盐酸纳美芬缺血后处理抑制TLR2/MyD88/NF-κB p65炎症信号途径减轻大鼠肺缺血–再灌注损伤作用的研究

目的 研究纳美芬缺血后处理减轻肺缺血–再灌注损伤的作用机制,探讨全病程中的最佳药物治疗时机。方法 将60只大鼠随机均分为假手术组、模型组,以及纳美芬A、B、C、D组共6组,每组10只。假手术组大鼠不行缺血再灌注处理,未予药物治疗。模型组采用阻断左肺门法建立肺缺血–再灌注模型,未予药物治疗。缺血处理后纳美芬A、B、C、D组分别于肺循环再灌注前5 min、再灌注后10、30、60 min时予尾静脉注射纳美芬（15μg/kg）。全部大鼠于再灌注3 h末处死后留取左肺上叶组织,评估各组大鼠肺组织损伤程度,检测肺组织湿/干重比值、髓过氧化物酶（myeloperoxidase,MPO）活性和肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)、Toll样受体2(Toll-like receptor 2,TLR2)mRNA、MyD88 mRNA以及TLR2、MyD88、核因子κB(nuclear factor-κB,NF-κB)p65、p-NF-κB p65表达水平。结果 模型组和纳美芬A、B、C、D组均可见不同程度的肺泡间隔破坏,肺间质水肿明显、间质内炎症细胞浸润和红细胞...     

缬沙坦对大鼠缺血再灌注心肌细胞的影响

目的：研究缬沙坦对大鼠缺血再灌注心肌细胞凋亡的影响。方法：对18只雄性SD大鼠建立心肌缺血再灌注模型，分成3组：假手术组；缺血再灌注组I缬沙坦预保护组。观察大鼠缺血再灌注心肌细胞凋亡及相关基因Bcl-2、P53的表达情况以及缬沙坦干预后的影响。结果：假手术组凋亡细胞无明显增多，而缺血再灌注组凋亡细胞明显增多，Bcl-2上升，P53上升，而缬沙坦干预组心肌细胞凋亡下降，Bcl-2上升，P53下降。结论：缺血再灌注过程中大鼠心肌细胞发生凋亡，缬沙坦可抑制P53的表达，促进Bcl-2的表达。     

大鼠大脑中动脉永久性缺血和缺血再灌注模型的比较

目的:比较大鼠大脑中动脉永久性阻塞模型和缺血再灌注模型的差异,寻找一种制作简单,成功率高的脑缺血模型。方法:将150只SD雄性大鼠随机分为:永久性大脑中动脉阻塞60只,线栓阻塞大脑中动脉4h、8h、24h后生理盐水灌注后取脑;大脑中动脉缺血再灌注60只,线栓阻塞大脑中动脉100min后,拔出线栓形成再灌注,分别在再灌注4h、8h、24h后灌注取脑;对照组30只。比较模型制作的成功率、术后存活率、神经功能缺失评分、脑梗死体积及模型稳定性。结果:脑缺血再灌注组模型成功率高于永久性脑缺血组,差异有统计学意义(P<0.05);永久性脑缺血模型组死亡率较脑缺血再灌注模型组死亡率有升高趋势,但无统计学意义;TTC染色:永久性大脑中动脉阻塞梗死灶随着缺血时间的延长逐渐扩大,大脑中动脉缺血再灌注梗死灶随再灌注时间的延长无明显变化;结论:大鼠大脑中动脉缺血再灌注模型手术方式简单、结果稳定、缺血时间可控,是一种较理想的模拟脑梗死的动物模型。     

缺血后处理对缺血再灌注大鼠心肌梗死和心肌细胞凋亡的作用

目的观察在体情况下缺血后处理(IPC)对兔心肌梗死范围及缺血心肌细胞凋亡的影响,并与缺血预处理(IP)心脏保护作用比较. 方法采用兔心肌缺血/再灌注模型,在缺血后、再灌注前多次短暂再灌/停灌处理. 以Even's blue-TTC法检测心肌梗死范围,TUNEL方法检测缺血心肌细胞凋亡. 结果与对照组相比,缺血后处理明显减小心肌梗死范围(12.5±5.4% vs对照组26.7±6.7%, P<0.01),缺血区心肌凋亡指数明显下降(14.6±7.4 vs对照组30.4±12.3, P<0.05). 结论对于已缺血心肌,再灌前予多次短暂复灌、停灌处理具有与IP类似缩小心梗范围作用,IPC对缺血心肌的保护效应可能与其抑制缺血心肌细胞凋亡有关.     

