梓醇激活Nrf2/HO-1信号通路对高糖诱导EA.hy926细胞损伤的影响

目的 观察梓醇对高糖诱导EA.hy926细胞损伤的影响,并以Nrf2/HO-1信号通路为靶点探讨其可能的作用机制.方法 将常规培养的EA.hy926细胞随机分为对照组(A组)、梓醇组(B组,0.5mmol/L)、高糖组(C组,100mg/L)、梓醇高剂量保护组(D组,0.5mmol/L)、梓醇低剂量保护组(E组,0.0...     

miR-186海绵载体的构建及其在EA.hy926细胞株中的表达

目的：构建微小RNA-186（miR-186）基因的海绵载体,建立稳定敲减miR-186的EA.hy926细胞株。方法：化学合成miR-186海绵体序列,并克隆到慢病毒FV040表达载体上;采用lipofectamine 2000共转染FV040-miR-186-sponge载体和慢病毒辅助包装质粒到HEK293T细胞,包装慢病毒,测定病毒滴度;FV040-control慢病毒作为对照组,FV040-miR-186-sponge作为实验组,分别感染EA.hy926细胞,筛选稳转细胞株;采用荧光定量PCR （qPCR）法检测空白对照组、FV040-control对照组及FV040-miR-186-sponge实验组中EA.hy926细胞miR-186的相对表达水平。结果：测序结果显示克隆的目的基因序列与设计的miR-186海绵体序列完全一致。在感染的EA.hy926细胞中观察到绿色荧光蛋白（GFP）的表达。FV040-control包装的慢病毒滴度为2×10⁸ TU·mL^-1,FV040-miR-186-sponge组慢病毒滴度为6×10⁸ TU·mL^-1;成功建立了稳定表达miR-186-sponge的EA.hy926细胞株,感染效率达95%;qPCR检测,与空白对照组和FV040-control组比较,FV040-miR-186-sponge组EA.hy926细胞中miR-186相对表达水平降低（P<0.01）。结论：成功构建了miR-186基因的海绵载体,建立了稳定下调miR-186表达的EA.hy926-miR-186-sponge细胞株。     

木犀草素对EA.hy926细胞Nrf2信号通路的激活作用及H2O2致氧化损伤的保护作用

目的 研究木犀草素对人脐静脉内皮EA.hy926细胞核因子E2相关因子2(Nrf2)信号通路的影响,及对H2O2诱导的细胞氧化损伤的保护作用。方法 将细胞分成对照组、H2O2处理组、阳性药物(莱菔硫烷)组、不同浓度(5、10、20、40μmol/L)木犀草素组和不同浓度木犀草素(5、10、20、40μmol/L)+H2O2组,采用ARE荧光素酶报告基因、Western blotting和qRT-PCR确证木犀草素对Nrf2信号通路的影响;荧光标记流式细胞仪检测内源性活性氧(ROS)水平;MTT法评价木犀草素对H2O2诱导的EA.hy926细胞的保护作用。结果 木犀草素能够剂量依赖性地增强ARE荧光强度,上调Nrf2及其下游基因血红素加氧酶-1(HO-1)、抗氧化酶NAD(P)H醌氧化还原酶-1(NQO1)和谷氨酸半胱氨酸连接酶调节亚基(GCLM)的蛋白和mRNA表达,降低内源性ROS水平;采用木犀草素和H2O2协同处理细胞,可表现出保护作用。结论 木犀草素可以激活EA.hy926细胞Nrf2信号通路,抑制H2O2诱导的细胞毒性,对EA.hy926细胞具有氧化损伤保护作用。     

X射线致EA.Hy926内皮细胞血管损伤模型的建立

目的:探讨构建血管内皮细胞持续分泌炎症因子的血管损伤模型的方法。方法:2 Gy分割剂量的6 MV-X线(2Gy/F,5F/W,总计40Gy)照射人脐静脉融合细胞系EA. Hy926,照射野35cm×35cm,源皮距100cm。在照射期间及末次照射后1月,2月,3月,4月,5月提取细胞总RNA、总蛋白,以未照射组为对照组,采用实时荧光定量RT-PCR方法检测炎症相关因子转录水平表达情况,Western Blot法检测炎症因子蛋白水平的表达情况。结果:经2Gy×20次放疗后1-5月,人脐静脉融合细胞系EA. Hy926细胞炎症因子,与对照组相比,在转录与蛋白水平,表达均升高(P<0.05)。结论:放射性血管损伤细胞模型中,内皮细胞EA. Hy926炎症因子表达上调,导致放疗后血管损伤,促进放疗后晚期皮肤纤维化的发生。     

复方当归注射液对脑缺血神经保护作用的实验研究

目的:研究复方当归注射液对其对脑缺血的保护作用.方法:建立阻断大鼠大脑中动脉所致局灶性脑缺血、结扎大鼠双侧颈总动脉和花生四烯酸诱发的急性血栓性脑缺血模型的动物模型,测定复方当归注射液的神经保护作用.结果:复方当归注射液可以增加脑缺血大鼠脑海马CA1区神经细胞数量.结论:复方当归注射液可促进脑缺血及脑缺血后遗症神经功能恢复,减轻后遗症的神经功能障碍,对脑缺血具有保护作用.     

