四物汤对环磷酰胺致血虚证小鼠骨髓细胞凋亡及Bcl-2、Bcl-xL蛋白表达的影响

目的观察四物汤对环磷酰胺致血虚证小鼠外周血象、骨髓细胞凋亡及抑凋亡蛋白Bcl-2、Bcl-xL表达的影响。方法按250 mg·kg~(-1)剂量腹腔注射环磷酰胺1次,制备血虚证小鼠模型。实验动物随机分为正常对照组,模型对照组,四物汤低剂量组(5 g·kg~(-1)·d~(-1))、四物汤中剂量组(10 g·kg~(-1)·d~(-1))、四物汤高剂量组(20 g·kg~(-1)·d~(-1))。利用血细胞计数仪、流式细胞术和蛋白免疫印迹技术分别检测各组小鼠外周血象、骨髓细胞凋亡率及骨髓细胞Bcl-2、Bcl-xL蛋白表达。结果与模型组相比,四物汤低剂量组和中剂量组外周血红细胞数显著升高(P0.05,P0.05)、中剂量组和高剂量组白细胞数明显增加(P0.05,P0.05)、各剂量组血红蛋白含量均显著升高(P均0.05);四物汤各剂量组小鼠骨髓细胞凋亡率均显著下降(P均0.05),四物汤中剂量组Bcl-2、Bcl-xL蛋白表达量均显著增加(P0.05,P0.05)。结论四物汤可能通过上调骨髓细胞Bcl-2和Bcl-xL蛋白表达,降低骨髓细胞凋亡率,提高外周血象,以发挥补血作用。     

四种血虚小鼠模型制备方法的比较

目的筛选适宜的小鼠血虚模型的制造方法。方法采用环磷酰胺250 mg/kg腹腔注射;乙酰苯肼350 mg/kg皮下注射;环磷酰胺120 mg/kg 乙酰苯肼200 mg/kg腹腔注射及环磷酰胺160 mg/kg腹腔注射 乙酰苯肼60 mg/kg皮下注射四种方法制造小鼠血虚模型,取血测定小鼠外周血象、观察小鼠一般情况的变化。结果4种方法可造成不同程度的小鼠血虚状态,应用四物汤治疗后,环磷酰胺160 m l/kg腹腔注射 乙酰苯肼60 mg/kg皮下注射所造模型组小鼠血虚状态有显著改善。结论环磷酰胺160 mg/kg腹腔注射 乙酰苯肼60 mg/kg皮下注射所造模型小鼠最能反映中医血虚证的主要特征。     

复合血虚模型中环磷酰胺剂量的探索

目的:研究复合血虚模型中环磷酰胺剂量对血虚证模型及免疫系统的影响。方法:110只小鼠随机分为11组,即正常组、模型组、模型给药组,模型组及模型给药组小鼠分别于实验的第1、4天皮下注射乙酰苯肼生理盐水溶液,剂量分别为20、10mg/kg,第4、5、6、7天腹腔注射环磷酰胺生理盐水溶液,模型1组至5组的注射剂量分别为10 mg/kg、20 mg/kg、30 mg/kg、40 mg/kg、50 mg/kg。其中第4天先皮下注射乙酰苯肼生理盐水溶液,2 h后再腹腔注射环磷酰胺生理盐水溶液,整个模型建立过程共7天,造模的同时给药,各给药组均灌胃给予当归补血汤。结果:通过考察外周血常规、脏器指数、促红细胞生成素(EPO)水平等指标发现环磷酰胺剂量为20 mg/kg时为最佳模型,大剂量的环磷酰胺确实会产生免疫抑制作用,而小剂量环磷酰胺对免疫系统的损伤在给予补血药物后可以得到缓解。结论:本研究为血虚模型中环磷酰胺的用量提供了新的参考。     

