四物汤对环磷酰胺致血虚证小鼠骨髓细胞凋亡及Bcl-2、Bcl-xL蛋白表达的影响

目的观察四物汤对环磷酰胺致血虚证小鼠外周血象、骨髓细胞凋亡及抑凋亡蛋白Bcl-2、Bcl-xL表达的影响。方法按250 mg·kg~(-1)剂量腹腔注射环磷酰胺1次,制备血虚证小鼠模型。实验动物随机分为正常对照组,模型对照组,四物汤低剂量组(5 g·kg~(-1)·d~(-1))、四物汤中剂量组(10 g·kg~(-1)·d~(-1))、四物汤高剂量组(20 g·kg~(-1)·d~(-1))。利用血细胞计数仪、流式细胞术和蛋白免疫印迹技术分别检测各组小鼠外周血象、骨髓细胞凋亡率及骨髓细胞Bcl-2、Bcl-xL蛋白表达。结果与模型组相比,四物汤低剂量组和中剂量组外周血红细胞数显著升高(P0.05,P0.05)、中剂量组和高剂量组白细胞数明显增加(P0.05,P0.05)、各剂量组血红蛋白含量均显著升高(P均0.05);四物汤各剂量组小鼠骨髓细胞凋亡率均显著下降(P均0.05),四物汤中剂量组Bcl-2、Bcl-xL蛋白表达量均显著增加(P0.05,P0.05)。结论四物汤可能通过上调骨髓细胞Bcl-2和Bcl-xL蛋白表达,降低骨髓细胞凋亡率,提高外周血象,以发挥补血作用。     

乙酰苯肼致血虚证模型小鼠的证候物质基础初探

目的研究乙酰苯肼引起的血虚证模型小鼠证候可能的物质基础。方法以雄性ICR小鼠为对象,采用乙酰苯肼170 mg/kg皮下注射,第1天和第4天各1次制作血虚证模型,并设立正常对照组。动态观察小鼠体重变化,显微镜下观察血液细胞与股骨骨髓细胞,取肾脏、肾上腺和骨髓分别抽提RNA,以实时荧光定量PCR技术检测相关基因表达、以ELISA方法检测血清皮质酮含量。结果与正常对照组比较,乙酰苯肼小鼠造模3天后体重显著下降(P<0.05),小鼠呈现虚弱征象,小鼠脾脏代偿性增大而胸腺却明显萎缩(P<0.01)。乙酰苯肼组小鼠血液红细胞形态异常、正常红细胞数量减少、白细胞代偿性增多;骨髓成熟的环状核细胞减少。与正常对照组比较,乙酰苯肼组小鼠骨髓IL-5和IL-6基因表达显著升高(P<0.05),而巨噬细胞集落刺激因子(M-CSF)、IL-1b和IL-7基因表达显著下降(P<0.05);肾脏促红细胞生成素(Epo)、粒细胞集落刺激因子(G-CSF)和M-CSF基因表达也显著升高(P<0.05,P<0.01),而粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)基因表达则被乙酰苯肼抑制(P<0.05);肾上腺Cyp21a1与Cyp11b1基因表达显著升高(P<0.05);小鼠血清皮质酮含量明显升高(P<0.01)。结论乙酰苯肼所复制的证候以血虚证为主,脾脏肿大、肾脏Epo基因代偿性高表达以及继发肾上腺皮质功能虚性亢奋是该证候物质与功能变化最突出特征。     

四物汤对环磷酰胺致血虚证小鼠骨髓蛋白质组的影响

目的：研究四物汤对环磷酰胺（CTX）损伤致血虚证小鼠骨髓蛋白质组的影响,旨在分子水平上探讨四物汤促进骨髓造血的作用机制。方法：采用CTX 250 mg·kg^-1腹腔注射制成化学损伤型血虚证小鼠模型,利用蛋白质组学技术研究四物汤治疗后的差异蛋白质组。结果：研究发现CTX使小鼠骨髓中12个蛋白表达上调、3个蛋白表达下调,四物汤可使CTX造模后这些表达改变的蛋白有不同程度恢复。结论：四物汤可能通过影响与细胞凋亡、造血干祖细胞增殖分化有关的蛋白质而促进骨髓造血。     

