wistar大鼠50只分为正常对照组、四氯化碳(CCl4)模型组、高糖组、补硒高剂量组和低剂量组,后4组动物每只给CCl4油溶液0.15ml腹腔内注射2次/周,共注射6周;后3组大鼠分别给予高糖、葡萄糖酸硒,观察每一种情况对大鼠血清硒含量、肝功能和肝纤维化形成过程产生的影响。结果:实验3周和6周时,补硒组和模型组及高糖组血清ALT均增高,各组间差异不明显,但补硒组AST均明显降低,与模型组及高糖组比较有较明显差异(P<0.05或P<0.01),补硒组大鼠血清硒含量在6周时均较模型组明显增高(P<0.01),维持在正常水平,并对大鼠肝纤维化有一定的抑制作用,但两个剂量组间未见明显差异,高糖使大鼠的体重明显增加,未见大鼠肝纤维化的改善。结论:补硒对肝损伤动物血清硒及肝纤维化的影响表现在后期,采用低剂量较长期的补硒方法可能有效安全。     

中药肝力克对实验性大鼠肝纤维化的影响

目的：观察中药肝力克对实验性肝纤维化大鼠肝组织炎症活动度和肝纤维化的影响。方法：大鼠随机分成正常对照组和遣模组。造模组大鼠予40％CCl4皮下注射。造模结束后，将造模组大鼠随机分为肝纤维化模型组，肝力克大、中、小剂量组及秋水仙碱组，并给予不同剂量的药物灌胃治疗，实验结束后处死大鼠，取肝组织常规HE染色，观察大鼠肝组织炎症活动度和肝纤维化程度。结果：肝纤维化模型组大鼠肝组织炎症活动度计分及肝纤维化程度计分均较正常对照组明显升高，差异有非常显著性意叉；用肝力克各剂量及秋水仙碱治疗后，大鼠肝组织炎症活动度及肝纤维化程度均明显降低，与肝纤维化模型组相比，差异有非常显著性和显著性意叉，其中尤以肝力克大剂量组炎症活动度降低最明显。结论：肝力克有明显减轻实验性肝维化大鼠肝组织炎症活动度及改善纤维化程度的作用。     

苦参碱对大鼠实验性肝纤维化的影响

目的：研究苦参碱对肝纤维化的防治作用及其机理。方法：应用四氯化碳诱导大鼠实验性肝纤维化，并以苦参碱防治。观察了３，６，１２周对照组、模型组、治疗组的血清丙氨酸转移酶（ＡＬＴ）、透明质酸（ＨＡ）、肝组织羟脯氨酸（ＨｙＰ）含量以及肝脏病理变化。结果：苦参碱５０ｍｇ／ｋｇ和１００ｍｇ／ｋｇ均能显著减轻肝细胞变性、坏死及纤维组织的形成，同时能降低不同实验阶段血清ＡＬＴ（Ｐ＜０．０１）、ＨＡ（Ｐ＜０．０１）以及肝组织中Ｈｙｐ含量（Ｐ＜０．０５）。结论：苦参碱有防治四氯化碳诱发的肝纤维化的作用。     

大鼠酒精性肝纤维化模型的构建

目的：探索简便、经济的大鼠酒精性肝纤维化造模方法。方法：33只大鼠随机分为2组。模型组予酒精灌胃，于实验的第4、12、24周末分批采血，以测定生化指标，后行放血法处死。将取出的肝脏进行常规切片、HE染色及Masson三色胶原染色后行病理学观察。正常对照组以等量饮用水代替酒精灌胃，于实验第24周末处死，处理同模型组。结果：于实验第24周时观察到了除酒精性肝硬化外酒精性肝病的各种病理表现，并且随着酒精刺激时间的延长肝纤维化程度逐渐加重。结论：应用酒精灌胃法可成功复制大鼠酒精性肝纤维化模型，该方法简便、经济。     

逍遥散对肝纤维化大鼠肝脏保护作用的研究

目的观察逍遥散对胆管结扎致肝纤维化大鼠肝功能及肝纤维化指标的影响。方法采用胆管结扎法复制肝纤维化大鼠病理模型,各组大鼠分别以生理盐水、阳性对照药、低剂量逍遥散、高剂量逍遥散进行干预,测定各组大鼠血清ALT、AST、TBIL、HA、PCIU、LN、Ⅳ—C水平。结果肝纤维化模型组大鼠血清ATJT、AST、TBIL、HA、PCⅢ、LN、Ⅳ—C水平均显著高于假手术组（P〈0．05）;阳性对照药组、逍遥散高剂量组大鼠血清ALT、AST、TBIL、HA、PCⅢ、LN、Ⅳ—C水平均显著低于肝纤维化模型组（P〈0．05）。结论逍遥散对胆管结扎致肝纤维化大鼠肝功能具有一定程度的保护作用,对肝纤维化具有一定的防治作用。     

