非小细胞肺癌患者外周血外泌体中差异表达的微小RNAs研究

背景目前,临床上尚缺乏早期、有效诊断非小细胞肺癌(NSCLC)的指标,来源于癌组织的外泌体及其内部物质因可反映亲本细胞性质而有望成为早期诊断肿瘤的生物学标志物。目的通过高通量测序技术筛选NSCLC患者外周血外泌体中差异表达的微小RNAs (miRNAs)。方法收集2018年1月—2019年1月于深圳市人民医院就诊的4例NSCLC患者的外周血样品,其中肺腺癌(LUAD) 2例、肺鳞状细胞癌(LUSC) 2例;另收集同期4例健康志愿者的外周血样品作为对照。采用HiSeq 2500高通量测序仪进行miRNAs测序,采用DESeq2软件筛选差异表达的miRNAs;在癌症基因组图谱(TCCGA)中选取并比较39对LUAD组织及其配对癌旁正常组织、45对LUSC组织及其配对癌旁正常组织miRNA-9-3p测序结果。结果 (1)高通量测序结果显示,4例NSCLC患者外周血外泌体中平均检测到776种miRNAs,4例健康志愿者外周血外泌体中平均检测到238种miRNAs。(2) LUAD与LUSC患者外周血外泌体中差异表达最显著的10种miRNAs中有6种是重合的,分别为miRNA-1228-5p、miRNA-129-5p、miRNA-760、miRNA-885-3p、miRNA-9-3p、miRNA-95-3p。(3) LUSC-1、LUSC-2、LUAD-1及LUAD-2外周血外泌体中miRNA-9-3p表达量分别为71.51、15.61、13.99、16.11转录本数,4例健康志愿者外周血外泌体中miRNA-9-3p表达量均为0。TCCGA中LUAD组织和LUSC组织miRNA-9-3p表达量均高于其配对癌旁正常组织(P0.01)。结论通过高通量测序技术发现miRNA-1228-5p、miRNA-129-5p、miRNA-760、miRNA-885-3p、miRNA-9-3p、miRNA-95-3p可能是NSCLC患者潜在的特异性miRNAs,其中miRNA-9-3p主要来源于NSCLC患者癌组织,这为后续通过外周血外泌体miRNAs测序而实现NSCLC的早期、无创诊断奠定了研究基础。     

冠心病患者血清外泌体微小核糖核酸-141-3p对内皮细胞损伤的影响研究

目的:检测冠状动脉粥样硬化性心脏病患者血清外泌体中微小核糖核酸-141-3p(miR-141-3p)的表达变化,并分析miR-141-3p对人血管内皮细胞损伤的影响.方法:收集冠状动脉粥样硬化性心脏病患者血清(n=8)和健康人对照(n=8),用外泌体提取试剂盒提取血清外泌体RNA,使用qRT-PCR的方法检测血清外泌体...     

非小细胞肺癌组织中外泌体差异蛋白表达及临床意义

目的分析非小细胞肺癌(NSCLC)患者血清外泌体差异蛋白表达在临床诊断中的意义。 方法选择2017年1月至2018年1月新疆医科大学附属肿瘤医院肺内一科收治的NSCLC患者85例为NSCLC组,同期医院健康体检志愿者50例为对照组,利用蛋白组学技术筛选出两组患者血清外泌体中表达差异性最大的蛋白,采用Western blot与酶联免疫吸附法检测其在NSCLC患者中的表达水平,分析在诊断NSCLC中的应用价值。 结果NSCLC组患者血清外泌体总蛋白质平均浓度显著高于对照组(t＝18.723,P＝0.000);两组血清外泌体中TMEM88蛋白表达量差异显著,Gel-Pro软件定量分析血清外泌体TMEM88蛋白条带积分光密度值(IOD),提示NSCLC患者血清外泌体中TMEM88蛋白质表达水平显著高于对照组(t＝13.316,P＝0.000); NSCLC患者在肿瘤Ⅲ~Ⅳ期、有淋巴结转移及有血管癌栓中血清外泌体来源TMEM88蛋白表达升高(t＝7.376、3.958、4.304,P＝0.000);血清来源外泌体TMEM88蛋白表达超过589.41时,诊断NSCLC的AUC＝0.787,灵敏度及特异度分别为74.1%和87.1%,约登指数为0.612。 结论NSCLC患者血清外泌体来源TMEM88蛋白表达量异常升高,表达量与患者肿瘤分期、淋巴转移、脉管癌栓及肿瘤负荷量有关,在NSCLC诊断中有临床意义。     