复合血虚模型中环磷酰胺剂量的探索北大核心CSCD

目的:研究复合血虚模型中环磷酰胺剂量对血虚证模型及免疫系统的影响。方法:110只小鼠随机分为11组,即正常组、模型组、模型给药组,模型组及模型给药组小鼠分别于实验的第1、4天皮下注射乙酰苯肼生理盐水溶液,剂量分别为20、10mg/kg,第4、5、6、7天腹腔注射环磷酰胺生理盐水溶液,模型1组至5组的注射剂量分别为10 mg/kg、20 mg/kg、30 mg/kg、40 mg/kg、50 mg/kg。其中第4天先皮下注射乙酰苯肼生理盐水溶液,2 h后再腹腔注射环磷酰胺生理盐水溶液,整个模型建立过程共7天,造模的同时给药,各给药组均灌胃给予当归补血汤。结果:通过考察外周血常规、脏器指数、促红细胞生成素(EPO)水平等指标发现环磷酰胺剂量为20 mg/kg时为最佳模型,大剂量的环磷酰胺确实会产生免疫抑制作用,而小剂量环磷酰胺对免疫系统的损伤在给予补血药物后可以得到缓解。结论:本研究为血虚模型中环磷酰胺的用量提供了新的参考。     

赤芍总苷对HepA肝癌小鼠肿瘤细胞凋亡的影响

目的探讨赤芍总苷对HepA肝癌小鼠肿瘤生长及肿瘤细胞凋亡的影响及其机制。方法60只健康昆明小鼠,随机分5组,分别为模型组,环磷酰胺(100mg/kg)组,赤芍总苷(240、120mg/kg)组,环磷酰胺(100mg/kg) 赤芍总苷(240mg/kg)组。复制小鼠HepA肝癌皮下移植模型后,第2天ig给药,连续给药7d,第8天处死,取肿瘤组织,计算抑瘤率,流式细胞仪检测肿瘤细胞凋亡率和分析细胞周期,以及免疫组化法检测凋亡相关蛋白Bcl-2和Bax的表达。结果赤芍总苷高、低剂量明显抑制HepA肝癌小鼠肿瘤的生长;肿瘤细胞凋亡指数增加;抑制肿瘤细胞G0/G1期比例,向S期细胞转化,凋亡率增高;下调肿瘤细胞中Bcl-2蛋白的表达,同时明显提高肿瘤细胞中Bax蛋白的表达。结论赤芍总苷对HepA肝癌小鼠肿瘤生长有明显抑制作用,并诱导肿瘤细胞凋亡,其主要机制与调节Bcl-2和Bax蛋白表达有关。     

乙酰苯肼致血虚证模型小鼠的证候物质基础初探

目的研究乙酰苯肼引起的血虚证模型小鼠证候可能的物质基础。方法以雄性ICR小鼠为对象,采用乙酰苯肼170 mg/kg皮下注射,第1天和第4天各1次制作血虚证模型,并设立正常对照组。动态观察小鼠体重变化,显微镜下观察血液细胞与股骨骨髓细胞,取肾脏、肾上腺和骨髓分别抽提RNA,以实时荧光定量PCR技术检测相关基因表达、以ELISA方法检测血清皮质酮含量。结果与正常对照组比较,乙酰苯肼小鼠造模3天后体重显著下降(P<0.05),小鼠呈现虚弱征象,小鼠脾脏代偿性增大而胸腺却明显萎缩(P<0.01)。乙酰苯肼组小鼠血液红细胞形态异常、正常红细胞数量减少、白细胞代偿性增多;骨髓成熟的环状核细胞减少。与正常对照组比较,乙酰苯肼组小鼠骨髓IL-5和IL-6基因表达显著升高(P<0.05),而巨噬细胞集落刺激因子(M-CSF)、IL-1b和IL-7基因表达显著下降(P<0.05);肾脏促红细胞生成素(Epo)、粒细胞集落刺激因子(G-CSF)和M-CSF基因表达也显著升高(P<0.05,P<0.01),而粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)基因表达则被乙酰苯肼抑制(P<0.05);肾上腺Cyp21a1与Cyp11b1基因表达显著升高(P<0.05);小鼠血清皮质酮含量明显升高(P<0.01)。结论乙酰苯肼所复制的证候以血虚证为主,脾脏肿大、肾脏Epo基因代偿性高表达以及继发肾上腺皮质功能虚性亢奋是该证候物质与功能变化最突出特征。     

