Ⅺ型胶原α1蛋白调节蛋白激酶通路促进人肺腺癌原代细胞迁移和侵袭

目的探讨Ⅺ型胶原α1蛋白(COL11A1)在肺腺癌迁移和侵袭中的作用和机制。方法采用2020年9至11月贵州医科大学附属医院收治的4例肺腺癌患者手术病理组织, 经免疫组织化学方法鉴定肺腺癌组织及癌旁组织并行转录组测序, 使用TCGA和GTEx数据库行单基因预后分析。用Western blot法检测肺腺癌组织和癌旁组织中COL11A1基因表达水平。提取及培养人肺腺癌原代细胞。COL11A1 siRNA转染人肺腺癌原代细胞后转录组测序, 差异基因做KEGG富集分析, 分析差异基因富集的通路, Western blot法检测该通路各关键位点蛋白表达及磷酸化水平变化, 划痕愈合实验检测细胞迁移、CCK8法检测细胞增殖、Transwell检测侵袭能力。结果肺腺癌组织转录测序筛选差异表达较高的10个基因, 单基因预后分析发现COL11A1基因表达水平与生存率相关(P<0.001);Western blot法检发现COL11A1在肺腺癌组织中表达较癌旁组织高(P<0.001);COL11A1 siRNA转染人肺腺癌原代细胞后转录组测序发现差异基因集中在PI3K-akt通路上, Weste...     

MAGEA4在非小细胞肺癌中的表达以及与患者预后的关系

目的探讨MAGEA4基因在非小细胞肺癌(NSCLC)患者中的表达、相关生物学功能及其与患者生存期的关系。方法检索肿瘤基因表达谱数据库(TCGA)中MAGEA4基因在NSCLC患者癌组织和癌旁组织中的表达情况;应用STRING数据构建MAGEA4基因编码蛋白-蛋白相互作用网络,并对网络中的蛋白进行基因本体论(GO)和KEGG信号通路富集;应用linkedomics在线分析软件,分析TCGA数据中与MAGEA4正负相关表达基因。同时回顾性分析我院手术治疗的68例NSCLC患者组织标本,采用免疫组织化学法(IHC)检测患者癌和癌旁组织中MAGEA4蛋白表达水平并分析其与患者临床病理特征的关系,对前述生物信息分析结果进行验证。结果 MAGEA4基因mRNA在NSCLC患者癌组织中的表达水平明显高于癌旁组织(P0.05);与MAGEA4蛋白相互作用网络中,区域聚类指数为0.90,蛋白相互作用网络富集明显(P0.05);与MAGEA4正相关表达最为显著的基因为MAGEA410(r=0.80,P0.05),而负相关表达最为显著的基因为DE4D (r=-0.37,P0.05);功能富集分析显示,MAGEA4生物学过程、细胞成分及分子功能分别主要富集于磷脂酰肌醇3激酶结合、细胞粘附的蛋白质复合物和核苷酸受体活性;KEGG信号通路富集显示,MAGEA4及相关共表达基因主要富集于Notch信号通路、维生素代谢信号通路和DNA复制相关信号通路等。生存分析显示,MAGEA4基因mRNA高表NSCLC患者总生存低于低表达患者(HR=1.3,95%CI:1.04～3.21,P0.05);而高低表达组无疾病进展生存无统计学差异(HR=0.82,95%CI:0.36～1.94,P0.05);IHC分析显示,MAGEA4蛋白表达水平与NSCLC患者肿瘤分化程度(P0.05)和淋巴结转移(P0.05)存在相关性,MAGEA4蛋白高表达者肿瘤分化程度较低,淋巴结转移率较高。结论 MAGEA4在NSCLC癌组织中表达明显增强,MAGEA4高表达与患者的预后不良有关。抑制MAGEA4基因表达有望成为NSCLC治疗的新靶点。     