结直肠癌患者血清外泌体lnc-KIAA1586-2的表达及其临床意义

目的 探讨血清外泌体来源lnc-KIAA1586-2在结直肠癌(colorectal cancer, CRC)患者中的表达水平及其临床意义。方法收集2019年1月至2020年12月临床明确诊断的110例CRC患者及同期100名健康体检者血清标本,同时收集所有患者的临床资料。qRT-PCR法检测血清外泌体中lnc-KIAA1586-2的表达水平,电化学发光法检测血清CEA与CA19-9的表达水平。采用ROC曲线评价不同指标的诊断效能,并分析其与患者临床病理特征的关系。采用Cox比例风险模型进行多变量回归分析。结果 CRC患者血清外泌体中lnc-KIAA1586-2的相对表达水平(2.96±0.13)显著高于健康对照组(1.56±0.11)(t=9.53,P<0.001),患者术后血清外泌体lnc-KIAA1586-2相对表达水平显著下降。ROC曲线分析结果表明,血清外泌体lnc-KIAA1586-2诊断CRC的AUC为0.832,显著优于传统肿瘤标志物CEA、CA19-9的诊断效能。单因素分析发现血清外泌体lnc-KIAA1586-2相对表达量与肿瘤长径(χ²...     

利用GEO数据库分析肝细胞癌组织中着丝粒蛋白F基因的表达及其与预后的相关性

目的探讨着丝粒蛋白F(CENPF)基因在肝细胞癌(HCC)患者组织中的表达情况及与临床特征和预后的相关性。方法利用在线工具Oncomine分析CENPF在HCC与正常肝组织的表达情况,从美国国立生物技术信息中心的GEO数据库下载相关芯片数据(GSE14520),收集215例HCC组织的基因表达谱及相关临床数据,将其分为CENPF低表达组(n=107)和CENPF高表达组(n=108)。对样本中的CENPF基因表达数据及其对应的临床信息进行分析。计量资料组间比较采用t检验;计数资料组间比较采用χ~2检验;生存分析采用log-rank(Mantel-Cox)检验;生存资料单因素及多因素分析采用Cox比例风险模型。结果数据集证实HCC组织中CENPF表达水平明显高于正常肝组织(t=12.217,P0.001)。CENPF基因表达水平与AFP水平、肿瘤大小、TNM分期、转移风险有关系(χ~2值分别为6.463、4.338、7.951、17.331,P值均0.05)。生存分析显示CENPF高表达患者预后明显差于CENPF低表达组(风险比=1.92,95%可信区间:1.24~2.96,P=0.005)。Cox单因素分析显示,HCC患者预后与AFP水平、肿瘤直径、合并肝硬化、肿瘤分期、转移风险及CENPF表达相关(P值均0.05);Cox多因素分析显示,合并肝硬化、肿瘤分期及CENPF高表达是HCC患者预后的独立危险因素(P值均0.05)。结论 CENPF基因高表达可能与HCC进展相关,可作为HCC患者的潜在预后生物标志物。     

叉头转录因子A2、J2在肝细胞癌组织中的表达及意义

目的检测肝细胞癌(HCC)组织中叉头(FOX)转录因子A2(FOXA2)与FOXJ2的表达水平,探讨FOXA2、FOXJ2与HCC的相关性。方法选取2014年1月—2019年7月于河南中医药大学第一附属医院病理学检查明确为HCC患者54例,收集临床资料和病理组织。采用免疫组化S-P法检测HCC组织中FOXA2与FOXJ2的蛋白水平表达,分析其与HCC相关临床病理特征及患者预后的关系。计数资料比较采用χ~2检验与校正χ~2检验,FOXJ2与FOXA2表达相关性采用Spearman相关分析法;采用KaplanMerier法进行生存期分析;采用Image-Pro Plus进行FOXA2、FOXJ2表达的半定量分析;采用Wilcoxon秩和检验比较组间差异。结果 HCC组织中FOXA2和FOXJ2蛋白表达阳性率分别为70.37%(38/54)和75.92%(41/54); FOXA2和FOXJ2表达水平间呈显著正相关(rs=0.648,P 0.001)。FOXA2阴性组与阳性组相比,肿瘤直径、分化程度、肿瘤个数、AFP水平差异均有统计学意义(χ~2值分别为5.440、4.113、4.352、3.865,P值分别为0.020、0.043、0.037、0.049); FOXJ2阴性组与阳性组比较,分化程度差异有统计学意义(χ~2=9.267,P=0.002)。FOXA2、FOXJ2阳性表达组HCC患者的累积生存率均显著高于FOXA2、FOXJ2阴性表达组HCC患者(P值均0.01)。结论 FOXA2与FOXJ2的表达水平可能与HCC的发生发展及预后相关,二者在HCC的发生发展中起协同作用。     

