肺腺癌细胞表皮生长因子受体酪氨酸激酶抑制剂耐药相关上皮间质转化基因筛选及其调控通路分析

目的基于生物信息学方法,在肺腺癌细胞中筛选出与表皮生长因子受体-酪氨酸激酶抑制剂(EGFR-TKI)耐药、与上皮间质转化(EMT)相关的差异基因,构建蛋白互作网络,进一步筛选出枢纽基因,分析枢纽基因在肺腺癌与正常组织之间的差异表达。方法用GEO数据库中的肺腺癌细胞EGFR-TKI耐药基因表达谱芯片和EMT基因表达谱芯片共同筛选,STRING构建蛋白互作网络,MCODE分析蛋白互作网络的功能模块与枢纽基因,Oncomine分析枢纽基因在肺腺癌与正常组织之间的差异表达。结果细胞周期依赖性激酶阻滞基因1B(CDKN1B)、肌微管素相关蛋白3(MTMR3)是网络枢纽基因。CDKN1B参与有丝分裂细胞周期、苏氨酸激酶、酶复合物、P53信号通路、PI3K/AKT信号通路等调控过程; MTMR3参与磷脂酰肌醇信号通路、磷脂醇激酶、肌酸肌醇代谢等调控过程。与正常组织比较,CDKN1B在肺腺癌组织的表达降低,MTMR3在肺腺癌组织的表达升高,差异均有统计学意义(P <0. 05)。结论本研究发现了与肺腺癌细胞EGFR-TKI耐药与EMT相关的枢纽基因CDKN1B、MTMR3及其调控通路,这有助于分析肺腺癌EGFR-TKI耐药机制,寻找靶向治疗的分子标记物。     

多药耐药相关基因在胃癌的表达

检测从未接受过化疗瓣胃癌病人胃癌组织及癌旁组织的酸性谷胱甘肽S－转移酶（GST－π）基因、多药耐药相关蛋白（MRP）基因、肺耐药蛋白（LRP）基因和多药耐药基因1（MDR1）。使用半定量逆转录聚合链酶反应（RT－PCR）方法。结果显示,在胃癌组织中,GST－π、MRP、LRP和MDR1表达阳性率分别为36.00%、12.00%、10.00%和10.00%,无显著高于癌旁组织中的表达,表达的总阳性率达46.00％。说明上述4种基因在未化疗过的胃癌组织中均有不同程度的高表达;但它们之间无共表达。近半数的胃癌病人可能存在固有性耐药。     

胃癌组织中多药耐药相关蛋白基因表达的临床意义

目的　探讨胃癌mrp基因表达与其病理学的关系。方法　应用RT PCR方法 ,对 1 997年 1月— 2 0 0 1年 9月间手术切除的 83例胃癌组织、癌旁及 72枚淋巴结中的mrp基因表达情况进行检测分析。结果　胃癌组织中mrp阳性率( 4 5 8% )及表达水平 ( 0 .5 1± 0 .30 )高于癌旁组织 ( 1 5 7% ,0 .32± 0 .1 5 ;P <0 .0 1 ) ;肿瘤浸润浆膜、低分化癌、TNMⅢ、Ⅳ期和N2 病例的mrp表达水平 ( 0 .4 6± 0 .2 8,0 .4 7± 0 .2 7,0 .4 5± 0 .2 9,0 .4 3± 0 .2 5 ;P <0 .0 5 )高于肿瘤侵犯粘膜层、高中分化癌、TNMⅠ、Ⅱ期和N0 者 ( 0 .35± 0 .1 9,0 .34± 0 .2 0 ,0 .36± 0 .2 1 ,0 .33± 0 .1 8;P <0 .0 5 )。结论　胃癌组织中mrp表达增高 ;mrp表达与胃癌病灶大小无关 ;其表达水平与肿瘤浸润深度、分化程度、TNM分期及淋巴转移有关 ,并且癌组织中mrp的表达与对应淋巴结组织相一致     