大脑中动脉缺血再灌注后nNOS的表达

①目的 探讨神经元型一氧化氮合酶(nNOS)与脑缺血的关系。②方法 制备Wistar大鼠大脑中动脉缺血再灌注模型，用苏木精-伊红染色观察缺血后脑组织的形态学改变，用免疫组织化学法显示nNOS的变化。③结果 缺血再灌注后皮质及壳尾核nNOS免疫阳性神经元细胞表达增多，以再灌注3h最多，6h开始下降。组织学观察可见缺血区内有神经元的变性、肿胀及坏死。④结论 在局灶性脑缺血再灌注早期nNOS表达增多，并可能参与急性期神经毒性作用。     

缺血后处理对糖尿病大鼠缺血再灌注心肌的保护作用

目的 探讨缺血后处理对糖尿病大鼠缺血再灌注心肌的保护作用.方法 通过尾静脉注射2％链脲佐菌素溶液(45mg/kg)建立糖尿病大鼠模型,并将大鼠随机分为4组(每组12只):正常组:正常大鼠自由饲食水,不做任何手术处理;假手术组:糖尿病大鼠开胸后在冠状动脉左前降支(LAD)下穿线,不结扎;缺血再灌注(IR)组:结扎糖尿病大鼠LAD造成缺血30min,再灌注2h;缺血后处理(IPostC)组:结扎糖尿病大鼠LAD 30 min,再灌注30 s,阻断30 s,重复3次,再灌注2h.采用TTC法检测心肌梗死面积,TUNEL法检测心肌细胞凋亡.结果 与IR组比较,IPostC组大鼠心肌梗死面积及凋亡指数明显减小,差异有统计学意义(P＜0.05).结论 缺血后处理能够减小心肌梗死面积,减少心肌细胞凋亡,对糖尿病大鼠缺血再灌注心肌具有保护作用.     

丁苯酞对大鼠脑组织缺血再灌注损伤的保护作用及相关分子机制研究

目的:研究丁苯酞对大鼠脑组织缺血再灌注损伤的保护作用及相关分子机制。方法:选择雄性SD大鼠作为实验动物并随机分为假手术组(Sham组)、缺血再灌注组(I/R组)、丁苯酞组(NBP组),采用线栓法建立缺血再灌注模型并在再灌注前给予6mg/kg丁苯酞氯化钠注射液进行干预。再灌注后12、18、24h时,测定脑组织中细胞凋亡的数目以及细胞凋亡分子、氧化应激分子的含量。结果:再灌注12、18、24h时,三组大鼠脑组织中凋亡细胞数目的分析如下:I/R组大鼠脑组织中凋亡细胞的数目显著多于Sham组,Fas、FasL、BNIP3、Caspase-3、Caspase-9的蛋白表达量以及ROS、MDA的含量均显著高于Sham组,CAT、SOD的含量均显著低于Sham组;NBP组大鼠脑组织中凋亡细胞的数目显著低于I/R组,Fas、FasL、BNIP3、Caspase-3、Caspase-9的蛋白表达量以及ROS、MDA的含量均显著低于I/R组,CAT、SOD的含量均显著高于I/R组。结论:丁苯酞能够通过抑制细胞凋亡和氧化应激反应的途径来减轻大鼠脑组织缺血再灌注损伤。     

三七总皂甙对大鼠肝移植缺血再灌注损伤的保护作用

目的探讨三七总皂甙对大鼠肝移植I／R损伤的影响及可能机制。方法SD大鼠随机分为3组：假手术(SO)组，生理盐水灌注(NS)组，三七总皂甙灌注(PNS)组。于供肝再灌注后2h处死动物取出肝脏标本，检测肝细胞凋亡及BCL-2，MDA水平。结果假手术组肝细胞凋亡少见，NS组与PNS组与SO组比较，肝细胞凋亡显著增高。PNS组与NS组比较，肝细胞凋亡显著降低。肝细胞BCL-2蛋白的阳性表达，PNS组与NS组和SO组比，差异有显著性。MDA含量：PNS组与NS组和SO组比，差异有显著性。结论PNS预处理对肝脏缺血／再灌注损伤(I／R)具有保护作用，其可能机制为抑制氧自由基生成，上调调控基因BCL-2蛋白的表达抑制肝细胞凋亡。     

