姜黄素抑制肾癌ACHN细胞增殖及促凋亡的实验研究

目的观察姜黄素对人肾癌ACHN细胞株增殖及细胞凋亡的影响,探讨姜黄素诱导ACHN细胞株凋亡的作用机制。方法不同浓度姜黄素作用人肾癌ACHN细胞24 h后,应用MTT比色法检测姜黄素对人肾癌ACHN细胞的增殖抑制率;流式细胞术检测姜黄素诱导细胞的凋亡率;RT-PCR检测姜黄素对ACHN细胞Bcl-2、Bax、NF-κBP65 mRNA表达的影响;Western blot方法检测其对细胞Bcl-2、Bax、NF-κBP65I、κB蛋白表达的影响。结果姜黄素对人肾癌ACHN细胞有明显的抑制作用,可引起细胞凋亡,并且存在剂量和时间依赖;不同浓度姜黄素作用细胞24 h后,Bcl-2、NF-κBP65 mRNA水平下降,Bax mRNA水平升高(P0.05),Bcl-2、NF-κBP65蛋白表达量下降,BaxI、κB蛋白表达量升高(P0.05)。结论姜黄素通过上调IκB,下调NF-κB活性,调控凋亡基因Bcl-2/Bax的表达,抑制人肾癌ACHN细胞的增殖,诱导人肾癌ACHN细胞的凋亡。     

淫羊藿苷对肝癌细胞株SMMC-7721增殖与凋亡的影响

目的:探讨淫羊藿苷对肝癌细胞株SMMC-7721的抑增殖和促凋亡作用及其机制。方法:以不同浓度(0,6.25,12.5,25,50,100,200,400,800μg/mL)的淫羊藿苷作用于SMMC-7721细胞株不同时间(24,48,72 h)后,用MTT法检测药物对SMMC-7721细胞增殖状态;以不同浓度淫羊藿苷作用SMMC-7721细胞48 h后,用流式细胞仪检测细胞周期及凋亡情况,用Western blot检测细胞PCNA,Bcl-2,Bax蛋白的表达。结果:与对照组(0μg/mL)比较,各浓度的淫羊藿苷均明显抑制SMMC-7721细胞的增殖,并呈明显的时间与浓度依赖性(均P<0.05);淫羊藿苷呈浓度依赖性诱导SMMC-7721细胞发生G0/G1期阻滞和凋亡,下调SMMC-7721细胞PCNA蛋白和Bcl-2蛋白,上调Bax蛋白的表达(均P<0.05)。结论:淫羊藿苷可抑制SMMC-7721细胞增殖并诱导其凋亡。     

金荞麦提取物调控DDIT4对肾癌细胞凋亡的影响

目的:探讨金荞麦提取物Fr4对肾癌细胞增殖和凋亡的影响及其作用机制。方法:采用不同浓度Fr4处理肾癌细胞786-O,MTT法检测细胞增殖,流式细胞术检测细胞凋亡,Western blot检测786-O细胞中Cyclin D1、P21、Bcl-2、Bax、DDIT4表达。建立过表达DDIT4细胞。在786-O细胞中转染si-DDIT4,并用400μg/ml Fr4处理,研究786-O细胞增殖、凋亡变化。结果:Fr4明显抑制786-O细胞活性(P0.05),并呈剂量和时间依赖性;不同浓度Fr4显著减少Cyclin D1蛋白表达量,提高P21蛋白水平(P0.05),并呈剂量依赖性。400μg/ml的Fr4明显增加细胞凋亡率和Bax、DDIT4蛋白表达量(P0.05),降低Bcl-2蛋白水平。过表达DDIT4显著抑制24 h、48 h、72 h的细胞活性及Cyclin D1、Bcl-2蛋白水平,增加细胞凋亡率、P21和Bax蛋白表达量(P0.05)。抑制DDIT4逆转了Fr4对786-O细胞增殖、Cyclin D1、Bcl-2蛋白表达的抑制作用,和对细胞凋亡、DDIT4、P21和Bax蛋白表达的促进作用。结论:金荞麦提取物Fr4通过调控DDIT4表达抑制肾癌细胞增殖,并诱导其凋亡。     