灵甲方对血瘀型肝纤维化大鼠骨桥蛋白的干预研究

目的：了解灵甲方对血瘀型肝纤维化动物模型的防治肝纤维化作用,从OPN、PAI-1的蛋白表达层面探索其防治肝纤维化的机理。方法：将Wistar大鼠共70只,随机分为4组：正常对照组、灵甲方组、复方鳖甲软肝片组、血瘀组。除正常对照组外,其余3组均采用腹腔注射DMN同时尾静脉注射小牛血清白蛋白和去甲肾上腺素的方法,复制血瘀型肝纤维化大鼠模型共4周。4周后灵甲方组以灵甲方灌胃,每天1次,共治疗8周。复方鳖甲软肝片对照组4周后以复方鳖甲软肝片灌胃,每天1次,共治疗8周。8周结束后,取血检测ALT、AST、Alb、Glb;取肝组织,用Western blot检测OPN与PAI-1的蛋白表达。结果：与血瘀组比,灵甲方及复方鳖甲软肝片治疗后大鼠的ALT明显降低（P〈0.05）,且灵甲方组的AST较血瘀组降低明显（P〈0.01）;与血瘀组比,灵甲方治疗后大鼠的体重明显增加（P〈0.01）,复方鳖甲软肝片治疗后大鼠的体重亦有增加（P〈0.05）;与血瘀组比,灵甲方治疗后肝体比比值显著增高（P〈0.01）,脾体比比值降低（P〈0.05）,且灵甲方组较复方鳖甲软肝片治疗组在治疗后肝体比比值增加更明显（P〈0.05）。灵甲方治疗后OPN及PAI-1的蛋白表达水平均较血瘀组显著降低（P〈0.01）,灵甲方较复方鳖甲软肝片对OPN表达的抑制作用更强,差别有统计学意义（P〈0.05）。结论：灵甲方可能通过抑制OPN的表达间接降低PAI-1的蛋白表达水平,所以表现为对PAI-1蛋白表达水平的降低幅度较OPN大,从而使PAI-1对细胞外基质降解的抑制作用减弱,增加细胞外基质的降解,发挥抗纤维化作用。     

灵甲方对血瘀型肝纤维化大鼠骨桥蛋白的干预研究

目的:了解灵甲方对血瘀型肝纤维化动物模型的防治肝纤维化作用,从OPN、PAI-1的蛋白表达层面探索其防治肝纤维化的机理。方法:将Wistar大鼠共70只,随机分为4组:正常对照组、灵甲方组、复方鳖甲软肝片组、血瘀组。除正常对照组外,其余3组均采用腹腔注射DMN同时尾静脉注射小牛血清白蛋白和去甲肾上腺素的方法,复制血瘀型肝纤维化大鼠模型共4周。4周后灵甲方组以灵甲方灌胃,每天1次,共治疗8周。复方鳖甲软肝片对照组4周后以复方鳖甲软肝片灌胃,每天1次,共治疗8周。8周结束后,取血检测ALT、AST、Alb、Glb;取肝组织,用Western blot检测OPN与PAI-1的蛋白表达。结果:与血瘀组比,灵甲方及复方鳖甲软肝片治疗后大鼠的ALT明显降低(P<0.05),且灵甲方组的AST较血瘀组降低明显(P<0.01);与血瘀组比,灵甲方治疗后大鼠的体重明显增加(P<0.01),复方鳖甲软肝片治疗后大鼠的体重亦有增加(P<0.05);与血瘀组比,灵甲方治疗后肝体比比值显著增高(P<0.01),脾体比比值降低(P<0.05),且灵甲方组较复方鳖甲软肝片治疗组在治疗后肝体比比值增加更明显(P<0.05)。灵甲方治疗后OPN及PAI-1的蛋白表达水平均较血瘀组显著降低(P<0.01),灵甲方较复方鳖甲软肝片对OPN表达的抑制作用更强,差别有统计学意义(P<0.05)。结论:灵甲方可能通过抑制OPN的表达间接降低PAI-1的蛋白表达水平,所以表现为对PAI-1蛋白表达水平的降低幅度较OPN大,从而使PAI-1对细胞外基质降解的抑制作用减弱,增加细胞外基质的降解,发挥抗纤维化作用。     

