蛋白激酶CK2α对喉癌细胞凋亡和超微结构的影响

目的 探讨蛋白激酶CK2α对人喉癌细胞凋亡和超微结构的影响及其可能机制.方法 用脂质体转染法分别将蛋白激酶CK2α特异性siRNA表达质粒psiRNA-hH1neo-CK2α及非特异性siRNA表达质粒psiRNA-hH1neo-cont转染人喉癌Hep-2细胞.Western印迹法检测转染细胞蛋白激酶CK2α蛋白表达,膜联蛋白V-异硫氰酸荧光素(Annexin V-FITC)和碘化丙啶(PI)双染色法检测转染细胞凋亡率的变化,透射电镜观察转染细胞形态学变化,Western印迹法检测转染细胞bcl-2和Bax蛋白的表达.结果 转染psiRNA-hH1neo-CK2α质粒后,Hep-2细胞蛋白激酶CK2α蛋白表达明显下降(P＜0.01).和未转染细胞组和psiRNA-hH1neo-cont转染细胞组比较,psiRNA-hH1neo-CK2α转染组细胞出现典型的凋亡征象,如核固缩、染色质凝集靠近核膜和凋亡小体形成.psiRNA-hH1neo-CK2α转染细胞凋亡率明显高于未转染细胞组和psiRNA-hH1neo-cont转染细胞组(25.66%±0.83%比3.66%±0.43%、5.18%±0.22%,均P＜0.05);与其他2组比较,psiRNA-hH1neo-CK2α转染组细胞bcl-2蛋白表达较低(相对吸光度比值为0.20±0.09 vs 0.72±0.16、0.56±0.11,均P＜0.01),Bax蛋白表达较高(相对吸光度比值为0.81±0.17 vs 0.26±0.12、0.33±0.17,均P＜0.01),bcl-2/Bax较低(0.25±0.05 vs 2.76±0.21、1.70±0.22,均P＜0.01).结论 蛋白激酶CK2α与喉癌细胞凋亡密切相关,该作用可能与bcl-2/Bax降低有关,蛋白激酶CK2α可能是一个有潜力的喉癌治疗靶点.     

252锎中子放疗对宫颈癌细胞凋亡及bcl-2、bax的影响

目的探讨中子放疗前后宫颈癌细胞凋亡、凋亡相关基因bcl-2、bax表达的变化及意义.方法应用TUNEL法、免疫组化检测宫颈鳞癌放疗前后的细胞凋亡、凋亡相关基因bcl-2、bax表达变化.结果20例患者宫颈癌细胞凋亡阳性率和凋亡指数(AI)分别由放疗前的35%和(4.22±4.14)%增加至放疗后的85%和(34.64±24.36)%,差异显著(P＜0.01).放疗前后bcl-2表达无明显变化(P＞0.05),且与凋亡无明显相关(P＞0.05).bax表达阳性率和平均标记指数分别由放疗前的25%和(8.35±3.06)%增加至放疗后的80%和(16.43±6.05)%,差异显著(P＜0.01),且放疗后与凋亡呈正相关(r=0.852 0,P＜0.01).结论 252锎中子射线诱导了肿瘤细胞的凋亡,可能是其治疗作用的重要机制之一;bax表达是252锎中子射线诱导细胞凋亡的途径之一,其机制可能与bcl-2/bax间的平衡改变有关.     

