紫檀芪对宫颈癌细胞自噬及SIRT1-FoxO信号通路的影响

目的:探讨紫檀芪(PTE)对宫颈癌细胞自噬及SIRT1-FoxO信号通路的影响。方法:以人宫颈癌HeLa细胞作为研究对象。采用CCK-8法和流式细胞术分别测定不同浓度的PTE对HeLa细胞活力和凋亡率的影响;透射电镜观察细胞中自噬体数目;qPCR测定细胞中SIRT1和FoxO的mRNA表达;Western blot测定细胞中SIRT1、FoxO、LC3-Ⅰ、LC3-Ⅱ、p62、Bax和Bcl-2水平。结果:PTE作用于HeLa细胞24和48 h后,细胞活力抑制率随浓度增加而升高。与0μmol/L PTE相比,15、30和60μmol/L PTE处理后,HeLa细胞凋亡率、细胞中自噬体数目及Bax、LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ、SIRT1和FoxO水平显著升高(P<0.05),Bcl-2和p62水平显著降低(P<0.05),且呈浓度依赖性。结论:PTE可能通过激活SIRT1-FoxO信号通路诱导HeLa细胞自噬和凋亡,从而抑制HeLa细胞活力。     

细胞自噬在宫颈癌中的相关研究进展

细胞自噬指细胞利用溶酶体降解细胞质中错误折叠的蛋白质及受损细胞器等,重新利用降解物质及胞内有害物质的过程,以维持细胞内环境稳定。正常状态下细胞的自噬维持在低水平,当细胞处在不利因素条件下,自噬也会被激活应对不利因素。自噬在肿瘤发生、发展、转移、复发、药物抵抗等方面有着重要作用,但自噬在这些方面的详细机制仍不清楚。我们在文中对宫颈癌细胞中自噬相关基因的表达情况进行了阐述,自噬治疗在宫颈癌中具有重要的应用前景。     

T细胞免疫球蛋白黏蛋白分子3对宫颈癌细胞生物学行为及肿瘤免疫微环境的影响

目的：探讨T细胞免疫球蛋白黏蛋白分子3(Tim-3)对宫颈癌体内外生长进展及免疫微环境的影响。方法：免疫组化染色和qRT-PCR检测宫颈癌组织及癌旁组织中Tim-3表达；将HeLa细胞随机分对照组、NC shRNA组（转染阴性对照NC shRNA慢病毒质粒）、Tim-3 shRNA组（转染Tim-3 shRNA慢病毒质粒），qRT-PCR和Western blot检测转染效果，CCK-8检测细胞增殖活性，EdU染色检测细胞增殖，Transwell检测细胞迁移与侵袭；注射转染Tim-3 shRNA或NC shRNA慢病毒质粒的HeLa细胞构建移植瘤裸鼠模型，定时测量肿瘤体积，21 d后抽取腹主动脉血，称量瘤体质量，HE染色、TUNEL染色和免疫组化染色检测肿瘤组织生长，ELISA检测血清TNF-α、IL-1β、IL-6、IL-12表达，流式细胞术检测肿瘤浸润性免疫细胞亚群变化。结果：宫颈癌组织Tim-3表达较癌旁组织显著升高（P<0.01）；转染成功获得Tim-3低表达的HeLa细胞，与对照组比较，Tim-3 shRNA组HeLa细胞增殖活性下降（P<0.01）,EdU标记阳...     