当归补血汤多糖对环磷酰胺和乙酰苯肼联用致小鼠血虚模型的影响

目的 :观察当归补血汤多糖对血虚小鼠血液系统的影响。方法 :用环磷酰胺和乙酰苯肼联用所致的血虚小鼠为实验对象。结果 :当归补血汤多糖能显著升高血虚小鼠的RBC、WBC、Hb水平。结论 :当归补血汤多糖具有补血作用 ,是当归补血汤的有效活性部位。     

四物汤对血虚证小鼠骨髓细胞CD 34抗原表达的影响

目的：探讨四物汤对^60Coγ射线或环磷酰胺诱导的血虚证小鼠骨髓细胞CD34抗原分子表达的影响。方法：用^60Coγ射线全身照射小鼠升腹腔注射环磷酰胺造成小鼠血虚证模型，实验分正常组、模型组、小剂量组、中剂量组、大剂量组，荧光标记小鼠骨髓细胞并用流式细胞仪 测定CD34＋细胞在骨髓有核细胞中的比例，同时做小鼠骨髓细胞 落培养。结果与结论：四物汤可促进血虚小鼠骨髓中干祖细胞增生，增加CD34抗原分子的表达，为四物汤治疗血虚证提供了依据。     

四物汤对乙酰苯肼致溶血性贫血模型大鼠的治疗作用

目的：考察四物汤对溶血性贫血模型大鼠的治疗作用。方法：用乙酰苯肼诱导动物模型,四物汤治疗后观察一般表现,检测肝脏、脾脏重量和外周血红白细胞计数、血红蛋白含量、网织红细胞计数。结果：模型大鼠表现萎靡,肝脾肿大,红细胞数、血红蛋白量明显减少,白细胞、网织红细胞数上升;四物汤治疗后大鼠一般表现好转,肝脾缩小,外周血象明显好转。结论：四物汤可以明显改善溶血性贫血模型大鼠外周血象,促进骨髓造血。     

四物汤对环磷酰胺所致血虚证小鼠造血细胞作用的研究

探讨四物汤治疗环磷酰胺所致小鼠血虚证的作用机理。腹腔注射环磷酰胺制成小鼠血虚证模型;测定小鼠外周血象;骨髓细胞集落形成;CD34^ 细胞在骨髓有核细胞中的比例;小鼠胸腺指数。结果表明四物汤具有明显促进骨髓造血和增强免疫的作用,并可升高血虚证小鼠的外周血象。四物汤增强免疫、促进造血可能是四物汤治疗小鼠血虚证的机理之一。     

参芪养血颗粒对环磷酰胺和乙酰苯肼所致血虚小鼠的影响

目的 研究参芪养血颗粒对乙酰苯肼和环磷酰胺联用所致血虚小鼠的影响.方法 乙酰苯肼和环磷酰胺联合共同作用小鼠,建立小鼠血虚证模型,观察参芪养血颗粒对小鼠外周血象、胸腺和脾脏指数以及骨髓有核细胞增殖的影响.结果 参芪养血颗粒给药组的小鼠红细胞(RBC)、白细胞(WBC)、血红蛋白(Hb)高于模型组;胸腺、脾脏指数也有一定程度增加,并能促进骨髓有核细胞增殖.结论 参芪养血颗粒可以改善化学物质所致的小鼠贫血和骨髓抑制,具有生血、补血的作用.     

四物汤对辐射致血虚证小鼠血清蛋白质表达的影响

目的 :用蛋白质组技术考察四物汤对血虚证小鼠血清蛋白的影响 ,在分子水平上探讨四物汤补血的作用机理。方法 :⁶⁰Coγ射线全身照射小鼠造成血虚证模型 ;二向电泳、图象分析、质谱鉴定等蛋白质组学技术测定四物汤对血虚证小鼠血清中有影响的蛋白。结果 :四物汤可使血虚证小鼠血清中 12个下调和 4个上调的蛋白质有所恢复 ,进一步质谱鉴定其中 4个蛋白质可能是DNA依赖蛋白激酶 (DNA -dependent protein kinase catalytic sub unit,P973 13 ) ,肌细胞增强蛋白 (dystrophin ,P11531) ,马达蛋白 (KIF13A ,Q9EQW7) ,肌动蛋白结合蛋白 (dys-tonin ,Q9QX20 )。它们的功能是参与DNA双链损伤的修复 ,与AP-1结合将 6-磷酸甘露糖受体从高尔基体转运到胞浆膜上 ,将细胞骨架铆定在胞浆膜上等。结论 :四物汤可能通过对血虚证小鼠血清中蛋白的影响而促进骨髓造血、减轻辐射引起的损伤。     