CHD病人心肌细胞凋亡及bcl-2家族蛋白和caspase-3的调节作用

目的：观察CHD病人心肌细胞凋亡情况及bcl-2、bcl-xl、bax和bad及caspase-3和心肌氧化性应激对心肌细胞凋亡的调节作用。方法：研究以进行常规CPB手术无肺动脉高压的ASD病人为对照组（ASD组，n=5）、以合并CHD的RHD病人为观察组（RHD组,n=5）。并行循环后留取右心室全层心肌标本。用原位TUNEL技术检测凋亡心肌细胞。用流式细胞仪测定右心室bcl-2、bcl-xl、bax和bad蛋白表达。分别用Z－DEVD－AMC底物降解法和TBARS方法测定右心室caspase-3活性和MDA含量。结果：CHD病人右心室心肌细胞凋亡数、caspase-3活性和MDA含量均明显高于ASD病人（分别P＝0．026，0．013和0．002）；与ASD病人比较，CHD病人右心室促凋亡蛋白bax和bad表达明显上调（P＜0．003和0．001）。而两组抗凋亡蛋白bcl-2和bcl-xl表达之间无显著性差异（均P＞0．01）。结论：心肌细胞凋亡参与CHD的病理生理过程。CHD病人的心肌细胞凋亡与心肌细胞bax和bad蛋白表达上调、caspase-3激活以及心肌氧化性应激增高有关。     

胃癌与P16和bcl-2基因蛋白表达

目的　探讨p16和bcl- 2基因蛋白表达与胃癌的关系。方法　胃癌病人 2 9例 ,另以浅表性胃炎33例及正常胃黏膜 2 8例作为研究对象。采用免疫组法 (SP法 ) ,观察胃黏膜细胞 p16和bcl- 2基因蛋白表达。结果　胃癌组 p16和bcl- 2基因蛋白表达阳性率分别为 2 0 .7%和 6 2 % ,与浅表性胃炎及正常胃黏膜组比较有非常显著性差异 (P <0 .0 1)。结论　p16和bcl- 2基因在胃癌的发生过程中起重要作用 ,p16基因蛋白表达降低及bcl- 2基因蛋白表达增高 ,提示细胞增殖与凋亡的自稳态失衡 ,最终导致细胞过度增殖而发生癌变。     

脂质体介导转染bcl-2反义核酸进入HL60细胞的动力学模式和生物学效应

bcl- 2基因是重要的抗凋亡和耐药基因 ,在造血系统恶性肿瘤细胞中普遍高表达。利用 bcl- 2反义核酸有望抑制bcl- 2基因的表达 ,促进细胞凋亡 ,提高肿瘤对化疗的敏感性。　目的　应用阳离子脂质体介导或寡核苷酸直接转染技术 ,建立 HL6 0细胞摄入荧光素标记的 bcl- 2寡核苷酸的动力学模式 ,研究脂质体介导下 bcl- 2反义核酸对 HL6 0细胞的生物学效应 ,初步探讨脂质体的生物学作用。　方法　应用荧光素标记的寡核苷酸 ,凝胶电泳观察脂质体寡核苷酸复合物的形成 ,流式细胞仪测定细胞内的平均荧光强度和 bcl-2蛋白的表达 ,荧光显微镜观察细胞内荧光物质的分布 ,3H-Td R掺入法和 MTT法检测 HL6 0细胞的生长 ,RT- PCR法检测细胞内 bcl- 2 m RNA的表达水平。　结果　 (1)当脂质体与寡核苷酸的质量比合适时 ,两者可形成复合物。(2 )脂质体介导转染法显著提高 HL6 0细胞对寡核苷酸的摄入 ,当脂质体与寡核苷酸的质量比 (μg/ μg)为 2 .0 / 1时 ,细胞内相对平均荧光强度可达寡核苷酸直接转染时的 40倍 ,而且 HL6 0细胞对寡核苷酸的摄入与其浓度和作用时间有关 ,未标记的寡核苷酸竞争性抑制细胞对标记寡核苷酸的摄取。 (2 )细胞内的寡核苷酸可向胞外转运 ,脂质体介导转染后 ,胞内荧光强度衰减缓慢 ,t1 /2 约为 4h,     

