细菌耐药基因在斑马鱼体内转移规律的初步研究

目的初步研究耐药基因在斑马鱼体内转移和扩增规律。方法构建RP4质粒介导的耐药基因在斑马鱼肠道内转移模型并采用选择性平板筛选和qPCR技术研究斑马鱼粪便中耐药菌和耐药基因的体外排出量随时间的变化规律。结果细菌培养结果显示,粪便中耐药菌的数量大于供体菌数量,接合子最多时可占粪便中全部可培养细菌总数的12%。qPCR检测结果显示,粪便中耐药基因的相对表达量大于供体耐药基因的相对表达量,产生的接合子的相对数量可高达15%。结论本研究条件下,粪便固有细菌可获得耐药基因,耐药基因在斑马鱼肠道内发生了转移和扩增。     

空气中颗粒物对耐药基因接合转移的影响

目的 研究空气中颗粒物对耐药基因体外接合转移的影响.方法 供体菌为大肠埃希菌(携带RP4质粒),受体菌为具有美罗培南抗性的肺炎克雷伯菌,在不同粒径、不同浓度颗粒物作用条件下,接合一段时间后,利用含有不同抗生素的LB琼脂固体培养基平板计数,计算接合子数量和接合转移频率.结果 PM0.1、PM2.5、PM10、1648a都...     

石墨烯对大肠杆菌和肺炎克雷伯杆菌耐药基因接合转移的影响和机制探索研究

目的 探讨石墨烯对多重耐药基因水平接合转移的影响.方法 供体菌为具有耐卡那霉素、四环素、氨苄青霉素的大肠埃希菌,受体菌为具有耐美罗培南的肺炎克雷伯杆菌,保持供、受体菌液浓度比例为1:1,配制10 ml作用体系,在37℃电热恒温箱中接合,利用含有多种抗生素的LB琼脂培养基选择平板计接合子数量并计算接合转移频率.探讨不同菌...     

山东省部分志贺氏菌R质粒接合转移的研究

志贺氏菌属耐药菌株的不断增加,给细菌性痢疾的防治工作带来了一定的困难。耐药菌株中的一部分菌株耐药受可转移性耐药质粒(R质粒)控制。为了解山东省志贺氏菌耐药情况及R质粒接合转移率,我们对由腹泻病人分离的222株志贺氏菌进行了常用抗菌药物敏感性测定并对其中的67株耐药菌株作了R质粒接合转移实验,结果报告如下:     

水中携带非接合性质粒CTX-M型产ESBL大肠埃希菌耐药基因捕获与转移研究

目的初步探索长江水系重庆段地表水中携带非接合性质粒CTX-M型产超广谱β-内酰胺酶(Extended-Spectrumβ-Lactamases,ESBL)大肠埃希菌(Escherichia coli,E.Coli)捕获氨基糖苷类修饰酶(aminoglycoside modifying enzyme,AME)编码基因及水平转移β-内酰胺酶编码基因(bla)规律,为预防与控制产ESBL大肠埃希菌危害提供理论依据。方法采用滤膜法分离、梅里埃微生物分析系统鉴定菌株;将从长江水系重庆段地表水分离出的大肠埃希菌中筛选出2株供体菌与受体菌进行接合,形成转移接合子,再次将该转移接合子与E.Coli NK5449进行接合,观察AME编码基因和bla CTX基因转移情况;用纸片扩散法测定相关菌株耐药谱;用PCR方法检测分析供、受体菌与转移接合子bla基因型、AME编码基因及整合子携带情况,并用随机扩增多态性分析技术判断相关菌株与质粒同源性。结果携带非接合性质粒的产ESBL大肠埃希菌可作为受体菌与携带AME编码基因的非产ESBL供体菌接合,接合频率分别为1.6×10-6和7.2×10-6。借助外来可移动基因元件,其本身又可转变为供体菌,将bla CTX基因向其他受体菌水平转移,接合频率分别为3.7×10-6和7.4×10-6。结论与携带接合性质粒的产ESBL大肠埃希菌相比,携有非接合性质粒的产ESBL大肠埃希菌缺失bla CTX基因转移能力是暂时的,当有外来接合质粒、整合子或其他可移动基因元件协同作用时,该类菌株可实现耐药基因的捕获与转移,在扩大自身耐药谱同时,也可将自身blaCTX基因以较高的频率传递给其他菌株,这将促进水环境中耐药基因的扩散,增加对人类健康的威胁。     

