SH2-Bβ抗体对哮喘小鼠肺及初级传人神经元SH2-Bβ表达的调节作用

目的：探讨SH2-Bβ在哮喘发病中的作用。方法：用卵蛋白致敏致喘的方法制备BALB／c小鼠哮喘模型。应用免疫组织化学方法和免疫印记法（Western blot）观察SH2-Bβ在哮喘小鼠下呼吸道及内脏感觉传入部位的表达及应用SH2-Bβ抗体后SH2-Bβ水平的变化，Metamoph图象分析系统对结果进行分析。结果：免疫组织化学结果显示哮喘小鼠肺、C7-T5节段脊神经节及对应的脊髓后角SH2-Bβ免疫阳性产物平均光密度值分别为0．806±0．023、0．766±0．018、0．547±0．014，明显高于对照组（0．243±0．018、0．131±0．011、0．215±0．029）（P〈0．01）。而应用SH2-Bβ抗体组相应部位的平均光密度值分别为（0．252±0．015、0．158±0．012、0．251±0．024）明显低于哮喘组（P〈0．01）。Western blot结果显示：哮喘组肺及C7-T5节段脊髓后角SH2-Bβ与β—actin MOD值的比（2．512±0．021，2．615±0．022）明显高于对照组（0．675±0．019，0．712±0．018）（P〈0．01），而应用SH2-Bβ抗体组相应部位的比值（0．969±0．023，1．023±0．022）明显低于哮喘组（P〈0．01）。结论：肺内、C7-T5脊神经节及对应脊髓后角神经元的SH2-Bβ参与哮喘的发病过程，anti—SH2-Bβ可下调SH2-Bβ的表达，减轻肺部炎症。     

经鼻应用SH2-Bβ抗体可抑制高脂饮食小鼠体质量增长

目的 探讨经鼻应用SH2-Bβ抗体对高脂饮食小鼠体质量的影响.方法 采用8周C57BL/6小鼠随机分为正常组、肥胖组和SH2-Bβ抗体(1:50)干预组,每组12只.测量每日摄食量及每周体质量变化,应用Western blot检测SH2-Bβ在各组小鼠下丘脑和肝的表达,HE染色观察肝的组织学改变.免疫组织化学染色检测肾SH2-Bβ表达,并观察其病理改变.结果 肥胖组小鼠摄食量和体质量明显高于SH2-Bβ抗体干预组和正常组(P＜0.05).Western blot检测结果显示,肥胖组小鼠SH2-Bβ蛋白在下丘脑表达下调,明显低于SH2-Bβ抗体干预组和正常组(P＜0.05);而在肝组织表达上调,明显高于SH2-Bβ抗体干预组和正常组(P＜0.05).肝组织HE染色结果显示,SH2-Bβ抗体干预组与肥胖组相比,肝细胞索排列整齐,肝细胞脂肪变性减轻,脂滴变小,炎性细胞减少.肾组织免疫组织化学染色结果显示,肥胖组小鼠SH2-Bβ蛋白在肾组织表达上调,明显高于SH2-Bβ抗体干预组和正常组(P＜0.05).炎性细胞浸润明显.结论 经鼻应用SH2-Bβ抗体可使高脂饮食小鼠下丘脑内SH2-Bβ表达上调,降低摄食量而降低体质量;肝肾组织SH2-Bβ表达下调,使肝肾脂肪沉积减轻,进而减轻脂肪沉积所致的组织炎症或损伤.这表明SH2-Bβ经中枢通过调节进食量,在周围组织通过改变脂肪沉积量而对体质量进行调节.     

