大黄虫丸对转化生长因子-β1诱导A549细胞上皮-间充质转化的影响

目的：基于“IPF患者存在肺络干血”假说,观察大黄虫丸含药血清对TGF-β1诱导后A549细胞上皮-间充质转化(EMT)及Smad3,Collagen Ⅲ表达的影响,探讨其防治特发性肺纤维化(IPF)的作用机制。方法：正常培养并取对数生长期A549细胞,TGF-β1对其诱导48 h,电子显微镜下观察A549细胞的形态学变化;选择吡非尼酮（PFD）为阳性对照药,RT-PCR法检测EMT相关基因及Smad3 mRNA的表达;Western Blottingting法检测Smad3,p-Smad3,Collagen Ⅲ蛋白表达。结果：成功获取发生EMT的A549细胞;以α-SMA mRNA表达情况判断EMT程度由高到低依次为:模型组(M),大黄虫丸含药血清大剂量组(D),西药组(P),大黄虫丸含药血清中剂量组(Z),大黄虫丸含药血清小剂量组(X),空白对照组(K);与M组比较,Z组,X组,P组中Collagen Ⅲ表达不同程度降低(P<0.05),且其在Z组与K组中表达差异无统计学意义(P>0.05);与M组及K组比较,各观察组Smad3表达差异无统计学意义(P>0.05),但对其基因及磷酸化,即Smad3 mRNA及p-Smad3的表达有影响,且与M组比较,Z组,X组,P组中均不同程度降低(P<0.05),D组中表达虽低于M组,但差异无统计学意义(P>0.05)。结论：大黄虫丸对TGF-β1诱导后A549细胞发生EMT程度与Smad3 mRNA及Collagen Ⅲ的表达有影响,推测大黄虫丸对IPF的保护机制可能与不同程度阻断或逆转了TGF-β1/Smad3介导的EMT有关。     

大黄䗪虫丸对TGF-β1诱导A549细胞Rho/ROCK信号通路表达的影响

目的:观察大黄?虫丸含药血清对转化生长因子-β1(TGF-β1)诱导后A549细胞RhoA/ROCK信号通路表达情况的影响,探讨其防治特发性肺纤维化(IPF)的作用机制.方法:正常培养并取对数生长期A549细胞,TGF-β1对其诱导48 h,电子显微镜下观察A549细胞的形态学变化;选择吡非尼酮作为阳性对照药,RT-P...     

补中益气汤含药血清对TGF-β介导的A549细胞中整合素β1蛋白表达的影响

目的:利用补中益气汤含药血清干预TGF-β介导的肺腺癌A549细胞,观察A549细胞中整合素β1的表达变化,探讨补中益气汤在肺癌侵袭和转移过程中的作用。方法:采用血清药理学方法制备含药血清,按照随机对照方法将40只SD大鼠随机分为4组,分别为补中益气汤高剂量含药血清组(11.34 g·kg-1)、补中益气汤中剂量含药血清组(5.67 g·kg-1)、补中益气汤低剂量含药血清组(2.84 g·kg-1)和空白血清组(10 m L·kg-1),每日给药一次,连续灌胃三天后提取大鼠血清,用于后续实验。将A549细胞分为空白血清组(10%大鼠空白血清)、TGF-β+空白血清组(10 ng·m L-1TGF-β+10%大鼠空白血清)、TGF-β+补中益气汤高剂量含药血清(10 ng·m L-1TGF-β+10%大鼠高剂量含药血清)、TGF-β+补中益气汤中剂量含药血清(10 ng·m L-1TGF-β+10%大鼠中剂量含药血清)、TGF-β+补中益气汤低剂量含药血清组(10 ng·m L-1TGF-β+10%大鼠低剂量含药血清)。MTT法检测补中益气汤含药血清对TGF-β介导的A549细胞的抑制率。细胞划痕实验检测补中益气汤含药血清对TGF-β介导的A549细胞迁移能力的影响。细胞免疫荧光技术、western blot方法检测整合素β1在蛋白水平上的表达。结果:与A549细胞空白血清组、TGF-β+空白血清组分别比较,补中益气汤高剂量、中剂量和低剂量含药血清可提高对TGF-β介导的A549细胞的抑制率(IR)(P0.01),分别具有抑制TGF-β介导的A549细胞的迁移作用(P0.01),且能减少整合素β1在蛋白水平上的表达(P0.01)。结论:补中益气汤含药血清能抑制TGF-β介导的A549细胞的生长及迁移,以及能降低整合素β1在蛋白水平上的表达。     