肺癌患者癌旁组织中上皮-间质转变相关蛋白表达对其预后的影响

目的探讨肺癌患者癌旁组织中上皮-间质转变(EMT)相关蛋白表达对其预后的影响。方法采用免疫组化法检测81例肺癌患者癌组织和配对癌旁组织中的EMT相关蛋白(E-cadherin、β-catenin和Vimentin),观察E-cadherin、β-catenin和Vimentin在癌组织和癌旁组织中表达差异,并比较癌旁组织中E-cadherin、β-catenin和Vimentin表达差异下患者的预后情况,以患者的病理资料和EMT相关蛋白表达差异纳入Cox回归模型,预后因子采用多因素分析。结果 (1)肺癌组织中E-cadherin和β-catenin阳性表达率(49.38%和14.81%)明显低于癌旁组织(72.84%和51.85%),而Vimentin阳性表达率(55.56%)明显高于癌旁组织(23.46%)(均P<0.05)。(2)癌旁组织中E-cadherin阳性、β-catenin阳性和Vimentin阴性患者预后较E-cadherin阴性、β-catenin阴性和Vimentin阳性患者预后好(P<0.05)。(3)Cox回归分析发现临床分期、肿瘤分期、EMT-L和肿瘤分化程度是独立的风险预后因子。结论 EMT相关蛋白在癌旁组织中的表达异常对肺癌患者的预后有一定的影响,在癌症早期阶段及癌旁组织未发生明显组织形态学异常时,EMT相关蛋白的检测对患者的预后情况分析具有一定的参考价值。     

Western印迹检测人肾细胞癌中NF-κB信号通路分子蛋白的表达水平

目的应用Western印迹方法检测人肾细胞癌组织及癌旁组织中NF-κB信号通路蛋白表达,探究NF-κB信号通路与人肾细胞癌之间的可能关系。方法手术获得3对人肾细胞癌组织标本以及相应的癌旁组织标本,利用Western印迹方法检测人肾细胞组织以及相应癌旁组织中NF-κB信号通路蛋白p-IκB、NF-κB P65以及NF-κB P50表达水平。结果与相应癌旁组织比较,人肾细胞癌组织中NF-κB信号通路蛋白IκBa表达水平明显下降,而NF-κB信号通路蛋白NF-κB P65和NF-κB P50表达水平明显升高。结论人肾细胞癌的发生可能与NF-κB信号通路存在一定的相关性。     

Western印迹检测人肾细胞癌中NF-KB信号通路分子蛋白的表达水平

目的 应用Western印迹方法检测人肾细胞癌组织及癌旁组织中NF-κB信号通路蛋白表达,探究NF-κB信号通路与人肾细胞癌之间的可能关系.方法 手术获得3对人肾细胞癌组织标本以及相应的癌旁组织标本,利用Western印迹方法检测人肾细胞组织以及相应癌旁组织中NF-κB信号通路蛋白p-IκB、NF-κB P65以及NF-κB P50表达水平.结果 与相应癌旁组织比较,人肾细胞癌组织中NF-κB信号通路蛋白IκBa表达水平明显下降,而NF-κB信号通路蛋白NF-κB P65和NF-κB P50表达水平明显升高.结论人肾细胞癌的发生可能与NF-κB信号通路存在一定的相关性.     

基于癌症基因组图谱数据库构建肝细胞癌相关miRNA-mRNA调控网络

目的 探讨肝细胞癌(HCC)发病机制,为HCC的诊断和临床治疗提供依据。方法 基于癌症基因组图谱数据库,鉴定HCC样本与癌旁组织样本之间差异表达的miRNA与mRNA。通过miRDB、TargetScan数据库预测差异表达miRNA的靶基因,并与差异mRNA取交集确定目标基因。使用FunRich软件预测在HCC差异表达miRNA中的潜在转录因子。利用Bioconductor中的clusterProfiler包进行功能注释和途径富集分析。通过STRING数据库构建了蛋白质-蛋白质相互作用网络,对前20个枢纽基因进行表达验证和生存分析。结果 对375例HCC样本、50例癌旁样本进行差异miRNA分析,共鉴定出300个差异表达的miRNA。对374例HCC样本、50例癌旁样本进行差异mRNA分析,共鉴定出1 106个差异表达的mRNA。分别在上调的和下调的miRNA中选择20个差异表达最显著的miRNA预测其靶基因。对131个候选基因进行功能富集分析,结果显示主要与缬氨酸、亮氨酸和异亮氨酸降解,碳代谢以及催乳素信号通路等途径有关。结论 在肝细胞癌中异常表达的miRNA-mRNA通路可能成为肝...     