SH2-B在结肠癌组织中表达及临床意义

目的 探讨SH2-B在结肠癌癌变过程中的演变规律,分析SH2-B表达与结肠癌临床分期的关系,分析SH2-B表达与结肠癌转移的关系.方法 免疫组织化学方法检测69例结肠癌组织、27例结肠腺瘤组织、29例结肠息肉组织中SH2-B蛋白的表达.69例结肠癌患者I期11例、Ⅱ期22例、Ⅲ期19例、Ⅳ期17例,其中无转移34例,淋巴节转移35例.结果 免疫组织化学检测结果显示,SH2-B蛋白在结肠息肉组织、结肠腺瘤组织、结肠癌组织中的表达呈浆-核型,以胞浆为主.结肠息肉患者SH2-B阳性率为31%(9/29),结肠腺瘤患者SH2-B阳性率为52%(14/27),结肠癌患者SH2-B阳性率为93%(27/29).结肠癌组织中SH2-B的阳性细胞率(0.64±0.26)明显高于结肠腺瘤组织(0.26±0.27)和结肠息肉组织(0.12±0.21)(P<0.001),结肠腺瘤组织中阳性细胞表达率明显高于结肠息肉组织(P<0.05).结肠癌Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ和Ⅳ期强阳性率分别为18.2%(2/11)、45.4%(10/22)、57.9%(11/19)和82.3%(14/17).转移组和非转移组强阳性率为45.7%(16/35)和23.5%(8/34),转移组SH2-B强阳性率显著高于无转移组(P<0.05).结论 SH2-B过表达可能参与了结肠癌癌变过程,可能是结肠癌变的早期事件.SH2-B表达与结肠临床分期有关.SH2-B可能参与了结肠癌转移,SH2-B高表达与结肠癌转移呈正相关.     

干扰素γ对哮喘小鼠肺组织中水通道蛋白5表达的影响

目的:观察干扰素γ(IFN-γ)对哮喘小鼠肺组织中水通道蛋白5(AQP5)表达的影响.方法:24只清洁级BALB/C小鼠随机分为对照组、哮喘组和IFN-γ组,每组8只,后2组制作哮喘模型,IFN-γ组用IFN-γ治疗.采用免疫组织化学法检测肺组织中AQP5蛋白的表达.结果:哮喘组肺组织AQP5蛋白相对表达量为(0.118 6±0.000 7),较对照组的(0.206 0±0.000 5)减低(P<0.01),IFN-γ治疗后AQP5蛋白相对表达量为(0.147 9±0.000 2),较哮喘组增加(P<0.01).结论:AQP5蛋白表达下调可能参与了哮喘发病时气道黏液分泌的调节,IFN-γ可上调AQP5蛋白的表达,在哮喘气道黏液分泌中起治疗作用.     

丙酸氟替卡松对哮喘小鼠气道重塑及TGF-β1表达的影响

目的:探讨丙酸氟替卡松对哮喘小鼠气道重塑的影响及其可能的作用机制.方法:将30只Balb/c小鼠随机分为哮喘组(A组),正常对照组(B组),丙酸氟替卡松治疗组(C组)3组,每组动物10只.A组小鼠于第1日及第15日以鸡卵白蛋白(OVA)致敏,从第1次致敏后第22日开始雾化吸入25g/L OVA激发并持续4 wk,建立哮喘气道重塑模型;B组用生理盐水以同样方法致敏并雾化吸入;C组于激发前30 min雾化吸入丙酸氟替卡松(0.17g/L),吸入时间每次10 min,其它程序与A组相同.制备小鼠肺组织病理切片,HE染色观察各组气道结构改变情况,采用医学图像分析软件测定支气管管壁厚度(WAt/Pbm),支气管平滑肌厚度(WAm/Pbm);肺组织石蜡切片行TGF-β1免疫组化染色后计算机图像分析测定其灰度值.结果:光镜下可见A组小支气管上皮细胞脱落、管壁炎症细胞浸润、杯状细胞增生、平滑肌增厚,而C组上述改变较A组明显减轻.与B组比较,A组支气管管壁厚度[(17.43±1.10)μm2/μm],平滑肌厚度[(6.58±1.16)μm2/μm]显著升高(P＜0.01);与A组比较,C组支气管管壁厚度[(14.06±1.20)μm2/μm],平滑肌厚度[(4.41±1.00)μm2/μm]显著降低(P＜0.01).与B组比较,A组TGF-β1的灰度值(66.18±1.53)显著降低(P＜0.01);与A组比较,C组丙酸氟替卡松干预后TGF-β1的灰度值(72.05±1.65)显著升高(P＜0.01).结论:吸入丙酸氟替卡松能有效防治哮喘小鼠气道重塑,可能的机制是丙酸氟替卡松通过下调TGF-β1的表达干预了气道重塑.     