不同AFP水平下血清IL-1与肝癌根治术后早期复发和预后的关系

目的研究IL-17在不同AFP水平下的HBV相关肝细胞癌(HCC)中的表达情况以及其与HCC根治术后复发和预后的关系。方法收集新疆医科大学附属肿瘤医院2013年1月-2014年12月收治的HBV相关HCC行根治切除术的连续病例167例,另外选取肝血管瘤患者115例(其中HBV携带者83例)作为对照组。采用ELISA法检测167例HBV相关HCC血清中IL-17表达,采用电化学发光法检测血清AFP浓度,并分析IL-17的表达与不同AFP水平的关联性及其与HBV相关HCC患者根治切除术后复发和生存的关系。计数资料组间比较采用χ2检验,生存分析采用Kaplan-Meier相关性分析、Log-rank检验以及Cox比例风险模型。结果将HBV相关HCC患者以血清AFP水平分为2组,AFP<400 ng/ml组IL-17的阳性表达率为50.9%(58/114),AFP≥400 ng/ml组为34.0%(18/53),2组比较差异有统计学意义(χ~2=8.11,P=0.002)。AFP<400 ng/ml组和AFP≥400 ng/ml组患者术后无瘤生存期(34.1个月vs 13.4个月)、总体生存期(84.2个月vs 57.4个月)、1年内肿瘤复发率(28.9%vs 50.9%)比较差异均有统计学意义(χ~2值分别为10.34、3.13、10.89,P值均<0.05)。Kaplan-Meier分析发现,AFP<400 ng/ml的HBV相关HCC患者,IL-17阳性表达组术后1年复发率高于阴性表达组,无瘤生存期、总生存期均显著低于低表达组(χ2值分别为7.350、3.814、9.744,P值均<0.05)。Cox模型分析结果显示,IL-17阳性表达、血管癌栓、组织分化程度是影响HCC患者预后的相关因素(P值均<0.05)。结论 AFP<400 ng/ml的HBV相关HCC患者中IL-17阳性表达预示着早期复发和预后不良。     

直肠癌手术前后血清miR-24-3p和FOXQ1水平变化及其与预后的关系研究

[目的]研究直肠癌患者手术前后血清miR-24-3p和叉头框蛋白Q1(FOXQ1)水平变化及其与预后的关系。[方法]选择2011年2月~2014年10月在我院行根治性手术切除的64例直肠癌患者(直肠癌组)作为研究对象,同时期体检健康且无肿瘤家族史的50例正常者(正常组)作为对照,检测直肠癌患者手术前后及正常组血清miR-24-3p和FOXQ1水平,分析血清miR-24-3p和FOXQ1水平与直肠癌患者临床病理特征和3年生存率的关系。[结果]直肠癌组手术前和手术后血清miR-24-3p相对表达量均显著低于正常组(P0.05),血清FOXQ1水平均显著高于正常组(P0.05),直肠癌患者术后血清miR-24-3p相对表达量显著升高,血清FOXQ1水平显著降低;直肠癌患者术后半年内复发患者血清miR-24-3p相对表达量显著低于未复发患者(P0.05),血清FOXQ1水平显著高于未复发患者(P0.05)。血清miR-24-3p表达水平与直肠癌患者TNM分期、浸润程度及淋巴结转移有关(P0.05),血清FOXQ1水平与直肠癌患者肿瘤大小、TNM分期、浸润程度及淋巴结转移有关(P0.05);直肠癌组患者血清miR-24-3p和FOXQ1表达水平呈显著负相关关系(r=-0.762,P=0.000);术后血清miR-24-3p升高率48.15%患者3年生存率显著高于升高率48.15%患者(P0.05),血清FOXQ1降低率33.69%患者3年生存率显著高于降低率33.69%患者(P0.05);FOXQ1表达水平是影响直肠癌患者预后的危险因素,而miR-24-3p表达水平是直肠癌患者预后的保护因素。[结论]直肠癌患者术后血清miR-24-3p水平显著升高,FOXQ1水平显著降低,其升高或降低程度与患者远期预后密切相关。     