益气除痰方干预TGF-β信号途径逆转A549细胞上皮间质转化研究

目的:观察益气除痰方是否能通过干预TGF-β信号途径,逆转肺癌A549细胞上皮间质转化(EMT)。方法:通过暴露于TGF-β_1环境中,诱导肺腺癌细胞株A549发生EMT,并以益气除痰方含药血清进行干预,相差显微镜下观察各组细胞形态变化;划痕实验、Transwell实验检测各组细胞迁移及侵袭能力;Western-blot检测各组细胞EMT相关蛋白及TGF-β信号通路蛋白Smad2/3的表达。结果:镜下可见经TGF-β_1孵育的A549细胞呈现明显的间质细胞形态,益气除痰方含药血清作用24 h后细胞A549细胞出现凋亡且间质化程度较低;划痕实验结果显示:与空白血清组比较,TGF-β_1+空白血清组A549细胞迁移及侵袭能力显著升高,益气除痰方可降低TGF-β_1所升高的细胞迁移及侵袭能力;Western-blot检测显示TGF-β_1可以激活Smad2/3通路下调E-cadherin的表达,上调Vimentin的表达,而益气除痰方含药血清可抑制该过程。结论:益气除痰方可能通过干预TGF-β/Smad信号通路上调E-cadherin表达,下调Vimentin表达,从而逆转肺癌A549细胞上皮间质转化,抑制肿瘤细胞的侵袭迁移。     

补中益气汤含药血清干预TGF-β介导的A549细胞MMP-9表达影响的研究

目的:利用补中益气汤含药血清干预TGF-β介导的肺腺癌A549细胞,观察A549细胞中MMP-9的表达变化,探讨补中益气汤在肺癌EMT中侵袭和转移过程中的作用。方法:体外培养A549细胞,用TGF-β进行干预,MTT法检测补中益气汤含药血清对A549细胞的抑制率,免疫细胞化学方法、Western blot和实时荧光定量PCR等方法检测MMP-9在蛋白及基因水平上的表达。结果:TGF-β干预后,MMP-9的表达量上调(P<0.05),与TGF-β诱导组相比,补中益气汤高、中、低剂量含药血清组可提高对A549细胞的抑制率(IR)(P<0.01),且能减少MMP-9在mRNA和蛋白水平上的表达(P<0.05)。结论:MMP-9能作为肺癌EMT过程中有无侵袭转移的良好预测指标,且补中益气汤能够有效降低MMP-9在蛋白及基因水平上的表达,进而抑制A549细胞的侵袭转移,从而逆转EMT。     

六君子汤含药血清对TGF-β1介导的A549细胞MMP-9和整合素β1蛋白表达的影响

目的:观察六君子汤含药血清对TGF-β1介导的A549细胞MMP-9和整合素β1表达的影响,探讨六君子汤影响肺癌转移的可能机制。方法:制备六君子汤含药血清,体外培养A549细胞。实验分三组:空白血清组,空白血清+TGF-β1组,六君子汤最佳浓度含药血清+TGF-β1组。普通显微镜下观察TGF-β1对A549细胞的干预程度。细胞划痕实验检测六君子汤含药血清对TGF-β1介导的A549细胞迁移能力的影响。免疫细胞化学法和Western Blot技术检测MMP-9和整合素β1在蛋白表达水平上的变化。结果:TGF-β1能够明显诱导A549细胞发生上皮间质转化。与空白血清组比较,空白血清+TGF-β1组细胞迁移程度明显增加(P0.05),MMP-9和整合素β1的蛋白表达增加(P0.05);与空白血清+TGF-β1组比较,含药血清组细胞迁移程度下降(P0.05),MMP-9和整合素β1的蛋白表达下降(P0.05)。结论:(1)六君子汤含药血清能够减缓TGF-β1介导的A549细胞的迁移能力;(2)六君子汤含药血清能够降低TGF-β1介导的A549细胞MMP-9和整合素β1蛋白的表达。     