NOD8抑制人胰腺癌细胞自噬及凋亡对其自噬作用的影响

目的:探讨NOD8(也称NLRP10或PYNOD)是否能抑制胰腺癌细胞发生自噬及其可能机制,并研究凋亡对NOD8调控自噬的影响。方法:用JetPRIME阳离子聚合物将空质粒pEGFP-C2和重组质粒pEGFP-NOD8分别转染入胰腺癌Panc-1细胞,并设立空白对照组,48 h后应用Western blot检测NOD8蛋白、自噬相关蛋白(beclin-1和LC3-Ⅱ)以及磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)/蛋白激酶B(Akt)/哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)通路相关蛋白(Akt、p-Akt、mTOR和p-mTOR)的表达;并采用免疫荧光染色法观察细胞LC3斑点的数量。此外,用caspase抑制剂Z-VAD-FMK作用于过表达NOD8的Panc-1细胞后,Western blot检测beclin-1和LC3-Ⅱ蛋白的表达水平;免疫荧光染色法观察细胞LC3斑点数量。结果:pEGFP-NOD8组细胞NOD8蛋白表达明显高于对照组和pEGFP-C2组(P0.01)。与对照组和pEGFP-C2组相比,pEGFP-NOD8组细胞beclin-1和LC3-Ⅱ蛋白表达及细胞LC3斑点数量显著降低;并且pEGFP-NOD8组细胞p-Akt及p-mTOR蛋白表达量显著上升(P0.01),而AKT和mTOR蛋白表达无明显差异。与pEGFP-NOD8组相比,pEGFP-NOD8+Z-VAD-FMK组细胞beclin-1和LC3-Ⅱ蛋白表达水平及LC3斑点数量显著高于pEGFP-NOD8组。结论:NOD8可抑制Panc-1细胞自噬,其机制可能与激活PI3K/Akt/mTOR通路有关;凋亡可增强NOD8对自噬的抑制作用。     

TRPC6特异性抑制剂SAR7334对宫颈癌细胞生物学行为影响的研究

目的　探讨TRPC6在宫颈癌组织中的表达及其抑制剂SAR7334对Siha（人宫颈鳞癌细胞）增殖和迁移的影响。 方法　选取2017年9月至2019年9月在十堰市人民医院确诊为宫颈鳞癌的11例病例作为实验组,对照组取同一患者正常宫颈组织,免疫印迹法和免疫荧光法等检测宫颈组织中TRPC6蛋白表达;使用20、100、1000 nmol/L SAR7334处理Siha细胞,CCK8法和Hoechst染色检测细胞增殖与凋亡;划痕实验和Transwell法验检测细胞迁移。免疫印迹法检测TRPC6通道阻断后Siha细胞自噬程度的改变。 结果　宫颈癌组织中TRPC6表达上调;与对照组相比,用100 nmol/L SAR7334阻断TRPC6后,Siha细胞的增殖和迁移减少,划痕愈合率降低,凋亡率增加（P<0.05）。TRPC6通道阻断后,Siha细胞自噬减弱。 结论　TRPC6在宫颈癌中表达上调,其抑制剂SAR7334可能通过影响细胞自噬抑制宫颈癌Siha细胞的增殖与迁移。     

TRPC6特异性抑制剂SAR7334对宫颈癌细胞生物学行为影响的研究

目的　探讨TRPC6在宫颈癌组织中的表达及其抑制剂SAR7334对Siha（人宫颈鳞癌细胞）增殖和迁移的影响。 方法　选取2017年9月至2019年9月在十堰市人民医院确诊为宫颈鳞癌的11例病例作为实验组,对照组取同一患者正常宫颈组织,免疫印迹法和免疫荧光法等检测宫颈组织中TRPC6蛋白表达;使用20、100、1000 nmol/L SAR7334处理Siha细胞,CCK8法和Hoechst染色检测细胞增殖与凋亡;划痕实验和Transwell法验检测细胞迁移。免疫印迹法检测TRPC6通道阻断后Siha细胞自噬程度的改变。 结果　宫颈癌组织中TRPC6表达上调;与对照组相比,用100 nmol/L SAR7334阻断TRPC6后,Siha细胞的增殖和迁移减少,划痕愈合率降低,凋亡率增加（P<0.05）。TRPC6通道阻断后,Siha细胞自噬减弱。 结论　TRPC6在宫颈癌中表达上调,其抑制剂SAR7334可能通过影响细胞自噬抑制宫颈癌Siha细胞的增殖与迁移。     