病毒性脑炎患儿脑脊液外泌体中miR-221/222检测及其临床意义

目的检测病毒性脑炎患儿脑脊液外泌体中微小RNA-221/222(miR-221/222)水平,并探讨miR-221、miR-222与病毒性脑炎发生及预后的关系。方法选取2018年3月–2019年6月于本院住院治疗的79例病毒性脑炎患儿为病脑组,并根据预后评定将患儿分为预后良好组50例,预后不良组29例。选取同期68例以头痛为主诉而脑脊液正常患儿作为对照组。采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)法检测脑脊液外泌体中miR-221、miR-222表达水平;分析病毒性脑炎患儿脑脊液外泌体中miR-221与miR-222的相关性;分析脑脊液外泌体中miR-221、miR-222检测对病毒性脑炎的诊断价值及其对病毒性脑炎患儿预后的影响。结果透射电镜观察病脑组和对照组患儿脑脊液中均存在中间较周围淡染、边界较清晰的椭圆形或类圆形囊泡,且囊泡内可见致密低电子影;病脑组患儿脑脊液外泌体中miR-221、miR-222相对表达量分别为1.02±0.27和1.03±0.26,对照组分别为1.49±0.33和1.60±0.43,差异均有统计学意义(t值分别为9.354和9.531,均P0.01),且miR-221与miR-222水平呈正相关(r=0.540,P0.05)。脑脊液外泌体miR-221、miR-222诊断病毒性脑炎的AUC分别为0.846、0.879,截断值分别为1.393、1.436,特异性分别为87.9%、74.9%,敏感度分别为65.6%、85.1%;二者联合诊断的AUC为0.914,特异性为83.5%,敏感度为86.8%。预后不良组病脑患儿脑脊液外泌体中miR-221、miR-222相对表达量分别为1.59±0.41和1.79±0.49,预后良好组分别为1.59±0.41和1.79±0.49,差异均有统计学意义(t值分别为4.314和3.846,均P0.01)。多因素Logistic回归分析miR-222是影响病毒性脑炎患儿预后不良的独立危险因素(P0.05)。结论病毒性脑炎患儿脑脊液外泌体中miR-221、miR-222水平显著升高,两者对诊断病毒性脑炎及其预后评估可能有重要价值。     

原发性肝细胞癌血清中miR-888-5p的表达及临床意义

背景miR-888-5p高表达于原发性肝细胞癌(hepatocellular carcinoma,HCC)组织及HCC细胞系,可促进肿瘤细胞侵袭及转移,与疾病分期及预后不良相关.然而HCC患者血清中miR-888-5p的表达水平尚未被检测,血清miR-888-5p对于HCC诊断及预后判断相关价值尚未被评估.目的检测HCC患者血清中miR-888-5p表达水平,探究其对HCC的诊断价值及与临床特征之间的关系.方法收集68例HCC患者、46例慢性乙型病毒性肝炎(chronic hepatitis B,CHB)患者、43例肝硬化(liver cirrhosis,LC)患者及40例同期健康体检者,实时荧光定量聚合酶链反应(quantitative real-time polymerase chain reaction,qRT-PCR)法检测血清中miR-888-5p表达量,受试者工作特征(receiver operating characteristic,ROC)曲线评估其诊断HCC的价值,并分析与HCC临床特征之间的关系.结果HCC患者血清中miR-888-5p表达量较CHB、LC及健康者显著上调(P<0.05).ROC曲线提示,联合检测ROC曲线下面积(area under curve,AUC)为0.907,敏感性91.18%,特异性72.50%)对HCC诊断价值优于分别检测血清miR-888-5p(AUC=0.737,敏感性79.41%,特异性62.50%)及甲胎蛋白(alpha-fetoprotein,AFP)(AUC=0.819,敏感性73.53%,特异性97.50%),且对AFP阴性HCC也具有较高的诊断价值:AUC=0.793,敏感性90.90%,特异性62.50%.此外,miR-888-5p表达水平与HCC肺转移相关(P=0.01).结论血清miR-888-5p对HCC及AFP阴性HCC具有较高诊断价值,与AFP联合检测诊断价值更高.miR-888-5p表达水平与HCC肺转移相关,有望成为HCC早期诊断及评估预后的新型血清学分子标志物.     