大黄虫丸对博来霉素致肺纤维化模型大鼠MMP-2和TGF-β1的影响

目的基于"肺系络病"理论,研究搜剔肺络法代表方大黄虫丸对博来霉素致肺纤维化模型大鼠胶原沉积的影响。方法选雄性SD大鼠60只,随机分为6组即空白组、模型组、醋酸泼尼松组、大黄虫丸小剂量组、大黄虫丸中剂量组、大黄虫丸大剂量组,每组10只。于造模28天后常规每日一次灌胃给药,给药30天后麻醉取肺组织,进行HE、Masson染色、免疫组化检测基质金属蛋白酶-2(MMP-2)的表达,ELISA检测血清转化生长因子β1(TGF-β1)的含量,观察并比较各指标的组间差异。结果在MMP-2表达方面,与模型组、醋酸泼尼松组相比,大黄虫丸各剂量组表达明显减弱(P0.05),并与胶原沉积的高低相一致。在血清TGF-β1含量方面,模型组及各药物干预组与空白组比较无明显差异(P0.05);本研究说明大黄虫丸对肺纤维化模型大鼠具有一定的治疗作用,并优于西药激素的治疗效果,其治疗作用是通过对MMP-2的表达抑制实现的,其并不能抑制肺组织TGF-β1的产生。结论大黄虫丸可能通过抑制MMP-2的表达发挥抗纤维化的作用。     

补中益气汤含药血清对TGF-β1介导的A549细胞中Twistl表达的影响

目的:观察补中益气汤含药血清对转化生长因子-β1(transforming growth factor-β1,TGF-β1)介导的人肺腺癌A549细胞上皮间质转化过程中Twistl表达的影响。方法:制备最佳浓度补中益气汤最佳浓度含药血清作用于TGF-β1诱导的A549细胞,实验分组为空白血清组、空白血清+TGF-β1组、以及补中益气汤最佳浓度补中益气汤含药血清+TGF-β1组。采用免疫组化、western-blot和realtime PCR法分别检测Twistl在蛋白和基因水平表达的变化。结果:最佳浓度的补中益气汤含药血清能使上皮间质化的A549细胞中Twistl蛋白表达下降,mRNA表达水平降低。结论:补中益气汤含药血清能抑制TGF-β1介导的A549细胞上皮间质化过程中Twistl表达。     

补中益气汤含药血清对TGF-β1介导的A549细胞中拓扑异构酶Ⅱα表达的影响

目的:观察补中益气汤含药血清对转化生长因子-β1(transforming growth factor-β1,TGF-β1)介导的人肺腺癌A549细胞上皮间质转化过程中耐药标志物TopoⅡα表达的影响。方法:制备最佳浓度补中益气汤含药血清作用于TGF-β1诱导的A549细胞,实验分组为空白血清组、最佳浓度补中益气汤含药血清+TGF-β1组、以及空白血清+TGF-β1组。采用免疫组化、western-blot和realtime PCR法分别检测TopoⅡα在蛋白和基因水平表达的变化。结果:最佳浓度的补中益气汤含药血清能使上皮间质化的A549细胞中TopoⅡα蛋白表达增加,mRNA表达水平升高。结论:补中益气汤含药血清能增加TGF-β1介导的A549细胞上皮间质化过程中TopoⅡα表达。     

