阻断PI3K/AKT/mTOR通路增强顺铂诱导的人皮肤黑素瘤细胞株A375凋亡的机制研究

目的:本实验探讨抑制PI3K/AKT/mTOR通路对顺铂诱导人皮肤黑素瘤细胞株A375细胞凋亡作用及其机制。方法:用顺铂处理人皮肤黑素瘤细胞株A375细胞后Western blot检测细胞凋亡、PI3K/AKT/mTOR通路的活化情况以及细胞增殖-毒性检测试剂盒(Cell Counting Kit-8,CCK-8)。用PI3K的抑制剂LY294002(LY)和mTOR的抑制剂雷帕霉素(Rapamycin,Rap)分别预处理以研究其对顺铂处理后人皮肤黑素瘤细胞株A375细胞凋亡的协同作用。为进一步探索阻断PI3K/AKT/mTOR通路对顺铂处理后人皮肤黑素瘤细胞株A375细胞凋亡的协同作用机制,采用Western blot检测阻断PI3K/AKT/mTOR后联用顺铂处理人皮肤黑素瘤细胞株A375细胞中Bcl-2、Bcl-xl蛋白表达。结果:顺铂处理后的A375黑素瘤细胞中PARP的活化剪切体表达量水平呈浓度和时间依赖性增加,细胞活力呈浓度和时间依赖性降低(P0.05)。顺铂处理A375黑素瘤细胞后PI3K/AKT/mTOR通路的活化。阻断PI3K/AKT/mTOR通路再用顺铂联合处理A375黑素瘤细胞后PARP的活化剪切体表达量明显上调以及细胞活力明显降低(P0.05)。阻断PI3K/AKT/mTOR通路后再用顺铂联合处理A375黑素瘤细胞发现Bcl-2蛋白和Bcl-xl表达水平下调。结论:阻断PI3K/AKT/mTOR通路对顺铂诱导的细胞凋亡具有协同作用,该协同作用可能与Bcl-2和Bcl-xl蛋白下调有关。     

DESI2基因干扰联合PI3K抑制剂对人胰腺癌细胞ASPC-1的影响

目的 研究人凋亡相关新基因DESI2基因和PI3K抑制剂对人胰腺癌细胞ASPC-1的影响。方法 构建DESI2慢病毒干扰载体,并将细胞分为四组：（1）溶剂对照组;（2）PI3K抑制剂组;（3）DESI2干 扰+PI3K抑制剂组;（4）DESI2空载+PI3K抑制剂组。采用MTT检测细胞活性,流式检测细胞周期和调亡, Transwell检测细胞侵袭情况,qRT-PCR检测细胞DESI2、Caspase3、AKT、PI3K和mTOR mRNA的表达, Western blotting检测细胞DESI2、Caspase3、AKT、p-AKT、PI3K、p-PI3K、mTOR和p-mTOR蛋白表达情 况。结果 与溶剂对照组相比,PI3K抑制剂组和DESI2空载+PI3K抑制剂组细胞活性明显下降,G1期比 例升高,S期和G2期比例降低,凋亡明显升高,细胞侵袭能力明显下降,DESI2和Caspase3的mRNA和蛋 白水平表达明显升高,AKT、PI3K和mTOR及其磷酸化的蛋白表达量明显下降。与PI3K抑制剂组相比, DESI2干扰+PI3K抑制剂组细胞活性明显升高,G1期比例降低,S期比例升高,凋亡明显下降,细胞侵袭能 力明显升高,DESI2和Caspase3 mRNA和蛋白水平表达明显下降,AKT、PI3K和mTOR及其磷酸化的蛋白 表达量明显升高,研究数据组间比较均达到统计学显著水平（P<0.05）。 结论 PI3K抑制剂通过阻断PI3K/ AKT/mTOR信号通路,可以抑制人胰腺癌细胞ASPC-1的增殖及侵袭,促进细胞调亡;PI3K/AKT/mTOR信 号通路的功能状态能反馈调节上游DESI2基因的表达。     