外周血miRNA-26a的表达对经TACE治疗的原发性肝癌患者预后的意义

目的探讨外周血miRNA-26a的表达对TACE治疗的原发性肝癌患者预后的意义。方法选取2013年5月至2013年10月于本院行TACE治疗的原发性肝癌患者29例(A组)、代偿期肝硬化患者30例(B组)及健康体检者30例(C组)为研究对象,采用实时定量PCR技术检测外周血miRNA-26a的表达水平,分析原发性肝癌(PLC)患者TACE治疗术后miRNA-26a表达水平的变化、不同miRNA-26a表达水平的PLC患者无疾病进展时间(progress free survival,PFS)及1、2、3年生存率的差异。结果肝癌患者外周血miRNA-26a的表达水平(1.230±0.299)低于代偿期肝硬化组(1.897±0.534)和健康体检组(2.427±0.569),差异有统计学意义(t=-5.542、-10.058,P0.001);原发性肝癌患者TACE治疗前后外周血miRNA-26a表达水平的差异有统计学意义[(1.230±0.299)vs(2.154±0.371),t=-8.786,P0.001)。以TACE术前外周血miRNA-26a表达的中位值1.145将PLC患者分为高表达组(13例)和低表达组(16例),高表达组的无疾病进展生存时间为(27.18±4.28)个月,显著高于低表达组的(17.23±9.18)个月,差异有统计学意义(t=5.287,P=0.019),高表达组1、2、3年生存率分别为92.31%、76.92%和61.54%,低表达组的1、2、3年生存率分为93.75%、50.00%、43.75%,差异有统计学意义(χ~2=3.885,P=0.032)。结论原发性肝癌患者经TACE治疗后外周血miRNA-26a的表达水平提高,外周血miRNA-26a的表达对原发性肝癌介入治疗的预后评估有判断价值。     

miR-301a-3p在胰腺癌中的表达及与患者预后关系的研究

目的探讨miR-301a-3p在胰腺癌中的表达水平及与患者预后的关系。方法收集2016年1月至2019年1月宿迁市中医院收治的66例胰腺癌患者的手术病理标本(包括肿瘤组织和癌旁组织),检测组织及外周血中miR-301a-3p的表达水平;抽取同期健康体检志愿者的外周血,检测外周血miR-301a-3p的表达水平。收集患者的临床病理参数并进行统计分析。结果 miR-301a-3p在胰腺癌患者肿瘤组织、癌旁组织中的相对表达量分别为10.64±2.12、5.64±1.73,在胰腺癌患者血浆及健康志愿者血浆中的相对表达量分别为5.36±1.13、1.28±0.29,差异均具有统计学意义(P均0.05)。Spearman等级相关检验发现,miR-301a-3p在胰腺癌患者肿瘤组织与血浆中的表达水平呈正相关关系(r=0.539,P0.01)。单因素及多因素分析结果显示,肿瘤大小、是否有淋巴结转移、糖类抗原19-9(CA19-9)水平是影响肿瘤组织中miR-301a-3p表达水平的独立危险因素。癌胚抗原(CEA)、CA19-9、miR-301a-3p诊断胰腺癌的受试者工作特征(ROC)曲线下面积(AUC)分别为0.576、0.693、0.757,三者联合诊断时为0.806,三者联合诊断的准确度明显优于单独诊断。Log-rank检验发现,血浆miR-301a-3p高表达组患者的总生存期(OS)显著短于miR-301a-3p低表达组(χ~2=5.524,P=0.018);组织miR-301a-3p高表达组患者的OS也显著短于miR-301a-3p低表达组(χ~2=22.163,P0.001)。结论胰腺癌患者的肿瘤组织和血浆中miR-301a-3p的表达水平均明显升高,且对患者预后有显著不良影响。     

重症肺炎肺泡灌洗液微小核糖核酸-127的表达水平及临床意义

目的:探讨重症肺炎患者肺泡灌洗液(BALF)中微小核糖核酸-127-5p(miRNA-127-5p)的表达水平及临床价值。方法:选取我院2017年1月至2019年5月重症肺炎患者102例进行分析。所有患者第1天行纤维支气管镜检查;在病程第4、7天经纤维支气管进行支气管肺泡灌洗(BAL);选择右肺中叶或左上叶舌段,注入0.9%氯化钠液之后,使用合适的负压(100 mm Hg,1 mm Hg=0.133 k Pa)吸取BALF;应用聚合酶链式反应(PCR)法检测miR-127-5p表达量;采用酶联免疫吸附实验(ELISA)法对BALF中IL-6、IL-8及IL-10水平进行测定。结果:动态监测两组患者BALF中的miRNA-127-5p表达量以及IL-6、IL-8及IL-10水平;治疗第1天,两组的miRNA-127-5p表达量以及IL-6、IL-8及IL-10水平,差异无统计学意义(P>0.05);治疗第4天,预后良好组的miRNA-127-5p表达量显著高于预后不良组,差异有统计学意义(P<0.05);治疗第4天,预后良好组的IL-8,IL-10水平显著低于预后不良组,差异有统计学意义(P<0.05);治疗第7天,预后良好组的miRNA-127-5p表达量显著高于预后不良组,差异有统计学意义(P<0.05);治疗第7天,预后良好组的IL-8,IL-10水平显著低于预后不良组,差异有统计学意义(P<0.05);经治疗,两组的miRNA-127-5p表达量逐渐升高,IL-8,IL-10水平逐渐降低。miRNA-127-5p表达量在预测重症肺炎患者预后情况的AUC曲线下面积为(敏感度=88.6%,特异性=70.9%)。结论:肺泡灌洗液中miRNA-127-5p表达量有望成为一种判断重症肺炎患者的预后的新型生物标志物。     