非受体酪氨酸激酶c-Abl/Arg对细胞微管结构的影响

c—abl／Arg非受体酪氨酸激酶的主要生物学功能是参与细胞增殖分化、细胞周期和细胞凋亡的调控,并在氧化应激和DNA损伤修复过程中发挥重要作用。已有研究发现,绝大多数胞质c—Abl的C端可与F-肌动蛋白细胞骨架结合,因而c—Abl在调节肌动蛋白动态平衡、细胞形态以及细胞迁移等方面有着重要的作用。     

Qnr基因介导的细菌耐药机制的研究进展

Qnr质粒能编码Qnr蛋白,通过保护细菌DNA促旋酶及拓扑异构酶介导细菌耐药,通常位于I类整合子上,通过耐药基因载体导致细菌耐药基因的水平传播,与革兰氏阴性菌多药耐药有密切的关系.     

恶性肿瘤中Yes相关蛋白与p73作用关联的研究进展

Yes相关蛋白(Yes associated protein,YAP)是Hippo信号通路最主要的调控因子,具有促进细胞增殖、抑制细胞凋亡的作用。在人类乳腺癌、肺癌、结直肠癌、胃癌、卵巢癌等多种肿瘤中YAP表达明显上调。而在另一方面,当DNA损伤时,作为转录辅助激活因子的YAP增强p73相关凋亡基因的转录,具有促进凋亡作用。在细胞内环境的维持与调控过程中,YAP所发挥的作用截然不同。本文主要介绍Hippo信号通路、YAP、p73在恶性肿瘤中的作用,以及YAP与p73在肿瘤细胞中的具体调控机制和作用。     

凋亡相关基因p53，Fas蛋白在早期食管癌及癌前病变中的表达与PDT疗效的关系

目的:探讨凋亡相关基因p53,Fas蛋白在早期食管癌及癌前病变中的表达与PDT疗效的关系。方法:采用免疫组织化学法检测30例PDT治疗前后的早期食管癌及51例癌前病变中凋亡相关p53和Fas蛋白的表达,并分析与PDT疗效的关系。结果:p53蛋白表达与PDT早期食管癌疗效无相关性(P>0·05),p53     

蛋白酪氨酸磷酸酶SHP2基因及其与实体瘤关系

SHP2属于蛋白酪氨酸磷酸酶家族成员之一,是最早被定义为癌基因的酪氨酸磷酸酶。近年来,SHP2激活突变和高表达在白血病、实体瘤和努南综合征中陆续被发现,与肿瘤的发生、发展和预后密切相关。目前,SHP2基因已被研究用作临床肿瘤治疗的靶分子。     

hPeriod1PAS结构域相互作用蛋白的筛选和研究

目的寻找与近日节律系统核心基因Period1（Per1）相互作用的新蛋白,揭示近日节律相关的可能信号通路。方法采用酵母双杂交方法,以人Per1的PAS结构域为诱饵,扫描人下丘脑cDNA文库,并通过体外转录、免疫共沉淀验证蛋白间相互作用;通过RT—PCR检测RACK1（receptors for activated Ckinase）表达的组织特异性及节律性;运用RNAi技术初步研究RACK1与Per1的信号联系。结果人下丘脑区域RACK1蛋白与Per1存在相互作用;RACK1在多器官组织保守表达,但其表达未呈现明显节律性;上调及下调Per1表达,RACK1的RNA水平无显著变化。结论细胞内接头分子RACK1是一种新的Per1作用蛋白,可能介导、调控Per1的功能。     

CDKN2A基因失活对喉癌的影响及其临床意义

 目的 研究细胞周期依赖性激酶抑制基因(CDKN2A)失活对喉癌的影响及其临床意义.方法 应用半定量反转录聚合酶链反应(RT-PCR)和免疫印迹分析法检测喉癌手术切除组织68例,非肿瘤喉部组织68例,观察CDKN2A基因失活与喉癌发生发展的关系.结果 (1)喉癌组织CDKN2A mRNA表达明显少于非肿瘤喉组织(P<0.05);(2)喉癌组织中CDKN2A蛋白的表达明显低于非肿瘤喉组织,差异有统计学意义(两者的低表达率为80.9%、47.1%,过低表达率为52.9%、22.1%,P<0.05),并与病理分型无关;(3)Western blot电泳结果半定量分析显示,喉癌组织CDKN2A蛋白的表达水平明显低于非肿瘤喉组织(t=3.246,P＜0.05).结论 CDKN2A基因的变异及其编码蛋白质的失活与喉癌的发生发展明显相关.     