PI3K/AKT信号传导通路及其在肾脏疾病中的研究进展

PI3K/AKT信号传导通路与许多细胞的抗凋亡、增殖、分化以及其他重要生理及病理过程有着密切的联系。该通路与某些肾脏疾病关系密切。本文概述PI3K/AKT抗凋亡信号传导通路成员的结构、调节因素、信号传导、生物学功能及其在肾脏疾病中的研究进展。     

Notch1调控PI3K/AKT信号通路促进黑素瘤细胞发展的研究

目的:分析Notch1在黑素瘤发展过程中的作用和机制。方法:采用RT-PCR检测Notch1 mRNA在黑素瘤和正常黑素细胞中的表达,采用慢病毒转染技术构建Notch1过表达的黑色素瘤细胞系,CCK法检测细胞增殖能力,Transwell检测细胞侵袭能力,划线法检测细胞迁移能力,流式细胞术检测细胞凋亡能力,Westernblot检测细胞Notch1过表达对PI3K/AKT信号通路中AKT磷酸化水平的影响。结果:黑素瘤细胞系MM200、Mel-CV、A2058和A375细胞中Notch1mRNA水平明显高于正常黑素细胞系HemN-MP(P0.05)。黑素瘤细胞A2058细胞中Notch1水平升高后,细胞的增殖速率显著提高,在48h、72h和96h转染组细胞增殖能力明显高于对照组(P0.05);Transwell结果显示Notch1水平升高可以显著增加穿过小室膜A2058细胞数量(P0.05);划线法结果显示24h转染组细胞迁移率明显高于对照组(P0.05);流式细胞检测结果显示转染组细胞早期凋亡率明显低于对照组(P0.05)。Notch1水平增加后,AKT蛋白磷酸化水平明显提高,说明Notch1能够促进PI3K/AKT信号通路的激活。加入了Notch信号通路特异性阻断剂DAPT后,能够有效抑制Notch1过表达引起的AKT蛋白磷酸化的升高。结论:Notch1能够调节PI3K/AKT信号通路通过促进黑素瘤的发展,本研究为临床治疗黑素瘤提供了新的思路。     

国外期刊摘译

联合应用周期素依赖性蛋白激酶与AKT抑制剂诱导转移性前列腺癌细胞凋亡;肿瘤蛋白D52的表达变化对前列腺癌细胞凋亡与迁移影响的研究;抑制NF-κB与激活AP-1可增强前列腺癌细胞的凋亡;厚朴酚通过抑制EGFR／PI3K／Akt信号通路诱导人前列腺癌细胞凋亡;转移性前列腺癌细胞中PI3K／Akt依赖的转录调控与NF-κB介导的BMP-2-Smad信号通路的激活……     

西黄丸及其主要成分抑制PI3K/Akt/mTOR信号通路促进PC-3荷瘤小鼠前列腺癌细胞的凋亡

目的:评估西黄丸及其主要成分对裸鼠去势抵抗性人前列腺癌PC-3细胞皮下移植瘤的PI3K/AKT/mTOR信号通路及细胞凋亡的影响.方法:通过西黄丸、麝香、牛黄、多西他赛、麝香+牛黄干预动物模型,计算各组抑瘤率及HE染色观察肿瘤细胞形态,采用qPCR方法检测各组PI3K/Akt/mTOR mRNA水平,Western印迹...     

PI3K／AKT信号传导通路及其在肾脏疾病中的研究进展

PI3K／AKT信号传导通路与许多细胞的抗凋亡、增殖、分化以及其他重要生理及病理过程有着密切的联系。该通路与某些肾脏疾病关系密切。本文概述PI3K／AKT抗凋亡信号传导通路成员的结构、调节因素、信号传导、生物学功能及其在肾脏疾病中的研究进展。     

Bikunin抑制前列腺癌细胞PC3体外侵袭的实验研究

目的:探讨bi kuni n对前列腺癌细胞侵袭能力的影响及其相关的分子机制。方法:利用bi kuni n处理前列腺癌细胞系PC3,采用t r ans wel l实验检测其对细胞侵袭能力的影响。同时,利用west ern印迹技术检测PI3K/AKT信号通路在此过程中的作用。结果:Bi kuni n能够显著降低PC3细胞的侵袭能力;Bi kuni n能够抑制PI3K和AKT的活性;PI3K和AKT的抑制剂能够抑制PC3细胞的侵袭;组成型活化的PI3K能够阻断bi kuni n的抑制作用。结论:Bi kuni n可能通过调节PI3K/AKT信号通路来抑制前列腺癌细胞的侵袭;Bi kuni n具有一定的临床应用前景。     