三七总皂苷对过氧化氢诱导HT22 细胞氧化损伤的保护作用

目的 研究三七总皂苷（PNS）对氧化氢H2O2 损伤后海马神经元HT22 细胞的保护作用。 方法 采用CCK-8 法检测作用PNSHT22 细胞后细胞生长活性的变化,并通H2O2 刺激HT22 细胞,观察 PNS 对HT22 细胞活性的影响及形态变化。采用乳酸脱氢酶检测细胞损伤情况,流式细胞仪检测细胞的凋 亡比例。结果 PNS 在有效浓度范围内对HT22 细胞无毒性,且能增加细胞活性,减轻H2O2 对其损伤程度。 结论 PNS 能通过增强细胞内抗氧化活性,提高HT22 细胞的存活率,从而保护细胞抗氧化损伤。     

熊果酸对过氧化氢诱导大鼠心肌细胞氧化损伤的保护作用

目的观察熊果酸(ursolic acid,UA)对过氧化氢(H2O2)诱导大鼠心肌细胞氧化应激损伤模型的保护作用,并探讨其作用机制。方法冷消化法原代培养SD大鼠心肌细胞,3 d后将细胞随机分为5组:正常对照组、H2O2模型组、UA低(2.5μM)、中(5μM)、高(10μM)浓度组。UA预处理心肌细胞后,加入H2O2作用,分别检测心肌细胞存活率、LDH、CAT、SOD的变化,ROS的水平。结果 UA低、中、高浓度组对比模型组OD值明显降低,LDH含量明显下降,CAT、SOD活性升高,ROS水平下降,且P0.05。结论 UA对大鼠心肌细胞氧化损伤具有保护作用,可减轻氧自由基对心肌细胞的氧化损伤。     

丹参酮ⅡA磺酸钠对PM2.5染毒血管内皮细胞的保护作用

目的 观察丹参酮ⅡA磺酸钠(STS)对PM2.5引起的血管内皮细胞EA.hy926损伤的保护作用.方法 取对数生长期EA.hy926细胞分为对照组、100 μg/mL PM2.5组及STS干预组(先给予12.5、25、50 μg/mL STS干预后再加入100 μg/mL PM2.5).24 h后CCK8法测定细胞的存活率,荧光标记法检测细胞内氧自由基生成情况,流式细胞术检测细胞凋亡率,Western blot法检测凋亡蛋白酶Caspase-9和Caspase-3的表达变化.结果 PM2.5对EA.hy926细胞有明显的毒性,可以导致细胞内氧自由基生成增多,并引起Caspase-9和Caspase-3活化造成细胞凋亡,与对照组比较差异有统计学意义;STS可以抑制PM2.5对EA.hy926细胞的毒性,降低胞内活性氧(ROS)生成及Caspase-9和Caspase-3的活化,减少细胞凋亡数目,与PM2.5组比较差异有统计学意义.结论 丹参酮ⅡA磺酸钠可以减少PM2.5引起的血管内皮细胞凋亡,其保护作用可能与抑制氧自由基生成有关.     

G1对EA.hy926内皮细胞内质网应激的抑制作用

【摘要】目的：观察GPR30受体激动剂G1对高糖诱导的eahy926内皮细胞内质网应激（endoplasmic reticulum stress,ERS）的影响。方法：选用eahy926内皮细胞为研究对象,分为3组：正常对照组（Con,17.51mmol/L）、高糖组（HG,33.3mmol/L）、高糖 G1组（HG G1,HG 1umol/L G1）,利用流式细胞术检测三组细胞凋亡率,Western blot法检测ERS相关分子BIP、IRE1、PERK及凋亡分子BAX、Bcl-2的表达变化,RT-PCR法检测BIP和CHOP的mRNA表达变化。结果：HG组与Con组比较,细胞凋亡率明显升高（P<0.01）,BIP、IRE1、PERK及凋亡分子BAX表达上调（P<0.01或P<0.001）,Bcl-2的表达下调（P<0.05）,BIP、CHOP mRNA 表达上调（P<0.01）,HG G1组与HG组比较,细胞凋亡率明显降低（P<0.01）,BIP、IRE1、PERK及凋亡分子BAX表达下调（P<0.05或P<0.01或P<0.001）,Bcl-2的表达上调（P<0.05）,BIP、CHOP mRNA 表达下调（P<0.01）。结论：GPR30受体激动剂G1可抑制eahy926内皮细胞内质网应激。     