氯喹对人宫颈癌细胞系HeLa增殖、凋亡及自噬的影响

目的 探讨氯喹(CQ)对人宫颈癌细胞系HeLa增殖、凋亡及自噬的影响,并初步探讨其作用机制。方法 将HeLa细胞分为对照组(不加药物)和实验组(氯喹-1组至氯喹-5组,分别用25、50、75、100、150μmol/L CQ处理)。细胞均培养24和48 h; CCK-8法和集落形成实验检测细胞增殖;活性氧检测试剂盒检测细胞内ROS产生;流式细胞测量术检测细胞凋亡率。蛋白免疫印迹检测自噬蛋白p62、LC3和Beclin1,凋亡蛋白Bax、Bcl-2和PARP以及PI3K/AKT/MDM2通路蛋白的表达水平。结果 CQ呈时间和浓度依赖性抑制细胞增殖(P<0.05);CQ显著抑制细胞自噬活性,诱导胞内ROS的产生,诱导细胞凋亡(P<0.05)。与对照组相比,CQ可明显抑制PI3K/AKT/MDM2信号通路的激活(P<0.05)。结论 氯喹可能通过PI3K/AKT/MDM2通路抑制人宫颈癌HeLa细胞的增殖,诱导细胞凋亡。     

动脉粥样硬化病变进程中血管细胞自噬的改变及低剪切应力对血管内皮细胞自噬的影响

<正>目的:动脉粥样硬化(atherosclerosis,As)进程中血管细胞自噬的改变及低剪切应力对血管内皮细胞自噬的影响。方法:高脂饮食喂饲Apo E-/-小鼠,分别于0、4、8和12周处死。HE和油红O染色法观察As病变;免疫组织化学法和Western blot检测Beclin 1、LC3和p62蛋白表达;将HUVECs置于体外灌流系统,分别以低剪切应力(5 dyn/cm2)和正常剪切应力(15 dyn/     

富马酸二甲酯对糖尿病肾病自噬及足细胞功能的影响

目的 探究富马酸二甲酯(DMF)对糖尿病肾病(DN)自噬及足细胞功能的影响.方法 通过对大鼠腹腔注射50 mg/kg的STZ诱导了DN模型,DN组大鼠灌胃2 mL生理盐水,DN+25DMF组、DN+50DMF组和DN+75DMF组分别灌胃25、50和75 mg/(kg?d)的DMF,共治疗12周.检测各组大鼠的血糖、尿...     

南蛇藤醇抑制宫颈癌细胞生物学行为的机制研究

目的　探讨南蛇藤醇抑制宫颈癌细胞增殖和侵袭的作用机制。 方法　将正常培养HeLa细胞分为对照组、南蛇藤醇低、中、高剂量组（终浓度分别为4 μmol/L、8 μmol/L和12 μmol/L）、阳性对照组（顺铂,终浓度为10 μmol/L）、LY294002组（LY294002,终浓度为20 μmol/L）和（南蛇藤醇+LY294002）组（南蛇藤醇和LY294002,终浓度分别为12 μmol/L和20 μmol/L）。MTT法检测各组细胞存活情况;流式细胞仪检测细胞凋亡情况;Transwell检测细胞的侵袭;蛋白质印迹法检测PI3K/AKT/NF-κB信号通路的表达;采用皮下注射HeLa细胞建立裸鼠模型,观察南蛇藤醇（120 mg/kg）对裸鼠移植瘤体积和重量的影响。 结果　与对照组相比,南蛇藤醇组、阳性对照组和LY294002组HeLa细胞的相对增殖率、侵袭细胞数均明显下降（P<0.001）,细胞凋亡率明显升高（P<0.001）,p-PI3K、p-AKT、NF-κB p65蛋白表达明显下调（P<0.001）,且随着南蛇藤醇浓度升高,其作用增强;与LY294002组相比,（南蛇藤醇+LY294002）组HeLa细胞的相对增殖率和侵袭细胞数明显下降（q=10.182,q=10.217,P均<0.001）,细胞凋亡率明显升高（q=23.636,P<0.001）;与对照组相比,南蛇藤醇组裸鼠体重、移植瘤的体积和重量明显下降（q=4.100,P<0.020;q=13.501,P<0.001;q=5.078,P=0.005）。 结论　南蛇藤醇可能通过抑制HeLa细胞的PI3K/Akt/NF-κB信号通路,抑制其恶性生物学行为。     