大黄(庶虫)虫丸对基因转染慢性粒细胞白血病K562细胞趋化因子受体4表达的影响

目的 探讨大黄(庶虫)虫丸治疗慢性粒细胞白血病的可能作用机理.方法 将CXCR4基因定向克隆到含有双启动子的真核表达载体pBudCE4.1,经转染入K562细胞,筛选获得能稳定高表达人CXCR4蛋白的K562/CXCR4细胞.16只裸鼠随机分为空白组和大黄(庶虫)虫丸大、中、小剂量组,每组4只.大黄(庶虫)虫丸大、中、小剂量组分别给予大黄(庶虫)虫丸270、135、70 mg/ml灌胃,每次3ml,空白组给予生理盐水3 ml灌胃,均每天1次,连续给药3天,第3天每隔2h给药1次,连续给药3次,末次给药1h后,心脏采血,分离血清,制备大黄(庶虫)虫丸含药血清.应用MTT法检测不同浓度大黄(庶虫)虫丸含药血清对K562/CXCR4细胞增殖的影响,TUNEL法检测其对K562/CXCR4细胞凋亡的影响,Western blotting法检测各组细胞CXCR4表达的变化.结果 与空白组比较,大黄(庶虫)虫丸大、中、小剂量组细胞在24、48、72、96h时吸光度A490均明显降低(P＜0.01);大黄(庶虫)虫丸大、中、小剂量组作用时间越长、药物浓度越高,细胞的抑制率越高.空白组细胞凋亡率为0.28％,大黄(庶虫)虫丸大、中、小剂量组细胞凋亡率分别为60.79％、28.91％和10.14％.大黄(庶虫)虫丸大、中、小剂量组细胞中CXCR4表达较空白组明显降低,并且随剂量增大CXCR4表达降低.结论 大黄(庶虫)虫丸可能通过抑制K562/CXCR4细胞增殖,诱导其凋亡,并影响CXCR4的表达,进而干预慢性粒细胞白血病的发生发展过程.     

补肾益肺消癥方对肺纤维化上皮间质转化中瘦素相关因子的影响

目的:明确肺纤维化上皮-间质转化(EMT)对瘦素相关因子的影响,对瘦素加速EMT的分子机制进行初探,并观察补肾益肺消癥方对EMT过程中瘦素相关因子的作用.方法:将A549细胞根据干预手段不同分为正常组、模型组[转化生长因子-β1(TGF-β1)]、中药组(TGF-β1+补肾益肺消癥方)、尼达尼布组(TGF-β1+尼达尼...     

大黄虫丸对鸡胚尿囊膜血管新生的影响

目的:观察大黄虫丸对鸡胚绒毛尿囊膜(CAM)血管新生的影响。方法:采用血清药理学方法制备含药血清,观察含药血清对培养5～7 d鸡胚CAM血管生成的影响,并与生理盐水及正常血清组对照。结果:大黄虫丸含药血清可抑制CAM血管的生成,与生理盐水组比较,大黄虫丸含药血清组的血管指数明显降低(P<0.01)。结论:大黄虫丸具有抑制CAM血管新生的作用。     

大黄虫丸含药血清对体外人肺腺癌PAa细胞株的影响

目的:实验通过大黄虫丸含药血清干预体外人肺腺癌PAa细胞株研究其抗肿瘤机制,进而探讨活血化瘀法在肿瘤治疗中的疗效和价值。方法:采用血清药理学方法以不同浓度的大黄虫丸含药血清与人肺腺癌PAa细胞株共同孵育,于不同时间观察,并与空白血清作对照。研究大黄虫丸含药血清对体外人肺腺癌PAa细胞株的细胞毒作用、生长抑制作用及对细胞周期的影响。结果:5%～20%各组含药血清OD值与相同作用时间10%牛血清、相同浓度的正常鼠血清OD值比较有明显差异(P<0.05～0.01),并随着血药浓度的提高OD值逐渐减低;药血清对人肺腺癌PAa细胞株增殖有明显抑制作用,并随药血清浓度提高、作用时间延长抑制作用增强;其诱导凋亡作用随药血清浓度的增加及作用时间的延长而增强。结论:大黄虫丸含药血清对体外人肺腺癌PAa细胞株有明显抑制作用,为大黄虫丸抗肿瘤提供了科学依据。     

芪连扶正胶囊对TGF-β介导EMT作用的影响

目的：观察芪连扶正胶囊含药血清对TGF-β及EMT相关分子在肺癌A549细胞中表达的影响,探讨相关机制。方法：体外培养肺癌A549细胞,制备芪连扶正胶囊含药血清,分组干预,采用RT-PCR检测TGF-β1mRNA表达,IC检测E-cad与N-cad表达。结果：对照组、芪连扶正低剂量、中剂量、高剂量组、化疗组及联合组的TGF-β1 mRNA相对表达量依次为（31.11±1.58）%、（29.53±1.50）%、（27.28±1.75）%、（25.23±1.38）%、（23.03±1.59）%、（20.72±1.38）%;各组E-cad、N-cad均有不同程度阳性表达,除芪连扶正胶囊低剂量组外,各药组E-cad阳性率均高于对照组、N-cad则相反(P<0.05或P<0.01);与化疗组相比,联合组及芪连扶正胶囊各组亦有统计学意义(P<0.05或P<0.01)。结论：芪连扶正胶囊可通过逆转TGF-β介导的EMT作用防止肿瘤转移。     

