miR-9-5p通过抑制SIRT1调控骨关节炎发病进程中软骨细胞的凋亡

为研究miR-9-5p靶向沉默信息调节因子2相关酶1(silent information regulator factor 2-related enzyme 1, SIRT1)对骨关节炎(osteoarthritis, OA)软骨细胞凋亡的影响及相关机制,对小鼠的原代软骨细胞进行分离、培养并构建OA细胞模型(加入IL-1β)和OA小鼠模型,检测miR-9-5p的表达、Caspase-3活性、细胞活性及凋亡。确定miR-9-5p和SIRT1存在靶向关系后检测SIRT1活性和上述指标。用番红O-固绿对OA小鼠组织进行染色并分析,在OA小鼠模型中再次验证miR-9-5p通过抑制SIRT1对软骨细胞凋亡的影响。结果显示,miR-9-5p mRNA在OA组织及IL-1β处理的软骨细胞中表达显著升高(P<0.001), miR-9-5p可抑制OA软骨细胞活性(P<0.001)并促进其凋亡(P<0.01)。miR-9-5p靶向作用于SIRT1,并通过抑制SIRT1抑制OA软骨细胞活性(P<0.001),促进其凋亡(P<0.05)。在OA动物模型的验证中得到相同的结果。...     

miR-30e-5p通过靶向ATG5基因调控肝癌细胞增殖、凋亡及自噬

为探讨miR-30e-5p对人肝癌细胞增殖、凋亡及自噬的影响及其潜在的分子机制,为肝癌的诊断和治疗提供新的靶点,采用qRT-PCR检测人正常肝细胞HL-7702及人肝癌细胞MHCC97H、Huh7、HCCLM3中miR-30e-5p的表达量,采用脂质体转染技术将miR-30e-5p mimics转染至MHCC97H细胞...     

微小RNA-199a-5p通过靶向SIRT1促进心肌纤维化相关基因表达

目的:研究微小RNA-199a-5p(miR-199a-5p)对心肌成纤维细胞中纤维化相关基因表达的调控作用及其可能作用的靶基因。方法:原代分离并体外培养成体C57BL/6小鼠心肌成纤维细胞;双萤光素酶报告基因实验检测miR-199a-5p与潜在靶基因沉默信息调节因子1(SIRT1)3’端非翻译区(3’-UTR)的结合作用;实时荧光定量PCR(RT-q PCR)和Western blot法分别检测SIRT1以及纤维化标志物胶原蛋白(Col)1a1、Col3a1和α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)的mRNA和蛋白表达。结果:在血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)诱导的小鼠心肌成纤维细胞中,Col1a1、Col3a1和α-SMA的表达增强,miR-199a-5p表达上调。在心肌成纤维细胞中过表达miR-199a-5p可以增强Col1a1、Col3a1和α-SMA的表达。双萤光素酶报告基因实验显示miR-199a-5p与SIRT1 3’-UTR有结合作用。RT-q PCR和Western blot结果证实miR-199a-5p可在转录水平抑制SIRT1表达。过表达miR-199a-5p和沉默SIRT1均能一致性促进心肌成纤维细胞中Col1a1、Col3a1和α-SMA的表达。抑制AngⅡ诱导的小鼠心肌成纤维细胞中NF-κB激活,可显著降低miR-199a-5p表达。结论:SIRT1是miR-199a-5p的作用靶基因,并介导miR-199a-5p促进纤维化标志物Col1a1、Col3a1和α-SMA的表达。     

miR-106a-5p靶向GAB1影响人心肌细胞增殖和凋亡的机制研究

目的 探究心力衰竭患者血浆中miR-106a-5p的表达水平及其影响人心肌细胞增殖和凋亡的潜在机制.方法 利用RT-qPCR检测45例心力衰竭患者和健康志愿者血浆中miR-106a-5p的表达水平;利用Lipofectamine 2000转染miR-106a-5p模拟物及模拟物对照至人心肌细胞系,RT-qPCR验证转染...     