Leptin对子宫颈癌Hela细胞生物学行为的影响及机制

目的 观察瘦素(Leptin)对子宫颈癌Hela细胞生物学行为的影响,并探讨其机制.方法 用不同浓度Leptin重组蛋白处理子宫颈癌Hela细胞,MTT法检测细胞增殖状态的变化;流式细胞仪检测瘤细胞周期变化及凋亡;RT-PCR检测C-MYC基因的表达;Western blot检测C-MYC蛋白质的表达.结果 Leptin明显促进子宫颈癌Hela细胞的增殖并抑制细胞的凋亡;Leptin激活子宫颈癌Hela细胞中C-MYC基因及其蛋白质的表达.结论 Leptin通过激活C-MYC的表达促进子宫颈癌Hela细胞的增殖并抑制其凋亡,其作用机制通过激活癌基因C-MYC而发挥效应.     

沉默c-myc基因对Raji细胞自噬活性的影响

为了研究沉默c-myc基因后Raji细胞自噬活性的变化及其机制,采用脂质体转染SiRNA法沉默c-myc基因,在透射电镜下观察细胞自噬体的形成情况,采用western blot法测定LC3-Ⅰ、LC3-Ⅱ、Beclin-1、磷酸化P70、磷酸化AKT蛋白的表达。研究发现沉默c-myc基因后,电镜下观察到Raji细胞自噬活性随时间而增强,LC3-Ⅰ、LC3-Ⅱ蛋白表达、LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ比值随时间而增高;Beclin-1表达增高,磷酸化P70表达降低,磷酸化AKT表达无明显变化。结果提示沉默c-myc基因使Raji细胞自噬活性明显增强,其机制是通过上调Beclin-1表达和抑制mTOR的活性来实现的。     

低氧对结肠癌SW480细胞生存的影响及与细胞自噬的关系

 摘要：目的 观察低氧微环境对结肠癌细胞增殖、侵袭及自噬的影响,探讨低氧对结肠癌细胞生存及与自噬的关系。方法 免疫磁珠分选CD133+ 细胞;Boyden小室实验研究结肠癌细胞的侵袭;透射电子显微镜（TEM）观察细胞的超微结构;MDC荧光检测自噬囊泡;联合运用流式细胞仪和台盼蓝染色研究自噬与细胞增殖的关系。结果 Boyden小室实验中低氧微环境增加结肠癌细胞SW480进入下室的细胞数量;在实验组低氧的微环境中SW480细胞的MDC荧光强度由20.53±0.64降低至17.00±0.20,而CD133+ 细胞的MDC荧光强度由19.89±0.58增加至33.13±1.95（P<0.05）。台盼蓝染色实验显示,与对照组相比,低氧微环境中SW480活细胞率随着时间的延长而降低（P<0.05）;但CD133+ 活细胞率无显著改变。结论：低氧可增加SW480细胞的侵袭性,细胞自噬水平下降,活细胞率降低;CD133+细胞在低氧的微环境中自噬的发生增加,活细胞率基本不变。     

CD147对前列腺癌PC-3细胞自噬的影响

 目的：研究白细胞分化抗原（CD）147在体外对前列腺癌PC-3细胞的自噬作用。方法：通过氨基酸饥饿法建立自噬模型,免疫印迹技术检测CD147的表达。利用RNA干扰CD147表达的细胞系,免疫印迹技术检测自噬蛋白LC3-I和LC3-II的表达;台盼蓝排斥实验检测细胞的死亡情况。结果：在PC-3细胞自噬模型中,随着饥饿诱导时间延长,CD147表达逐渐升高。用RNA干扰技术降低CD147表达后,与阴性对照组比较,在自噬模型中CD147干扰组自噬相关蛋白LC3-II表达增多;并且细胞死亡数量明显增加,阴性对照组细胞死亡率分别为（19.3±3.1）%和（22.3±3.5）%,而在CD147干涉组细胞死亡率为(38.4±3.1)%,差异有统计学意义（P<0.05）。结论：在前列腺癌PC-3细胞中CD147抑制饥饿诱导的自噬,减少自噬性细胞死亡的发生。     