木脂素1对人胃癌细胞株SGC-7901体外抗肿瘤作用

目的研究木脂素1抑制人胃癌细胞株SGC-7901增殖的机理。方法使用倒置显微镜观察不同浓度的木脂素1对人胃癌细胞株SGC-7901细胞形态学变化的影响;采用四甲基偶氮唑盐比色法(MTT法)检测木脂素1在不同浓度范围内对人胃癌细胞株SGC-7901细胞存活率的影响,计算半数抑制浓度(IC50);通过流式细胞仪分析木脂素1对SGC-7901细胞凋亡以及细胞周期的影响;通过Western blot法分析木脂素1对SGC-7901细胞凋亡相关蛋白Caspase3、Bcl-2及Bax表达的影响。结果形态学结果显示,木脂素1对SGC-7901细胞有不同程度的杀伤作用,其作用随浓度的增加而增强;在不同浓度范围内(2.5~20μg/m L),木脂素1对SGC-7901细胞存活率表现出不同程度的抑制作用,且呈现出时间和浓度依赖关系(P0.05),其IC50为4.19μg/m L;木脂素1干预SGC-7901细胞48 h后,随着药物浓度增加,凋亡细胞比率、G2/M期细胞比率以及Caspase3和Bax的表达增高(P0.05),而G0/G1期细胞比率和Bcl-2的表达降低(P0.05)。结论木脂素1显著抑制SGC-7901细胞增殖并通过阻滞其于细胞周期的G2/M期而诱导细胞凋亡,其机理可能与活化该细胞中的Caspase3及Bax蛋白以及抑制Bcl-2蛋白表达有关。     

姜黄素通过PPAR-γ途径促进人肾癌细胞的调亡

目的观察姜黄素对人肾癌细胞株A498细胞增殖和凋亡的影响,并探讨PPAR-γ途径在其中的作用。方法姜黄素(10、50、100μmol/L)处理A498细胞12、24、48h。采用MTT法测定细胞活力,并计算肿瘤细胞抑制率,流式细胞术测定细胞凋亡。实时定量PCR和Western Blot分别检测Bcl-2、Bax及PPAR-γmRNA和蛋白的表达。观察PPAR-γ阻断剂GW9662对姜黄素作用的影响。结果姜黄素(10、50、100μmol/L)分别处理人肾癌细胞株A498细胞24、48、72h后,以浓度和时间依赖的方式抑制细胞增殖促进细胞凋亡,同时以浓度依赖的方式下调了A498细胞中Bcl-2的表达,增加了Bax和PPAR-γ的表达。GW9662部分地消除了姜黄素对A498细胞增殖和凋亡的影响。结论姜黄素抑制人肾癌细胞增殖促进其凋亡,其机制涉及到PPAR-γ途径。     

丹参酮ⅡA与人肝癌细胞HepG2体内外增殖和凋亡的相关性

目的:探讨丹参酮ⅡA对人肝癌细胞HepG2体内外增殖、凋亡相关研究。方法:采用不同浓度(0、1、2、4、8μg/m L)、不同时间(24、48、72 h)丹参酮ⅡA处理人肝癌HepG2细胞,采用MTT法检测人肝癌细胞HepG2增殖抑制率,采用流式细胞仪技术检测细胞凋亡情况,采用Western lot检测Bax、Bcl-2蛋白表达;建立裸鼠肝癌模型,测量给药1、6、12和21 d肿瘤体积变化。结果:丹参酮ⅡA作用24、48、72 h对HepG2细胞抑制率逐渐升高,差异有统计学意义(P0.05),且呈一定的药物剂量依赖性(P0.05)。采用Annexin V-FITC/PI双染法检测各浓度丹参酮ⅡA对HepG2细胞凋亡的影响,各剂量丹参酮ⅡA的细胞凋亡率明显高于对照组(P0.05),且随着丹参酮ⅡA浓度增加,细胞凋亡率明显升高(P0.05)。各丹参酮ⅡA药物组Bcl-2表达均低于对照组(P0.05),且随着丹参酮ⅡA药物浓度的升高,Bcl-2表达明显降低(P0.05);各丹参酮ⅡA药物组Bax表达均高于对照组(P0.05),且随着丹参酮ⅡA药物浓度的升高,Bax表达明显升高(P0.05)。丹参酮ⅡA低剂量组和丹参酮ⅡA高剂量组给药12、21 d肿瘤体积低于同期对照组,且丹参酮ⅡA高剂量组低于丹参酮ⅡA低剂量组,差异均有统计学意义(P0.05)。结论:丹参酮ⅡA可有效抑制肝癌HepG2细胞增殖,促进细胞凋亡,且其作用与丹参酮ⅡA药物浓度相关,丹参酮ⅡA可能通过调节凋亡相关基因Bcl-2、Bax表达可能是其促进细胞凋亡及抑制肿瘤体积增长。     