bcl-2反义寡核苷酸对小细胞肺癌细胞NCI-H69放射敏感性的影响

目的 研究bcl-2反义寡核苷酸对人小细胞肺癌细胞NCI-H69放射敏感性的影响.方法 将NCI-H69细胞培养传代,然后将细胞分为反义寡核苷酸组、正义寡核苷酸组、无义寡核苷酸组和空白对照组,通过脂质体将不同寡核苷酸导入细胞中,用Western-Blot法检测Bcl-2蛋白的表达. 采用直线加速器分别以不同剂量(0、2、4、6、8、10 Gy)X线照射4组细胞.收集照射后的细胞,流式细胞仪检测细胞凋亡率,MTT法测定细胞存活分数.结果 Western-Blot杂交显示反义寡核苷酸组无Bcl-2蛋白表达,相对正义寡核苷酸组、无义寡核苷酸组及空白对照组Bcl-2蛋白表达明显受到抑制(F=7.24～15.31,q=5.03～7.80,P＜0.01).细胞经X线照射后,反义寡核苷酸组细胞凋亡率明显高于空白对照组,差异具有显著性(F=7.24～15.31,q=5.03～7.80,P＜0.01);正义寡核苷酸组和无义寡核苷酸组与空白对照组相比无统计学差异.4组细胞接受辐射后,反义寡核苷酸组在未照射和照射不同剂量后的存活分数均低于空白对照组,差异有统计学意义(F=11.04～45.56,q=5.10～14.75,P＜0.01),而正义寡核苷酸和无义寡核苷酸组与空白对照组比较则无统计学差异.结论 bcl-2反义寡核苷酸能有效封闭bcl-2基因的表达,增强小细胞肺癌细胞NCI-H69对X线的敏感性.     

bcl-2 RNAi表达载体的构建、鉴定及其对Raji细胞的干扰效果

目的 构建bcl-2特异性RNAi真核细胞质粒表达载体,并研究其对B细胞淋巴瘤Raji细胞的干扰效果.方法 根据GenBank提供的bcl-2 cDNA序列,设计并合成两对短发夹结构的互补DNA序列,经退火形成互补双链,克隆至载体pGenensil-1构建重组质粒,予以酶切和DNA测序鉴定.脂质体介导重组质粒转染Raji细胞,采用RT-PCR法观察重组质粒对bcl-2 mRNA表达的影响,流式细胞仪测定细胞凋亡.结果 酶切及测序鉴定表明,成功构建bcl-2 shRNA的质粒表达载体pGenesil-1-bcl-2-544和pGenesil-1-bci-2-1009.转染Raji细胞48 h后,RT-PCR结果显示Raji细胞中bcl-2 mRNA表达分别下调了(31.95±3.02)%和(47.57±2.88)%,与空白对照组相比,差异有统计学意义(P<0.05);流式细胞仪检测结果显示Raji细胞凋亡率分别为(14.25±0.84)%和(11.96±0.79)%,明显高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05).结论 成功构建bcl-2特异性RNAi真核细胞质粒表达载体,它能有效沉默bcl-2基因在B细胞淋巴瘤中的表达并促进B细胞淋巴瘤Raji细胞凋亡.     

Bcl-2基因转染对体外培养大鼠大脑皮层神经细胞氧糖剥夺损伤的保护作用

目的研究bcl-2基因转染对体外培养大鼠大脑皮层神经细胞氧糖剥夺损伤的保护作用,为基因转染治疗脑血管病寻找实验依据。方法体外培养新生大鼠大脑皮层神经细胞,应用脂质体转染法将bcl-2基因转染入神经细胞,建立氧糖剥夺模型,实验分为正常对照组、氧糖剥夺组和bcl-2转染组(转染bcl-2基因24h后,进行氧糖剥夺),采用Western blot法、MTT法、流式细胞仪分别检测各组细胞的bcl-2蛋白表达、细胞活力及凋亡率。结果 SD大鼠大脑皮层神经细胞可纯化体外培养,纯度达到90%以上。成功建立了大鼠神经细胞体外氧糖剥夺模型,成功进行了质粒pc-DNA3.1-hbcl-2的转化、扩增及基因转染。对照组神经细胞bcl-2少量表达,氧糖剥夺组bcl-2蛋白微弱表达,转染组细胞bcl-2蛋白高表达,各组间差异均有统计学意义(均P<0.01)。MTT法检测结果显示,对照组细胞的吸光度值(A)为(0.851±0.034);氧糖剥夺组的A值为(0.648±0.030),与对照组相比明显降低(P<0.01);转染组的A值为(0.787±0.004),低于对照组(P<0.05),但明显高于氧糖剥夺组(P<0.05)。对照组神经细胞凋亡率为4.6%;氧糖剥夺损伤后细胞凋亡率明显增加,为19.6%;转染组细胞凋亡率与氧糖剥夺组相比有明显下降,为9.6%,差异有统计学意义(均P<0.01)。结论脂质体介导的bcl-2基因转染对氧糖剥夺损伤的大鼠大脑皮层神经细胞有明显保护作用。     