红霉素耐药粪肠球菌ermB基因及水平转移分析

目的研究临床分离的红霉素耐药粪肠球菌中红霉素耐药基因ermB及其水平转移情况。方法采用聚合酶链式反应(PCR)法检测红霉素耐药粪肠球菌耐药基因ermB,采用液体环境传递法研究红霉素耐药基因ermB水平转移情况。结果 20株耐红霉素粪肠球菌中ermB基因17株为阳性,阳性率为85.00%。液体环境传递实验结果表明,3.57%(10/280)菌株携带的ermB基因在粪肠球菌之间液体环境中水平转移;1.39%(4/288)菌株携带的ermB基因在粪肠球菌与葡萄球菌之间液体环境中水平转移;无法统计菌株携带的ermB基因在粪肠球菌与大肠杆菌之间液体环境中水平转移情况。结论耐红霉素粪肠球菌ermB基因携带率较高,且该基因在粪肠球菌间和异种菌株间液体环境下可发生水平转移。     

ICU多耐药肺炎克雷伯菌整合子及耐药基因研究

目的 研究ICU多耐药肺炎克雷伯菌的整合子及其耐药基因情况.方法 收集宁波市医疗中心李惠利医院2019年ICU来源多耐药肺炎克雷伯菌30株,统计分析药敏结果;多重PCR检测Ⅰ类、Ⅱ类、Ⅲ类整合酶基因及整合子可变区,进一步对整合子阳性菌株的可变区进行测序分析.结果 30株多耐药肺炎克雷伯菌对多种抗菌药物(头孢类头孢唑林、...     

健康人肠道大肠埃希菌整合子和耐药基因盒的研究

目的：研究健康人肠道大肠埃希菌的整合子携带情况与整合子携带的基因盒种类及其与耐药性之间关系.方法：PCR检测Ⅰ类整合子,确定细菌携带整合子的情况.整合子阳性菌株进一步检测整合子的可变区,分析插入基因盒的序列.结果：150株大肠埃希菌中有38株携带Ⅰ类整合子,集中分布在对3种以上抗生素耐药的菌株中.插入基因盒集中在甲氧苄氨嘧啶耐药基因（dfr）和氨基糖甙类抗生素耐药基因（aadA）.结论：细菌的多重耐药性与整合子携带高度一致,但是细菌耐药谱和其整合子无对应关系.     

泛耐药肺炎克雷伯菌的耐药基因研究

目的 了解1株对临床常用18种抗菌药物(包括亚胺培南、美罗培南)均耐药的肺炎克雷伯菌(KPN)所携带的耐药基因状况.方法 对该株KPN进行了9类耐药基因的PCR法检测,包括β-内酰胺酶基因blaTEM、blaSHV、blaLEN、blaOKP、blaCTX-M-1、2、9群、blaOXA-1、2、10群、blaCARB、blaPER、blaVEB、blaGES、金属β-内酰胺酶基因blaIMP、blaVIM、blaKPC,AmpC酶基因blaDHA、blaACT/MIR、blaCMY/MOX、blaCMY/LAT,氨基糖苷修饰酶基因aac(3)-Ⅰ、aac(3)-Ⅱ、aac(6')-Ⅰ b、aac(6')-Ⅱ、ant(2")-Ⅰ、ant(3")-Ⅰ,喹诺酮类耐药基因qnrA、TMP耐药基因dfrA1、dfrA17,消毒剂磺胺耐药基因qacE△1-sul1,整合子遗传标记基因intⅠ1、intⅠ2、intⅠ3,转座子遗传标记基因tnpA、merA,共计36种.结果 KPN共检出7种耐药基因,分别为β-内酰胺酶基因blaTEM,blaSHV,金属β-内酰胺酶基因blaKPC-2,氨基糖苷修饰酶基因aac(3)-Ⅱ,ant(3")-Ⅰ,消毒剂磺胺耐药基因qacE△1-sull,整合子遗传标记基因intⅠ1.结论 在该株泛耐药KPN中发现了少见的blaKPC-2金属β-内酰胺酶基因,该菌对18种抗菌药物的耐药可能与其同时携带有多种耐药基因有关,临床应对此类菌株引起重视.     