芦竹素对人前列腺癌细胞系细胞凋亡及bcl-2/bax表达的影响

目的:研究芦竹素对人前列腺癌细胞系LNCap细胞凋亡的影响及其作用机理。方法:取对数生长期的LNCap细胞,分别用不同浓度的芦竹素处理48 h后,用MTT细胞增殖法检测细胞活力,Hoechst染色观察细胞形态学变化,流式细胞仪检测细胞凋亡和周期,并用Western blot检测LNCap细胞中Bcl-2和casepase家族蛋白表达情况。结果:芦竹素能以剂量依赖性方式降低LNCap细胞的活力,浓度为20、40、80μg/m L的芦竹素作用LNCap细胞48 h后,细胞凋亡率分别增加至11.3%、25.2%、57.1%,明显高于对照组(0.5%);不同浓度的芦竹素处理LNCa P细胞48 h后,G0/G1期细胞的比例增加,而G2/M期和S期的比例减少;芦竹素处理组LNCap细胞Cleaved-caspase 3及Cleaved-caspase 9表达量增加,同时促凋亡蛋白Bax表达量增加,而抗凋亡蛋白Bcl-2表达量降低,且呈剂量依赖性。结论:芦竹素能抑制LNCap细胞增殖并诱导其凋亡,其作用机制与上调Cleaved-Csepase 3,Cleaved-Casepase 9和Bax表达、下调Bcl-2的表达有关。     

百里香醌调控Caspase-3/Bax/Bcl-2信号通路诱导人皮肤鳞状细胞癌增殖和凋亡的作用机制研究

目的:探讨百里香醌对人皮肤鳞状细胞癌A431细胞增殖、凋亡的影响及可能机制。方法:将A431细胞分为对照组,低、中、高浓度实验组,对照组采用DMEM培养,而低、中、高浓度实验组分别采用含1、15、30μg/ml百里香醌的DMEM培养。MTT法检A431细胞增殖;台盼蓝法观察A431细胞存活;划痕试验检测各组A431细胞迁移;免疫荧光法检测Bax和Bcl-2蛋白表达;Westernblot检测各组A431细胞中Bax、Bcl-2、Caspase-3、Cyto C和PARP蛋白表达。结果:百里香醌能有效抑制人皮肤鳞状细胞癌A431细胞增殖,且呈浓度及时间依赖性;台盼蓝法显示,百里香醌浓度增加使A431细胞死亡率上升,呈浓度依赖性;与对照组比较,低、中、高浓度实验组A431细胞迁移能力降低;与对照组比较,经百里香醌处理后A431细胞Bax表达增加,Bcl-2表达降低;Western blot检测结果显示,与对照组比较,不同浓度百里香醌处理后A431细胞Bax、cyto-C、caspase-3和PARP表达水平增加,而Bcl-2表达下降。结论:百里香醌具有抑制A431细胞增殖、侵袭以及诱导凋亡的作用,其机制可能是Bax/Bcl-2比值升高,促使释放至胞浆中Cyto C增加,进而激活Caspase-3以及PARP蛋白有关。     