CDKN2A基因在非小细胞肺癌中表达及生物学功能生物信息分析

目的探讨细胞周期蛋白依赖激酶抑制剂2A(CDKN2A)在人非小细胞肺癌(NSCLC)中表达、生物学功能和患者预后的关系。方法应用生物信息分析技术探讨癌症基因组图谱数据库(TCGA)中CDKN2A在NSCLC患者肿瘤组织和正常肺组织中的表达情况。采用蛋白-蛋白相互作用(PPI)数据库STRING分析CDKN2A编码蛋白作用网络,并进行聚类分析。采用基因本体论(Gene Ontology,GO)和京都基因与基因组百科全书(Kyoto Encyclopedia of Genes and Genomes,KEEG)富集CDKN2A和相关蛋白的生物学功能和信号通路。同时分析CDKN2A高低表达与NSCLC患者的无疾病进展生存和总生存的关系。同时采用免疫组化检测62例NSCLC患者癌组织和癌旁组织中CDKN2A表达情况分析CDKN2A阳性和阴性表达组患者生存期是否存在差异。结果CDKN2A基因在多种实体肿瘤包括乳腺癌、食管癌、肠癌等中表达水平明显上调。在NSCLC患者癌组织中CDKN2A表达水平明显高于正常肺组织(P<0.05)。而CDKN2A表达水平与肿瘤分期无明显相关性(P>0.05)。CDKN2A相关蛋白PPI网络中,相互作用关系指数为24.8,区域聚类指数为0.74,相互作用蛋白呈现明显的聚类表达(P<0.05)。CDKN2A编码蛋白主要定位在细胞核、细胞膜和囊泡;分子功能主要为蛋白结合、核蛋白结合和铁结合。而生物学过程主要集中于代谢、细胞增殖及对刺激的反应。KEGG信号通路主要为细胞周期调控、DNA蛋白结合以及Wnt信号通路。CDKN2A高表达NSCLC患者总生存期明显低于低表达组,且差异有统计学意义(HR=1.3,P=0.02),而CDKN2A高低表达组间NSCLC患者无疾病进展生存无统计学差异(HR=0.94,P=0.59)。62例NSCLC患者癌组织中CDKN2A阳性表达11例(17.7)而对应癌旁组织中阳性表达49例(79.0%),癌组织中CDKN2A阳性标的率显著高于癌旁组织(P<0.05)。而CDKN2A阳性组与阴性组患者生存期差异无统计学意义(HR=0.99,P>0.05)。结论CDKN2A在NSCLC患者癌组织中表达升高,并与患者预后不良有关,有望成为NSCLC预后和治疗的靶点。     