大黄■虫丸含药血清调控大鼠原代肝星状细胞BAMBI表达的研究

目的:研究大黄■虫丸含药血清对LPS诱导大鼠肝星状细胞(HSC)骨成形蛋白-激活素膜结合阻断因子(BAMBI)表达的影响及其作用机制。方法:体外培养并鉴定Wistar大鼠原代HSC,提取并制备大黄■虫丸含药血清,分别予空白对照血清、大黄■虫丸中药含药血清培养细胞,LPS刺激后,应用Western Blot法和免疫组化检测HSC中TLR4、MyD88、BAMBI蛋白变化;EMSA检测NF-κB结合蛋白的活性;结果:Western Blot法和免疫组化结果:与空白对照组比较,LPS处理组TLR4、MYD88表达升高,BAMBI表达降低。与LPS处理组比较,含药血清和LPS共处理组TLR4、MYD88降低,BAMBI表达升高。EMSA结果显示,LPS处理组NF-κB结合蛋白的活性增强,LPS与含药血清共处理组NF-κB结合蛋白的活性降低。结论:大黄■虫丸含药血清可通过抑制LPS诱导的HSCs中TLR4-MYD88的表达,进而减少NF-κB活化,促进TGF-β假受体BAMBI的表达,这可能是发挥其抗纤维化作用的机制之一。     

虎杖苷对TGF-β1诱导的人类肺泡上皮A549细胞EMT的影响

目的探讨虎杖苷对转化生长因子-β1(transforming growth factor-β1,TGF-β1)诱导的人类肺泡上皮A549细胞生长及上皮-间质转化(epithelial-mesenchymal transition,EMT)过程的作用机制。方法体外培养A549细胞,随机分成5组:空白组、对照组、低剂量组、中剂量组、高剂量组,分别加入普通培养液、含5ng/mL TGF-β1的培养液、含浓度为50μmol/mL的虎杖苷加TGF-β1的培养液、含浓度为100μmol/mL的虎杖苷加TGF-β1的培养液、含浓度为150μmol/mL的虎杖苷加TGF-β1的培养液进行干预,观察并记录不同时间段细胞形态变化;MTT法检测虎杖苷最佳药物浓度;蛋白质印迹法(Western blot)、实时PCR(Real-time PCR)检测上皮标志物E-cad、间质标志物Vimentin蛋白及mRNA表达水平。结果倒置相差显微镜观察到虎杖苷和TGF-β1干预后A549细胞由原来的鹅卵石状上皮形态转变成梭形,且细胞间隙变大,细胞间的连接变得松散,对照组较为明显,低、中、高剂量组比对照组细胞形态稍饱满;48h中剂量组虎杖苷对TGF-β1诱导的A549细胞EMT抑制作用最明显。在虎杖苷和TGF-β1作用下,E-cad蛋白及mRNA表达总体呈下调趋势(P0.05),与对照组比较,各药物组E-cad蛋白及mRNA表达下调幅度较小,且48h比24h明显。而Vimentin蛋白及mRNA表达总体呈上调趋势,与对照组比较,各药物组Vimentin蛋白及mRNA表达上调的幅度较小,且48h比24h明显,差异有统计学意义(P0.05)。结论虎杖苷能抑制TGF-β1诱导的A549细胞EMT过程,并存在时间和剂量依赖性,具有抑制肺纤维化的作用。     