苦参碱抑制人雄激素非依赖性前列腺癌细胞系PC-3细胞增殖和诱导凋亡机制的研究

目的 探讨苦参碱抑制雄激素非依赖性前列腺癌细胞株PC-3增殖、诱导细胞凋亡的可能机制,为临床雄激素非依赖性前列腺癌的治疗提供一定的实验基础和理论依据.方法 应用活性Caspase-3检测、Western blot印迹分析不同浓度苦参碱作用PC-3细胞后其Caspase-3表达的差异,并通过荧光免疫细胞化学染色、Western blot印迹分析研究不同浓度苦参碱对PC-3细胞Bax/Bcl-2表达的影响.结果 Caspase-3检测显示不同浓度苦参碱均可上调Caspase-3表达.随着苦参碱浓度的增加,Caspase-3表达的荧光强度升高,Caspase-3/β-actin积分密度值亦升高,呈现剂量依赖性关系(P<0.01).Bax、Bcl-2蛋白表达分析显示不同浓度苦参碱作用PC-3细胞后,Bax蛋白的表达增加,Bcl-2蛋白表达下降.Bax表达的荧光强度及Bax/β-actin积分密度值随着苦参碱浓度的增加而升高,呈现剂量依赖性关系(P<0.01);Bcl-2表达的荧光强度及Bcl-2/β-actin积分密度值随着苦参碱浓度的增加而下降,亦呈现剂量依赖性关系(P<0.01).结论 苦参碱抑制PC-3细胞增殖并诱导细胞凋亡可能涉及到了线粒体.细胞色素C/Caspase-9/Caspase-3途径.     

低频超声微泡增强紫杉醇诱导三阴性乳腺癌细胞自噬的作用及机制

目的 探讨低频超声微泡增强紫杉醇诱导三阴性乳腺癌细胞自噬的作用及机制。方法 将MDA-MB-468细胞分为对照组(不进行处理)、紫杉醇组(6μg/ml紫杉醇)、低频超声组(低频超声+6μg/ml紫杉醇)和低频超声微泡组(低频超声+6μg/ml紫杉醇+微泡),检测各组MDA-MB-468细胞增殖情况,凋亡情况,自噬情况,Bcl-2、Bax、Beclin1、LC3Ⅰ、LC3Ⅱ蛋白表达情况。结果 与0μg/ml相比,1、3、6、12、24μg/ml紫杉醇处理下MDA-MB-468细胞增殖抑制率均升高(P 0. 05)。与对照组相比,紫杉醇组MDA-MB-468细胞增殖抑制率、凋亡率、细胞中Bax、Beclin1、LC3Ⅱ蛋白表达水平升高(P 0. 05),细胞中绿色点状物明显增多,细胞中Bcl-2、LC3Ⅰ蛋白表达水平降低(P 0. 05);与紫杉醇组相比,低频超声组MDA-MB-468细胞增殖抑制率、凋亡率、细胞中Bax、Beclin1、LC3Ⅱ蛋白表达水平升高(P 0. 05),细胞中绿色点状物明显增多,细胞中Bcl-2、LC3Ⅰ蛋白表达水平降低(P 0. 05);与低频超声组相比,低频超声微泡组MDA-MB-468细胞增殖抑制率、凋亡率、细胞中Bax、Beclin1、LC3Ⅱ蛋白表达水平升高(P 0. 05),细胞中绿色点状物明显增多,Bcl-2、LC3Ⅰ蛋白表达水平降低(P 0. 05)。结论 低频超声微泡可通过上调Bax、Beclin1、LC3Ⅱ蛋白表达及下调Bcl-2、LC3Ⅰ蛋白表达增强紫杉醇诱导三阴性乳腺癌细胞的凋亡、自噬反应。     

日达仙诱导肾癌细胞株ACHN细胞凋亡的实验研究

目的：探讨日达仙诱导肾癌细胞株ACHN凋亡的抗肿瘤作用的机制.方法：以浓度50～400 mg/L日达仙作用肾癌ACHN细胞24～72 h后,用MTT比色法检测细胞生长活性,用单细胞凝胶电泳法和流式细胞仪分别检测ACHN细胞DNA损伤和凋亡的情况.结果：日达仙能显著抑制肾癌细胞株ACHN细胞的体外生长,呈时间与剂量依赖性;日达仙诱导肾癌细胞株ACHN凋亡.结论：日达仙通过抑制肾癌细胞株ACHN增殖、诱导细胞凋亡等机制,显著抑制肾癌细胞的体外生长.     

放射治疗对小鼠肾癌细胞凋亡和Bcl-2与Bax蛋白表达的影响

目的:观察放射治疗对BALB/c小鼠肾癌的抑制作用及对Bcl-2和Bax蛋白表达的影响.方法:建立BALB/c小鼠的肾癌细胞移植瘤放射治疗模型;HE染色测定肿瘤细胞死亡面积,采用免疫印迹法(western blot法)检测肿瘤组织的凋亡相关蛋白表达.结果:放疗组小鼠移植瘤生长速度较肿瘤对照组明显减慢.放疗组小鼠肿瘤组织中抗凋亡蛋白Bcl-2表达下调,促凋亡蛋白Bax表达上调.结论:经放射治疗后,小鼠肿瘤生长受到明显抑制,可能与放疗引发肿瘤细胞凋亡相关蛋白表达变化相关.     