CCNA2基因在肝细胞癌中的表达、信号通路和预后关系生物信息分析及验证

背景肝细胞癌(hepatocellular carcinoma, HCC)是消化系统常见恶性肿瘤,预后较差.本文拟采用生物信息学方法探讨CCNA2基因在HCC中的表达情况,及其作为HCC患者预后分子标志物的可行性.同时,采用免疫组织化学法对CCNA2生物信息分析结果进行验证.目的探讨CCNA2在HCC中的表达,相关信号通路及与患者预后关系.方法应用生物信息分析工具比对TCGA数据库中CCNA2基因m RNA在HCC组织和癌旁组织中表达水平;在STRING数据库中构建CCNA2蛋白-蛋白相互作用网络,并对相关蛋白功能和KEGG信号通路进行富集.根据CCNA2表达水平分为高低表达组,比较CCNA2高低组患者总生存(overall survival, OS)和无疾病进展生存(disease free survival, DFS)是否不同.回顾性分析72例手术治疗的HCC患者,采用免疫组织化学法检测患者癌组织中CCNA2蛋白表达水平与患者临床病理特征的关系,对生物信息分析结果进行验证.结果在HCC中, CCNA2中m RNA表达水平明显高于癌旁正常肝组织;与CCNA2蛋白相互作用较为紧密的蛋白10个,蛋白间相互作用关系edge=50,区域聚类指数为0.931,与CCNA2蛋白相互作用较为紧密的10蛋白相互作用网络富集显著(P 0.05); TOP2基因m RNA与CCNA2正向相关表达(r=0.85, P 0.05),而CCL14基因与CCNA2负相关表达(r=-0.54, P 0.05).CCNA2基因相关信号通路主要富集于细胞周期、病毒致癌、乙型肝炎、p53信号通路和PI3K-Akt信号通路等.预后分析提示CCNA2基因m RNA高表达患者OS(HR=1.7, P=0.0037)和DFS低于低表达组(HR=1.6, P=0.0037).免疫组化显示CCNA2蛋白在HCC患者癌组织中的高表达率为34.7%(25/72). CCNA2蛋白高表达与HCC患者肿瘤直径(P0.05)、DC浸润(P 0.05)、术后2年复发/转移(P 0.05)有关.结论CCNA2基因在HCC患者癌组织中表达水平上调,并可作为HCC预后不良的分子标记物.     

沉默lncRNA TPT1-AS1对非小细胞肺癌生物学行为的影响及机制研究

目的研究长链非编码RNA(lncRNA)TPT1-AS1在非小细胞肺癌组织中的表达及对沉默lncRNA TPT1-AS1非小细胞肺癌生物学行为的影响及机制。方法检测非小细胞肺癌组织和癌旁组织lncRNA TPT1-AS1表达情况,做细胞培养及lncRNA TPT1-AS1转染,分为空白组、过表达组、沉默组,过表达组转染si-TPT1-AS1-NC质粒,沉默组转染si-TPT1-AS1质粒,空白组细胞不做任何处理,转染24h后鉴定转染效率。检测各组细胞增殖、凋亡、迁移、侵袭及PTEN-PI3K-AKT信号通路蛋白表达情况。结果与癌旁组织相比,癌组织TPT1-AS1 mRNA表达量升高(P0.05)。与空白组相比,过表达组TPT1-AS1 mRNA表达量升高,沉默组TPT1-AS1 mRNA表达量降低(P0.05),说明转染成功。与过表达组相比,沉默组各时间点细胞增殖率、细胞迁移数、侵袭数、p-PI3K、p-AKT、MMP-2、MMP-9、Bcl-2蛋白表达量降低,凋亡率、PTEN、Bax蛋白表达量升高(P0.05)。结论 lncRNA TPT1-AS1在非小细胞肺癌组织高表达,沉默lncRNA TPT1-AS1可抑制肺癌细胞增殖、迁移、侵袭,促进凋亡,其机制可能与调控PTEN-PI3K-AKT信号通路相关。     

核苷二磷酸激酶等蛋白在人胰腺癌与癌旁组织中的差异表达

目的应用比较蛋白质组学方法研究人胰腺导管腺癌组织和癌旁组织之间差异表达的蛋白质。方法利用双向凝胶电泳（2-DE）对8例胰腺导管腺癌组织和癌旁组织的总蛋白进行分离，两组间差异蛋白质点用质谱和数据库检索鉴定。利用蛋白质印迹分析和免疫组织化学法检测差异蛋白在胰腺癌和癌旁组织的表达。结果鉴定出30个差异表达蛋白，包括亲环素A、过氧化氧化还原蛋白1、14-3-3sigma、AnnexinII、热休克蛋白27、核苷二磷酸激酶（NDPK）等。差异表达蛋白NDPK在35例胰腺癌组织表达率为77．1％，而配对癌旁组织为28．6％。结论2-DE为基础的蛋白质组学技术是研究肿瘤的一种重要手段。NDPK等差异表达蛋白可能是潜在的胰腺癌诊断标记物。     