合并与未合并糖尿病的胰腺癌患者血管生成素样蛋白2在血清中的表达及其与预后的关系

目的探讨血管生成素样蛋白2(ANGPTL2)在合并与未合并糖尿病的胰腺癌患者中的表达水平及其作为胰腺癌患者预后指标的价值。方法收集2015年1月—2018年1月于广西医科大学第一附属医院、广西医科大学附属肿瘤医院、广西医科大学附属武鸣医院治疗的胰腺癌患者的血清标本125例,其中单纯胰腺癌组64例、合并糖尿病胰腺癌组61例,另选取66例健康体检者作为对照组。采用ELISA法检测各组血清ANGPTL2水平,分析ANGPTL2的表达水平与临床指标、生存预后的关系。符合正态分布的计量资料3组间比较采用单因素方差分析,进一步两两比较采用Bonferroni法;偏态分布者的计量资料3组间比较采用独立样本Kruskal-Wallis H秩和检验,进一步两两比较采用单因素ANOVA法。计数资料组间比较采用χ~2检验。相关性分析采用Spearman相关分析。Kaplan-Meier法绘制生存曲线,log-rank检验比较生存率。采用Cox风险模型行单/多因素分析,确定影响胰腺癌预后的独立危险因素。结果合并糖尿病胰腺癌组患者血清ANGPTL2[7.79(7.12～8.17) ng/ml]明显高于单纯胰腺癌组[5.74(5.08～6.40) ng/ml]和健康对照组[3.72(3.25～4.16) ng/ml](P值均0.001)。血清ANGPTL2水平与CA19-9、CEA均呈正相关(r值分别为0.560、0.731,P值均0.001)。单因素分析显示,肿瘤大小、远处器官转移、分化程度、CEA、ANGPTL2、HbA1c与胰腺癌患者远期生存密切相关(P值均0.05);多因素分析显示,肿瘤大小(HR=2.657,P=0.005)、远处器官转移(HR=5.000,P=0.014)、分化程度(HR=2.466,P=0.004)、CEA(HR=1.110,P 0.001)、ANGPTL2(HR=1.901,P=0.001)均为影响胰腺癌患者预后的独立危险因素。在所有胰腺癌患者中,ANGPTL2高表达组的2年生存率明显低于ANGPTL2低表达组(8.51%vs 25.81%,χ~2=5.651,P=0.017)。在合并糖尿病的胰腺癌患者中ANGPTL2高表达组的2年生存率也明显低于ANGPTL2低表达组(2.20%vs 32.70%,χ~2=24.895,P 0.001)。结论 ANGPTL2可能是评价胰腺癌患者,特别是合并糖尿病的胰腺癌患者预后的有效指标。     

肝癌细胞来源外泌体对肿瘤相关M2型巨噬细胞极化的影响

目的 探讨来源于肝癌细胞的外泌体对肿瘤相关巨噬细胞极化的影响，揭示肝癌形成新机制。方法 通过超速离心法分离肝癌细胞来源外泌体，透射电子显微镜、动态光散射粒度分析仪、蛋白免疫印迹法对外泌体表征进行鉴定；诱导巨噬细胞极化模型，实时荧光定量PCR和蛋白免疫印迹法验证其极化状态。符合正态分布的计量资料两组间比较采用t检验；多组间比较采用单因素方差分析，进一步两两比较采用LSD-t检验。结果 透谢电子显微镜显示肝癌细胞来源外泌体为圆形或椭圆形囊泡结构，外泌体粒径大小为(172.65±2.34)nm,蛋白免疫印迹分析显示肝癌细胞来源的外泌体中标志蛋白TSG101和CD63呈高阳性表达。佛波酯15 ng诱导人源单核细胞巨噬细胞24 h贴壁后CD68表达显著增加(6.67±0.98 vs 1.00±0.25,t=11.20,P<0.001)。蛋白免疫印迹分析显示，相比对照组(L02来源外泌体组),HCC细胞来源外泌体(低、中、高3种剂量)诱导巨噬细胞表达M2型巨噬细胞标志物Arg-1、CD163均明显增加(P值均<0.05)。结论 肝癌细胞来源外泌体可促进巨噬细胞M2型极化。     