应用bcl-2基因及GDNF治疗大鼠脑缺血的研究

目的 观察胶质细胞源性神经营养因子(GDNF)与bcl-2基因对大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤(CIRI)的影响.方法 取健康Wistar大鼠40只,采用Longa改良栓线法制成大脑中动脉闭塞(MCAO)模型,缺血2 h后再灌注,随机分4组:对照组、bcl-2组、GDNF组、bcl-2+GDNF组,于再灌注3 h后经侧脑室注射GDNF 10μl、经颈动脉注射pLXSN-bcl-2质粒10μg,MCAO后3d(n=5),14 d(n=5),通过免疫组化染色检测bcl-2蛋白和GDNF的表达情况,TUNEL法检测细胞凋亡情况.结果 bcl-2+GDNF组bcl-2蛋白表达与GDNF表达水平均较其他组表达明显增加(P<0.05),bcl-2组、GDNF组较对照组明显增加(P<0.05);脑内细胞凋亡GDNF+bcl-2组较其他组明显减少(P<0.05),bcl-2组、GDNF组较对照组明显减少(P<0.05).结论 bcl-2基因和GDNF可能通过减少神经细胞凋亡,促进bcl-2与GDNF蛋白表达,增强对局灶性缺血脑组织的保护能力,加速中枢神经损伤的修复;bcl-2基因与GDNF协同作用,促使神经细胞在脑内的凋亡进一步减少,从而避免脑缺血再灌注后脑细胞进一步损伤.     

bcl-2基因转染对人胃上皮细胞GES-1增殖的影响

目的:观察bcl-2基因脂质体法转染人胃上皮细胞系GES-1及其转染后对GES-1细胞增殖的影响. 方法:以脂质体法转染构成bcl-2基因表达的人胃上皮细胞系GES-1细胞模型,空载体质粒pcDNA3转染GES-1细胞及正常GES-1细胞为对照;经酶标免疫组织化学法鉴定bcl-2基因表达阳性细胞;用HE染色法进行形态学观察;并采用细胞计数及MTT法分析bcl-2转染后对GES-1细胞增殖的影响. 结果:脂质体法转染bcl-2基因后,细胞高表达Bcl-2蛋白;HE染色后形态学观察无明显改变;细胞计数法绘制细胞生长曲线结果显示bcl-2基因转染6 d后细胞生长速度明显超过对照组,MTT法结果显示bcl-2基因转染第24,48,72 h, A490 nm值分别为4.15±0.31,5.98±0.56,8.94±0.79,对照组分别为3.01±0.20,4.76±0.52,7.69±0.84,两组相比较具有显著性差异(P＜0.05). 结论:bcl-2基因转染使GES-1细胞稳定且高表达Bcl-2蛋白,并促进了细胞增殖.     

bcl-2基因与细胞凋亡关系的研究进展

目的:探讨bcl-2在细胞凋亡中的研究进展。方法:研究国内外有关文献进行综述。结果与结论:bcl-2在细胞凋亡中起着重要的作用,而且已取得很大进展,为我们研究肿瘤及其他疾病提供了有力的武器。     

bcl-2家族蛋白和信号传导通路

bcl-2家族蛋白作为凋亡的重要调节因子,它具有双重的效应,既起到了抑制凋亡的作用,又起到了促进凋亡的作用.另外,这些蛋白通常在人类肿瘤中表达,与肿瘤细胞的生存和死亡密切相关,所以本综述针对bcl-2的发现、其家族成员、如何发挥信号传导以及调节信号传导的三种模式一一作出了阐述,为bcl-2作为凋亡传导通路的重要环节以及...     