TMPRSS4在非小细胞肺癌中的表达及临床意义

目的通过观察上皮细胞-间质转型(EMT)通路相关蛋白跨膜丝氨酸蛋白酶TMPRSS4(transmembrane protease serine 4,TMPRSS4)在非小细胞肺癌患者手术切除的肺癌组织、癌旁组织中的表达,探讨TMPRSS4蛋白水平表达与非小细胞肺癌的临床关系。方法应用免疫组织化学SP法检测45例非小细胞肺癌及其配对癌旁组织中TMPRSS4蛋白的表达情况。结果非小细胞肺癌组织中TMPRSS4蛋白阳性表达率为60.00%,癌旁组织中TMPRSS4阳性表达率为4.44%;癌组织中TMPRSS4蛋白阳性表达率明显高于癌旁正常肺组织(χ2=29.31,P0.01)。TMPRSS4蛋白表达与非小细胞肺癌淋巴结转移、临床分期相关(P0.05)。结论 TMPRSS4在非小细胞肺癌中的表达与肿瘤发生、转移密切相关,高表达的TMPRSS4蛋白提示肺癌有转移风险更高及预后更差的可能,TMPRSS4可能成为非小细胞肺癌中一个新的研究方向。     

肺癌组织中ERO1L、TNFRSF4的表达与患者免疫功能、炎症反应因子及预后的关系

目的 探究肺癌组织中内质网氧化物蛋白(ERO1L)、肿瘤坏死因子受体4(TNFRSF4)的表达与肺癌患者免疫功能、炎症反应因子及其预后的关系。方法 选取2018年7月～2020年7月于本院进行手术治疗的108例肺癌患者,收集术中留取的癌组织和癌旁组织标本。采用qRT-PCR检测ERO1L和TNFRSF4的mRNA相对表达量;使用免疫组织化学法检测ERO1L和TNFRSF4蛋白表达情况,分析二者表达水平与患者临床病理特征的关系,采用Kaplan-Meier法分析ERO1L、TNFRSF4蛋白表达水平与患者预后的关系。肺癌患者预后生存率的影响因素采用Cox多因素分析。结果 肺癌患者癌组织中ERO1L mRNA表达水平显著高于癌旁组织,TNFRSF4 mRNA表达水平显著低于癌旁组织(P<0.05);肺癌组织中ERO1L蛋白高表达率显著高于癌旁组织,TNFRSF4蛋白高表达率显著低于癌旁组织(P<0.05)。ERO1L蛋白高表达组患者CD3⁺、CD4⁺显著低于低表达组(P<0.05),IL-1β、IL-6、TNF-α显著高于低表达...     

Six1基因在肺癌组织表达水平及RNA干扰抑制其表达后对肺癌细胞生物学特性的影响

目的探讨Six1基因在肺癌组织表达及抑制其表达后对肺癌细胞增殖凋亡的影响。方法提取肺癌及癌旁组织蛋白,Western印迹检测Six1的表达; Six1-siRNA转染人肺癌A549细胞,分为空白组和阴性对照组(NC组)、Six1-siRNA组,转染48 h后通过Western印迹检测各组细胞Six1的表达; CCK8检测Six1-siRNA转染A549细胞24～72 h的细胞增殖;流式细胞术检测转染48 h的细胞凋亡率; Western印迹检测增殖相关蛋白细胞增殖核抗原(PCNA)、B细胞淋巴瘤/白血病-2(Bcl-2)家族Bcl-2相关X蛋白(Bax)及Notch1信号通路Notch1和Hes1的蛋白表达。结果 Six1在肺癌组织中的表达显著高于癌旁组织(P<0. 05); Six1-siRNA转染能明显降低A549细胞Six1的表达;与空白组比较,Six1-siRNA组细胞24～72 h的细胞增殖均显著降低,在48 h的细胞凋亡率显著升高,PCNA、Notch1和Hes1蛋白表达均显著降低,Bax蛋白表达显著升高(P<0. 05)。结论 Six1在肺癌组织中高表达,通过RNA干扰抑制其表达可通过下调Notch1信号通路降低肺癌细胞增殖及诱导细胞凋亡,对细胞增殖凋亡的影响方式是下调PCNA和上调Bax蛋白表达。     