磷脂酰肌醇-3-激酶/蛋白激酶B信号通路在甲状腺癌中的研究进展

目的 了解磷脂酰肌醇-3-激酶/蛋白激酶B(phosphatidylinositol-3-kinase/protein kinase B,PI3K/AKT)信号通路在甲状腺癌中的研究现状以及在甲状腺癌的发生、细胞分化、侵袭和转移中的作用，以寻找甲状腺癌治疗的潜在靶点。方法 检索关于PI3K/AKT信号通路在甲状腺癌中研究的相关文献并进行分析及总结。结果 PI3K/AKT信号通路在甲状腺癌中直接或间接地被异常活化，导致细胞凋亡受抑制、恶性增殖、周期进展加速、侵袭、转移等，从而促进甲状腺癌的发生及发展；同时也有一些抑癌基因、微小RNA、长链非编码RNA等间接抑制PI3K/AKT信号通路的激活或直接作用于PI3K/AKT信号通路并抑制其活性，从而抑制甲状腺癌的发生和发展。结论 在甲状腺癌中，有不少蛋白、基因、微小RNA和长链非编码RNA通过不同的靶点直接或间接地激活PI3K/AKT信号通路，促进甲状腺癌的发生与发展；同时也有许多靶点抑制PI3K/AKT信号通路的激活，从而抑制甲状腺癌的恶性增殖、侵袭与转移。目前已有研究者尝试将PI3K/AKT信号通路作为治疗甲状腺癌的切入点，深入探究PI3K...     

CXCR4抑制剂AMD3100抑制结肠癌细胞奥沙利铂耐药的机制研究

目的：探讨CXCR4抑制剂AMD3100对奥沙利铂耐药的影响及其作用机制。方法：构建奥沙利铂耐药细胞HCT116;q-PCR和Western blot检测耐药组与对照组CXCR4表达及PI3K-AKT信号通路磷酸化水平。q-PCR和Western blot检测CXCR4抑制剂AMD3100刺激上述细胞系后PI3K-AKT信号通路磷酸化水平变化。CCK8检测AMD3100抑制CXCR4或联合应用AKT抑制剂LY294002对奥沙利铂耐药细胞的耐药性影响。结果：不同浓度奥沙利铂刺激后,耐药组细胞活性无显著变化,而对照组细胞活性随奥沙利铂浓度增加而显著下降。q-PCR和Western blot检测发现耐药组细胞CXCR4表达和PI3K-AKT磷酸化水平显著上升（P<0.05）。给予CXCR4抑制剂AMD3100后,CXCR4表达和PI3K-AKT磷酸化水平显著下降（P<0.05）。结论：CXCR4通过激活PI3K-AKT信号通路在结肠癌奥沙利铂耐药中发挥作用。AMD3100能够增强耐药细胞对奥沙利铂的敏感性,可能成为对抗结肠癌化疗耐药的潜在治疗药物。     

连翘苷调节相关信号通路对地塞米松诱导的成骨细胞自噬和凋亡的影响

目的 探讨连翘苷(phillyrin, PHN)调节磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)/丝氨酸苏氨酸激酶(AKT)/哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)信号通路对地塞米松(dexamethasone, DEX)诱导的成骨细胞自噬和凋亡的影响。方法 将MC3T3-E1细胞分为对照组(NOR组)、DEX组(10μmol/L DEX处理MC3T3-E1细胞)、L-PHN组(5μmol/L PHN处理MC3T3-E1细胞)、M-PHN组(10μmol/L PHN处理MC3T3-E1细胞)、H-PHN组(20μmol/L PHN处理MC3T3-E1细胞)、ZSTK474组(用20μmol/L PHN和2μmol/L的PI3K/AKT/mTOR信号通路抑制剂ZSTK474处理MC3T3-E1细胞);MTT法检测细胞毒性和细胞活力;流式细胞术检测MC3T3-E1细胞凋亡;透射电子显微镜(TEM)观察自噬小体;Western blot法检测MC3T3-E1细胞中自噬、凋亡和PI3K/AKT/mTOR通路相关蛋白表达;ALP活性及ALP染色检测MC3T3-E1细胞分化能力。结果 0～80μmol/L PHN对...     