胃癌患者癌组织和血清外泌体中LncRNA CCAT1、miR-140-3p表达及其临床意义

目的 观察胃癌患者癌组织和血清外泌体中LncRNA结肠癌相关转录因子1(CCAT1)、微小核糖核酸-140-3p(miR-140-3p)表达情况并分析其临床意义。方法 选取93例行胃癌根治术的胃癌患者为胃癌组，47例胃部良性病变患者为良性病变组，47例健康体检者为健康对照组。采集所有研究对象静脉血，提取血清外泌体，于胃癌患者行胃癌根治术过程中留取患者肿瘤组织样本及癌旁组织样本，采用RT-q PCR法检测血清外泌体及胃癌、癌旁组织中的LncRNA CCAT1、miR-140-3p。对胃癌患者随访5年，记录患者生存时间并计算5年生存率。采用Pearson相关分析法分析患者癌组织及血清外泌体中LncRNA CCAT1与miR-140-3p的相关性；比较不同病理特征胃癌患者癌组织及血清外泌体LncRNA CCAT1、miR-140-3p表达，以胃癌患者癌组织LncRNA CCAT1、miR-140-3p表达的平均值为界限，将患者分为高、低LncRNA CCAT1、miR-140-3p者，采用K-M生存曲线比较高、低LncRNA CCAT1、miR-140-3p患者5年总生存率；采用受试者工作特...     

微RNA-21-5p靶向调控程序性死亡蛋白4对系统性红斑狼疮患者外周血B细胞增殖与凋亡的影响

目的 探讨微RNA(RNA-21-5p)通过靶向程序性死亡蛋白4(PDCD4)对SLE患者外周血B细胞增殖与凋亡的调控作用.方法 选择我院经临床确诊的SLE患者30例,采用梯度离心法提取外周血淋巴细胞(PBL),磁珠法分选B细胞后流式细胞术检测外周血B细胞比例;采用电转染法将细胞分为空白对照组、miRNA-21-5p阴性对照组、miRNA-21-5p Inhibitor组、PDCD4阴性对照组、PDCD4 siRNA组.于转染后48 h收集细胞.采用实时荧光定量(RT)-PCR法检测各组细胞miRNA-21-5p及PDCD4 mRNA的表达水平;采用蛋白质印迹法检测各组细胞PDCD4的蛋白表达;采用双荧光素酶靶标实验验证miR-21-5p和PDCD4的靶向关系;采用流式细胞仪检测各组细胞凋亡情况、采用CCK-8法检测各组细胞的增殖情况;采用蛋白质印迹法和RT-PCR法分别检测各组细胞Fas、FasL、CD40和CD40L的表达水平.采用独立样本t检验对2组间数据进行比较;采用单因素方差分析对多样本实验结果进行统计分析;抗dsDNA抗体阳性率比较采用χ^2检验.结果 SLE患者血清补体[C3 (0.85±0.11)g/L、C4 (0.54±0.09)g/L]较健康对照组[C3(1.16±0.17) g/L、C4(1.57±0.09) g/L]降低(t=7.524,P<0.05;t=38.471,P<0.05),而抗dsDNA抗体(47%)、IgG(15.46±0.75) g/L、IgA (2.68±0.20) g/L较健康对照组抗dsDNA抗体(17%)、IgG(11.95±0.80) g/L、IgA (2.16±0.11) g/L均升高(χ^2=4.427,P<0.05;t=15.218,P<0.05;t=10.125,P<0.05);SLE患者外周血B细胞比例[(6.78±0.29)%]、miRNA-21-5p表达水平(7.52±0.59)%较健康对照外周血B细胞比例[(2.03±0.24)%]、miRNA-21-5p表达水平(3.60±0.62)均升高(t=59.064,P<0.05;t=19.317,P<0.05),而SLE患者外周血PDCD4基因表达水平(1.54±0.35)较健康对照(4.42±0.42)降低(t=19.126,P<0.05);与空白对照组和miRNA-21-5p NC组相比,miRNA-21-5p Inhibitor组细胞增殖受到抑制,细胞凋亡比例升高(F=5.244,P<0.05;F=37.903,P<0.05);与空白对照组和PDCD4 NC组相比,PDCD4 siRNA组细胞增殖能力增强,细胞凋亡比例减少(F=5.956,P<0.05;F=25.431,P<0.05).双荧光素酶报告基因实验分析结果显示,PDCD4是miRNA-21-5p的靶基因.结论 miRNA-21-5p可能通过抑制PDCD4的表达促进SLE患者外周血B细胞增殖,导致B细胞凋亡异常.miRNA-21-5p可作为SLE治疗新的靶向基因.     