四物汤对放射线致血虚证小鼠骨髓蛋白质表达的影响

目的 :观察四物汤对血虚证小鼠骨髓蛋白质表达的影响 ,为阐明四物汤补血作用的分子机理提供理论和实验依据。方法 :采用 3.5Gy⁶⁰Coγ射线全身 1次性照射 ,制备小鼠血虚证模型。利用双向电泳、图像分析、胶内酶切、质谱鉴定等蛋白质组学技术 ,结合生物信息学 ,分离、分析、鉴定蛋白质。结果 :四物汤可以逆转放射线致血虚证小鼠骨髓 10个上调和 5个下调的蛋白质。其中 8个蛋白质可能分别是淋巴细胞特异性蛋白质 1、蛋白酶体26SATP酶亚组分 4、造血细胞蛋白质酪氨酸磷酸酶、H-ras、3-磷酸甘油醛脱氢酶、生长因子受体结合蛋白 14及Lgals12。结论 :四物汤能调节骨髓蛋白质表达 ,并可能由此促进造血细胞的生长和分化 ,发挥补血作用。     

四物汤对放射线致血虚证小鼠骨髓Epo和G-CSF基因表达的影响

目的:考察四物汤对放射线致血虚证小鼠的生血作用及对骨髓Epo,G-CSF基因表达的影响,为阐明四物汤补血作用的分子机制提供依据。方法:采用3.5Gy⁶⁰Coγ射线全身1次性照射,制备小鼠血虚证模型;检测外周血象;骨髓集落培养观察并计数CFU-GM,BFU-E,CFU-E,CFUmix;RTPCR检测骨髓Epo和G-CSF基因表达。结果:四物汤显著升高放射线致血虚证小鼠外周血白细胞数量和骨髓CFUGM,BFUE,CFUE,CFUmix数量,上调骨髓Epo和GCSF基因表达。结论:四物汤促进骨髓细胞Epo和G-CSF基因的表达可能是其生血作用的机制之一。     

四物汤对综合放血法致小鼠血虚证造血功能的影响

目的:观察四物汤对综合放血法致小鼠血虚证造血功能的影响,为比较四物汤对不同血虚证模型补血作用提供实验依据。方法:每日按75g·kg^-1体重限食,隔日游泳20min及放血0.4mL共15d,建立小鼠血虚证模型。提前7d,四物汤小,中,大剂量组分别按每天5,10,20g·kg^-1给予四物汤至造模结束,通过血细胞计数仪及流式细胞仪等分析手段,检测外周血象、骨髓细胞周期、骨髓细胞凋亡和CD34⁺细胞数。结果:四物汤小,中,大剂量组可以使血虚证小鼠红细胞由第7天最低值4.6×10¹²·L^-1,分别显著升高到6.5,7.1,7.0×10¹²·L^-1;在第15天,使血虚证小鼠S期骨髓细胞数由11.53%,分别显著增加到14.34%,14.03%,13.58%。结论:四物汤可以在一定程度上逆转综合放血致小鼠的造血损伤。     

麋鹿角对环磷酰胺并乙酰苯肼诱导血虚模型的作用

目的:研究麋鹿角的补血作用。方法 :采用环磷酰胺并乙酰苯肼化学损伤血虚模型,以麋鹿角粉、麋鹿角水提取物以及水提药渣灌胃给药,检测小鼠体质量变化、外周血常规、骨髓细胞周期以及脾脏病理变化。结果:麋鹿角粉(1、2、4g/kg)和麋鹿角水提药渣(1、2g/kg)均对降低的模型小鼠外周血白细胞数有明显升高作用;麋鹿角粉(2、4g/kg)、水提取物以及水提药渣均能改善造模引起的小鼠体重下降,并能促进模型小鼠骨髓细胞由G0/G1期向S期转化,促进骨髓细胞DNA的合成,促进造血祖细胞的增殖;麋鹿角水提取物(1、2、4g/kg)具有改善模型小鼠脾脏病变的作用。结论 :麋鹿角对化学损伤性血虚模型小鼠有一定的保护作用。本研究可为麋鹿角药用资源的合理利用及其产业化提供科学依据。     

