低剂量阿霉素联合TRAIL诱导人前列腺癌细胞LNCAP凋亡的实验研究

目的 研究低剂量阿霉素联合肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(TRAIL)诱导人前列腺癌细胞LNCAP凋亡的作用和机制,为提高肿瘤治疗效果提供理论依据.方法 采用蛋白印迹、流式细胞术、MTT等实验技术,检测TRAIL和低剂量阿霉素分别或者联合处理LNCAP细胞后细胞的生存率变化、相关受体及其配体系统、凋亡相关蛋白(c-FLIP,BCL-2,XIAP)的变化.结果 低剂量阿霉素(0.86 μmol/L)可以增加细胞表面DR4和DR5的表达,同时减少凋亡抑制蛋白c-FLIP的表达,增强TRAIL诱导LNCAP细胞凋亡的敏感性.结论 低剂量阿霉素(0.86 μmol/L)可以增强TRAIL对LNCAP细胞的凋亡诱导效应.     

TRAIL联合阿霉素诱导肝癌耐药株凋亡的实验研究

目的研究肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(tumor necrosis factor related apoptosisinducing ligand，TRAIL)及TRAIL和阿霉素(ADM)联用对肝癌耐药株诱导凋亡的作用。方法通过浓度递增法．用阿霉素处理人肝癌细胞株HepG2获得肝癌耐药株HepG2／ADM。并通过MTT方法鉴定耐药株的耐药性。构建可溶型TRAIL真核表达质粒真核表达质粒pIRES-EGFP-TRAIL。通过脂质体(Lipofectamine)2000介导转染质粒人HepG2／ADM。通过RT—PCR和Western blot证实转染的HepG2／ADM有sTRAIL的mRNA和蛋白的表达后，用MTT方法和Annexin V—FITC—PI染色流式细胞仪检测单纯TRAIL处理和联合阿霉素处理HepG2／ADM的生长抑制率和凋亡率。并用共聚焦显微镜观察处理后细胞凋亡的形态。结果肝癌耐药株筛选成功，sTRAIL质粒构建、转染成功。用MTT测HepG2／ADM抑制率阿霉素处理组40．9％；TRAIL处理组29％；合用组58．4％；联合后抑制率有显著差异。凋亡检测为阿霉素处理组18．37％；TRAIL处理组14．8％；合用组52．71％。但TRAIL处理HepG28．9％和HepG2／ADM8．54％的凋亡率无显著差异。结论TRAIL联合阿霉素能明显增加HepG2／ADM的凋亡从而逆转耐药。同时单纯TRAIL治疗对耐药株作用与亲代细胞作用相仿，说明TRAIL可能有另外的诱发凋亡的途径，受HepG2／ADM耐药性的影响小。     

表阿霉素诱导肝癌细胞凋亡的研究

目的 研究表阿霉素对肝癌细胞凋亡的影响.方法 在体外培养的肝癌细胞中加入不同浓度的表阿霉素,应用光镜、电镜、DNA凝胶电泳及流式细胞术检测肝癌细胞凋亡的形态学特征、生化学特征.细胞凋亡百分率及细胞周期的变化.结果 在表阿霉素作用下,凋亡的肝癌细胞出现膜小泡、凋亡小体等特征性改变;DNA电泳呈现典型的“梯状”条带;流式细胞术测定,出现典型的凋亡峰,其凋亡百分率随着药物浓度的提高和作用时间的延长而明显升高;同时,G_(1/0)期和S期细胞含量下降,而G_2/M期细胞含量上升.非凋亡细胞则无此表现.结论 表阿霉素可诱导肝癌细胞发生凋亡,并可使肝癌细胞生长受阻于G_2/M期,这可能是其杀伤肿瘤的一种重要机制.     