大黄虫丸经旁分泌途径对早期肝纤维化的干预作用

目的 观察大黄(庶虫)虫丸经旁分泌途径对大鼠肝星状细胞增殖及其表达TGF-β_1 基因的影响. 方法采用Nycodenz 分离液非连续密度梯度离心法同步分离急性CCl_4 损伤模型大鼠和正常大鼠肝的枯否细胞(KC)和星状细胞(HSC).在制备正常鼠血清和大黄(庶虫)虫丸药物血清的基础上,将它们分别加入KC 培养板内作用48 h 后制备成正常鼠KC 条件培养液(NKCCM)和损伤鼠KC 条件培养液(KCCM).将NKCCM 和KCCM 作用于活化的HSC 24 h 后,采用MTT 法和3H-TdR 掺入法检测HSC 增殖的变化;采用半定量RT-PCR 法扩增TGF-β_1 mRNA 以检测HSC 表达TGF-β_1 基因的情况. 结果旁分泌组各组的HSC 增殖幅度及TGF-β_1 基因的相对表达量较正常对照组NKCCM 组均明显增加(P<0.05或0.01).同时旁分泌组中,含药血清作用的5%,10%和20% KCCM 组较无药物血清作用的0% KCCM 组HSC 的增殖能力及TGF-β_1 基因的相对表达量则下降,且随药物浓度的升高逐渐降低,其组间差别有统计学意义(P<0.05或P<0.01).结论 大黄(庶虫)虫丸可明显抑制经旁分泌途径活化的大鼠HSC 的增殖及TGF-β_1 基因的表达,且其抗肝纤维化效应与药物剂量间存在一定的依赖关系.     

大黄虫丸对肝纤维化大鼠内毒素血症的影响

目的内毒素血症影响肝纤维化的进展,为明确大黄虫丸是否对肝纤维化大鼠内毒素血症有影响。方法用四氯化碳花生油混合液注射大鼠,建立肝纤维化动物模型,以正常组和模型组作对照,用大黄虫丸大剂量、中剂量和小剂量灌胃作治疗组,检测大鼠血清谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)、白蛋白(ALB)、转化生长因子β1(TGF-β1)和脂多糖(LPS)。结果大黄虫丸可明显减轻大鼠肝纤维化,以小剂量组减轻最为明显。模型组较正常组大鼠血清ALT、AST、TGF-β和LPS明显升高,ALB明显降低(P0.001),而不同剂量组均能降低血清ALT、AST、TGF-β1和LPS水平,升高ALB水平,较对照组有明显差异(治疗组各指标与对照组相比,P0.001),其中以小剂量组效果最为明显。结论大黄虫丸可抑制肝纤维化大鼠内毒素血症,这可能是其抗纤维化机制之一。     

大黄(*虫)虫丸对大鼠肝星状细胞表达TGF-β1的影响

目的:探讨大黄(*虫)虫丸对大鼠肝星状细胞表达转化生长因子β1(TGF-β1)的影响.方法:用CCl4复合因素致大鼠肝纤维化模型,同时分别给予3种剂量大黄(*虫)虫丸治疗,免疫组化方法观察TGF-β1、α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)的合成表达及纤维化程度分级.结果:经给予大黄(*虫)虫丸干预治疗常规剂量组大鼠TGF-β1、α-SMA表达与模型组比较差异无显著性(P＞0.05),但双倍剂量组和三倍剂量组TGF-β1、α-SMA在汇管区及不连续纤维间隔的表达明显减弱(P＜0.05,P＜0.01).结论:大黄(*虫)虫丸较大剂量能抑制肝星状细胞增殖和分泌TGF-β1,减少胶原生成,从而减弱肝星状细胞的自分泌放大效应,这可能是大黄(*虫)虫丸抗肝纤维化作用的主要机制之一.     

大黄虫丸对大鼠肝星状细胞表达TGF-β1的影响

目的：探讨大黄Zhe虫丸对大鼠肝星状细胞表达转化生长因子β1(TGF-β1)的影响。方法：用CCl4复合因素致大鼠肝纤维化模型,同时分别给予3种剂量大黄Zhe虫丸治疗,免疫组化方法观察TGF-β1、α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)的合成表达及纤维化程度分级。结果：经给予大黄Zhe虫丸干预治疗常规剂量组大鼠TGF-β1、α-SMA表达与模型组比较差异无显著性(P>0.05),但双倍剂量组和三倍剂量组TGF-β1、α-SMA在汇管区及不连续纤维间隔的表达明显减弱(P相似文献