永久缺血缺氧对PC12细胞自噬的影响

目的建立缺血缺氧损伤细胞模型,探讨永久性缺血缺氧致神经细胞损伤机制及其对PC12细胞自噬的影响。方法采用经典的神经细胞模型PC12细胞作为研究对象,利用无糖的DMEM培养基和缺氧罐(95%N_2和5%CO_2)培养PC12细胞,模拟体内神经细胞缺血缺氧环境。细胞分为对照组(在正常条件下,使用完全培养基培养细胞)和糖氧剥夺(OGD)处理组(在缺氧条件下,使用OGD培养基培养细胞):0.5h(OGD+0.5h)、2h(OGD+2h)、6 h(OGD+6h)、12h(OGD+12h)和24h(OGD+24h)。利用MTT检测细胞存活率,通过流式细胞仪检测细胞凋亡率,比色法检测细胞乳酸脱氢酶(LDH)释放率,免疫荧光以及Western blotting法检测低氧诱导因子-1α(HIF-1α)、环氧化酶-2(COX2)、微管相关蛋白轻链3(LC3)和Beclin-1的表达,透射电子显微术检测自噬体的超微结构,探讨不同永久性缺血缺氧时间对细胞损伤以及自噬的影响。结果与对照组相比,细胞存活率下降,呈OGD时间依赖性,且自OGD 6h显著下降,差异具有统计学意义(P0.05);细胞凋亡率和坏死率持续增高,与OGD时间呈正相关,且自OGD 12h后显著升高,差异具有统计学意义(P0.05);HIF-1α和COX2蛋白表达随OGD时间延长逐渐升高,OGD 12h后增高显著,差异具有统计学意义(P0.05)。OGD组被荧光标记的绿色的LC3蛋白相对于对照组,数量增多,绿色荧光增强。Beclin-1蛋白表达结果显示,Beclin-1的表达与OGD时间呈正相关,并由OGD6h开始明显增加,差异具有统计学意义(P0.05)。结论缺血缺氧能够诱导PC12细胞氧化应激及自噬激活。     

低氧预适应对HT22细胞自噬的影响

目的:研究低氧预适应(HPC)对小鼠海马HT22细胞自噬的影响。方法:将HT22细胞并分为对照组(control)、低氧组(hypoxia)、低氧预适应组(HPC)和低氧预适应与3-甲基腺嘌呤联合处理组(HPC+3-MA)。MTS法检测HT22细胞活性,采用real time RT-PCR检测HT22细胞中自噬及微管相关蛋白1轻链3(LC3)mRNA表达,利用Western Blot检测LC3蛋白的表达及LC3Ⅱ/LC3Ⅰ的比值变化,转染GFP-LC3进一步检测LC3Ⅱ表达。结果:HPC可增加低氧状态下HT22细胞的活性,与HPC组相比,HPC+3-MA组HT22细胞活性降低;HPC可以诱导低氧状态下HT22细胞中LC3的mRNA的表达,并增加LC3Ⅱ/LC3Ⅰ的比值。结论:HPC通过促进低氧状态下HT22细胞自噬提高细胞活性。     

细胞自噬与肿瘤

自噬又称为II型程序性细胞死亡(type II programed cell death)是以胞质内出现双层膜结构包裹长寿命蛋白和细胞器的自噬体为特征的细胞"自我消化"的一系列生化过程~([1]).自噬现象最早是Ashford和Porter于1962年用电子显微镜在人的肝细胞中观察到.近年来随着酵母模型的建立,分子生物学及基因技术的发展,对自噬的研究有了很大的进展.     

细胞自噬与心血管疾病

细胞自噬是一种利用溶酶体对自身细胞器进行分解、将产生的大分子物质予以回收利用的高度保守的细胞降解过程。饥饿、缺血、氧化应激等均可诱导其发生。自噬在细胞的发育和分化过程中起着至关重要的作用,和许多心血管疾病的发生、发展密切相关。正常的细胞自噬对心肌细胞有保护作用,自噬不足或自噬过度则可促发疾病或加重病变。本文综述细胞自噬在心血管疾病中的研究进展。