β_2受体下调哮喘模型的构建研究

目的构建β2受体(β2R)下调哮喘动物模型,以研究β2R下调及其激素保护作用的机制。方法32只BALB/c小鼠随机分成对照组、哮喘组、β2R下调组和地塞米松组,每组8只。哮喘组、β2R下调组和地塞米松组分别于实验的第0、14和21d腹腔注射卵白蛋白(OVA)和氢氧化铝的混悬液200μL,第28d开始连续1周(30min/d)雾化吸入1%OVA(W/V)溶液;β2R下调组和地塞米松组在最后1周每天雾化吸入OVA之前腹腔注射60μg沙丁胺醇及雾化吸入0.01%沙丁胺醇30min;地塞米松组同时予以腹腔注射地塞米松5mg·kg-1.d-1,连续7d。对照组腹腔注射等量的磷酸盐缓冲液(PBS),以PBS雾化吸入。用体积描记箱测定各组小鼠气道阻力。测定BALF中白细胞总数和分类计数。ELISA法检测BALF中IL-4、IFN-γ以及血清总IgE浓度。提取小鼠肺组织总蛋白,免疫印迹实验测定β2R总量,放射配基结合实验测定β2膜受体数量。结果哮喘组、β2R下调组与对照组、地塞米松组比较,高剂量乙酰胆碱激发下的气道阻力明显增高(P0.01),BALF中嗜酸粒细胞、中性粒细胞和淋巴细胞明显增多(P0.01),BALF中IL-4和血清总IgE水平显著增高(P0.01),BALF中IFN-γ水平显著降低(P0.01)。β2R下调组肺组织β2R总量和β2膜受体数量均显著低于其余三组(P0.01),对照组、哮喘组、地塞米松组之间无显著差异。结论在传统的OVA致敏激发哮喘动物模型基础上,采用腹腔注射结合雾化吸入沙丁胺醇的方法成功构建了β2R下调的哮喘动物模型。地塞米松对β2R下调具有保护作用。     

锌对辣椒素致痛模型小鼠脊髓caspase-9表达的影响

目的研究锌对辣椒素致痛模型小鼠脊髓caspase-9表达的影响。方法 C57/BL6小鼠给予低锌或高锌预处理2 w后,利用足底注射辣椒素制备神经病理性疼痛的动物模型。应用免疫组织化学技术、免疫印迹技术和图像分析技术检测锌预处理对小鼠脊髓后角caspase-9表达的影响。结果正常喂养的小鼠注射辣椒素后,脊髓中的caspase-9蛋白表达显著增多,光密度值增加(P<0.01);高锌预处理能显著降低脊髓caspase-9蛋白的表达,光密度值降低;而低锌预处理组使脊髓caspase-9蛋白的表达增多,光密度增加(P<0.01)。结论锌能抑制NPP模型小鼠脊髓caspase-9蛋白的表达,锌可能参与了神经病理性疼痛的产生与传导。     

热毒宁注射液对哮喘大鼠肺组织病理改变及TRAF2表达的调控作用

目的:观察热毒宁注射液对哮喘大鼠肺组织肿瘤坏死因子受体相关因子(TRAF2)表达和病理改变的影响,并探讨其可能的作用机制。方法:SD大鼠27只随机分成哮喘组、对照组和热毒宁组,每组9只。哮喘组和热毒宁组建立大鼠哮喘模型,光镜下观察肺组织病理改变,免疫组织化学法检测肺组织TRAF2的表达。结果:HE染色显示哮喘组肺内支气管及血管壁周围见大量炎性细胞浸润、黏液腺增生,气道上皮断裂和脱落、黏液栓形成。热毒宁组炎性细胞数目较哮喘组明显减少,黏膜上皮增生不明显,支气管腔见较少的炎性分泌物,黏液腺增生不明显,未见黏液栓形成。免疫组化结果显示,哮喘组支气管壁TRAF2的光密度值(0.317±0.041)显著高于对照组(0.220±0.057)(P<0.01);热毒宁组支气管壁TRAF2的光密度值(0.291±0.019)与哮喘组相比差异无统计学意义(P>0.05),仍显著高于对照组(P<0.01)。结论:哮喘大鼠TRAF2的表达水平增强,其可能参与了哮喘的气道炎症过程。热毒宁能减轻哮喘大鼠气道炎症,可能不是通过TRAF2途径。     