五子衍宗方对环磷酰胺致成年雄性小鼠睾丸生殖细胞凋亡的保护作用

目的:探讨五子衍宗方对环磷酰胺致成年雄性小鼠睾丸生殖细胞凋亡的保护作用。方法:随机将50只成年雄性Balb/C小鼠分为正常对照组、模型组以及五子衍宗方低(100 mg/kg)、中(200 mg/kg)、高(400 mg/kg)剂量组,每组10只。五子衍宗方3个剂量组每天分别灌胃相应剂量五子衍宗方,正常对照组和模型组灌胃等体积双蒸水,1次/d。正常对照组从第4天开始腹腔注射生理盐水,其余各组从第4天开始腹腔注射环磷酰胺200 mg/kg,每隔7 d注射1次,共4次,同时各组每天继续灌胃相应药物。第4次腹腔注射环磷酰胺后间隔12 h称量小鼠体质量,乙醚麻醉颈椎脱臼处死小鼠,迅速取出睾丸去除多余组织,称量睾丸质量,计算睾丸指数,HE染色观察睾丸组织形态变化,TUNEL检测睾丸生殖细胞凋亡,Western blot检测睾丸组织中凋亡相关蛋白Caspase-3、BAX、BCL-2表达。结果:与正常对照组比较,模型组小鼠体质量、睾丸质量、睾丸指数、睾丸内各级生殖细胞数量及睾丸组织内BCL-2蛋白表达水平显著降低,睾丸内凋亡阳性染色细胞显著增多,睾丸组织内BAX、Caspase-3蛋白表达水平显著升高;而五子衍宗方可显著升高小鼠体质量、睾丸质量、睾丸指数、睾丸内各级生殖细胞数量以及睾丸内BCL-2蛋白表达水平,明显减少睾丸内凋亡阳性染色细胞,降低睾丸内BAX和Caspase-3蛋白表达水平。结论:五子衍宗方能显著减少环磷酰胺致成年雄性小鼠睾丸生殖细胞凋亡,其作用机制可能与升高BCL-2蛋白表达水平、降低BAX、Caspase-3蛋白表达有关。     

调治天癸方对环磷酰胺致少弱精症模型大鼠生精细胞凋亡的影响

目的研究调治天癸方对环磷酰胺致少弱精症模型大鼠生精细胞凋亡的影响。方法采用环磷酰胺法造模,随机分为正常对照组,模型组(35 mg/kg),生精胶囊组(0.6 g/kg),调治天癸方高、中、低剂量组(33.8、16.9、8.5 g/kg),每组12只,连续灌胃给药2周。采用TUNEL法检测生精细胞凋亡,Western Blot法检测Bcl-2、Bax蛋白表达。结果与模型组比较,调治天癸方组、生精胶囊组生精细胞凋亡数显著减少(P0.01),Bax蛋白表达显著降低(P0.01),Bcl-2蛋白表达显著增高(P0.01)。结论调治天癸方可以有效减少少弱精症大鼠生精细胞的凋亡,其对生精细胞凋亡的干预作用可能与上调凋亡抑制蛋白Bcl-2表达、下调凋亡促进蛋白Bax表达有关。     

四物汤对血虚证小鼠骨髓细胞CD 34抗原表达的影响

目的：探讨四物汤对^60Coγ射线或环磷酰胺诱导的血虚证小鼠骨髓细胞CD34抗原分子表达的影响。方法：用^60Coγ射线全身照射小鼠升腹腔注射环磷酰胺造成小鼠血虚证模型，实验分正常组、模型组、小剂量组、中剂量组、大剂量组，荧光标记小鼠骨髓细胞并用流式细胞仪 测定CD34＋细胞在骨髓有核细胞中的比例，同时做小鼠骨髓细胞 落培养。结果与结论：四物汤可促进血虚小鼠骨髓中干祖细胞增生，增加CD34抗原分子的表达，为四物汤治疗血虚证提供了依据。     

地甘口服液对环磷酰胺所致小鼠脾组织凋亡及相关基因mRNA表达的影响

目的探讨地甘口服液对环磷酰胺损伤所致小鼠脾组织凋亡及凋亡相关基因 bc1-2 和 bax mRNA 表达的作用.方法建立环磷酰胺损伤的小鼠模型(小鼠用环磷酰胺 100mg/kg,腹腔注射 1 次/d,连续3d,造成模型),喂饲1 00%地甘口服液每次0.2mL/10g 小鼠,每日2次.第10天用原位末端标记的 TUNEL 技术检测脾组织细胞凋亡和原位杂交法检测凋亡相关基因bc1-2 和bax mRNA 的表达.结果地甘口服液组与对照组比较,脾脏的细胞凋亡率和bax mRNA 表达显著减少(P＜0.01),bc1-2 mRBA 的表达显著增强(P＜0.01).结论地甘口服液可能通过促进bc1-2 和降低bax mRNA 的表达,促进造血细胞的增生和提高机体免疫力.     