鱼藤素诱导人前列腺癌细胞凋亡及其机制研究

目的 观察鱼藤素对于激素抵抗型前列腺癌(HRPC)细胞PC3和DU145增殖、细胞周期和凋亡的影响并探讨其机制.方法 设阴性对照组(有细胞但不加药),空白对照组(无细胞仅有培养液),阳性对照组(渥曼青霉素100 nmoL/L),及鱼藤素分别10、100、1 ìmol/L共6组.CCK-8法进行细胞毒性实验,检测细胞生长抑制率.流式细胞术检测细胞周期和凋亡,Westem-blot检测Akt、MAPK及其磷酸化蛋白表达,探讨药物作用机制.结果 10 nmol/L～1 ìmol/L鱼藤素对PC3细胞均有生长抑制作用,呈现明显的时间、浓度依赖性,对DU145细胞则无此作用.鱼藤素使PC3细胞出现G2/M期阻滞现象并引起浓度依赖性的凋亡,而未改变DU145细胞的周期分布也不能诱导其凋亡.鱼藤素能够阻断P13K/AKT通路而对MAPK通路无影响.结论 鱼藤素通过阻断PI3K/AKT通路实现抑制PC3细胞增殖、诱导凋亡的作用.两株细胞间实验结果 的差异是因为其PI3K/AKT通路活化状态的差异造成的.     

PI3K/AKT信号通路与良性前列腺增生的研究进展

良性前列腺增生是引起中老年男性下尿路症状的最常见疾病之一,对患者的生活质量产生极大的影响。但目前良性前列腺增生的病因仍不清楚。磷酸肌醇 3激酶 -蛋白激酶 B(PI3K/AKT)是常见的信号通路之一,P13K/AKT信号通路的激活可参与细胞的增殖、存活、蛋白质合成和葡萄糖代谢等生物过程。研究表明 PI3K/AKT在良性前列腺增生的发生发展中具有重要作用。本文针对 PI3K/AKT信号通路的组成、BPH相关因素与 PI3K/AKT通路的关系、通过抑制 PI3K/AKT治疗 BPH的药物共 3个方面总结了近年来 PI3K/AKT通路在良性前列腺增生中的研究进展。     

HGF通过P13K/AKT信号通路上调SMMC-7721细胞Mcl-1的表达

目的 探讨HGF是否上调SMMC-7721细胞抗凋亡蛋白Mcl-1的表达以及HGF是通过哪条信号途径调节MCl-1.方法 人肝癌细胞SMMC-7721进行实验;采用RT-PCR检测HGF受体c-Met在SMMC-7721细胞的表达情况;用Western blot方法 检测MAPK和P13K/AKT磷酸化以及Mcl-1蛋白的表达;用信号通路阻断剂处理SMMC-7721细胞,检测HGF是通过哪条信号途径调节Mcl-1.结果 人肝癌细胞SMMC-7721表达HGF受体C-Met;HGF能够激活MAPK、PI3K/AKT信号转导途径;HGF能够上调SMMC-7721细胞Mcl-1表达;进一步用特异的抑制剂阻断MAPK途径后,并不能改变HGF对Mcl-1的上调作用,而阻断PI3K/AKT途径后,HGF对Mcl-1的上调作用被抑制.结论 HGF对Mcl-1的上调作用是通过PI3K/AKT途径介导的.     