肝豆灵对铜负荷肝纤维化大鼠肝星状细胞凋亡的影响

目的观察肝豆灵对铜负荷肝纤维化大鼠肝星状细胞(hepatic stellate cells,HSC)凋亡的影响,探讨肝豆灵防治Wilson病肝纤维化的作用机制。方法将75只大鼠分成空白组、模型组、肝豆灵组、青霉胺组及肝豆灵+青霉胺组,采用喂食硫酸铜饮食复制铜负荷大鼠模型,采用TUNEL法检测HSC的凋亡。结果模型组可见大量HSC增生;与模型组比较,各治疗组HSC数量显著降低(P0.01),HSC凋亡指数显著升高(P0.01);肝豆灵+青霉胺组AI显著高于肝豆灵组和青霉胺组(P0.01)。讨论肝豆灵可促进铜负荷大鼠HSC的凋亡,其与青霉胺联合用药的作用更显著。     

软肝饮对免疫性肝纤维化大鼠胶原代谢水平的影响

目的：建立大鼠免疫损伤性肝纤维化的实验模型,研究中药复方软肝饮对血清层粘;连蛋白(Laminin,LN)、透明质酸(Hyaluronic acid,HA)、血清Ⅲ型前胶原(Precollagen typeⅢ,PCⅢ)、肝脏羟脯氨酸(Hydroxyproline,Hyp)含量的影响,探讨其抗肝纤维化的作用机制。方法：在以人血白蛋白(HSA)诱导的免疫损伤性肝纤维化大鼠模型基础上,软肝饮小剂量(1g／kg),大剂量(2g／kg)灌胃给药,连续8周,以鳖甲软肝片和秋水仙碱为阳性对照药;放射性免疫方法测定大鼠血清中HA、LN、PCⅢ含量;化学法测定肝脏羟脯氨酸含量。结果：软肝饮两个剂量组可明显降低HSA诱导免疫性肝纤维化大鼠模型血清中HA、LN、PCⅢ的含量,同时可降低大鼠肝脏中羟脯氨酸的含量。结论：软肝饮通过对肝脏胶原物质代谢的影响而产生抗肝纤维化的治疗作用。     

枳椇子对CCl4大鼠肝纤维化预防肝组织病理变化的影响

目的 :研究枳子提取物对四氯化碳 (CCl4)诱导的实验性肝纤维化的预防作用。方法 :用CCl4制备大鼠肝纤维化模型 ,分别取组织于光镜电镜下观察。结果 :模型组肝细胞大量坏死 ,汇管区炎性细胞浸润 ,假小叶形成。线粒体肿胀 ,膜不清晰 ,嵴消失 ,内质网扩张明显 ,溶酶体减少。预防组能减轻纤维化时 ,肝细胞的变性坏死及炎性细胞浸润 ,使线粒体膜及嵴恢复 ,减少内质网扩张 ,促进细胞再生 ,阻滞纤维化的发生发展。结论 :枳子具有明确抗纤维化作用 ,4 2 9g生药 /kg预防效果佳。其机理可能与减轻有毒物质对肝细胞的损伤 ,拮抗细胞脂质过氧化 ,稳定细胞膜有关。     

高血糖、肝星状细胞与肝纤维化

近年来,很多临床回顾性资料证实了糖尿病与肝纤维化有关联。肝纤维化或肝硬化后胰岛素抵抗与肝细胞损伤是肝源性糖尿病的主要发生机制;而高血糖作为糖尿病的重要表现能促进肝纤维化的发生及加重肝纤维化,其机制可能与高血糖致肝星状细胞的激活和增殖等相关。从分子水平阐明糖尿病相关性肝纤维化的发病机制,有望为临床控制及减少糖尿病相关性肝纤维化提供新的思路和方法。     

肝星形细胞凋亡机制的最新进展

慢性肝病是全球重要死因之一,各种致病因素所致慢性肝损伤均可引起肝纤维化。近年来临床和实验数据均显示肝纤维化甚至肝硬化均可通过肝星形细胞(HSC)的凋亡而得以逆转,因此,阐明肝星形细胞凋亡的分子机制成为发展抗纤维化药物的重要途径之一。肝星形细胞的凋亡受多种因素调控,包括生长因子及其受体、自然杀伤细胞、细胞外基质组分、神经内分泌通路、药物制剂以及翻译后修饰均可影响肝星形细胞的凋亡。在此就各相关因素进行综述。