四物汤对综合放血法致小鼠血虚证造血功能的影响

目的:观察四物汤对综合放血法致小鼠血虚证造血功能的影响,为比较四物汤对不同血虚证模型补血作用提供实验依据。方法:每日按75g·kg^-1体重限食,隔日游泳20min及放血0.4mL共15d,建立小鼠血虚证模型。提前7d,四物汤小,中,大剂量组分别按每天5,10,20g·kg^-1给予四物汤至造模结束,通过血细胞计数仪及流式细胞仪等分析手段,检测外周血象、骨髓细胞周期、骨髓细胞凋亡和CD34⁺细胞数。结果:四物汤小,中,大剂量组可以使血虚证小鼠红细胞由第7天最低值4.6×10¹²·L^-1,分别显著升高到6.5,7.1,7.0×10¹²·L^-1;在第15天,使血虚证小鼠S期骨髓细胞数由11.53%,分别显著增加到14.34%,14.03%,13.58%。结论:四物汤可以在一定程度上逆转综合放血致小鼠的造血损伤。     

桃红四物汤对实验性大肠癌Bcl-2/Bax蛋白及Casepase-3mRNA表达的影响

目的:观察桃红四物汤对大肠癌凋亡相关基因Bcl-2、bax蛋白和Casepase-3 mRNA表达的影响。方法:建立BALB/C小鼠人大肠癌LS174T细胞大肠癌模型,随机选取48只荷瘤小鼠分为模型组,桃红四物汤组,5-Fu组,桃红四物汤+5-Fu组,每组12只小鼠。模型组灌服生理盐水。检测各组肿瘤体积、重量、免疫组化检测Bcl-2、bax和实时定量PCR检测Casepase-3 mRNA的表达情况。结果:桃红四物汤组,5-Fu组,桃红四物汤联合5-Fu组移植瘤质量均显著低于模型组(P<0.05),以桃红四物汤+5-Fu组较显著。桃红四物汤联合5-FU组凋亡相关基因Bcl-2、Casepase-3表达减弱(P<0.05)、Bax表达增强均较模型组显著(P<0.05)。结论:桃红四物汤对Bcl-2蛋白及Casepase-3 mRNA表达有一定的抑制作用,对Bax蛋白表达有促进作用,以桃红四物汤联合5-Fu为著。     

采用化学药物联合致小鼠血虚模型评价四物汤及其配伍组成的作用特点

目的:研究四物汤组方对乙酰苯肼及环磷酰胺致血L虚模型小鼠的影响,探讨其组方特点和作用机制.方法:用乙酰苯肼和环磷酰胺造小鼠血虚模型,分别采用全白动血细胞分析仪测定血虚小鼠外周血象,称重法测定肝脾指数,定磷法测定红细胞膜Na+-K+-ATP酶,Ca2+ -Mg2 -ATP酶活性,流式细胞仪检测骨髓细胞周期.结果:其中药味当归、白芍对模型小鼠的外周血象、肝脾指数、骨髓细胞周期均有较显著的恢复作用,熟地对红细胞膜Na+ -K+ -ATP酶活性的影响也较显著;含当归的药对对模型小鼠的肝脾指数、红细胞膜Na+ -K+ -ATP酶活性的影响则较显著;含白芍的药组和含当归的药组则分别对肝指数和红细胞膜Na+ -K+ -ATP酶活性有较显著影响;各给药组均能促进Go/G1期阻滞的骨髓细胞向S期转化.结论:四物汤及其组方药对化学损伤血虚模型小鼠均有不同程度的保护作用,作用途径各有特点,可见当归和白芍对血虚症状的改善有重要的作用,是四物汤发挥理血调经功效的重要贡献药味.     