lncRNA MALAT1通过上调miR-30a-5p促进乳腺癌细胞增殖

目的 探讨lncRNA MALAT1靶向miR-30a-5p对乳腺癌细胞增殖的影响。方法 CCK-8实验检测lncRNA MALAT1对乳腺癌细胞MCF7增殖的影响。建立MCF7荷瘤小鼠模型检测lncRNA MALAT1对荷瘤小鼠肿瘤生长的影响。通过生物信息学网站预测miR-30a-5p是否与lncRNA MALAT1结合,并通过双荧光素酶报告基因实验进行验证。Real time-qPCR检测lncRNA MALAT1过表达对miR-30a-5p表达的影响。CCK-8实验检测lncRNA MALAT1过表达载体和miR-30a-5pmimics共转染到MCF7细胞对细胞增殖的影响。结果过表达lncRNA MALAT1促进MCF7细胞的体外增殖及MCF7细胞荷瘤小鼠肿瘤生长。lncRNA MALAT1与miR-30a-5p结合,且过表达lncRNA MALAT1下调miR-30a-5p的表达。结论 lncRNA MALAT1通过下调miR-30a-5p表达促进乳腺癌细胞增殖。     

卵巢癌患者miR-497、miR-125a-5p的表达及与其临床特征和生存率的关系

目的:分析卵巢癌患者癌组织中微小RNA-497(miR-497)和微小RNA-125a-5p(miR-125a-5p)的表达情况及其临床意义.方法:选取2018-06—2019-12在本院手术治疗的96例卵巢癌患者作为研究对象,将手术切除的卵巢癌组织作为试验组,癌旁(>2cm)正常组织为对照组.采用实时荧光定量PCR(...     

miR-30a-5p启动子区DNA甲基化在同型半胱氨酸致肝损伤中的作用

目的:探讨微小RNA-30a-5p(miR-30a-5p)启动子区DNA甲基化在肝损伤中的作用。方法:随机选取4周龄胱硫醚β-合成酶(CBS)基因正常(CBS^+/+)小鼠(n=12)及单基因敲除(CBS^+/-)小鼠(n=12),均给予高蛋氨酸饮食8周。HL-7702细胞体外常规培养,分为对照(control)组、同型半胱氨酸(Hcy)组和Hcy+5-氮杂胞苷(AZC)组。全自动生化分析仪检测小鼠血清Hcy、丙氨酸氨基转移酶(ALT)和天门冬氨酸氨基转移酶(AST)水平;微板法测定肝细胞ALT和AST水平;小鼠肝脏石蜡切片行HE染色观察肝脏损伤情况;细胞活力染色检测肝细胞活力;RT-qPCR法检测小鼠肝脏组织和肝细胞中miR-30a-5p的表达;Pearson相关性分析肝脏miR-30a-5p表达与血清ALT和AST水平的相关性;巢式降落式甲基化特异性PCR (nMS-PCR)检测小鼠肝脏组织以及肝细胞中miR-30a-5p启动子区DNA甲基化水平的变化。结果:与CBS^+/+对照组相比,CBS^+/-组...     

miR-210 介导 CH25H 免疫信号通路调控骨关节炎软骨细胞增殖和凋亡 新机制研究

目的：探讨miR-210调控骨关节炎软骨细胞增殖和凋亡免疫通路的新机制。方法：Hulth法构建大鼠骨关节炎模型,分离软骨细胞并进行鉴定。HE染色和番红O染色观察两组大鼠关节软骨组织变化。IL-1β体外诱导软骨细胞并检测miR-210表达。细胞增殖和流式细胞术检测sh-miR-210、NC-miR-210和mimics-miR-210分别转染软骨细胞后其增殖和凋亡变化。RT-PCR、免疫荧光和Western blot检测IL-1β刺激及RNA转染后软骨细胞IL-6和MMP-13表达变化。RT-PCR和Western blot检测软骨细胞胆固醇25-羟化酶（CH25H）表达。共同转染mimics-miR-210和CH25H过表达质粒及sh-miR-210和shRNACH25H质粒后观察软骨细胞增殖能力变化。结果：骨关节炎大鼠体内软骨组织和体外IL-1β刺激软骨细胞中miR-210表达均下调。软骨细胞增殖能力随着miR-210表达沉默而减弱,随着miR-210过表达而增强。miR-210抑制免疫细胞因子IL-6和MMP-13表达。CH25H在骨关节炎组软骨中表达显著增加,且CH25H随着mi...     