辛伐他汀对哮喘气道重构小鼠肺组织TGF-β1表达的影响

目的:探讨辛伐他汀对哮喘气道重构小鼠肺组织转化生长因子-β1(TGF-β1)表达的影响。方法:采用随机分组的方法,将60只雌性SPF级BALB/C小鼠分为哮喘组、辛伐他汀组、对照组,每组20只。观察和比较各组小鼠肺组织和气管的病理改变,同时采用图像分析软件测量各组小鼠肺组织中支气管壁面积(WAi)、平滑肌层面积(WAm)和支气管基底膜周长(Pbm);使用Real time PCR和Western blot方法分别检测小鼠肺组织TGF-β1 mRNA和TGF-β1蛋白表达。结果:哮喘组小鼠肺组织病理改变程度最严重,辛伐他汀组病理改变程度虽高于对照组,但较哮喘组减轻;哮喘组小鼠支气管壁厚度及平滑肌层厚度高于辛伐他汀组和对照组;哮喘组小鼠肺组织TGF-β1 mRNA水平高于辛伐他汀组和对照组,哮喘组小鼠肺组织TGF-β1蛋白水平高于辛伐他汀组和对照组,差异均有统计学意义。结论:辛伐他汀可能通过减少肺组织TGF-β1表达而抑制哮喘气道重构。     

T-bet重组腺病毒调节哮喘小鼠辅助性T细胞1型/2型免疫平衡

目的研究静脉注射T-bet重组腺病毒(AdT-bet)对小鼠哮喘模型过敏性气道炎症及辅助性T细胞1型/2型(Th1/Th2)免疫失衡的影响。方法随机将36只C57BL/6小鼠分为AdT-bet治疗(A)组、模型对照(B)组、正常对照(C)组。以卵蛋白、氢氧化铝免疫建立哮喘模型,A组激发前尾静脉注射1×10~8 pfu/100μL的AdT-bet,各组激发后进行肺泡灌洗分析细胞组分,分离肺T淋巴细胞测定细胞因子分泌水平,以流式细胞仪检测CD3~ 、CD4~ T细胞比例及表达γ-干扰素(IFN-γ)和白细胞介素(IL)-4、IL-5的比例,比较各组肺组织学改变。结果A组与B组相比:①明显抑制抗原激发后气道内嗜酸性粒细胞的浸润(0.004±0.003比0.221±0.067,P<0.01);②明显抑制肺T淋巴细胞产生IL-4[(22±12)pg/mL比(170±28)pg/mL]、IL-5[(16±13)pg/mL比(330±30)pg/mL],增加了IFN-γ[(2100±360)pg/mL比(60±50)pg/mL]的产生,差异均有统计学意义(P值均<0.01);③肺T淋巴细胞CD4~ IFN-γ%及IFN-γ~ /IL-4~ 明显升高(P值均<0.01),而CD4~ IL-4~ %明显下降(P<0.01);④明显抑制哮喘鼠气道内及肺泡内的过敏性炎症反应。结论激发前静脉应用AdT-bet对哮喘小鼠过敏性气道炎症有明显的防治作用,其机制可能与表达的T-bet上调Th1/Th2比值,从而调整了免疫平衡有关。     