早期肺鳞癌相关蛋白的筛选及其表达验证

目的应用蛋白质组学技术筛选早期肺癌癌变相关蛋白。方法利用双向凝胶电泳方法分离人早期肺鳞癌组织和相应癌旁正常组织总蛋白,选择差异蛋白质点进行质谱分析。免疫组织化学法验证部分差异蛋白质的表达差异。结果用DeCyder软件DIA模块分析显示,每块2-DE胶分离近1470左右个蛋白质点,再经过BVA模块分析,找出在9张图像中均出现,差异有统计学意义(P0.05)、两组间蛋白含量比值在1.5倍以上的差异性蛋白质点24个,成功鉴定14个。选择在癌组织中高表达的差异蛋白点进行质谱分析,最终鉴定为AnnexinⅡ、Cathcpsin D等蛋白质。免疫组织化学检测结果显示,AnnexinⅡ、Cathcpsin D蛋白在肺鳞癌组织中的阳性表达率均显著增高(P0.05)。结论蛋白质组学方法是一种应用于初步筛选早期肺癌相关蛋白的有效方法 ,所鉴定的蛋白为进一步筛选用于肺癌早期诊断及其治疗的分子标志物奠定了前期基础。     

基于非依赖性全扫描采集蛋白组学技术初步研究继发性细粒棘球蚴病小鼠肝脏差异表达蛋白

目的　寻找细粒棘球蚴病（CE）小鼠肝脏差异表达蛋白,为细粒棘球蚴病靶向治疗药物研发提供借鉴。方法　8只6～8周龄昆明种雌性小鼠随机分成CE组和对照组,CE组小鼠经腹腔注射接种约2 000个细粒棘球绦虫原头节,对照组小鼠注射等量生理盐水,饲养350 d后处死两组小鼠。收集CE组小鼠病灶肝脏（病灶组）、病灶旁肝脏组织（病旁组）及对照组小鼠肝脏组织（对照组）,采用非依赖性全扫描采集（data independent acquisition,DIA）蛋白组学技术比较病灶组与对照组、病旁组与对照组差异表达蛋白,并进行蛋白基因本体论（GO）富集分析、京都基因和基因组百科全书（KEGG）通路分析。结果　病灶组与对照组、病旁组与对照组间同时存在26种差异表达蛋白,其中8种上调表达蛋白、18种下调表达蛋白。GO功能富集注释分析结果显示,这些差异表达蛋白主要富集在内质网膜等细胞内成分中,通过氧化还原酶实现催化等分子功能,参与氧酸代谢、羟基酸代谢等生物代谢过程。KEGG通路富集分析结果显示,酰基辅酶A氧化酶1(Acox1)参与脂肪酸氧化过程中的初级胆汁酸生物合成,影响过氧化物酶体信号通路;肝脏型脂肪酸结合蛋白（Fabp1）通过脂肪细胞因子信号通路参与脂肪酸转运,影响脂质代谢所参与的过氧化物酶体增殖激活受体（PPAR）信号通路。结论　与正常小鼠相比,CE小鼠肝脏组织蛋白质表达具有差异性,其中部分差异表达蛋白可能与CE潜在药物靶点相关。     

非小细胞肺癌Bcl-2基因蛋白表达及其与细胞凋亡和增殖的关系

目的探讨非小细胞肺癌Bcl-2蛋白表达与细胞凋亡和增殖的关系。方法采用SAB免疫组化法检测43例非小细胞肺癌及20例癌旁正常肺组织石蜡包埋标本Bcl-2蛋白及增殖细胞核抗原（PCNA）表达；用TUNEL法检测细胞凋亡。结果肺癌组织Bcl-2蛋白的表达显著高于癌旁肺组织，P〈0．05；肺癌组织中凋亡指数和增殖指数均明显高于癌旁正常肺组织，P〈0．01，Bcl-2表达阳性的肺癌组织细胞凋亡指数明显低于Bcl-2表达阴性组，P〈0．05；高细胞凋亡、增殖指数提示肺癌预后不良，P〈0．05。结论肺癌存在Bcl-2表达上调，Bcl-2异常表达在肺癌发生过程中可能起重要作用。     