高危型HPV阳性宫颈癌患者miRNA-34a-5p的表达及临床意义

目的　探讨高危型人乳头状瘤病毒（high risk-human papilloma virus, HR-HPV）阳性宫颈癌患者组织及血清中微小RNA（microRNA, miRNA）-34a-5p的表达及其对宫颈癌的诊断价值。方法　将100例HR-HPV阳性宫颈癌患者（宫颈癌组）、70例宫颈上皮内瘤变（cervical intraepithelial neoplasia, CIN）患者（CIN组）、70例HR-HPV阳性子宫良性病变或者HPV单纯阳性的健康体检者（对照组）作为研究对象。采集上述研究对象的血清标本及70例行手术治疗的宫颈癌组患者癌组织及癌旁组织。使用实时荧光定量PCR技术测定组织及血清中miRNA-34a-5p水平，并分析miRNA-34a-5p与宫颈癌临床、病理指标的关联及血清miRNA-34a-5p对宫颈癌的诊断价值。结果　①对照组血清中miRNA-34a-5p的相对表达量高于CIN组和宫颈癌组：（0.933±0.097）vs.（0.554±0.099）vs.（0.369±0.099），差异有统计学意义（F=741.401，P=0.000）；宫颈癌组患者术前血清中miRNA-34a-5p相对表达量低于术后1周，差异有统计学意义（t=8.305，P=0.000）。有无淋巴结转移和有无远处转移的宫颈癌患者血清中miRNA-34a-5p相对表达量的差异有统计学意义（P均＜0.05）。②宫颈癌组患者癌旁组织中miRNA-34a-5p的相对表达量高于癌组织，差异具有统计学意义（t=40.313，P=0.000）。③宫颈癌组患者癌组织中的miRNA-34a-5p表达水平与血清中的表达水平呈正相关（r=0.908，P=0.000）。④以0.508为miRNA-34a-5p相对表达量的最佳临界值诊断宫颈癌，其灵敏度为83.6%，特异度为79.4%，AUC为0.860，95%置信区间为0.803～0.917。结论　HR-HPV阳性宫颈癌患者癌组织和血清中miRNA-34a-5p表达下调，对宫颈癌诊断及预后监测具有一定的参考价值。     

心力衰竭患者血浆外泌体microRNA检测及其功能分析

目的明确心力衰竭(心衰)患者血浆外泌体microRNA(miRNA)表达谱的差别,寻找其在心衰早期诊断和预后评估中的价值。方法应用外泌体提取试剂盒抽提10例心衰患者及10例非心衰对照者外周血浆外泌体,对血浆外泌体miRNA进行高通量测序,初步筛选差异表达miRNA,并通过实时荧光定量PCR方法验证,分析差异表达miRNA的功能及其与NT-proBNP的相关性。结果 miRNA高通量测序共筛选出24条显著差异表达的血浆外泌体miRNA。其中14条miRNA表达显著上调,10条miRNA表达明显下调。定量PCR验证和高通量测序筛选结果一致。差异表达miRNA的功能涉及炎性反应、细胞凋亡、增值、自噬等。相关性分析提示miR-122-5p与NT-proBNP具有相关性(r=0.537,P=0.015)。结论血浆外泌体来源miRNA可能成为潜在的辅助诊断心力衰竭和评估预后的一类新型生物标志物。     

出血性脑卒中患者血清miR-217-5p表达及临床意义

目的 探讨血清miR-217-5p在出血性脑卒中患者中的表达水平及其临床意义。方法 选取2019年5月至2021年5月邯郸市第一医院收治的出血性脑卒中患者135例作为观察组,另选取同时期健康体检者127例为对照组。采用实时荧光定量聚合酶链式反应法检测所有受试者血清miR-217-5p表达水平并对比;根据美国国立卫生研究院卒中量表(NIHSS)评分将观察组患者分为轻度、中度和重度,比较不同病情程度患者血清miR-217-5p表达水平;根据治疗后随访3个月的预后情况将观察组分为预后良好组和预后不良组,比较预后良好组和预后不良组血清miR-217-5p表达水平及一般资料;采用多因素Logistic回归分析法分析出血性脑卒中患者预后不良的影响因素,并绘制受试者工作特征(ROC)曲线分析血清miR-217-5p表达水平对出血性脑卒中患者预后情况的预测价值。结果 观察组血清miR-217-5p表达水平低于对照组(t=37.182,P <0.05);观察组中度、重度患者血清miR-217-5p表达水平低于轻度者(P <0.05),重度者血清miR-217-5p表达水平低于中度者(P &l...