柚苷对髓核间充质干细胞生物学性能的影响及其相关机制

目的:探讨柚苷对人退变腰椎间盘来源髓核间充质干细胞(human nucleus pulposus-derived mesenchymal stem cell,h NPMSC)生物学性能的影响及其可能机制。方法:收集腰椎间盘突出症患者的退变髓核组织,分离培养h NPMSC并进行体外扩增。通过细胞形态学观察、细胞免疫表型检测及三系分化进行间充质干细胞的鉴定。取P3代hNPMSC分为对照组(正常培养基培养)、柚苷组(以含20μg/mL柚苷的培养基培养)和LY294002组(用含20μg/mL柚苷及PI3K/Akt信号通路抑制剂LY294002的培养基培养),培养6d后通过流式细胞仪检测细胞凋亡率,TUNEL荧光检测TUNEL染色阳性细胞率,Western Blot检测凋亡相关蛋白Caspase-3、Bcl-2和Bax及PI3K/Akt信号通路相关蛋白p-Akt、Akt和p53的表达,RT-PCR检测Ⅱ型胶原及蛋白多糖的m RNA表达。结果:来自人退变腰椎间盘髓核的原代细胞贴壁生长,呈不规则多边形,传代后以梭形为主;高表达干细胞相关阳性表面抗原分子CD73、CD90及CD105,低表达CD45及CD34;茜素红染色、油红O染色及甲苯胺蓝染色证实经诱导后可向骨、脂肪及软骨细胞分化,符合间充质干细胞的表型。与对照组比较,柚苷组细胞凋亡率、TUNEL染色阳性细胞率、p53、Caspase-3和Bax蛋白表达显著性下降,p-Akt及抗凋亡蛋白Bcl-2表达显著性增加(P0.05);LY294002干预后可以逆转这种改变(P0.05)。与对照组比较,柚苷组hNPMSC中Ⅱ型胶原及蛋白多糖的m RNA表达显著性增加;LY294002组中Ⅱ型胶原及蛋白多糖的m RNA表达较柚苷组显著性减少(P0.05)。结论:柚苷可通过激活PI3K/Akt信号通路减少细胞凋亡,促进hNPMSC向髓核细胞分化。     

大蒜素对人结肠癌HT29细胞增殖影响及作用机制研究

目的:探讨大蒜素对体外培养结肠癌HT29细胞增殖的影响,并探讨其作用机制。方法:采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法测定不同浓度大蒜素对HT29细胞增殖抑制率;流式细胞术测定细胞周期变化及凋亡相关蛋白Bcl-2与Bax的表达。结果:MTT显示大蒜素能抑制人结肠癌HT29细胞的增殖,并具有时间-剂量依赖性;流式细胞术测定结果显示10μg/ml大蒜素可明显诱导HT29细胞凋亡,并将细胞周期阻滞在G2/M期;可降低癌基因蛋白Bcl表达,而促进Bax表达。结论:大蒜素对人结肠癌HT29细胞增殖具有抑制作用,可能与细胞周期阻滞和凋亡相关蛋白表达有关。     

华蟾素诱导人乳腺癌细胞株MCF-7细胞凋亡与Bax/Bcl-2的关系

目的:观察华蟾素在诱导人乳腺癌MCF-7细胞株凋亡的过程中Bax和Bcl-2蛋白表达的变化及意义。方法:在人乳腺癌细胞株MCF-7中分别加入不同终浓度的华蟾素,24h、48h及72h后检测指标。应用MTT比色法检测细胞增殖活力,倒置显微镜观察细胞形态学变化,TUNEL法检测细胞凋亡指数,Western blot法检测Bax/Bcl-2蛋白表达,共聚焦显微镜观察Bax蛋白分布。结果:华蟾素能显著抑制MCF-7细胞增殖;倒置显微镜下发现凋亡的MCF-7细胞固缩、核染色质凝聚;western blot发现华蟾素能上调MCF-7细胞Bax蛋白表达,但对Bcl-2蛋白表达无影响,正常MCF-7细胞内的Bax均匀分布于细胞质中,华蟾素处理后,Bax明显地聚集于线粒体,呈现线粒体的转位。结论:华蟾素诱导MCF-7细胞凋亡,并在该过程中导致的Bax蛋白表达上调并且向线粒体转位。     