HER-2、Syk在胃癌中的表达及其临床意义

 目的 探讨人表皮生长因子受体2(human epidermal growth factor receptor 2, HER-2)、脾酪氨酸激酶(spleen tyrosine kinase, Syk)在胃癌中的表达及与胃癌的相关关系.方法 采用反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)和SP免疫组化技术,检测62例胃癌及癌旁组织中HER-2、Syk表达状况,与胃癌临床病理检测结果进行相关性统计分析.结果 胃癌组织中HER-2 mRNA、HER-2蛋白阳性率分别是11.29%和30.65%,均高于癌旁组织(P＜0.05);Syk mRNA、Syk蛋白阳性率分别为27.42%和22.58%,均低于癌旁组织(P＜0.05).淋巴结转移的胃癌组织中,HER-2 mRNA、HER-2蛋白阳性表达率均高于无淋巴结转移组(P＜0.05),Syk mRNA、Syk蛋白阳性表达率均低于无淋巴结转移组(P＜0.05).HER-2表达与胃癌患病年龄、性别、肿瘤大小、部位均无相关性(P＞0.05),与肿瘤浸润深度、病理分期相关(P＜0.05),Syk表达与胃癌上述临床病理结果均无相关性(P＞0.05).HER-2蛋白与Syk蛋白在胃癌组织中的表达呈负相关.结论 胃癌发生和转移与HER-2表达和Syk表达密切相关.检测HER-2、Syk对胃癌的治疗及其预后评估具有指导意义.     

中国北方汉族男子fms样酪氨酸激酶基因多态性与高住高练低训敏感性的关联性研究

目的:探讨fms样酪氨酸激酶(Flt-1)基因多态性与低氧训练敏感性的关联性。方法:选取70名中国北方平原地区汉族男子进行4周高住高练低训(HiHiLo),方案为每日在低氧环境(O2浓度为14.5%～14.8%,大约相当于海拔3000米)中休息10h,每周进行3次75%VO2max低氧训练(O2浓度为15.4%,大约相当于海拔2500米),其余时间在常氧下训练。测试其HiHiLo前后的VO2max及训练期间的血象指标。用PCR-RFLP法分析Flt-1基因SNP/A193019G多态性。结果:(1)4周HiHiLo后,AA基因型VO2max增加幅度高于AG基因型57.54%,但无显著性差异。(2)在HiHiLo期间(除第23天外),AA基因型Hb的变化幅度始终高于AG基因型,但无显著性差异。结果提示,与AG基因型者相比,AA基因型者可能有对低氧训练更敏感的趋势。     

EGFR-TKI序贯化疗对EGFR-TKI获得性耐药的中晚期非小细胞肺癌的疗效观察

目的探讨序贯化疗对表皮生长因子受体-酪氨酸激酶抑制剂(EGFR-TKI)获得性耐药的中晚期非小细胞肺癌(NSCLC)患者的疗效及安全性。方法选择2012年8月至2013年8月我院收治的104例EGFR-TKI获得性耐药的中晚期NSCLC患者作为研究对象,采用随机数字表法将患者分为EGFR-TKI序贯化疗组及单纯化疗组,每组52例患者。对比分析1年内两组患者的疗效、不良反应发生情况及生存率。结果 EGFR-TKI序贯化疗组患者的近期总有效率为73.08%,显著高于单纯化疗组的48.08%(χ~2=6.805,P<0.01)。EGFR-TKI序贯化疗组患者的无进展生存时间为(6.92±1.78)个月,而单纯化疗组患者的无进展生存时间为(4.78±1.12)个月,两组比较,差异有显著统计学意义(t=7.338,P<0.01)。EGFR-TKI序贯化疗组患者的总生存率、无瘤生存率高于单纯化疗组,而复发率低于单纯化疗组(P<0.05)。两组患者不良反应发生率比较,差异无统计学意义(P>0.05)。结论中晚期NSCLC患者EGFR-TKI治疗失败后,应用EGFR-TKI序贯化疗可有效提高患者治疗效果,延缓病情进展,提高患者远期生存率,且不良反应可耐受,是中晚期NSCLC患者EGFR-TKI获得性耐药后的有效治疗策略。     