TRAIL联合阿霉素诱导肝癌耐药株凋亡的实验研究

目的研究肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(tumornecrosisfactorrelatedapoptosisinducingligand,TRAIL)及TRAIL和阿霉素(ADM)联用对肝癌耐药株诱导凋亡的作用。方法通过浓度递增法用阿霉素处理人肝癌细胞株HepG2获得肝癌耐药株HepG2/ADM。并通过MTT方法鉴定耐药株的耐药性。构建可溶型TRAIL真核表达质粒真核表达质粒pIRES-EGFP-TRAIL。通过脂质体(Lipofectamine)2000介导转染质粒入HepG2/ADM。通过RT-PCR和Westernblot证实转染的HepG2/ADM有sTRAIL的mRNA和蛋白的表达后,用MTT方法和AnnexinVFITCPI染色流式细胞仪检测单纯TRAIL处理和联合阿霉素处理HepG2/ADM的生长抑制率和凋亡率。并用共聚焦显微镜观察处理后细胞凋亡的形态。结果肝癌耐药株筛选成功,sTRAIL质粒构建、转染成功。用MTT测HepG2/ADM抑制率阿霉素处理组40.9%;TRAIL处理组29%;合用组58.4%;联合后抑制率有显著差异。凋亡检测为阿霉素处理组18.37%;TRAIL处理组14.8%;合用组52.71%。但TRAIL处理HepG28.9%和HepG2/ADM8.54%的凋亡率无显著差异。结论TRAIL联合阿霉素能明显增加HepG2/ADM的凋亡从而逆转耐药。同时单纯TRAIL治疗对耐药株作用与亲代细胞作用相仿,说明TRAIL可能有另外的诱发凋亡的途径,受HepG2/ADM耐药性的影响小。     

阿霉素诱导人肝癌细胞凋亡机制的研究

探讨阿霉素诱导HCC-9204细胞凋亡的作用机制,及其与凋亡相关基因Bcl-2和Bax表达的关系。方法用TUNEL法和流式细胞仪观察和检测阿霉素对HCC-9204细胞增殖周期的影响以及细胞凋亡,并检测HCC-9204细胞中Bcl-2和Bax蛋白的表达水平。结果阿霉素能够显著诱导HCC-9204细胞凋亡,染色显示有典型的凋亡特征。在药物处理24h后流式细胞仪检测出显著的“亚二倍体峰”。阿霉素作用HCC-9204细胞后,Bcl-2蛋白表达明显减少(P<0.05);而Bax蛋白的表达虽有所增加,但与对照组相比差异无显著性(P>0.05)。结论阿霉素能诱导癌细胞凋亡,是其发挥抗癌作用的重要机制之一,这可能与其下调Bcl-2基因表达有关。     

Clusterin前导序列抗前列腺癌细胞凋亡作用的研究

目的　探讨clusterin前导序列在抗前列腺癌细胞凋亡中的作用。　方法　培养转染全长clusterin序列的LNCaP细胞 (简称A)及缺少前导序列clusterin的LNCaP细胞 (简称B)为试验组 ,培养野生型 (简称L)及转染PIRES2 EGFP永久表达载体的LNCaP细胞 (简称M)为对照组 ,RT PCR法检测 4组细胞的clusterinmRNA水平。以TNF α进行诱导 ,检测L组细胞clusterinmRNA的变化 ,MTT及ELISA法检测 4组细胞的增殖活性与凋亡情况。　结果　B、A组细胞clusterinmRNA水平均显著高于L、M组 (P均 <0 .0 1) ;B、A组间差异无显著性意义 (P >0 .0 5 )。TNF α作用 2h时 ,与对照组 (A =12732 .0± 5 1.1)相比L组细胞clusterinmRNA有一过性升高 (A =15 6 4 2 .0± 6 4 .3) ,t =- 77.10 6 ,P <0 .0 1;12、2 4hmRNA显著降低 (A =1170 5 .3± 30 .7,984 8.0± 6 7.4 ,t=2 4 .890 ,4 8.0 2 0 ,P均 <0 .0 1) ;TNF α作用 2 4h后 ,A组细胞存活比例 (0 .75 97± 0 .0 2 5 1)显著高于B组细胞 (0 .6 6 97± 0 .0 185 )及对照组 (0 .6 80 8± 0 .0 2 2 2 ,0 .6 991± 0 .0 2 91) ,P均 <0 .0 1;A组细胞凋亡程度 (A =0 .32 6 5± 0 .0 387)显著低于B组细胞 (A =0 .5 6 5 0± 0 .0 32 4 )及对照组 (A =0 .5 892± 0 .0 4 18,0 .6 2 36± 0 .0 311,P均     