虾青素对人源增生性瘢痕成纤维细胞的作用及机制研究

目的:探讨虾青素对人源增生性瘢痕成纤维细胞的作用以及机制研究。方法:体外培养人源增生性瘢痕成纤维细胞分别加入0、10、50、100μmol/L浓度的虾青素作用24h,MTT法检测细胞增殖抑制率;流式细胞仪检测各组细胞凋亡率;ELISA法检测细胞中的TIMP-1、MMP-1、COL-I及COL-Ⅲ的浓度;Western-blotting检测Bcl-2、α-SMA、TGF-β1及Bax等蛋白的表达。结果:不同浓度的虾青素使人源增生性瘢痕成纤维细胞活力降低而凋亡率增加;促凋亡蛋白Bax表达上调,抑制凋亡蛋白Bcl-2表达下调,同时抑制α-SMA、TGF-β1的表达及TIMP-1、MMP-1、COL-I、COL-Ⅲ合成。结论:虾青素能诱导人源增生性瘢痕成纤维细胞增殖、凋亡并抑制HSF细胞增殖、转化,减少胶原分泌,促进胶原酶解,继而有效改善增生性瘢痕的发生与发展。     

矢车菊素-3-葡萄糖苷诱导人胃癌细胞株SGC7901凋亡及其机制

目的 观察矢车菊素-3-葡萄糖苷(C3G)在体外诱导人胃癌SGC7901细胞凋亡的生物学效应,并初步探讨其分子机制.方法 分别采用不同浓度梯度的C3G处理SGC7901胃癌细胞,MTT比色法检测细胞生长率;激光共聚焦显微镜观察细胞形态改变;TUNEL法分析细胞凋亡率;Western blot法检测凋亡相关基因Bcl-2、Bax、Caspase-3、ICAD蛋白表达的情况.结果 C3G在体外能明显抑制人胃癌SGC7901细胞的生长增殖,且呈浓度、时间依赖性(P＜0.01).激光共聚焦显微镜下可见Hoechst33258荧光染色细胞呈凋亡特征性改变;TUNEL法检测实验组细胞凋亡率均明显高于阴性对照组(P＜0.01);C3G可下调Bcl-2蛋白表达,上调Bax蛋白表达,降低Bcl-2/Bax蛋白的比值,促使Caspase-3酶原蛋白活化,下调ICAD蛋白表达(P＜0.01).结论 C3G具有在体外抑制胃癌细胞增殖的作用,并能诱导其凋亡,其机制可能与Bcl-2/Bax降低导致Caspase-3活化、ICAD蛋白表达下降相关.     