浅谈细菌基因的水平转移

细菌--体积最小、数量最多、存活最久的一种生物--以简单的无性二分裂方式繁殖.如果,细菌仅依靠亲代遗传的信息和点突变来适应环境,那么,细菌对抗生素产生抗性应该还是一个漫长的过程.然而,事实却是恰恰相反.     

亚抑菌浓度三代头孢菌素对耐药质粒接合转移的影响

目的:探讨不同亚抑菌浓度三代头孢菌素对耐药质粒接合转移的影响。方法:研究不同亚抑菌浓度头孢噻肟(0μg/ml、4μg/ml8、μg/ml、16μg/ml3、2μg/ml)及头孢他啶(0μg/ml、2μg/ml、4μg/ml、8μg/ml、16μg/ml)在不同作用时间下供体菌(临床分离的携带CTX-M型基因肺炎克雷伯菌株)与受体菌(大肠埃希菌E.coli C600 SMR Lac)接合转移率的变化。结果:在4μg/ml头孢噻肟亚抑菌浓度作用下的接合转移率最高,除头孢噻肟空白组(0μg/ml),接合转移率随头孢噻肟亚抑菌浓度的增加而下降。同样,在2μg/ml头孢他啶亚抑菌浓度作用下的接合转移率最高。除头孢他啶空白组(0μg/ml),接合转移率随头孢他啶浓度的增加而下降。结论:不同亚抑菌浓度三代头孢菌素能影响耐药质粒的转移。临床使用抗菌药物时,应考虑到给药间歇期抗菌药物亚抑菌浓度的变化,及时调整治疗方案,防止细菌耐药性的播散。     

铜绿假单胞菌Ⅰ类整合子遗传标记及耐药基因研究

目的 了解分离自重症监护病房（ICU）铜绿假单胞菌（PAE）中,Ⅰ类整合子及抗菌药物耐药相关基因存在状况。方法 对ICU分离33株PAE,采用PCR方法检测Ⅰ类整合子遗传标记（intⅠ1和qacE△1-sul1基因）及22种抗菌药物耐药相关基因。结果33株PAE中,oprD基因均存在缺失突变,其他23种基因intⅠ1、qacE△1-sul1、blaIMP、blaVIM、blaTEM、blaSHV、blaOXA-10群、blaCARB、blaPER、blaVEB、blaGES、blaDHA、blaOXA-1群、blaOXA-2群、blaBEL-1、blaCTX-M-1群、aac（3）-Ⅱ、aac（6′）-Ⅰ、aac（6′）-Ⅱ、ant（3″）-Ⅰ、ant（2″）-Ⅰ、catB和cml1均阴性。结论 临床分离的PAE中不存在Ⅰ类整合子、oprD基因缺失突变率很高,oprD基因缺失突变是其对亚胺培南耐药的主要原因。     

李斯特菌的耐药性及耐药基因

细菌耐药性的发展越来越受到关注，李斯特菌也表现出向多重耐药发展的趋势。本文综述了李斯特菌属对几种常用抗生素的耐药现状及相关耐药基因，并着重阐述了对人体致病的单核细胞增生李斯特菌的耐药状况。     