釉丛蛋白1表达对结直肠腺癌细胞增殖、凋亡及PI3K/AKT信号通路的影响

目的:探究釉丛蛋白1(TUFT1)表达对结直肠腺癌细胞(HCT-15)增殖、凋亡及磷脂酰肌醇3-激酶/蛋白激酶B(PI3K/Akt)信号通路的影响。方法:2019年3月至2021年5月,20例结直肠癌(CRA)患者癌组织及相应癌旁组织。将HCT-15细胞分为对照组、siRNA-NC组、siRNA-TUFT1组、siRNA-TUFT1+IGF-1(PI3K/Akt通路激活剂25 ng/mL)组;实时荧光定量PCR检测组织及细胞中TUFT1表达;CCK-8法、克隆形成实验检测细胞增殖;流式细胞仪检测细胞周期及凋亡情况;Western blot检测组织及细胞中增殖、凋亡及PI3K/Akt通路相关蛋白表达情况。结果:与癌组织相比,癌旁组织中TUFT1 mRNA及蛋白表达显著增加(P<0.05);与对照组相比,siRNA-TUFT1组细胞增殖抑制率、G0/G1期细胞、细胞凋亡率、Caspase-3、Bax表达水平显著增加,而c-Myc、Cyclin D1表达水平、克隆细胞数、S期和G2/M期细胞、p-PI3K/PI3K、p-Akt/Akt水平显著降低(P<0.05);IGF-1可逆转TUFT1沉默对上述指标的影响。结论:TUFT1表达沉默可能通过抑制PI3K/Akt通路激活来抑制HCT-15细胞增殖、促进凋亡。     

miR-877-3p靶向人类表皮生长因子受体2/PI3K/AKT信号通路介导乳腺癌增殖、迁移和侵袭

目的研究miR-877-3p靶向人类表皮生长因子受体2(HER-2)并调节其下游PI3K/AKT信号通路介导乳腺癌的增殖、迁移、侵袭和愈合功能的分子机制。方法通过qPCR和Western blotting法评估miR-877-3p和HER-2在正常乳腺上皮细胞和乳腺癌细胞中的表达。CCK-8、Transwell和愈合实验分析miR-877-3p在乳腺癌细胞中的增殖、迁移、侵袭和愈合功能,荧光素酶报告基因实验检测miR-877-3p和HER-2的靶向关系。Western blotting实验评估miR-877-3p靶向HER-2及其下游PI3K/AKT信号通路蛋白的表达水平。结果 miR-877-3p的表达与乳腺癌细胞中HER-2呈负相关;miR-877-3p抑制乳腺癌细胞增殖、迁移、侵袭和愈合功能;HER-2是miR-877-3p的直接靶标;miR-877-3p靶向HER-2调控PI3K/AKT信号通路。结论 miR-877-3p靶向HER-2/PI3K/AKT信号通路介导乳腺癌增殖、迁移和侵袭。     

PI3K/AKT/FOXO1信号通路参与复方中药CFF-1诱导的前列腺癌细胞凋亡和周期阻滞

目的:研究复方中药CFF-1诱导前列腺癌细胞的凋亡作用及其相关分子机制的探讨。方法:通过形态学观察、噻唑蓝(MTT)比色实验、CCK-8实验测定前列腺癌细胞的存活能力;采用DAPI染色法测定细胞核凝缩破裂;运用Annexin V-FITC/PI双染流式细胞术测定前列腺癌细胞的凋亡率。再通过PI单染流式细胞术测定前列腺癌细胞的周期变化;以及采用蛋白质免疫印迹实验检测PI3K/AKT/FOXO1信号通路以及其下游凋亡相关蛋白和周期相关蛋白的表达。结果:复方中药CFF-1使前列腺癌细胞周期阻滞在G1期,并呈浓度依赖性降低细胞的存活能力、增加细胞核凝缩破裂以及核小体的形成,显著提高前列腺癌细胞的凋亡率。在分子机制上,CFF-1呈现浓度依赖性下调PI3K/AKT活性,降低FOXO1磷酸化水平,进而上调FOXO1的转录活性,最终影响凋亡相关基因和周期相关基因的表达。结论:CFF-1对前列腺癌细胞的生长有显著的抑制作用,并且通过PI3K/AKT/FOXO1信号通路诱导前列腺癌细胞周期阻滞并发生凋亡,对治疗前列腺癌具有潜在的临床应用价值。     