红景天苷对缺氧肾小管上皮细胞Toll受体2、IL-6表达及其凋亡的影响

目的:观察红景天苷(salidroside Sal.)对氯化钴(cobaltous chloride,Co Cl2·6H2O)诱导的缺氧人肾小管上皮细胞(human kidney tubular epithelia cell,HKC)Toll样受体2(toll-like receptor 2,TLR-2)表达、白细胞介素-6(interleukin-6,IL-6)的分泌及细胞凋亡的影响。方法:HKC细胞置于六孔板培养,随机分为正常对照组、缺氧模型组、红景天苷(salidroside Sal.)干预组(25μg/ml、50μg/ml、100μg/ml)。其中缺氧模型采用300μmol/L氯化钴处理6 h得到,红景天苷干预组在此模型基础上再用不同浓度的红景天苷处理缺氧细胞24 h。RT-PCR和Western blot检测TLR-2的表达,ELISA检测各组细胞上清中IL-6含量,流式细胞仪检测缺氧HKC凋亡情况。结果:氯化钴诱导HKC TLR-2蛋白(P<0.05)及RNA表达上调(P<0.01)、IL-6分泌增加(P<0.01)及细胞凋亡增加(P<0.01)。25μg/ml和50μg/ml的红景天苷能降低缺氧HKC细胞IL-6的水平(P<0.01),50μg/ml红景天苷抑制作用强于25μg/ml(P<0.05)。与缺氧模型组比较,尽管100μg/ml红景天苷能降低缺氧HKC细胞IL-6的绝对值水平,但差异无统计学意义(P>0.05)。25μg/ml,50μg/ml和100μg/ml红景天苷均能抑制TLR-2蛋白表达(P<0.01),且100μg/ml较25μg/ml红景天苷抑制作用显著(P<0.05),但25μg/ml与50μg/ml、50μg/ml与100μg/ml红景天苷比较,它们抑制作用的强弱差异无统计学意义(P>0.05)。三种浓度的红景天苷也能抑制缺氧HKC TLR-2的RNA表达(P<0.01),50μg/ml及100μg/ml红景天苷抑制作用强于25μg/ml红景天苷(P<0.05),但50μg/ml与100μg/ml红景天苷比较,二者抑制作用差异无统计学意义(P>0.05)。50μg/ml和100μg/ml红景天苷能抑制缺氧HKC凋亡(P<0.01),但25μg/ml红景天苷未表现出抑制凋亡的作用(P>0.05),50μg/ml与100μg/ml红景天苷比较,两者抑制凋亡的作用差异无统计学意义(P>0.05)。结论:红景天苷对缺氧HKC的TLR-2蛋白及RNA表达、IL-6的分泌及细胞凋亡均有抑制作用,但其抑制效应呈现非剂量依赖性。     

红景天苷通过JAK2/STAT3通路抑制退变髓核细胞的炎症反应和凋亡

目的观察红景天苷对退变髓核细胞凋亡和炎症反应的影响,并探究其与JAK2/STAT3信号通路的关系。方法通过氧糖剥夺(oxygen glucose deprivation,OGD)培养建立退变髓核细胞模型,退变细胞分别予浓度为10μg/mL、30μg/mL和50μg/mL的红景天苷培养液。后续实验选择30μg/mL浓度进行,分为Control组、OGD组、红景天苷组、AG490(JAK2/STAT3信号通路抑制剂)组和红景天苷联合AG490干预组。RT-PCR法检测髓核细胞蛋白聚糖(Aggrecan)和Ⅱ型胶原(Col2a1)表达水平;Western blot检测红景天苷对髓核细胞p-JAK2和p-STAT3蛋白水平的影响;ELISA检测上清液中炎症相关因子TNF-α、IL-1β和IL-6的表达水平,流式细胞术检测髓核细胞的凋亡。结果与Control组相比,OGD组Aggrecan和Col2a1 mRNA表达明显降低,炎症相关因子TNF-α、IL-1β和IL-6水平升高,p-JAK2和p-STAT3的蛋白水平明显上调。与OGD组相比,红景天苷组显著抑制细胞凋亡以及炎症相关因子TNF-α、IL-1β和IL-6的释放,同时,我们发现,AG490组和红景天苷联合AG490干预组上述指标均明显降低,其中红景天苷联合AG490干预组各检测指标较AG490组略低。红景天苷联合AG490干预明显改善髓核细胞的凋亡和炎症反应,并抑制JAK2和STAT3的磷酸化水平。结论红景天苷可能通过抑制JAK2/STAT3信号通路的活化而减轻退变髓核细胞炎症因子的产生和细胞凋亡。     

环氧化酶-2抑制剂塞来昔布对膀胱癌T24细胞杀伤作用的研究

目的：体外观察塞来昔布对人膀胱癌T24细胞株的抑制作用,并探讨其可能的机制。方法i采用MTT法检测塞来昔布对T24细胞的生长抑制作用;采用Hoechst 33258染色观察细胞凋亡形态;采用Western印迹法检测塞来昔布作用前后T24细胞COX-2蛋白的表达变化;采用RT—PCR法检测塞来昔布作用前后T24细胞Bcl-2及Bax基因的表达变化。结果：塞来昔布（≥100μmol／L）作用24h及48h后能明显抑制T24细胞的生长并诱导凋亡;塞来昔布100μmol／L作用,24h及48h后,T24细胞COX-2蛋白表达量下降,Bcl-2基因表达亦下调,而Bax基因在塞来昔布作用24h后变化不明显,48h后表达上调。结论：塞来昔布能抑制T24细胞增殖并诱导其凋亡,可能与下调Bcl-2、上调Bax基因表达有关。