益母草和当归注射液对家兔心肌缺血再灌注损伤的保护作用比较

当归、益母草均为妇科常用药物，当归偏于养血活血．而益母草偏于去瘀生新，益母草使子宫收缩，当归抑制子宫收缩。二者在防治心肌缺血，再灌注损伤方面的作用有无差异，尚未见报道，本文对此进行对比研究。     

蕨麻正丁醇部位对EAHY926内皮细胞缺氧损伤的保护作用

【目的】探讨蕨麻正丁醇部位对内皮细胞缺氧损伤的保护作用。【方法】采用人脐静脉内皮细胞株(EAHY926)建立缺氧损伤实验模型,通过MTT法测定各实验组细胞代谢率;比色法测定乳酸脱氢酶(lactate dehydrogenase,LDH)、细胞内超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)活性和NO浓度;放射免疫法测定内皮素-1(endothelin-1,ET-1)的活性。【结果】3.00 mg/ml、1.50 mg/ml和0.75 mg/ml蕨麻正丁醇部位均能显著减少缺氧损伤内皮细胞LDH的外漏量,并可显著提高细胞内SOD活性,增加NO分泌、减少ET-1的生成。【结论】蕨麻正丁醇部位对内皮细胞缺氧损伤具有显著的保护作用,其机制之一可能是清除缺氧导致的内皮细胞自由基堆积,减少ET-1的释放,增加NO分泌,从而减轻内皮细胞损伤。     

盐酸青藤碱诱导EA.hy926细胞自噬及其在抗炎中的作用

目的探讨中药单体提取物盐酸青藤碱诱导人内皮细胞EA.hy926自噬的机制及其在抗炎中发挥的作用。方法Western blot检测分别以终浓度为50、100μg/mL的盐酸青藤碱处理12h后的EA.hy926细胞中自噬相关蛋白LC3Ⅱ、ERK2、磷酸化ERK2及炎症细胞因子HMGB1表达变化情况;荧光显微镜观察吖啶橙染色的经盐酸青藤碱诱导后EA.hy926细胞酸性小体变化情况。结果经终浓度为50、100μg/mL的盐酸青藤碱处理EA.hy926细胞后,与对照组比较,100μg/mL的盐酸青藤碱可使自噬相关蛋白LC3Ⅱ表达(0.67±0.05)及ERK2的磷酸化水平(1.08±0.05)上调(P<0.05),ERK抑制剂U0126可使LC3Ⅱ表达下调(P<0.05)及EA.hy926细胞中酸性小体减少;盐酸青藤碱可抑制EA.hy926中LPS诱导的HMGB1表达,自噬抑制剂氯喹可逆转该细胞中盐酸青藤碱对LPS诱导HMGB1表达的抑制作用(P<0.05)。结论盐酸青藤碱可通过ERK通路诱导EA.hy926细胞自噬,该自噬过程是盐酸青藤碱下调炎症细胞因子HMGB1进而发挥抗炎活性的机制之一。     

厄贝沙坦调节EA.hy926细胞动脉粥样硬化相关炎症基因的表达水平

目的观察厄贝沙坦是否调节人脐静脉内皮细胞株EA.hy926动脉粥样硬化相关炎症基因表达谱的变化。方法人脐静脉内皮细胞株EA.hy926与厄贝沙坦(10-6 mol/L)共同孵育24 h,提取总RNA行基因表达谱分析。DAVID平台分析对照组和加药组之间疾病相关的差异基因,实时定量聚合酶链反应(RT-PCR)验证动脉硬化相关基因表达水平。Western blotting验证血管紧张素1型受体(AT1R)和血管紧张素2型受体(AT2R)蛋白水平的变化。结果基因芯片表达谱分析中,与对照组相比,共56条差异基因,其中39条基因表达水平上调,17条基因下调。疾病分类分析提示这些基因与冠状动脉粥样硬化、心肌梗死、结直肠癌等疾病相关。其中与动脉粥样硬化及心肌梗死相关的基因有8条,分别是MMP2、PTGS2、PECAM1、SELP、SELL、CYP1A1、MMRN1、HSPA1A。RT-PCR验证结果与芯片结果基本相符。Westren blotting提示厄贝沙坦组AT1R表达较对照组减低,AT2R表达增加。结论厄贝沙坦调节人脐静脉内皮细胞株EA.hy926动脉粥样硬化相关炎症因子的表达,这些因子能够增加动脉粥样硬化斑块的不稳定性,促炎因子表达的机制可能是AT2R的过表达。     

Effect of extracellular hypertonicity and alkalosis on endothelial-derived EA.hy 926 cells in vitro