强精煎对实验小鼠睾丸Bcl-2及Bax蛋白表达影响研究

目的:研究强精煎对实验小鼠睾丸Bcl-2、Bax蛋白表达及Bcl-2/Bax比值的影响。方法:80只成年健康雄性小鼠随机分成正常组、模型组、强精煎组和黄精赞育胶囊组各20只。除正常组外,其余3组采用环磷酰胺腹腔注射建立小鼠生精障碍模型,造模结束后第1天开始正常组和模型组灌胃给蒸馏水,其余两组分别给强精煎冲剂、黄精赞育胶囊混悬液,连续30天。结果:与模型组相比,正常组、强精煎组和黄精赞育胶囊组睾丸生殖细胞凋亡基因Bax蛋白表达率较低(P0.01)、Bcl-2蛋白表达率较高(P0.01)、细胞内Bcl-2/Bax比值较高(P0.01),正常组、强精煎组和黄精赞育胶囊组各组间比较睾丸生殖细胞中Bax、Bcl-2蛋白表达及Bcl-2/Bax比值相近(P0.05)。结论:强精煎治疗小鼠睾丸生精障碍的疗效与Bcl-2、Bax蛋白表达率及Bcl-2/Bax比值密切相关。     

左归丸对卵巢早衰小鼠性激素及Bcl-2/Bax表达的影响

目的:探讨左归丸对卵巢早衰小鼠性激素及Bcl-2/Bax表达的影响。方法:选取48只SPF级雌性小鼠,随机分为对照组、模型组、实验1组(左归丸高剂量组)、实验2组(左归丸低剂量组)。对照组每日腹腔注射生理盐水30ml/kg,其余三组注射环磷酰胺30 mg/kg,连续20d建立POF模型,干预30d。ELISA方法检测血清雌激素(E2)、黄体生成素(LH)、卵泡刺激素(FSH)、抗苗勒管激素(AMH)、基础抑制素B(INHB)、抗透明带抗体(AZpAb),Western blot检测卵巢组织Bcl-2、Bax蛋白。结果:模型组E_2明显低于对照组,FSH明显高于对照组,说明造模成功。与对照组比较,模型组E_2、AMH、INHB、Bcl-2、Bcl-2/Bax明显降低,LH和FSH、AZpAb、Bax明显增高(P0.01);与模型组比较,实验1组、2组E_2、AMH、INHB、Bcl-2、Bcl-2/Bax明显增高,LH和FSH、AZpAb、Bax明显降低(P0.01)。结论:左归丸能够改善卵巢早衰小鼠性激素水平,抑制透明带抗体产生,使Bcl-2蛋白上调、Bax蛋白下调,抑制卵巢颗粒细胞凋亡,提高卵巢储备功能,减少卵巢早衰。     

齐墩果酸对H22荷瘤小鼠肿瘤组织中细胞凋亡相关蛋白表达的影响

目的:通过研究齐墩果酸在H22荷瘤小鼠肿瘤组织中细胞凋亡相关蛋白的表达的影响,探讨其在肿瘤发生、发展过程中的可能作用及意义。方法:建立H22荷瘤小鼠实体瘤模型进行体内试验,将50只已接种H22细胞株的小鼠随机分为模型组,环磷酰胺40 mg·kg-1组,齐墩果酸低、中、高剂量组(1.25,2.50,5.00 mg·kg-1),连续灌胃给药10 d;处死小鼠,检测肝/体比及脾脏指数;采用免疫组化法检测瘤体内凋亡抑制基因生存素(survivin)及B细胞淋巴瘤/白血病-2(Bcl-2)的蛋白表达水平;利用原位末端标记法检测凋亡指数。结果:齐墩果酸可改善H22荷瘤小鼠的肝/体比和脾指数,齐墩果酸低、中、高剂量组对H22荷瘤小鼠肿瘤组织中survivin蛋白表达水平比模型组均显著降低(P0.01);齐墩果酸高、中剂量组对H22荷瘤小鼠肿瘤组织中Bcl-2蛋白表达水平与模型组比较显著降低(P0.01,P0.05);细胞经齐墩果酸处理后,survivin,Bcl-2表达下调,齐墩果酸各组细胞凋亡指数与模型组比较均显著升高,差异显著(P0.01)。结论:齐墩果酸可通过抑制H22荷瘤小鼠肿瘤细胞中survivin及Bcl-2蛋白的表达,提高凋亡率,诱导肿瘤细胞凋亡,还可改善荷瘤小鼠机体免疫力。survivin,Bcl-2异常表达与肿瘤的发生密切相关,通过共同调节凋亡而发挥抗肿瘤作用。     