菌落PCR快速鉴定Bcl-2基因及测序分析

目的 克隆大鼠Bcl-2基因（B cell lymphoma）全长cDNA,快速筛选重组pMD18-T-Bcl-2阳性克隆。方法 采用RT-PCR的方法从大鼠脾脏组织中扩增全长Bcl-2cDNA,将扩增产物克隆至pMD18-T载体中,用单菌活PCR扩增快速鉴定DNA片段后酶切进一步鉴定及序列分析。结果在筛选的阳性克隆中扩增到大鼠Bcl-2基因,经菌落PCR、酶切鉴定及DNA序列分析证实该序列正确。结论 用单菌落PCR扩增快速鉴定克隆在pMD18-T载体上的Bcl-2基因是一种简便、经济的方法。成功克隆了Bcl-2基因,为进一步研究Bcl-2 cDNA的基因功能及进行基因治疗奠定了基础。     

bcl-2在胃肠道间质瘤中的表达

目的 研究胃肠道间质瘤(GIST)中bcl-2的表达及其意义。方法 应用免疫组化Envision二步法检测bcl-2、CD 117、CD 34等在肿瘤中的表达。结果 51例GIST中,CD 117和CD 34阳性表达率分别为100％和76.5％;bcl-2阳性45例,阳性率为88.2％,其中良性、潜在恶性及恶性GIST中,bcl-2阳性表达率分别为100％、91.7％、82.8％,bcl-2阳性表达率与GIST良恶性无显著性差异(P>0.05)。结论bcl-2蛋白可作为诊断GIST的辅助性标记物之一,但不能作为判断GIST良恶性的指标。     

bcl-2在乳腺癌中的表达及意义

目的 研究bcl—2在乳腺癌中的表达情况，探讨其在乳腺癌中的表达及意义。方法 应用免疫组化法检测64例乳腺癌组织bcl—2。结果 bcl—2高表达者42例，阳性表达率为65．63％，bcl-2的表达与腋淋巴结转移、组织学分级、ER、PR的表达呈正相关；腋淋巴结转移组与非转移组bcl—2表达的差异显著。结论 结果提示bcl-2的表达可能与肿瘤的进展有关，bcl-2是乳腺癌预后的重要生物学指标。     

C-myc及bcl-2蛋白在睾丸肿瘤中的检测及其意义

目的:探讨原癌基因C-myc和细胞凋亡抑制基因bcl-2产物在睾丸肿瘤中表达的意义及相关关系,了解细胞增殖与凋亡的特点。方法:采用免疫组化SP法对38例睾丸肿瘤和10例正常睾丸组织中的C-myc和bcl-2蛋白进行定量检测。结果:C-myc蛋白在睾丸肿瘤中阳性表达例数31/38,阳性细胞百分率为24.99％,正常睾丸组织阳性例数0/10,差异有高度显著性（P<0.01）,但其表达与睾丸肿瘤病理分级、临床分期无关（P>0.05）。bcl-2蛋白的表达与肿瘤分级、分期密切相关（P<0.05）,随恶性程度增加,其表达强度降低。C-myc与bcl-2的表达无显著相关性（r=0.33,P>0.05）。结论:检测睾丸肿瘤组织中bcl-2蛋白的表达可以作为睾丸肿瘤恶性程度和预后的估价性指标;C-myc蛋白的异常表达可能在睾丸肿瘤的发生、发展过程中起着促进作用。     