苦参素对大鼠肝缺血再灌注中肝细胞的保护作用及其机制探讨

目的研究苦参素对大鼠肝缺血再灌注(IRI)中肝细胞的保护作用及其相关机制。方法采用阻断和恢复大鼠肝动脉和门静脉血供,制作全肝缺血30min再灌注90min模型。雄性Wistar大鼠随机数字法分为假手术组(sham组)、苦参素组(oxymatrine组)和对照组(IRI组),每组10只。血清天冬氨酸氨基转移酶(AST)、丙氨酸氨基转移酶(ALT)水平检测肝功状况,苏木素-伊红(HE)染色观察病理形态学改变,原位末端标记法(TUNEL)观察肝细胞凋亡情况,流式细胞术(FCM)测定肝细胞凋亡率及细胞周期,Western印迹法检测肝Fas基因表达情况。结果Oxymatrine组AST和ALT水平(513U/L±96U/L,352U/L±72U/L)明显低于IRI组(1326U/L±211U/L,768U/L±175U/L),差异有统计学意义(t值分别为4·21、4·13,P均<0·01);IRI组AST和ALT水平明显高于sham组(112U/L±53U/L、55U/L±17U/L),差异有统计学意义(t值分别为4·72、4·36,P均<0·01)。HE染色显示Oxymatrine组大鼠肝组织病理改变较IRI组轻,TUNEL检测显示oxymatrine组大鼠肝组织凋亡细胞数量较IRI组少。FCM检测显示oxymatrine组肝细胞凋亡明显少于IRI组(t=4·53,P<0·01);oxymatrine组较IRI组处于G0/G1期的肝细胞少,而S期肝细胞明显增多(t=4·52,P<0·01)。结论苦参素通过保护肝细胞和促进肝细胞更新,可明显减轻大鼠肝细胞在肝缺血再灌注中的损伤。     

小檗胺对大鼠肾缺血再灌注损伤保护作用的研究

采用大鼠肾动脉夹闭方法制备肾缺血再灌注损伤模型,缺血６０ｍｉｎ后再灌注３０ｍｉｎ,肾皮质丙二醛含量及钙含量较缺血组增高,过氧化氢酶活性低于缺血组。盐酸小檗胺可明显改善再灌注后的组织学损伤,降低ＭＤＡ及钙含量,提高ＣＡＴ活性。结果表明,小檗胺可以减轻氧自由基的损害作用,减轻细胞内钙超载,对缺血肾组织有一定保护作用。     

补阳还五汤联合依达拉奉对脑缺血再灌注损伤后神经细胞凋亡的影响

目的研究补阳还五汤联合依达拉奉对小鼠脑缺血再灌注损伤后神经细胞凋亡及Bcl-2、Bax和Caspase-3表达的影响。方法将50只小鼠随机分为假手术组、模型组、补阳还五汤组、依达拉奉组和两药联用组,每组10只,其中缺血再灌注后1d和7d各5只。首先制备小鼠大脑中动脉缺血模型,TUNEL法观察神经细胞凋亡指数（AI）,免疫组化法观察小鼠大脑皮质神经元Bcl、Bax-2和Caspase-3表达阳性细胞数。结果与模型组比较,补阳还五汤组、依达拉奉组、两药联用组小鼠脑神经细胞AI值均明显降低（P＜0.05）,Bcl-2/Bax比值明显升高（P＜0.05）,Caspase-3表达阳性细胞数明显减少（P＜0.05）,其中又以两药联用组更为明显（P＜0.05）。结论两药联用能降低脑缺血再灌注损伤后神经细胞的凋亡,降低促凋亡基因Caspase-3的表达,协同发挥脑保护作用。     

血管内皮生长因子对大鼠脑缺血再灌注模型的神经保护作用

目的 探讨血管内皮生长因子VEGF对大鼠脑缺血再灌注模型的神经保护作用。方法 应用大鼠大脑中动脉缺血再灌注（MCAO）模型，再灌注12h后给予VEGF腹腔注射，检测再灌注不同阶段大鼠神经功能缺损情况，以及梗死区一氧化氮合酶（nNOS）mRNA和超氧化物歧化酶（SOD）蛋白的表达量，与未注射VEGF组比较。结果 注射VEGF组大鼠缺血再灌注24、36和48h神经功能缺损评分明显高于MCAO组；MCAO组大鼠再灌注后nNOS基因表达开始增加，于24h达到高峰开始下降；SOD表达量则在48h内都在升高。注射VEGF组再灌注24、48h的nNOS和SOD的表达量与MCAO比较均明显增高（P〈0．05）。结论 VEGF具有增加再灌注组织一氧化氮合酶和超氧化物歧化酶表达进而促进脑缺血再灌注后神经功能恢复的作用。     