细胞凋亡与前列腺癌

前列腺癌的发生除了与多种癌基因、抑癌基因的激活和表达有关以外 ,细胞凋亡过程的抑制也是其形成的重要机制。本文从细胞凋亡的概念、特征和有关机制及调控等方面进行综述 ,并探讨细胞凋亡在前列腺癌发生、发展中的作用及相关机理。     

阿霉素诱导人胆囊癌细胞凋亡的研究

目的　观察阿霉素 (ADM )对胆囊癌细胞凋亡的影响。方法　在体外培养的胆囊癌细胞中加入不同浓度的阿霉素 ,应用光镜、电镜、DNA凝胶电泳及流式细胞仪检测胆囊癌细胞凋亡的形态学特征、生化学特征、细胞凋亡百分率及细胞周期的变化。结果　在阿霉素作用下 ,凋亡的胆囊癌细胞出现膜小泡、凋亡小体等特征性改变 ;DNA电泳呈现典型的“梯状”条带 ;流式细胞仪测定 ,出现典型的凋亡峰 ,其凋亡百分率随着药物浓度的提高而明显升高 ,分别与对照组比较 ,差异有显著性 (P <0 .0 5 ) ;同时 ,S期细胞含量下降 ,而G2 /M期细胞含量上升。非凋亡细胞则无此表现。结论　ADM可诱导胆囊癌细胞发生凋亡 ,并可使胆囊癌细胞生长受阻于G2 /M期 ,这可能是其杀伤肿瘤的一种重要机制     

前列腺癌细胞凋亡通路基因表达与凋亡反应性的关系

目的　探讨凋亡通路基因表达改变与前列腺癌细胞凋亡反应性的关系。　方法　凋亡诱导剂鬼臼乙叉甙分别作用前列腺癌激素敏感与不敏感细胞LNCaP和PC 3,Hoechst 332 5 8染色检测凋亡发生率。收集LNCaP和PC 3细胞后提取总RNA ,合成cDNA探针并以生物素标记 ,在凋亡通路特异基因寡核苷酸片段cDNA膜上进行杂交反应 ,检测基因mRNA表达。　结果　鬼臼乙叉甙能诱导两种细胞凋亡 ,但PC 3细胞的凋亡反应性小于LNCaP细胞。与LNCaP细胞比较 ,PC 3细胞显著下调的基因为Bcl1 0、CIDE A、GADD4 5a和RIP2 ,以及Caspase 4、5和 6 ,显著上调的基因为TRAF4。两种细胞均强烈表达Caspase 1 4和TNFR2。　结论　凋亡通路基因表达改变与前列腺癌细胞凋亡反应性不同有关 ,在前列腺癌激素敏感性转化中可能有重要作用     

细胞凋亡与晚期前列腺癌的治疗

对晚期前裂腺癌，目前尚无十分有效的方法。常规的去势治疗是通过使雄激素依赖型的前裂腺癌细胞发生凋亡而起作用，通过对细胞凋亡机制的研究，发现雄激素非依赖型的前列腺癌细胞仍保存着细胞凋亡的能力。因此，探索使雄激素非依赖型的前列腺癌细胞发生凋亡的方法，将为晚期前列腺癌的治疗开辟一条新的途径。     

肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体受体在肾癌中的分布及其意义

目的：研究肿瘤坏死因子相关诱导凋亡配体（TRAIL）受体在肾癌组织中的分布及其意义。方法：采用RT－PCR及NorthernBlot的方法检测TRAIL受体在肾癌组织及正常肾组织,肾癌细胞系GRC－I和正常肾小管细胞系HK－2中的表达。结果：死亡受体DR4、DT4在肾癌组织及正常肾组织、肾癌细胞系GRC－I和正常肾小管细胞系HK－2中强表达;假受体DcR-1在正常肾组织和正常肾小管细胞系HK－2中强表达;假受体DcR-2未见表达。结论TRAIL基因在肾癌肿瘤细胞的凋亡机制中可能发挥重要的作用。     