子宫肌瘤中bcl-2基因的表达及意义

目的 :探讨子宫平滑肌瘤中 bcl- 2基因的表达及临床意义。方法 :采用免疫组化技术检测子宫肌瘤患者的子宫肌瘤 (实验组 )和周围正常子宫肌层 (对照组 )中的 bcl- 2基因蛋白产物的表达。结果 :实验组中 bcl- 2蛋白全部表达为阳性 ,且呈中等至强阳性染色 ,其表达有明显的周期性差异 ,分泌期表达明显强于增生期 (P<0 .0 1 ) ;对照组中 bcl- 2蛋白大多数表达为阳性呈弱阳性表达 ,但表达在增生期和分泌期均无显著性差别 (P>0 .0 5 )。结论 :bcl- 2基因蛋白的变化在子宫肌瘤发生和发展中起重要作用。     

bcl-2 shRNA表达载体的构建及其在K562细胞中的干扰作用研究

目的构建bcl-2shRNA表达载体，观察其在人白血病K562细胞系中对bcl-2基因的干扰作用。方法设计合成有短发夹结构靶位bcl-2基因的65个碱基的寡核苷酸，连接到载体pSIREN-Shuttle（pSS），构建了bcl-2shRNA表达载体，得到重组质粒pSS-shbcl-2-1、pSS-shbcl-2-2、pSS-shbcl-2-3和一个阴性对照，将其稳定转染K562细胞，分别用RT-PCR、Western-blot法检测转染后K562细胞bcl-2mRNA及蛋白质表达水平。结果成功构建了bcl-2shRNA的表达载体，并筛选到转染后K562细胞在pSS-shbcl-2-3组bcl-2基因的mRNA和蛋白质表达水平明显抑制。结论特异性的bcl-2shRMA可以干扰K562细胞中bcl-2基因的表达，针对bcl-2基因不同位点的不同shRNA也有干扰效果的差异。     

靶向bcl-2基因短发卡RNA干扰真核质粒表达稳定株筛选和建立

目的构建针对bcl-2基因的短发卡RNA(shRNA)干扰真核质粒表达载体,转染到bcl-2基因高表达的胃癌细胞株SGC-7901中,并筛选出稳定低表达bcl-2基因的细胞株。方法针对bcl-2基因的mRNA序列设计、合成4对寡核苷酸序列,插入质粒载体pGPH1/GFP/Neo中,经脂质体介导转染SGC-7901细胞。RT-PCR检测bcl-2基因在mRNA水平的变化,MTT法检测bcl-2基因沉默后胃癌SGC-7901细胞的增殖情况。基因沉默效果最好的一组,经G418筛选以得到稳定表达株。结果与对照组相比,转染成功后的细胞bcl-2基因在mRNA水平均显著下降,细胞增殖速度明显降低(t=2.41,P<0.05);并筛选出稳定表达shRNA2质粒的阳性克隆。结论本研究成功利用针对bcl-2基因的shRNA质粒载体筛选出稳定低表达bcl-2基因的SGC-7901细胞,为胃癌的基因治疗研究奠定了基础。     

The relationship between bcl-2 gene abnormality and nasopharyeal carcinoma

Bcl--2/JHfusiongenecausedbyt(14;18)(q32;q21)mayleadtoaberrantexpressionofhcf--2geneandbecloselyrelatedtogenesisoflymphomaL'~':.Inordertoexploretherelationshipbetweenhcf--2geneaberrantandnasopharyngealcarcinoma(NPC),hcf--2/JHfusiongeneandhcf--2proteinexpressionwereexaminedwithsemi--nestedinsituPCR(SNISPCR)andimmunohistochemistrytechniquein41casesofNPC.MATERIALSANDMETHODSTissuepreparationFortyonesampleswereobtainedbybiopsyfrom41patientsinourdepartmentfromApril1996toMarch1997.Oft…