β2-AR减敏哮喘小鼠模型的建立及验证

目的：建立β₂-AR减敏哮喘小鼠模型并对其进行验证。方法：SPF级雄性BALB/c30只小鼠随机分为空白组、普通哮喘模型组、β₂-AR减敏哮喘模型组。建立普通哮喘模型，并在此基础上采用雾化吸入同时腹腔注射沙丁胺醇的方法进行β₂-AR减敏哮喘模型的制备，造模21 d末次激发后，测定小鼠气道阻力、ELISA法检测小鼠血清IgE含量，HE染色观察肺组织炎细胞浸润程度，Western blot法检测肺组织中β₂-AR含量，RT-PCR检测肺组织中β₂-ARmRNA的表达。结果：与空白组相比，随着乙酰甲胆碱(Mch)浓度升高，OVA诱导的各组气道阻力升高，β₂-AR减敏哮喘模型组气道阻力增加更加显著(P<0.05)；与空白组相比，普通哮喘组及β₂-AR减敏哮喘模型组IgE水平上升(P<0.01)；病理组织学观察发现β₂-AR减敏哮喘小鼠气道炎症浸润，黏液过度分泌及胶原明显沉积，且均较普通哮喘模型组的病理表现显著...     

哮喘模型小鼠肺组织TGF-β1、MMP-9、TIMP-1与气道重塑相关性研究

目的研究哮喘模型小鼠肺组织转化生长因子-β1(TGF-β1)、基质金属蛋白酶-9(MMP-9)、基质金属蛋白酶抑制剂-1(TIMP-1)与哮喘气道重塑的相关性及其机制。方法 40只清洁级健康雄性C57BL/6J小鼠,随机分为激发前组、第2周组、第4周组和第8周组,各10只。卵蛋白超声雾化激发哮喘。观察四组小鼠气道形态学参数,Western blot检测小鼠肺组织TGF-β1、MMP-9和TIMP-1分子的蛋白质水平,并探讨其相关性。结果哮喘小鼠肺组织TGF-β1、MMP-9、TIMP-1激发前组分别为(174.17±46.44)pg/mL、(3128.64±126.73)pg/mL、(1428.45±354.39)pg/mL;第2周组分别为(229.00±53.09)pg/mL、(8868.47±3544.42)pg/mL、(4783.29±1058.25)pg/mL;第4周组分别为(318.26±84.53)pg/mL、(6328.68±2874.37)pg/mL、(5328.26±2054.37)pg/mL;第8周组分别为(419.37±107.53)pg/mL、(4383.37±2498.53)pg/mL、(6542.38±3024.53)pg/mL;不同激发时间小鼠肺组织TGF-β1及MMP-9、TIMP-1差异有统计学意义,激发第8周显著高于激发前组和激发后第2、4周组(F=124.42、253.34、174.83,P均0.01)。不同激发时间小鼠肺组织上皮黏膜层面积/支气管基底膜周径、平滑肌面积/支气管基底膜周径、气管内壁面积/支气管基底膜周径激发前组分别为(10.10±2.77)×10~(-3)μm、(7.30±1.89)×10~(-3)μm、(15.10±2.81)×10~(-3)μm;第2周组分别为(24.90±3.35)×10~(-3)μm、(17.00±2.58)×10~(-3)μm、(28.20±5.18)×10~(-3)μm;第4周组分别为(37.00±4.88)×10~(-3)μm、(31.60±4.20)×10~(-3)μm、(37.10±8.82)×10~(-3)μm;第8周组分别为(45.00±5.88)×10~(-3)μm、(48.60±5.20)×10~(-3)μm、(53.10±11.82)×10~(-3)μm;不同激发时间小鼠肺组织气道形态学参数比较,差异均有统计学意义,激发第8周显著高于激发前组和激发后第2、4周组(F=6.25、4.31、11.09,P均0.01)。哮喘小鼠气道形态学参数(上皮黏膜层面积/支气管基底膜周径、平滑肌面积/支气管基底膜周径、气管内壁面积/支气管基底膜周径)与肺组织TGF-β1与MMP-9、TIMP-1水平呈正相关(r=0.95、0.94、0.93;r=0.97、0.96、0.99;r=0.94、0.92、0.96,P均0.01)。结论哮喘小鼠肺组织TGF-β1、MMP-9和TIMP-1可能参与了哮喘的病理生理过程,并参与了哮喘气道重塑。     