p53/miR-502-5p/TRAF2通路对骨关节炎软骨细胞损伤的影响

目的:探究微小RNA-502-5p(miR-502-5p)对白细胞介素-1β(IL-1β)诱导的骨关节炎(OA)软骨细胞损伤的影响。方法:Western blot和RT-q PCR检测骨关节炎患者软骨组织和IL-1β诱导的软骨细胞中p53和miR-502-5p的表达;分离培养软骨,并分组处理细胞,分别用MTT法检测细胞活力,流式细胞术检测细胞凋亡,Western blot检测炎性因子和细胞外基质(ECM)相关蛋白的表达,另外,萤光素酶报告实验检测miR-502-5p对p53及肿瘤坏死因子受体相关因子2(TRAF2)的调控作用。结果:与正常软骨组织相比,OA患者软骨组织中miR-502-5p的水平显著降低,p53和TRAF2水平则明显升高(P0.05)。IL-1β处理软骨细胞后,细胞活力下降、细胞凋亡率增加、IL-6、IL-8和TNF-α的蛋白表达水平显著上升;Ⅱ型胶原和蛋白聚糖的蛋白表达显著下调,基质金属蛋白酶(MMP)-3、MMP-9和MMP-13等的蛋白表达显著上调,miR-502-5p mimic转染反转了IL-1β对软骨细胞的这些作用。此外,p53与miR-502-5p之间存在负反馈调节,同时miR-502-5p能够靶向抑制TRAF2的水平。TRAF2沉默同样反转了IL-1β对软骨细胞增殖、凋亡、炎症反应以及ECM相关蛋白表达的影响。结论:调节p53/miR-502-5p/TRAF2通路能够减轻IL-1β诱导的骨关节软骨细胞损伤。     

miR-26a-5p调控MCL-1在孕产妇子痫前期中表达的临床意义

目的:探讨microRNA-26a-5p(miR-26a-5p)调控髓细胞白血病因子1(myeloid cell leukemia-1,MCL-1)表达在孕产妇子痫前期发生发展中的临床意义。方法:收集正常妊娠21例、妊娠期高血压孕产妇13例、轻度子痫前期15例和重度子痫前期26例共4组孕产妇血浆及胎盘组织,用real-time PCR分析其血浆及胎盘组织中miR-26a-5p及胎盘组织中MCL-1 mRNA的表达,Western blotting分析胎盘组织中MCL-1蛋白的表达,并分析其表达的临床意义。结果:随着病情进展,miR-26a-5p在孕产妇血浆和胎盘中表达逐步增高(P0.01),而其胎盘组织中MCL-1 mRNA的表达明显降低(P0.01),二者呈明显负相关(P0.01);胎盘组织中miR-26a-5p与MCL-1蛋白表达呈明显负相关(P0.01)。孕产妇血浆及胎盘组织中miR-26a-5p表达上调与孕龄、孕妇血浆白蛋白水平及胎儿体重呈明显负相关,而与孕产妇血压和尿蛋白水平呈明显正相关(P0.01),胎盘组织中MCL-1表达下调与此相反。结论:miR-26a-5p高表达通过下调MCL-1的表达参与子痫前期的发生与发展。     

Pae下调miR-106a-5p/PTEN对白血病细胞增殖、凋亡的影响

为探究丹皮酚(paeonol,Pae)调控miR-106a-5p/第10号染色体缺失的磷酸酶及张力蛋白同源物(phosphatase and ten-sion homologue deleted on chromosome 10,PTEN)通路对白血病细胞增殖和凋亡的影响,采用双荧光素酶报告基因分析法验证miR-106...     

miR-27a-3p靶向HOXA5基因通过Wnt/β-catenin信号通路调控糖尿病患者创面愈合

目的:研究微小RNA-27a-3p(miR-27a-3p)对糖尿病患者创面愈合的影响及作用机制.方法:采用qPCR和Western blot检测糖尿病患者创面愈合组织中miR-27a-3p、同源异型盒基因A5(HOXA5)mRNA和HOXA5蛋白的表达.使用高糖处理人微血管内皮细胞(HMECs),模拟糖尿病HMECs的...     