多重耐药铜绿假单胞菌耐药基因的检测与分析

目的:调查我院多重耐药铜绿假单胞菌β-内酰胺酶编码基因、外膜通道蛋白D2(OprD2)基因、氨基糖苷类修饰酶基因和耐消毒剂基因的存在状况。方法:采用K-B法测定临床分离的铜绿假单胞菌对17种抗菌药物的药物敏感性,筛选出100株多重耐药菌株,采用聚合酶链反应检测β-内酰胺酶编码基因、OprD2基因、氨基糖苷类修饰酶基因和耐消毒剂基因。结果:100株多重耐药铜绿假单胞菌中β-内酰胺酶编码基因CTX-M-1群、TEM、DHA的检出率分别为54.0%、30.0%、9.0%,未检出SHV、OXA-10群、PER、GES、VEB、CARB、IMP和VIM基因;OprD2基因的缺失率为61.0%;氨基糖苷类修饰酶基因aac(6′)-Ⅱ、ant(3″)-Ⅰ和ant(2″)-Ⅰ的阳性率分别为59.0%、33.0%、25.0%,未检出aac(6′)-Ⅰ;耐消毒剂基因qacE△1-sul1的检出率为15.0%。结论:我院多重耐药铜绿假单胞菌存在多种耐药基因,对β-内酰胺类抗生素的耐药主要与CTX-M-1群、TEM、DHA型耐药基因有关,对亚胺培南耐药主要与OprD2基因缺失有关,对氨基糖苷类抗生素的耐药主要与aac(6′)-Ⅱ、a...     

土壤中1株多重耐药菌的分离及其耐药基因的鉴定

目的 研究多重耐药菌在自然环境中的分布及耐药情况,为防控耐药基因从自然环境向人类自身传播扩散提供理论指导.方法 在杭州某医院和周边社区采集105份土壤样品,利用10 mg/L亚胺培南进行选择性富集,分离耐药菌株.对筛选获得的菌株进行16S rDNA菌种鉴定和药敏实验,PFGE和Southern blot实验确定含有耐药...     

全耐药菌10种耐药基因的研究

目的 研究全耐药菌氨基糖苷类修饰酶基因(AMEs)、消毒剂/磺胺耐药基因(qacE△1-sul1)、整合子(int)1、2、3等10种耐药基因的分布.方法 应用法国生物梅里埃公司的API鉴定条/PSE5.0药敏条和美国BD公司的Phoenix NMIC/ID-109鉴定/药敏板鉴定和细菌药敏试验,应用PCR法检测9株全耐药菌临床分离株6种A-MEs、qacE△1-sul、整合子(int)1、2、3等10种耐药基因,并分析其分布.结果 9株全耐药菌共检出8种耐药基因,其分布为aac(6')-Ⅱ、aac(3)-Ⅰ均1株,aac(3)-Ⅱ2株,ant(3")-Ⅰ、ant(2")-Ⅰ均3株,主要阳性耐药基因为aac(6')-Ⅰ b-Cr 4株,qacE△1-sul1、int Ⅰ 15株;int Ⅰ 2、int Ⅰ 3均为阴性;各有1株菌分别为2、3、5、6种基因阳性,2株菌为4种基因阳性;3株菌均为阴性.结论 全耐药菌菌种分布广;耐药机制多为多重机制,主要与A-MEs和Ⅰ类整合子有关,各种耐药基因的分布无特异性,部分菌需进一步研究.     