抗β2GPI抗体促进巨噬细胞摄取oxLDL加速动脉粥样硬化进展

目的：研究抗β2糖蛋白Ⅰ(β2GPⅠ)抗体在apoE基因敲除(apoE^-/-)小鼠巨噬细胞摄取功能及动脉粥样硬化之间的关系。方法：将雄性apoE^-/-小鼠随机分为抗β2GPI抗体组和模型组,每组8只,均给予高脂饲料喂养8周,其中,抗β2GPI抗体组小鼠腹腔注射抗β2GPI抗体,模型组小鼠腹腔注射同等剂量0.9%氯化钠溶液稀释的同源对照IgG抗体。8周后解剖小鼠,分离小鼠主动脉根组织,行Movat染色、免疫组织化学染色,观察主动脉根部动脉粥样硬化斑块的病理组织学特点;Western blotting检测主动脉斑块中内质网应激和巨噬细胞的标志蛋白表达;腹腔巨噬细胞体外培养,抗β2GPI抗体组和模型组分别加入氧化型低密度脂蛋白(oxLDL)+抗β2GPI抗体、oxLDL刺激24 h,观察巨噬细胞摄取oxLDL情况。结果：Movat染色显示,抗β2GPI抗体组小鼠主动脉斑块增多,斑块面积较大,胶原纤维、平滑肌纤维含量均减少,与模型组相比差异有统计学意义(P<0.05～P<0.01)。免疫组织化学染色显示,抗β2GPI抗体组小鼠主动脉根部斑...     

哮喘大鼠肺组织中血管紧张素Ⅱ受体和β2肾上腺素能受体表达及缬沙坦的影响

目的:探讨哮喘大鼠肺组织中血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)两种受体亚型(AT1R、AT2R)和β2肾上腺素受体(β2-AR)的表达及缬沙坦对两类受体的影响.方法:将50只SPF级Wistar大鼠随机分为正常对照组(A组)、哮喘组(B组)、缬沙坦15 mg/kg组(C1组)、缬沙坦30mg/kg组(C2组)、缬沙坦50 mg/kg组(C3组).用10%鸡卵白蛋白(OVA)致敏和1%OVA激发大鼠建立哮喘模型;分别用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)和Western blot法检测肺组织中ATR和β2-AR mRNA和蛋白表达.结果:与A组相比,B组的AT1R阳性表达率明显增高(P＜0.05).缬沙坦干预后,C1、C2、C3组的AT1R阳性表达率均明显下降(P均＜0.05);相关性分析提示AT1R的表达与缬沙坦剂量呈负相关(r=-0.96).A组未见AT2R表达,B组AT2R表达明显增加.缬沙坦干预后,C1组无AT2R表达,C2、C3组AT2R表达量低于B组(P均＜0.01).与A组相比,B组的β2-AR阳性表达率明显下调(P＜0.01),缬沙坦干预后,C1、C2、C3组的β2-AR阳性表达率均明显上调(P均＜0.05).结论:大鼠肺组织中存在血管紧张素Ⅱ受体,并在哮喘发作时被活化,可能参与哮喘发病的病理生理过程.ATR与β2-AR的变化可能存在相关性.哮喘大鼠肺组织中AT1R和AT2R表达增加,β2-AR表达下调.AT1R拮抗剂缬沙坦能抑制AT1R表达,上调β2-AR表达.     

低压缺氧对哮喘豚鼠血浆皮质醇含量和血液淋巴细胞β受体的影响

目的:探讨低压缺氧治疗哮喘的机制.方法:采用卵蛋白致敏和激发制成豚鼠哮喘模型,比较正常组、诱发哮喘发作后24h(发作组)、未经任何治疗哮喘豚鼠(对照组)以及低压缺氧治疗哮喘豚鼠(治疗组)的血浆皮质醇、外周血淋巴细胞β受体数目以及肺组织病理学变化.结果:①皮质醇水平:发作组较正常组显著升高(P<0.01),对照组较正常组明显下降(P<0.01),治疗组较对照组显著升高(P<0.01),与正常组差异不显著(P>0.05).②外周血淋巴细胞β受体数:对照组较正常组明显减少(P<0.01),治疗组较对照组明显增加(P<0.05),与正常组差异显著(P<0.05).③肺组织病理学变化: 治疗组较对照组明显好转,EOS浸润减少,肺泡膈间质水肿基本消失,Ⅱ型肺泡上皮增生.结论:低压缺氧治疗哮喘豚鼠后血浆皮质醇水平升高以及外周血淋巴细胞β受体数目增加,可能是低压缺氧治疗哮喘的机制.     