多药耐药相关蛋白在人恶性黑色素瘤转移性淋巴结组织中的表达及临床意义研究

 目的 研究多药耐药相关蛋白(MRP)在人恶性黑色素瘤转移性淋巴结组织中的表达及其与以顺铂、氮唏咪胺为主的联合化疗(删)疗效的关系.方法 免疫组织化学技术对石蜡包埋组织标本进行检测.结果 26例晚期恶性黑色素瘤患者转移性淋巴结组织中MRP表达阳性检出率为38.5%(10/26).MRP表达与PDBV化疗疗效无显著相关(P>0.05).结论 MRP在人恶性黑色素瘤转移性淋巴结组织中有一定程度表达,但人恶性黑色素瘤的多药耐药可能有其它重要因素参与.     

非受体酪氨酸激酶抑制剂CYT387对多发性骨髓瘤细胞增殖、凋亡影响及作用机制

目的 探讨非受体酪氨酸激酶(JAK)抑制剂CYT387对多发性骨髓瘤(MM)细胞增殖、凋亡的作用及其相关信号通路的关系。方法 选取4株MM细胞株(RPMI-8226、LP-1、U266、XG-7)及北京积水潭医院自2012年3月至2015年3月收治的26例MM患者为研究对象。对26例MM患者的骨髓及肿瘤组织进行免疫组化磷酸化JAK2(p-JAK2)表达检测。采用蛋白免疫印迹法检测4株MM细胞株中JAK2的磷酸化水平。采用蛋白免疫印迹法对XG-7细胞株用不同浓度CYT387处理后的磷酸化信号转导及磷酸化STAT3(p-STAT3)进行检测。采用不同浓度CYT387处理4株MM细胞株和JAK2不同磷酸化水平的MM原代肿瘤细胞后,进行细胞活力检测。蛋白免疫印迹法检测相同浓度CYT387处理后LP-1细胞株在不同时间点B细胞淋巴瘤/白血病2(BCL2)、B细胞淋巴瘤-特大型(BCL-xL)、半胱氨酸蛋白酶3(caspase-3)、聚腺苷二磷酸核糖聚合酶(PARP)的表达状况。结果 26例MM肿瘤组织中,13例(50%)呈p-JAK2阳性表达。4株细胞株全部p-JAK2阳性表达。随着CYT387...     

PS_2基因在乳腺癌中表达的临床意义

目的　探讨雌激素调节蛋白PS2 在乳腺癌中的表达及其临床意义。方法　应用免疫组化S P法 ,对 4 8例人乳腺浸润性导管癌中PS2 进行检测 ,分析其与ER ,PR以及预后的关系。结果　PS2 与ER呈显著正相关。在ER(+)PR(+)的病人中 ,PS2 阳性率达 6 7 9% ,而在ER(- )PR(- )的病人中PS2 阳性率仅为 12 5 % ,二者相比有显著性差异 (P <0 .0 1)。PS2 阳性表达与病人长生存期呈正相关 ,与腋窝淋巴结转移无相关性。结论　在预测乳腺癌抗雌激素治疗的效果时 ,PS2 要优于ER ,PR。同时PS2 阳性的乳腺癌患者预后较好 ,PS2 可作为预测乳腺癌患者生物学行为的指标之一     