介入治疗大脑中动脉急性闭塞后脑缺血再灌注损伤的影像学观察

目的 探讨介入治疗大脑中动脉急性闭塞后脑缺血再灌注损伤(CIRI)的影像学变化.方法 选择2013年1月至2014年11月该院收治的大脑中动脉急性闭塞患者32例 ,16例患者进行溶栓和(或)机械取栓后血管再通治疗(再通组) ,16例患者未进行溶栓治疗(非再通组),对比分析其发病时及第3、7天的头颅影像学变化差异.结果 在发病后第3天再通组患者侧脑室受压程度比例、中线移位程度均重于非再通组[0.50±0.11 vs.0.58±0.10,0.57(0.18,0.83)vs.0.22(0,0.57)cm],两组比较差异有统计学意义( P＜0 .05 );在发病后第7天再通组患者侧脑室受压程度比例、中线移位程度均轻于非再通组[0 .80 ± 0 .11 v s . 0.55±0.12,0(0,0.13)vs.0.46(0,0.88)cm],两组比较差异有统计学意义(P＜0.05).结论 介入治疗虽是缺血性卒中早期治疗的重要手段 ,但其加重了早期的脑水肿 ,应该重视介入治疗所导致的CIRI.     

局灶性脑缺血再灌注大鼠大脑皮质中Caspase-3蛋白的表达

目的：观察局灶性脑缺血再灌注（FCIR）大鼠大脑皮质Caspase-3的表达。方法：雄性SD大鼠42只，分为假手术组和缺血再灌注（IR）组，IR组又分为缺血2h再灌注2h、6h、12h、24h、48h、72h组，每组6只。IR组采用线栓法建立FCIR模型，假手术组仅插线1cm；于脑视交叉平面向后7～11mm处取脑组织。HE染色观察各个时间点细胞形态学变化，免疫组织化学SP法观察不同时间Caspase-3的表达，TUNEL法检测细胞凋亡。结果：脑缺血2h再灌注6hCaspase-3表达升高，再灌注24h达到高峰，再灌注72h开始下降。凋亡细胞数的变化与Caspase-3表达变化一致。结论：Caspase-3参与了脑缺血再灌注神经元的死亡过程，该作用可能与细胞凋亡有关。     

caspase-12在胎鼠宫内缺血/再灌注后脑神经元凋亡中的作用

目的 探讨caspase-12与内质网应激介导的宫内缺血/再灌注损害后胎鼠脑组织神经元凋亡的关系.方法 制作胎鼠宫内缺血/再灌注损伤模型.取胎鼠脑组织行TUNEL染色,分析神经元凋亡情况.以免疫组化法检测海马回CA1区caspase-12蛋白的表达情况.结果 缺血15min再灌注3、6、12、24h,海马回CA1区TUNEL阳性神经元数分别为(43.6±11.4)、(64.4±9.3)、(74.2±12.1)和(97.3±8.9)个/mm2;随着再灌注时间的延长,TUNEL阳性神经元数明显增加,于再灌注24h达高峰.与血流未恢复时的(20.2±9.9)个/mm2比较,差异有统计学意义(P＜0.001).缺血15min再灌注3、6、12、24h,海马回CA1区caspase-12的表达分别为0.41±0.12、0.51±0.21、0.59±0.16和0.31±0.09,与对照组的0.01±0.01比较,差异有统计学意义(P＜0.001),表达高峰于再灌注12h出现.结论 caspase-12活化是胎鼠宫内缺血缺氧时内质网应激介导脑神经元凋亡的重要环节.     