NONHSAT248596.1内源性竞争miR-146a-5p调控骨关节炎软骨退变的机制

背景：目前已有针对lncRNAmiRNAmRNA的共表达网络对骨关节炎发生发展调控机制的研究,课题组前期研究已通过数据库筛选出符合条件的NONHSAT248596.1和miR-146a-5p,尚缺乏体内实验来验证上述调控机制。目的：探究NONHSAT248596.1在基质细胞衍生因子1/4型趋化因子受体轴介导体内骨关节炎软骨退变进程中对miR-146a-5p发挥的竞争性内源性RNA调控作用。方法：取36只新西兰兔,通过向右侧后肢膝关节注射基质细胞衍生因子1溶液建立骨关节炎模型,采用随机数字表法分4组,lncRNA组、mi RNA组、ce RNA组、对照组分别向造模膝关节内注射NONHSAT248596.1过表达的慢病毒载体、mi R-146a-5p过表达的慢病毒载体、mi R-146a-5p+NONHSAT248596.1过表达的慢病毒载体及空慢病毒载体。造模第4,8,12周,取膝关节软骨组织和软骨下骨组织进行相关检测。结果与结论：(1)苏木精-伊红与番红O固绿染色显示,4组软骨组织都有不同程度的退变表现,造模第4周时,lncRNA组软骨组织中的软骨细胞肿胀、细胞极性消失,细胞外基质破...     

miR-34a-5p/PLCD3轴调控骨关节炎进展的机制

背景：目前已有针对miRNA/mRNA轴调节骨关节炎疾病进程的分子机制研究。先前生物信息学研究发现具有临床预测价值的mRNA(磷脂酶Cδ3:phospholipase C delta 3,PLCD3)及其靶向miRNA(miR-34a-5p),尚缺实验验证其调控骨关节炎的具体作用及机制。目的：探讨miR-34a-5p/PLCD3轴对骨关节炎进展的调控作用及机制。方法：选择15例膝骨关节炎患者的滑膜为骨关节炎组,同时选择同期因创伤致髌骨骨折行内固定术的15例年轻患者的健康滑膜为对照组,Real-time PCR法检测滑膜中PLCD3及miR-34a-5p的表达。通过细胞转染的方法,将人滑膜关节炎成纤维细胞(human fibroblast like synovial cells-osteoarthritis,HFLS-OA)进行处理,并分为miR-34a-5p模拟物组、pCDH-PLCD3组、miR-34a-5p模拟物+pCDH-PLCD3组、miR-34a-5p抑制剂组、si-PLCD3组、miR-34a-5p抑制剂+si-PLCD3组,通过Real-time PCR法检测PLCD3和...     

circVAPA靶向miR-628-5p调控宫颈癌HeLa细胞的增殖和凋亡

目的 探讨环状RNA(circRNA)囊泡相关膜蛋白相关蛋白A(circVAPA)对宫颈癌细胞HeLa增殖、凋亡的影响及分子机制。方法 实时定量PCR(RT-qPCR)检测宫颈癌组织和癌旁组织中circVAPA和miR-628-5p表达。生物信息学分析、双荧光素酶报告基因实验和RT-qPCR用于阐明circVAPA和miR-628-5p潜在相关性。脂质体法将circVAPA小干扰RNA(si-circVAPA)、miR-628-5p模拟物分别转染HeLa,运用四甲基偶氮唑蓝（MTT）法、流式细胞术检测干扰circVAPA或过表达miR-628-5p对HeLa细胞增殖和凋亡的影响。免疫印迹法（Western blot）检测Ki-67、B细胞淋巴瘤2(Bcl-2)和Bcl相关X蛋白（Bax）表达水平。结果 宫颈癌组织中circVAPA表达较癌旁组织显著升高,而miR-628-5p表达较癌旁组织显著降低（P<0.05）。miR-424-5p与LINC00210直接结合,干扰LINC00210后miR-424-5p表达水平显著升高,过表达LINC00210后miR-424-5p表达水平显...     