JAK2/STAT3信号通路在肝内胆管细胞癌中的表达及预后

目的 探讨Janus激酶2/信号转导子与转录激活子(JAK2/STAT)3信号通路在人胆管细胞癌(ICC)组织中的表达和临床特征意义。方法 采用免疫组织化学技术检测80例ICC组织及其相应的癌旁组织中JAK2和STAT3中的表达情况，并分析两者表达与ICC患者临床病理参数之间的关系。结果 ICC组织中JAK2与STAT3蛋白的阳性表达率均高于相应癌旁组织，两者表达呈明显正相关。JAK2与STAT3与肝硬化、胆管癌栓、血管侵犯、肿瘤分化、临床分期密切相关(均P<0.05);Kaplan-Meier分析表明高表达JAK2与STAT3的患者生存率及生存期更短，预后更差；Cox模型分析表明，JAK2与STAT3是影响ICC患者生存期的独立预后因素(均P<0.05)。结论 JAK2/STAT3信号通路在ICC组织中高表达，是反映ICC发生发展的重要生物学指标。     

核苷二磷酸激酶等蛋白在人胰腺癌与癌旁组织中的差异表达

目的 应用比较蛋白质组学方法研究人胰腺导管腺癌组织和癌帝组织之间差异的蛋白质.方法利用双向凝胶电泳(2-DE)对8例胰腺导管腺癌组织和癌旁组织的总蛋白进行分离,两组间差异蛋白质点用质谱和数据库检索鉴定利用蛋白质印迹分析和免疫组织化学法检测差异蛋白在胰腺癌和癌旁组织的表达.结果 鉴定出30个差异表达蛋白,包括亲环素A、过氧化氧化还原蛋白1、14-3-3 sigma、Annexin Ⅱ、热休克蛋白27、核苷二磷酸激酶(NDPD)等.差异表达蛋白NDPK在35例胰腺癌组织表达率为77.1%,而配对癌旁组织为28.6%.结论 2-DE为基础的蛋白质学技术是研究肿瘤的一种重要手段.NDPK等差异表达蛋白可能是潜在的胰腺癌诊断标记物.     

miR-152-3 p靶蛋白差异表达及调控机制在肝癌复发中的作用

目的比较肝癌复发与预后良好患者癌组织的蛋白表达,分析miR-152-3p相关的靶蛋白差异及调控机制,探讨miR-152-3p在肝癌复发中的作用。方法应用TMT标记全蛋白质组学测序方法和RT-PCR分别检测肝癌切除术后2年复发(n=6)与5年预后良好(n=6)患者肝癌组织的蛋白质表达和miR-152-3p的表达水平;联合六大数据库检索分析miR-152-3p靶基因,并运用Gene Ontology、DAVID和REACTOME数据库进行靶基因筛选、富集注释和信号转导通路富集分析;将筛选的miR-152-3p靶基因进行基因突变频率和生存曲线分析,验证miR-152-3p靶基因在肝癌复发中的作用。计量资料2组间比较采用独立样本t检验。肝脏组织有关基因生存率分析采用Kaplan-Meier分析。结果肝癌切除术后预后良好患者癌组织的miR-152-3p转录表达水平显著高于复发患者癌组织的水平(P<0.05)。蛋白测序结果显示,预后良好患者与复发患者的癌组织存在365个差异表达蛋白,联合肝癌复发数据库分析显示,其中有17个蛋白受miR-152-3p调控。进一步的信号通路分析发现,17个受miR-152-3p调控的靶基因其功能集中于线粒体核糖体翻译调控;多重富集发现靶基因与线粒体呼吸链复合体密切关系的蛋白6个,分别为AKAP1、FOXRED1、MRPL28、MRPL50、SHC1、STAU1。基因突变频率及生存曲线分析发现,线粒体呼吸链相关靶蛋白的功能缺失或减弱会严重影响患者的生存率。结论miR-152-3p在HCC切除术后预后良好和复发患者的癌组织表达差异显著,miR-152-3p在肝癌复发中作用机制可能是通过调控靶基因AKAP1、FOXRED1、MRPL28、MRPL50、SHC1、STAU1作用于线粒体呼吸链,影响细胞氧化呼吸功能导致肝癌复发。