四物汤对环磷酰胺所致小鼠贫血的影响

目的：探讨四物汤抑制环磷酰胺(CY)所致小鼠贫血的作用机制。方法：用CY腹腔注射建立小鼠贫血模型．同时给小鼠灌服四物汤，采用骨髓细胞培养测定小鼠骨髓干细胞增殖能力、ELISA方法检测小鼠血清促红细胞生成素(EPO)的含量。结果：四物汤能明显促进骨髓干细胞的增殖和升高血清EPO的含量。结论：四物汤能明显抑制环磷酰胺所致的小鼠贫血，其作用机制可能是通过减轻CY对骨髓的抑制、促进红系细胞生长，并促进肾脏合成EPO而实现的。     

四物汤对γ射线照射致血虚证小鼠造血细胞作用的研究

探讨四物汤预防和治疗血虚证的作用,用60 Coγ射线身全照射小鼠造成血虚证模型;荧光标记并用流式细胞仪测定CD34＋细胞在骨髓有核细胞中的比例,细胞固定后PI染色测定细胞周期,Annexin V-FITC试剂盒和DNA凝胶电泳检测骨髓细胞的凋亡,结果：四物汤对小鼠骨髓造 血干祖细胞,外周血细胞的恢复有明显促进作用,有保护骨髓和促进骨髓细胞由G1期进入S期的效应,四物汤可减轻射线引起的细胞凋亡,促进骨髓造血干祖细胞的增殖,抑制骨髓造血干祖细胞的凋亡是四物汤预防和治疗血虚证的机制之一。     

四物汤对γ射线照射致血虚证小鼠造血细胞作用的研究

探讨四物汤预防和治疗血虚证的作用机理。用⁶⁰Coγ射线全身照射小鼠造成血虚证模型;荧光标记并用流式细胞仪测定CD34⁺细胞在骨髓有核细胞中的比例;细胞固定后PI染色测定细胞周期;Annexin V-FITC试剂盒和DNA凝胶电泳检测骨髓细胞的凋亡。结果:四物汤对小鼠骨髓造血干祖细胞、外周血细胞的恢复有明显促进作用;有保护骨髓和促进骨髓细胞由G₁期进入S期的效应;四物汤可减轻射线引起的细胞凋亡;促进骨髓造血干祖细胞的增殖,抑制骨髓造血干祖细胞的凋亡是四物汤预防和治疗血虚证的机制之一     

四物汤及其提取物对辐射致血虚证小鼠造血作用的研究

【目的】探讨四物汤及其提取物治疗辐射致血虚证小鼠的作用机制和有效物质基础。【方法】γ射线全身照射小鼠制成血虚证模型,观察四物汤对其外周血和造血祖细胞集落的影响,基因芯片检测有效单体芍药苷的分子作用机制。【结果】四物汤、正丁醇提取物、水溶提取物对血虚证小鼠外周的白细胞的恢复有明显促进作用;四物汤和芍药苷增强血虚证小鼠骨髓造血干祖细胞的集落形成能力;芍药苷可促进骨髓基质细胞分泌造血因子(G—CSF,GM—CSF,PDGF—α)等,抑制造血抑制因子(M—CIP)的分泌。【结论】四物汤补血的物质基础可能是芍药苷,促进骨髓基质细胞分泌G—CSF,GM—CSF,PDGF-α等造血因子可能是四物汤补血的作用机制之一。     