TGF-β1和Smad6在哮喘大鼠气道重塑中的表达及福莫特罗的影响

目的 研究转化生长因子-β1(TGF-B1)和Smad6在支气管哮喘(简称哮喘)大鼠肺组织中表达变化及福莫特罗对其表达的影响.方法 无特定病原体级(SPF)健康雄性SD大鼠60只,根据干预方法和时间分为对照组(A2和A4),哮喘组(B2和B4),福莫特罗组(C2和C4),每组10只.用卵白蛋白(ovalbumin,OVA)致敏与激发,建立哮喘大鼠气道重塑模型,福莫特罗组模型制作同哮喘组,在激发阶段,激发前30 min给予福莫特罗灌胃处理,各组均在末次激发后1～2h处死大鼠.采用图像分析技术测定肺内支气管壁厚度(Wat)及支气管平滑肌厚度(Wam);免疫组化法测定肺组织中TGF-β1,及Smad6蛋白表达.结果 (1)Wat:C2组和B2组比较差异无统计学意义(P＞0.05),两者均显著厚于A2组(均P＜0.01),C4组显著薄于B4组(P＜0.01),两者均显著厚于A4组(均P＜0.01);(2)Wam:C2组显著薄于B2组(P＜0.01),两者均显著厚于A2组(均P＜0.01),C4组显著薄于B4组,两者均显著厚于A4组(均P＜0.01);(3)肺组织TGF-β1蛋白平均吸光度值:C2组低于B2组(P＜0.05),两者均显著高于A2组(均P＜0.01),C4组低于B4组(均P＜0.05),两者均显著高于A4组(均P＜0.01);(4)肺组织Smad6蛋白平均吸光度值:C2组与B2组比较差异无统计学意义(P＞0.05),两者均显著低于A2组(均P＜0.01),C4组显著低于B4组(P＜0.01),两者均显著高于A4组(均P＜0.01).结论 TGF-β1在哮喘气道重塑大鼠肺组织中表达增高,Smad6表达减低;TGF-β1和Smad6表达失衡可能促进了哮喘气道重塑的发生和发展;福莫特罗可抑制哮喘大鼠TGF-β1表达,促进Smad6表达,作用随激发时间延长而增强.     

穴位埋线对哮喘豚鼠气道病理形态学改变和TGF-β1的影响

目的:观察穴位埋线对哮喘豚鼠模型病理形态学改变和支气管肺组织TGF-β1蛋白表达的影响.方法:健康FMMU豚鼠32只,雌雄各半,随机分为4组:空白组,模型组,地塞米松组和穴位埋线组.处理结束后,取病理切片经苏木精-伊红染色后在光镜下观察气道病理结构的改变,并采用免疫组织化学法检测支气管肺组织转化生长因子-β1(TGF-β1)蛋白表达.结果:模型组豚鼠小气道中WA/Pi2、平滑肌面积/Pi2、支气管壁厚度d/Pi均较空白组以及穴位埋线组和地塞米松组显著增加(P<0.05,P<0.01);模型组支气管肺组织TGF-β1阳性细胞指数显著高于空白组以及穴位埋线组和地塞米松组(P<0.01,P<0.05).结论:穴位埋线可能通过下调TGF-β1蛋白的表达,抑制哮喘豚鼠的嗜酸粒细胞性炎症,减轻炎症对气道壁的损伤,达到干预气道重构的效果.     