食管癌干细胞辐射抗性与相关蛋白表达的研究

目的 探讨NS398联合X射线照射对食管癌干细胞和贴壁肿瘤细胞辐射增敏效应的差异,并分析食管癌干细胞的辐射抗性及其与相关蛋白表达的关系。方法 采用无血清培养基分离细胞系ECA109的食管癌干细胞;流式细胞仪检测细胞表面标记物CD44+和CD271+的表达;四甲基偶氮唑盐比色法(MTT)检测NS398联合不同照射剂量(0、4和8 Gy)对细胞增殖能力作用的联合效应;克隆形成实验检测NS398对亲本细胞和细胞球辐射增敏效应的差异;Western blot检测细胞内4种相关蛋白的表达水平。结果 在无血清培养基中可分离培养稳定传代的肿瘤干性细胞球。细胞球CD271+的表达高于亲本细胞(t=3.81,P<0.05)。照射后细胞球增殖能力大于亲本细胞。NS398联合照射时,亲本细胞的存活分数(SF₂)小于细胞球(t=2.91,P<0.05),NS398对亲本细胞的SER大于细胞球。细胞球内Bmi-1、c-Myc、β-catenin和CyclinD1的表达水平较亲本细胞均升高(t=8.09、7.90、7.50、7.15,P<0.05);4 Gy照射后细胞内CyclinD1的表达水平均升高(t=9.74、6.67,P<0.05);NS398联合4 Gy照射组与4 Gy照射组相比,亲本细胞β-catenin和CyclinD1表达水平降低(t=10.15、12.12,P<0.05),细胞球β-catenin和Cyclin D1表达水平亦降低(t=3.23、7.45,P<0.05)。结论 无血清培养基分离培养的食管癌干细胞高表达干细胞表面标记物CD271和干细胞相关蛋白,并具有辐射抗性,其机制可能与β-catenin分子及其下游靶蛋白的表达水平有关。     

涎腺腺样囊性癌发生发展相关基因研究进展

<正>涎腺腺样囊性癌(salivary adenoid cystic carcinoma,SACC)约占涎腺恶性肿瘤的24%,是对人体危害最大的头颈部恶性肿瘤之一。此肿瘤生长特殊,一般无包膜,侵袭性强,嗜神经生长和远处转移是SACC的两大恶性生物学特性。因放疗及化学药物治疗效果均不理想,临床难以确定其明确的浸润     

肺癌组织中P-gp、MRP、p53蛋白的表达及其临床意义

目的探讨P-糖蛋白、多药耐药相关蛋白、p53蛋白在肺癌中可能的临床意义及相互间的关系。方法采用免疫组化法检测31例石蜡包埋的肺癌及相应远离肿瘤部位的正常肺组织中P-糖蛋白、多药耐药相关蛋白、p53蛋白的表达情况,同时用流式细胞术检测其中29例冻存的肺癌组织中P-糖蛋白、p53蛋白水平,并与免疫组化法结果比较。结果免疫组化法显示P-糖蛋白、多药耐药相关蛋白、p53蛋白在正常肺组织中未见表达,在肺癌组织中阳性率分别为61.3%、54.8％、71.O％。P-糖蛋白与多药耐药相关蛋白表达有相关性(P<0.01),但P-糖蛋白与p53蛋白,多药耐药相关蛋白与p53蛋白之间均无相关性。P-糖蛋白和多药耐药相关蛋白阳性集中在非小细胞肺癌,阳性率分别为76％、68％,且肺癌细胞分化程度越低,P-糖蛋白阳性率越低(P<0.05)。p53蛋白阳性率在鳞癌(100％)明显高于腺癌(33.3％)(P<0.01),吸烟患者(88.9％)明显高于不吸烟患者(46.2%)(P<0.05),而与P-TNM各项指标无关。采用流式细胞术测得P-糖蛋白、p53蛋白阳性率分别为65.5％、79.3％,两种方法的符合率在P-糖蛋白、p53蛋白分别为62.1％、75.9％。结论P-糖蛋白、多药耐药相关蛋白过表达在肺癌中可能具有一定的协同作用,而与p53蛋白异常无关。