四物汤对辐射致血虚证小鼠作用的代谢组学研究

目的:基于超高效液相色谱-四级杆飞行时间质谱联用(UPLC-ESI-Q-TOF-MS)技术进行辐射损伤致血虚证以及四物汤的方证结合研究,发现辐射致血虚证及用四物汤干预后小鼠内源性代谢物的变化,基于代谢组学的方法考察血虚证的发生及四物汤的作用机制。方法:选用C57小鼠36只,按体重随机分为对照组、模型组及四物汤组。造模方法采用3.5Gy60Coγ射线全身照射制作模型,造模7 d后股动脉取血并摘取脾脏和胸腺,进行处理后用UPLC-ESI-Q-TOF-MS检测,应用Mark-erLynx XS软件对总离子流图进行色谱峰识别,利用主成分分析法对数据进行处理,采用正交偏最小二乘法进行组间数据分析。通过模式识别分析,快速确认标志物。结果:辐射损伤所致的血虚证小鼠血清中溶血磷脂、葡糖苷酸、单酰甘油酯、三羟基丁酸、神经酰胺、天冬氨酸磷酸酯、甘油磷脂等代谢物的含量变化明显;脾脏中变化明显的代谢物有单酰甘油酯、神经酰胺、溶血磷脂、羟基丁酸、棕榈酸、3-羟基硬脂酸、二甲基精氨酸、苯丙氨酸、磷脂酰丝氨酸;胸腺中有甲基腺苷、谷甾醇、肉毒碱、磷脂酰肌醇、磷脂酰乙醇胺、甘油二酯、二甲基精氨酸、神经酰胺、溶血磷脂、羟基丁酸、胆固醇等。结论:通过对这些生物标志物的生理功能分析,推测辐射损伤使小鼠机体的脂类代谢、糖类代谢及部分氨基酸的合成代谢发生紊乱,经典补血方剂四物汤治疗可以使之逆转并调整平衡。     

川芎嗪对血虚证小鼠骨髓细胞IL-6和IL-18基因表达的影响

目的:研究川芎嗪对辐射致血虚证小鼠骨髓细胞IL-6和IL-18基因表达的影响,为阐明川芎嗪补血和免疫调节作用的分子机制提供依据。方法:采用3.5 Gy60Coγ射线全身1次性照射制备小鼠血虚证模型;外周血白细胞计数;计算胸腺指数和脾指数;RT-PCR检测骨髓IL-6和IL-18 mRNA水平。结果:川芎嗪显著升高放射线致血虚证小鼠外周血白细胞数量(P<0.05)和脾指数(P<0.01),上调骨髓细胞IL-6(P<0.05)和IL-18(P<0.01)基因表达,对胸腺指数无显著影响。结论:川芎嗪促进骨髓细胞IL-6和IL-18基因的表达可能是其升血和调节免疫功能的机制之一。     

甘肃当归对乙酰苯肼溶血性血虚小鼠模型的干预作用

目的:比较甘肃岷县、礼县、渭源、临夏不同产地当归对乙酰苯肼溶血性血虚小鼠的干预作用。方法:建立乙酰苯肼溶血性血虚模型,给予当归水煎液[1.56 g/(kg·d)]22天后,检测外周血红细胞(RBC)、血红蛋白(HGB)、红细胞压积(HCT)、白细胞(WBC)、血小板(PLT)、红细胞膜钠-钾-ATP酶(Na+-K+-ATP)和钙-镁-ATP酶(Ca2+-Mg2+-ATP)活性,并观察肝脏指数(LI)、脾脏指数(SI)、胸腺指数(TI)的变化。结果:与模型组比较,岷县当归能提高RBC、HGB、HCT降低WBC、PLT(P0.05),临夏当归能提高HGB、HCT降低WBC、PLT(P0.05),渭源当归能提高HGB、HCT降低PLT(P0.05),礼县当归能降低PLT(P0.05);岷县当归能提高Na+-K+-ATP酶、Ca2+-Mg2+-ATP酶活性(P0.05),礼县当归能提高Na+-K+-ATP酶活性(P0.05),临夏当归能提高Ca2+-Mg2+-ATP酶活性(P0.05);甘肃产各当归均能降低LI(P0.05),有降低SI的趋势,岷县、礼县、渭源当归能升高TI(P0.05)。结论:甘肃当归[1.56 g/(kg·d)]具有明显改善乙酰苯肼溶血性血虚小鼠外周血象相关指标,提高红细胞膜ATP活性,降低肝脾指数,升高胸腺指数的作用,综合比较岷县当归作用较强。