Rho激酶抑制剂对大鼠脑缺血/再灌注后海马神经元损伤的保护作用

目的探讨Rho激酶抑制剂（盐酸法舒地尔）对大鼠脑缺血/再灌注（I/R）后海马CA1区神经元存活的影响。方法采用Pulsinelli-Brierley四血管阻塞全脑缺血模型,缺血前30 min腹腔注射盐酸法舒地尔15mg/kg,缺血15 min后再灌注5天,断头取脑,石蜡切片,焦油紫染色,图像分析测定单位面积内焦油紫染色细胞总和,并与I/R组、生理盐水组及假手术组比较,进行形态学分析。结果盐酸法舒地尔明显减少了脑I/R所致的海马CA1区神经元损伤,与I/R组比较存活细胞数明显增多（P〈0.05）。结论盐酸法舒地尔对脑缺血/再灌注所致海马CA1区神经元损伤具有明显的保护作用。     

盐酸戊乙奎醚预处理对大鼠局灶脑缺血再灌注损伤及凋亡相关基因caspase-3的影响

目的:观察盐酸戊乙奎醚预处理对大鼠局灶脑缺血再灌注损伤的影响及作用机制。方法:将60只雄性SD大鼠随机分为 3 组(每组20只)。对照组（C组）：进行假手术操作,未使用线栓法建立局灶脑缺血模型;缺血-再灌注组（I-R组）：麻醉前30 min腹腔内注射生理盐水2.0 mg•kg^-1后,使用线栓法建立大鼠局灶脑缺血模型,缺血120 min后进行再灌注;盐酸戊乙奎醚预处理组（P组）：麻醉前30 min腹腔内注射盐酸戊乙奎醚2.0 mg•kg^-1后,用线栓法建立大鼠局灶脑缺血模型,缺血120 min后进行再灌注。氯化三苯基四氮唑(TTC)染色观察测定脑梗塞体积;HE 染色法观察大鼠海马神经细胞形态的变化;半定量RT-PCR法测定海马组织caspase-3 mRNA的表达水平。结果:与I-R组比较,P组脑梗塞体积显著减小（P< 0.05）;I-R组海马神经细胞发生严重损伤,细胞核固缩、浓染,P组海马神经细胞损伤显著减轻;I-R组和P组caspase-3 mRNA表达水平明显高于C组（P< 0.05）,但P组caspase-3 mRNA表达水平低于I-R组（P< 0.05）。结论：盐酸戊乙奎醚预处理可以显著改善大鼠局灶脑缺血再灌注后海马神经细胞损伤,从而对脑缺血再灌注损伤发挥保护作用,这种保护作用可能与盐酸戊乙奎醚抑制大鼠脑海马组织凋亡蛋白酶caspase-3 mRNA的表达有关。     

短暂性MCAO大鼠注射天麻素具有神经保护作用

目的:探讨天麻素对缺血性脑损伤的神经保护作用.方法:通过线栓技术闭塞大脑中动脉(MCAO)2 h诱导建立暂时性局部脑缺血模型,SD大鼠腹腔内连续注射天麻素3 d.采用TUNEL染色测定缺血边缘区细胞凋亡;免疫组织化学染色观测S100β和iNOS蛋白表达.结果:MCAO后3 d,天麻素组大鼠脑梗死边缘区TUNAL 细胞数目明显减少(P＜0.05);S100β和iNOS 细胞数目下降(P＜0.05).结论:天麻素可以抑制脑缺血诱导的细胞凋亡,具有神经保护作用;S100β和iNOS蛋白表达的下调可能涉及到天麻素的抗细胞凋亡作用.     

两种线栓制备法制作大鼠大脑中动脉阻塞再灌注损伤模型的研究

目的 评价两种制备线栓的方法,为脑缺血实验研究提供稳定可靠的动物模型.方法 30只SD雄性大鼠（250～280 g）随机分成两组各15只,第一组采用Zea Longa流派（线栓头端加热成球形）,第二组采用Koizumi流派（线栓头端用胶包裹）,两种线栓制备法分别制作大鼠大脑中动脉阻塞再灌注损伤模型,观察手术时间、神经功能评分,计算梗死百分比,并分析神经功能评分和脑梗死体积比之间的关系,对两种线栓制备法模型的成功率与稳定性进行评价.结果 两组在神经功能评分、脑梗死体积比差异无统计学意义（P＞0.05）;两组模型的稳定性相近;神经功能评分与脑梗死体积比之间存在相同变化趋势;第二组操作时间少于第一组,两组之间的差异具有统计学意义（P＜0.01）.结论 第二组的线栓制备法线栓头采用密封胶包裹,线栓头大小容易控制,较第一组线栓头端加热成球形所需时间短,且易操作.