多重耐药铜绿假单胞菌耐药基因及亲缘性分析

目的 了解解放军第98医院临床分离的多重耐药铜绿假单胞菌（MRPA）中抗菌药物相关耐药基因存在状况及菌株亲缘性.方法 在2003年9月-2004年10月间从临床分离30株MRPA,采用PCR及序列分析的方法分析24种基因blaTEM、blaSHV、blaOXA-10群、blaPER、blaVEB、blaIMP、blaVIM、blaGES、blaCARB、blaDHA、blaMIR、aac（3）-Ⅰ、aac（3）-Ⅱ、aac（3）-Ⅲ、aac（3）-Ⅳ、aac（6＇）-Ⅰ、aac（6＇）-Ⅱ、ant（3＂）-Ⅰ、ant（2＂）-Ⅰ、aph（3＇）-Ⅵ、oprD、qacE△1-sul1、catB、cml1,采用Average法进行耐药基因聚类分析以确定菌株亲缘性.结果 30株MRPA中blaTEM、blaOXA-10群、blaCARB、aac（3）-Ⅱ、aac（6＇）-Ⅰ、aac（6＇）-Ⅱ、ant（3＂）-Ⅰ、ant（2＂）-Ⅰ、qacE△1-sul1和cml1基因的阳性率分别为66.7%、3.3%、3.3%、76.7%、3.3%、33.3%、53.3%、26.7%、83.3%和3.3%,blaOXA-10群基因经序列分析确认为blaOXA-10型ESBLs,27株（90.0%）发生oprD基因缺失突变;其他基因均阴性;根据耐药基因聚类分析该30株MRPA可分4群,为医院感染所致.结论 临床分离的MRPA中至少存在10种耐药基因,oprD基因缺失突变率很高,MRPA可导致克隆传播医院感染,并存在暴发性流行.     

淋菌耐药表型与耐药基因的分析

目的探讨淋菌多药耐药与耐药基因的关系。方法应用K-B法检测2009年1月-2010年8月分离的40株淋菌对抗菌药物的敏感性,煮沸法提取菌株DNA,随机抽取增其中22株PCR扩TEM、tetM、erm和mefA基因。结果淋菌的敏感性测定显示,多药耐药现象明显;TEM耐药基因的检出率为77.3%,tetM耐药基因的检出率为77.3%,未检出erm和mefA基因。结论淋菌的多药耐药与各耐药基因型之间密切相关。     

合肥市生猪肉沙门菌分离株耐药表型与耐药基因的相关性研究

目的:了解生猪肉中沙门菌分离株耐药表型与耐药基因的携带关系。方法:采用K-B纸片法对生猪肉中26株沙门菌分离株进行22种抗菌药物敏感试验,并应用PCR技术对沙门菌分离株进行耐药基因检测。结果:26株沙门菌总耐药率为61.54%(16/26),其中14株(53.85%)对至少3种以上抗菌药物耐药,属于多重耐药株,强力霉素-四环素-氯霉素-卡那霉素是主要多重耐药谱;3类抗菌药物耐药基因以tetB、Flor和aph(3)-IIa与aadB基因分别检出最高。结论:沙门菌耐药表型测定结果与耐药基因检测结果一致,耐药及多重耐药性与耐药基因的携带相关。     

铜绿假单胞菌耐药现状及β-内酰胺类抗菌药物耐药相关基因分析

目的 分析院内感染分离的铜绿假单胞菌（PA）耐药现状及β-内酰胺类抗菌药物耐药相关基因,为临床合理应用抗菌药物提供参考。方法 细菌鉴定采用法国梅里埃全自动微生物分析仪鉴定;药敏试验采用K-B纸片扩散法;聚合酶链反应（PCR）检测耐药基因和DNA测序分析耐药基因型。结果 37株PA中blaDHA阳性14株（37.84%）;blaVIM阳性7株（18.92%）;blaCARB阳性5株（13.51%）;blaSHV阳性2株（5.41%）;oprD2基因缺失26株（70.27%）。所分离的PA对第1代、2代和3代头孢菌素类药物耐药率均高达70%以上,对亚胺培南耐药率达32.43%。结论 本院院感患者分离的PA呈多重耐药,对β-内酰胺类抗菌药物耐药与携带blaDHA、blaVIM、blaCARB、blaSHV基因有关;oprD2基因缺失突变是亚胺培南耐药的重要原因。