灯盏花素对肾损害小鼠肾组织细胞凋亡及相关蛋白的影响

目的:观察灯盏花素对顺铂致小鼠肾损害肾组织细胞凋亡及相关蛋白的影响。方法:将昆明种小鼠随机分为对照组、模型组、灯盏花素25,50 mg.kg-1组。除对照组外,其余各组腹腔注射顺铂8 mg.kg-1制备小鼠肾损害模型,灯盏花素组分别灌胃给药,连续7 d。给药结束后收集小鼠尿液进行尿蛋白(Upr)/尿肌酐(Ucr)及N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶(NAG-U)测定。原位末端标记法(TUNEL)检测小鼠肾脏细胞凋亡状况,免疫组化法检测肾脏相关凋亡蛋白Bax和Bcl-2的表达。结果:模型组小鼠Upr/Ucr及NAG-U较对照组明显升高,肾组织的凋亡指数增加,肾组织细胞凋亡蛋白Bax及Bcl-2表达增强,Bax/Bcl-2比值升高(P<0.05,P<0.01),而2个灯盏花素实验组Upr/Ucr、NAG-U较模型组明显降低(P<0.05,P<0.01),其中灯盏花素50 mg.kg-1小鼠较模型组肾组织细胞凋亡指数、Bax表达、Bax/Bcl-2减少,Bcl-2的表达增强(P<0.05,P<0.01)。结论:Upr/Ucr与NAG-U可作为顺铂肾损害的评估指标。灯盏花素减轻顺铂肾损害的机制可能与增强凋亡相关蛋白Bcl-2的表达,降低Bax表达及Bax/Bcl-2的比值有关。     

四物汤对环磷酰胺所致血虚证小鼠造血细胞作用的研究

探讨四物汤治疗环磷酰胺所致小鼠血虚证的作用机理。腹腔注射环磷酰胺制成小鼠血虚证模型;测定小鼠外周血象;骨髓细胞集落形成;CD34^ 细胞在骨髓有核细胞中的比例;小鼠胸腺指数。结果表明四物汤具有明显促进骨髓造血和增强免疫的作用,并可升高血虚证小鼠的外周血象。四物汤增强免疫、促进造血可能是四物汤治疗小鼠血虚证的机理之一。     

4种不同方法制备四物汤的疗效比较

目的比较传统煎煮、煮散、机器煎煮、配方颗粒调配4种方法制备的四物汤汤剂对血虚小鼠的补血作用,探讨中药汤剂改革的方法。方法采用环磷酰胺160 mg/kg腹腔注射 乙酰苯肼60 mg/kg皮下注射造成小鼠的血虚状态,以小鼠红细胞、血红蛋白、红细胞压积为指标,观察用4种方法制备的高、中、低剂量的四物汤对此模型小鼠的作用。结果机器煎煮所制的四物汤疗效最为显著,其高、中、低剂量组均有显著疗效。4种方法制备的四物汤的小剂量组均有显著疗效,且四者间无显著性差异。结论4种方法中以机器煎煮法的疗效最为显著;但是,在临床常用量条件下,4种方法制备汤剂的疗效未呈现差别。     

四物汤对环磷酰胺致血虚证小鼠骨髓蛋白质组的影响

目的：研究四物汤对环磷酰胺（CTX）损伤致血虚证小鼠骨髓蛋白质组的影响,旨在分子水平上探讨四物汤促进骨髓造血的作用机制。方法：采用CTX 250 mg·kg^-1腹腔注射制成化学损伤型血虚证小鼠模型,利用蛋白质组学技术研究四物汤治疗后的差异蛋白质组。结果：研究发现CTX使小鼠骨髓中12个蛋白表达上调、3个蛋白表达下调,四物汤可使CTX造模后这些表达改变的蛋白有不同程度恢复。结论：四物汤可能通过影响与细胞凋亡、造血干祖细胞增殖分化有关的蛋白质而促进骨髓造血。