Endothelial and local metabolic mechanisms contribute in concert to the regulation of blood flow. In vivo extracellular alkalosis induces a vasoconstriction, hyperosmolarity a vasodilatation. The interaction between local metabolic and endothelial mechanisms is poorly understood. Therefore we investigated in endothelial-derived EA.hy926 cells the secretion of endothelial modulators of vascular tone under hypertonic stress with and without alkalosis: hyperosmolality was generated by either the addition of NaHCO subset 3 (25, 50, 100 mM, pH up to > 8) or mannitol (50, 100, 200 mM) to the cell culture media. The cells were studied using automated cell counting, measurement of the activity of the lactate dehydrogenase (LDH) and a bromo-deoxyuridine (BrdU) cell proliferation assay. Endothelin and cGMP, a surrogate marker for nitric oxide (NO), were measured with specific ELISAs. EA.hy 926 cells formed stable monolayers in vitro. The secretion of endothelin, but not of cGMP was inversely correlated with the osmolality of the incubation media: the endothelin concentration in the supernatants decreased in both mannitol- and NaHCO subset 3 -treated cells in a concentration-dependent manner (152.4 +/- 6.2 pg/ml (control) to 24.4 +/- 2.4 pg/ml (200 mM mannitol), res. to 18.2 +/- 2.7 pg/ml (100 mM NaHCO subset 3). Neither hypertonic bicarbonate nor mannitol solutions decreased the monolayer cell density or cell viability during the 6 hour incubation period. In conclusion, EA.hy926 cells are quite resistant against a 6-hour hypertonic/alkaline stress. Hypertonicity decreases the secretion of endothelin and has no effect on cGMP. At each level of hypertonicity the endothelin concentration was similar in the NaHCO subset 3 and mannitol media arguing against a direct role of endothelin in alkalosis-induced vasoconstriction in vivo. The decreased secretion of endothelin during hypertonicity could contribute to the hyperosmolal vasodilation seen in vivo.     

血管内皮细胞EA．hy926对单核细胞U937清道夫受体表达的影响

[目的]研究单核细胞、内皮细胞的相互作用对单核细胞清道夫受体AI、CD36表达的影响,观察细胞因子在其中的介导作用。[方法]采用单核细胞U937、内皮细胞EA．hy926单独培养、隔离培养及混合培养的方法形成不同的培养条件,通过夹心酶联免疫吸附法检测培养液中巨噬细胞集落刺激因子的含量,使用流式细胞术检测单核细胞表面清道夫受体AI、CD36的表达程度。[结果]单核细胞单独培养条件下清道夫受体AI和CD36的表达量较低,在和内皮细胞隔离培养及混合培养后两者的表达量均显著性升高（P〈0．05）,巨噬细胞集落刺激因子和血小板源性生长因子BB在单核细胞清道夫受体AI和CD36表达增高的调节中起着一定的介导作用,但不占主要地位。[结论]单核细胞与内皮细胞的相互作用可通过多种环节上调单核细胞清道夫受体AI和CD36的表达,从而参与动脉粥样硬化的发展。     

基于斑马鱼和EA.hy926细胞模型评价活血化瘀方的促血管新生作用

目的:评价活血化瘀方(SE)的促血管新生作用,并探讨其可能的作用机制。方法:选择转基因斑马鱼幼鱼及内皮细胞系EA.hy926细胞株为模型,按空白对照组、模型组、活血化瘀方不同剂量组进行分组和给药干预。在荧光显微镜下观察正常斑马鱼胚胎培养液中空白对照组及活血化瘀方组肠下静脉血管(SIVs)的生长状况;用VEGF受体抑制剂(VRI)诱导斑马鱼血管损伤,观察各组斑马鱼节间血管(ISVs)生长情况;采用VRI抑制内皮细胞系EA.hy926增殖模型,用MTT法评价活血化瘀方各组对细胞增殖的促进作用;用Real-time PCR法,检测各组斑马鱼体内血管内皮生长因子受体(VEGFR)基因(flt1、kdr、kdrl)的表达情况。结果:在正常斑马鱼模型上,活血化瘀方可明显促进斑马鱼SIVs出芽;在VRI诱导的斑马鱼血管损伤模型上,活血化瘀方各剂量组能够明显抑制斑马鱼ISVs的损伤,其血管生长指数与模型组比较差异均有统计学意义(P0.001);在EA.hy926细胞模型上,活血化瘀方各剂量组可明显促进内皮细胞的增殖。Real-time PCR结果表明,模型组VRI显著抑制了斑马鱼体内VEGF受体基因flt1、kdr、kdrl的表达,而活血化瘀方各剂量组的表达量均明显增高,并呈现一定的剂量依赖关系。结论:活血化瘀方在内皮细胞模型、正常斑马鱼模型和VRI诱导的斑马鱼血管损伤模型上均具有促血管新生作用,其机制可能与其上调VEGF受体flt1、kdr、kdrl基因的表达有关。