siRNA干扰YKL-40对乳腺癌增殖能力影响的实验研究

目的:探究YKL-40与乳腺癌的增殖能力的关系及其机制。方法:采用免疫荧光检测乳腺癌MCF-7细胞YKL-40的基础表达情况。荧光显微镜观察转染率,Real-time PCR筛选沉默效果最强的YKL-40 siRNA。Western blot检测PI3K/AKT通路相关蛋白PI3K、P-PI3K、AKT和P-AKT的表达水平,同时MTT和流式细胞仪分别验证YKL-40 siRNA处理的人乳腺癌MCF-7细胞,24、48和72 h各组细胞增殖能力和细胞周期的差异。结果:MCF-7细胞可表达YKL-40蛋白,主要定位于细胞质。Real-time PCR显示siRNA01、siRNA02、siRNA03组较NC组YKL-40基因沉默效果显著,其中以siRNA02沉默效果最强(P<0.01)。Western blot可见实验组较对照组总的PI3K和AKT保持不变,而P-PI3K、P-AKT表达量下降(P<0.05)。实验组较对照组G1期细胞增多(P<0.01),而S期细胞减少(P<0.01)。MTT显示实验组较对照组增值能力下降(P<0.01)。结论:乳腺癌中YKL-40可作为PI3K/AKT信号通路上游调控因子并影响细胞周期的进程,进而调节乳腺癌的增殖能力,提示YKL-40对于乳腺癌的治疗可能是一个重要靶点。     

IGF-1R抑制剂NVP-AEW541在肾上腺皮质癌SW13细胞系中的作用

目的通过细胞实验,探寻IGF-1R抑制剂NVP-AEW541阻断IGFR信号通路的激活,评价其对SW13细胞增殖、凋亡的影响情况。方法通过MTT试验观察细胞增殖,通过流式细胞仪检测细胞凋亡的改变,通过Western blot检测IGFR下游信号通路成员ERK和mTOR的表达情况。结果 NVP-AEW541可以呈浓度-时间依赖性抑制细胞增殖、呈浓度依赖性促进细胞早期凋亡和晚期坏死,并下调p-AKT的表达水平,而不影响mTOR的磷酸化水平和RAS/RAF/ERK信号传导通路。结论 IGF-1R抑制剂NVP-AEW541可以通过下调AKT的磷酸化水平,从而抑制细胞增殖、促进细胞凋亡,具有潜在的抗肿瘤作用。     

microRNA-124对胃癌细胞增殖与凋亡的影响及其与PI3K/Akt信号通路的关系

背景与目的:研究显示,microRNA-124(miR-124)在多种肿瘤中发挥抑癌基因的功能,并且在胃癌细胞及组织中表达下调,在胃癌的发生发展中发挥重要调控作用。本研究探讨miR-124对人胃癌细胞增殖、凋亡的影响及其与PI3K/Akt信号通路的关系。方法:用qRT-PCR检测人胃癌细胞系MGC803、AGS、MNK-45、SGC-7901和人正常胃黏膜上皮细胞GES-1中miR-124的表达。用miR-124模拟物(miR-124模拟物组)及miR-124阴性对照序列(阴性对照组)分别转染至MGC803细胞后,用CCK-8法及细胞克隆实验检测MGC803细胞增殖情况,流式细胞术检测细胞凋亡,Western blot检测PI3K、Akt、p-PI3K和p-Akt蛋白水平,qRT-PCR检测PI3K和Akt mRNA 表达。结果:与人正常胃黏膜上皮细胞GES-1比较,miR-124在各胃癌细胞中的表达均明显降低(均P0.05)。与阴性对照组比较,miR-124模拟物组转染后的OD450值与细胞克隆形成数均明显降低(P0.05);细胞凋亡率明显增加(P0.05);PI3K/Akt信号通路中关键分子PI3K、Akt、p-PI3K和p-Akt蛋白水平明显降低(均P0.05),PI3K和Akt基因表达水平也明显降低(均P0.01)。结论:miR-124表达的下调可促进胃癌细胞的增殖、抑制其凋亡,该作用机制可能与PI3K/Akt信号通路活化有关。