加味黄芪建中汤通过调节miR-516a-5p治疗血小板减少症

目的:研究加味黄芪建中汤对原发性免疫性血小板减少症(ITP)患者微小RNA-516a-5p(miR-516a-5p)表达的调控,探究其调节免疫细胞的作用机制.方法:收集2017年6月～2018年6月于我院就诊的ITP患者32例,随机分成地塞米松治疗组和地塞米松+加味黄芪建中汤综合治疗组,另取同期健康体检者15例作为对照...     

miR-181a-5p对坐骨神经损伤后神经细胞凋亡的影响

目的 探究miR-181a-5p对坐骨神经损伤后神经细胞再生及凋亡的影响。方法 建立坐骨神经损伤大鼠模型,通过FISH和qRT-PCR检测坐骨神经miR-181a-5p表达。鞘内注射antagomiR-181a-5p,通过qRT-PCR检测坐骨神经miR-181a-5p表达,通过HE染色检测坐骨神经病理学变化,通过TUNEL检测坐骨神经细胞凋亡。结果 miR-181a-5p在坐骨神经损伤大鼠坐骨神经近侧断端表达升高。鞘内注射antagomiR-181a-5p降低坐骨神经损伤大鼠坐骨神经miR-181a-5p表达,改善大鼠坐骨神经损伤,降低坐骨神经细胞凋亡水平。结论 miR-181a-5p在损伤的坐骨神经中高表达,抑制miR-181a-5p表达降低坐骨神经细胞凋亡水平。     

circSLC8A1通过调控miR-301a-3p表达对卵巢癌SKOV3细胞增殖和凋亡的影响

目的 探讨circSLC8A1对卵巢癌SKOV3细胞增殖和凋亡的影响及分子机制。方法 收集本院2016年1月至2020年12月37例卵巢癌患者的癌组织及癌旁组织,RT-qPC检测circSLC8A1和miR-301a-3p表达水平。卵巢癌细胞株SKOV3随机分为pcDNA-circSLC8A1组、pcDNA组、anti-miR-301a-3p组、anti-miR-NC组、pcDNA-circSLC8A1+miR-301a-3p组、pcDNA-circSLC8A1+miR-NC组。分别采用CCK-8法检测细胞活性;平板克隆实验检测细胞克隆形成数;流式细胞术检测细胞凋亡率;蛋白质印迹法检测蛋白表达;双荧光素酶报告实验检测circSLC8A1和miR-301a-3p的靶向关系。结果 卵巢癌组织中circSLCA81表达水平低于癌旁组织,miR-301a-3p表达水平高于癌旁组织（P<0.05）。过表达circSLC8A1或抑制miR-301a-3p表达,细胞活性降低,细胞克隆形成数减少,细胞凋亡率及Cleaved-caspase3、Cleaved-caspase9蛋白表达水平升高（P&...     

微小RNA-195-5p通过调控LRP6抑制滋养细胞增殖和转移

目的 探讨微小RNA-195-5p对滋养细胞HTR-8/SVneo增殖、迁移和侵袭的影响及可能机制。方法 体外培养滋养细胞HTR-8/SVneo,将miR-195-5p模拟物转染进滋养细胞HTR-8/SVneo中,实时定量PCR方法检测各组细胞miR-195-5p和LRP6 mRNA的表达,CCK-8方法检测HTR-8/SVneo细胞增殖能力,Transwell实验检测HTR-8/SVneo细胞迁移和侵袭能力。结果 miR-195-5p模拟物可显著促进HTR-8/SVneo细胞中miR-195-5p的表达,并抑制LRP6 mRNA的表达(P<0.05);双荧光素酶实验表明miR-195-5p可直接靶向LRP6;转染miR-195-5p模拟物后,HTR-8/SVneo细胞增殖、迁移和侵袭能力降低。结论 miR-195-5p可能通过抑制LRP6表达抑制HTR-8/SVneo细胞增殖、迁移和侵袭。