TRAIL受体在人骨肉瘤组织中的表达

目的 研究肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(TRAIL)受体在骨肉瘤细胞中的表达情况。方法 应用逆转录—聚合酶链反应(RT—PCR)对22例骨肉瘤组织标本、MG—63骨肉瘤细胞株、U251脑胶质瘤细胞株以及正常人外周血淋巴细胞TRAILR1—R4 mRNA表达进行检测。结果 22例骨肉瘤组织标本中15例同时表达TRAILR1、-R2和-R3，4例同时表达TRAIL-R1和-R2，只表达TRAIL-R1或-R2者3例，所有标本中均未检测到TRAIL，-R4表达；MG-63骨肉瘤细胞株、U251脑胶质瘤细胞株以及正常人外周血淋巴细胞则均检测到TRAILR1、-R2和-R3的联合表达。结论 死亡受体TRAIL-R1，R2在骨肉瘤中的普遍表达，是TRAIL诱导骨肉瘤细胞凋亡的分子基础；死亡受体和诱骗受体的差异性分布，并非TRAIL对选择性杀伤肿瘤细胞的关键性因素，可能还受其它因子调控。     

肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体与胰腺癌及相关药物研究

自肿瘤坏死因子家族的新成员肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体被发现以来,它一直是近些年来在肿瘤研究方面的热点.本文综述了近些年肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体在胰腺癌方面的相关研究进展,从肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体诱导胰腺癌肿瘤细胞凋亡机制人手,简要介绍胰腺癌对肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体的耐药机制.并根据目前已认同的耐药机制...     

TRAIL受体在膀胱癌中的表达及意义

目的：了解肿瘤坏死因子相关诱导凋亡配体（TRAIL）受体在膀胱癌组织中的表达及意义。方法：采用RT－PCR及Northern blot方法检测TRAIL受体在膀胱癌组织及正常膀胱粘膜中的表达。结果：死亡受体DR4、DR5在膀胱癌组织及正常膀胱粘膜中呈强表达,候受体DcR-1在正常膀胱粘膜呈强表达,假受体DcR-2未见表达。结论：TRAIL基因在膀胱移行上皮细胞癌凋亡机制中可能发挥重要作用。     

Enhanced proapoptotic effects of tumor necrosis factor-related apoptosis-inducing ligand on temozolomide-resistant glioma cells

OBJECT: Death receptor targeting is an attractive approach in experimental treatment for tumors such as malignant gliomas, which are resistant to radiation and chemotherapy. Among the family of cytokines referred to as death li gands, tumor necrosis factor-related apoptosis-inducing ligand (TRAIL) has attracted clinical interest. The aim of this study was to assess whether TRAIL can be used as an adjuvant to temozolomide (TMZ) for apoptosis induction in malignant glioma cell lines. METHODS: Six human malignant glioma cell lines (A172, U87, U251, T98, U343, and U373) were exposed to human (h)TRAIL, TMZ, or an hTRAIL/TMZ combined treatment. Cell viability was assayed using 3-(4,5-dimethylthiazole-2-yl)-2,5-diphenyltetrazolium bromide and phase-contrast microscopy. Cell apoptosis was detected using the terminal deoxynucleotidyl transferase-mediated deoxyuridine triphosphate nick-end labeling technique and quantified using flow cytometric analysis. The apoptosis signaling cascade was studied with Western blotting. The additive effects of hTRAIL and TMZ resulted in a significant decrease in cell viability and an increased apoptotic rate. Expression of the death receptors DR5 and DR4 in two cell lines (A172 and U251) upregulated significantly when they were used in combination hTRAIL/TMZ treatment (p < 0.05 compared with baseline control), leading to activation of caspase-8 and caspase-3 (p < 0.05 compared with baseline control) and confirming an extrinsic apoptotic pathway. A cell intrinsic pathway through mitochondrial cytochrome c was not activated. CONCLUSIONS: Based on this work, one may infer that hTRAIL should be considered as an adjuvant treatment for TMZ-resistant human malignant gliomas.     