3种类型CpG-ODN对哮喘小鼠Th1/Th2细胞因子IL-4、IFN-γ表达的影响

目的 通过研究3种类型的CpG-ODN对哮喘小鼠Th1/Th2相关细胞因子表达的影响,探讨CpG-ODN治疗支气管哮喘的可能机制.方法 以鸡卵蛋(OVA)免疫小鼠建立哮喘模型,CpG-ODN干预组分为C1、C2、C3组,分别给予3种CpG-ODN腹腔注射,观察小鼠肺组织病理改变,支气管肺泡灌洗液(BALF)中白细胞总数、嗜酸性粒细胞数的变化;ELISA法检测BALF及血清中IL-4和IFN-γ的含量变化.结果 3个CpG-ODN干预组病理改变较模型组轻,但3组之间镜下观无差别;3组CpG-ODN干预后BALF中细胞总数和EOS计数及IL-4均低于哮喘组,c3组最低(P<0.01),C1组与C2组之间无明显差异(P>0.05);3组CpG-ODN干预后的IFN-γ浓度均高于B组,C3组最高,C1组高于C2组(P<0.01).结论 3种类型的CpG-ODN对哮喘小鼠气道炎症反应及Th1/Th2失衡均有较好的逆转作用,由于结构及活性特点,C型CpG-ODN较A、B型效果更好.     

Notch2、Notch4受体在哮喘小鼠肺中的表达及布地奈德、姜黄素对其影响

目的探讨Notch2、Notch4受体在哮喘小鼠肺组织中的表达水平以及布地奈德和姜黄素对其的影响。方法将32只Balb/c小鼠按随机数字表法随机分为正常对照组(A组),哮喘组(B组),布地奈德组(C组)和姜黄素组(D组),每组8只。以卵白蛋白致敏激发建立哮喘小鼠气道炎症模型,每组小鼠分别于末次激发后处死,取肺组织行HE染色观察炎症浸润程度,免疫组织化学染色和RT-PCR法检测各组小鼠肺组织中Notch2和Notch4受体蛋白和mRNA的表达水平。结果 (1)C、D组Notch2蛋白及mRNA表达[分别为(0.075±0.002)、(0.073±0.002)和(0.088±0.012)、(0.085±0.008)]均明显低于B组[分别为(0.104±0.005)、(0.275±0.015)],但仍高于A组[分别为(0.049±0.004)、(0.041±0.007)],P均<0.05。(2)4组Notch4蛋白及mRNA表达分别为(0.121±0.004)、(0.118±0.003)、(0.117±0.004)和(0.117±0.005)以及(0.595±0.019)、(0.601±0.125)、(0.606±0.145)、(0.604±0.019),差异无统计学意义,均P>0.05。结论 Notch2受体参与哮喘小鼠气道炎症过程,布地奈德和姜黄素可能部分通过Notch2受体对哮喘小鼠气道炎症有一定抑制作用;Notch4受体对哮喘小鼠气道炎症无明显影响。     

雷公藤甲素对哮喘小鼠气道重塑及 转化生长因子-β1表达的影响

  【目的】 探讨雷公藤甲素对支气管哮喘(简称哮喘)小鼠气道重塑的影响。【方法】 40只雌性SPF级BABL/c小鼠,随机数字表法分为4组,每组10只、A组为生理盐水对照组;B组为卵蛋白(OVA)哮喘组;C组为雷公藤甲素治疗组;D组为地塞米松治疗组。在末次激发24 h后所有小鼠取左肺组织行苏木精-伊红(HE)染色,过碘酸-雪夫(PAS)染色,Masson三色染色以及抗转化生长因子β1(TGF-β1)抗体免疫组化染色。测定支气管管壁厚度(WAt/Pbm),支气管平滑肌厚度(WAm/Pbm)?取右肺组织行RT-PCR检测TGF-β1 mRNA表达。【结果】 B组小鼠支气管管壁厚度、杯状细胞百分数、气道平滑肌厚度、胶原纤维面积、TGF-β1的转录和表达水平均显著高于A组(P < 0.01)。C组小鼠上述各指标依次均显著低于B组(P < 0.05),D组小鼠上述指标显著低于B组(P < 0.05)。但C组和D组上述各指标间差异无统计学意义(P > 0.05)?肺组织的TGF-β1的蛋白表达水平与支气管的管壁厚度,平滑肌厚度,杯状细胞比,胶原纤维含量成正相关(相关系数分别为0.755?0.815?0.898?0.837;P < 0.01)。【结论】 雷公藤甲素可抑制BABL/c哮喘小鼠气道重塑的发生,其机制有可能是通过抑制TGF-β1的表达而实现的。