ADAM17 siRNA和阿霉素联用对前列腺癌PC-3细胞增殖和凋亡的作用

目的 探讨ADAM17 siRNA联合化疗药物阿霉素（ADM）对人前列腺癌细胞株PC-3增殖和凋亡的影响。方法 用ADM处理 ADAM17 siRNA表达质粒稳定转染的PC-3细胞,采用噻唑蓝（MTT）比色法观察细胞增殖率,吖啶橙染色和流式细胞仪（FCM）检测细胞凋亡率,并对凋亡蛋白caspase-3的活性进行对比分析。结果 ADAM17 siRNA和ADM单独及联合应用均能不同程度的降低PC-3细胞增殖率,上调凋亡率。FCM检测数据显示ADAM17 siRNA和ADM单独应用的细胞凋亡率分别为（6.2±1.4）%和（17.2±1.9）%,与ADAM17 siRNA和ADM联合应用的（36.4±3.7）%相比较,差异有显著统计学意义（P<0.01）,两者在诱导caspase-3活性方面也具有良好的协同增敏作用。结论 ADAM17 siRNA和ADM对人前列腺癌PC-3均有抑制细胞增殖和促进凋亡的效果,但两者联合应用效果更好。提示分子靶向用药的基因治疗和化疗联合治疗可能是提高疗效,减少前列腺癌术后复发转移风险的重要方法。     

聚集素在前列腺正常、增生、癌组织中的表达及意义

目的　通过检测聚集素 (Clusterin)在前列腺正常、增生、癌变组织中的表达 ,探讨其与前列腺疾病发生发展的关系。　方法　采用免疫组织化学染色法检测 12例正常前列腺组织、15例良性前列腺增生组织 (BPH)、5 6例前列腺癌标本中Clusterin的表达水平。　结果　 3种组织中Clusterin的阳性及弱阳性表达率为 81% (67/83 ) ,其中前列腺正常、增生、癌组织中阳性及弱阳性表达率分别为17% (2 /12 )、73 % (11/15 )、96% (5 4/5 6)。前列腺癌组织中Clusterin表达水平明显高于前列腺正常 (t=8 82 ,P <0 0 1)及增生 (t =7 63 ,P <0 0 1)组织 ,且在癌组织中与肿瘤病理分级 (r =0 64 9,P <0 0 1)、临床分期 (r=0 60 9,P <0 0 1)呈正相关。　结论　Clusterin可能通过抗凋亡机制在前列腺癌的生物特性中发挥着重要的作用     

肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体诱导结肠癌HCT-116细胞凋亡和炎性反应相关基因表达的研究

目的探讨肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体（TRAIL）对结肠癌细胞凋亡和炎性反应相关基因表达的影响。方法HCT-116细胞经10μg／L和100μg／L重组人类TRAIL蛋白处理后,应用荧光实时定量PCR和试剂盒测定凋亡相关基因（Bcl-2、Bad、caspase-3和-8）和炎性反应相关基因（TNF—α,IL-1β,COX-2）的表达水平。结果经10μg几和100μg／L重组人类TRAIL蛋白孵育处理24h后．HCT-116细胞的凋亡率分别为27．4％和45．9％。同时抗凋亡基因Bcl-2、促凋亡基因Bad以及凋亡指示基因caspase-3和caspase-8的表达均显著上调。且100μg／L组的上调幅度均高于10μg／L组（P〈0．05）。TRAIL蛋白处理后,炎性反应相关基因TNF-α,IL-1β,COX-2的表达亦显著上升．且100μg／L处理组的上升幅度均高于10μg／L组（P〈0．05）。结论TRAIL重组蛋白能够诱导结肠癌细胞凋亡以及炎性反应的发生。