脊柱骨折合并脊髓损伤患者血清HMGB1、NF-κB表达水平及其作为预后情况预测因素的临床意义

目的观察脊柱骨折合并脊髓损伤患者血清HMGB1、NF-κB表达水平并分析其作为预后情况预测因素的临床意义。方法观察组纳入自2017-01—2019-01采用椎管减压术治疗的93例脊柱骨折合并脊髓损伤,同期采用椎管减压术治疗的93例单纯脊柱骨折纳入对照组。观察组中55例ASIA神经功能等级高于术前(预后良好组),38例ASIA神经功能等级等于或低于术前(预后不良组)。比较观察组与对照组血清HMGB1、NF-κB表达水平,比较预后良好组与预后不良组的性别、年龄、致伤原因、是否合并骨质疏松、是否有骨折史、是否多节段脊髓损伤、椎管侵占率、受伤至使用激素类药物时间、HMGB1表达水平、NF-κB表达水平方面的差异。评价血清HMGB1、NF-κB水平预测脊柱骨折合并脊髓损伤患者预后情况的价值。结果 186例均顺利完成手术并完成血液检测。观察组HMGB1、NF-κB表达水平较对照组高,差异有统计学意义(P0.05)。椎管侵占率≥50%、受伤至使用激素类药物时间≥8 h、HMGB1与NF-κB表达水平较高是脊柱骨折合并脊髓损伤预后不良的危险因素(P0.05)。受试者工作特征曲线显示血清HMGB1与NF-κB表达水平联合预测脊柱骨折合并脊髓损伤患者预后情况的AUC值0.917(95%CI:0.861～0.974),约登指数0.776,敏感度92.1%,特异性85.5%。结论 HMGB1、NF-κB在脊柱骨折合并脊髓损伤患者的血清中表达水平较高,椎管侵占率≥50%、受伤至使用激素类药物时间≥8 h、HMGB1与NF-κB表达水平较高是脊柱骨折合并脊髓损伤预后不良的危险因素,联合HMGB1、NF-κB表达水平预测脊柱骨折合并脊髓损伤患者预后情况的价值较高。     

TLR4和NF-κB在大鼠肾缺血再灌注损伤中的表达及意义

目的：观察大鼠肾缺血再灌注损伤后Toll样受体4（TLR4）和核因子-κB（NF-kB）的表达变化及其关系.方法：将40只SD大鼠随机等分为假手术组（S组）和肾缺血再灌注损伤组（I/R组）,建立肾缺血再灌注模型.在肾缺血再灌注后24 h切取肾脏.采用免疫组织化学法观察TLR4蛋自及NF-κB蛋白在肾脏组织中的表达变化及其相关性 采用半定肇逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）检测两组肾组织中TLR4、NF-κB的mRNA水平表达变化.结果：TLR4蛋白在S组大鼠肾小管细胞中有少量表达,在I/R组24 h后肾组织中表达明显增加,与S组比较,差异有统计学意义（P〈0.05）.NF-κB P65蛋白在S组大鼠肾小管细胞胞浆和少量胞核中有表达.在I/R组24 h后肾小管细胞胞浆和胞核均可见NF-κB P65明显表达.差异有统计学意义（P〈0.01）.TLR4和NF-κB在肾缺血再灌注损伤组织中的表达具有明显的相关性.I/R组中的TLR4 mRNA、NF-κB mRNA表达均较S组上调,差异有统计学意义（P〈0.05）.结论：大鼠肾缺血冉灌注损伤后,肾组织TLR4和NF-κB P65的表达明显上调,且有明显的相关性.TLR4有可能通过激活NF-κB继而引起下游的炎症因子募集,介导肾缺血再灌注损伤.     

TLR4、NF-κB和AP-1在乳腺癌中的表达及其与临床病理特征的相关性研究

目的 探讨Toll 样受体4（TLR4）、核因子κB（NF-κB）和激活因子蛋白1（AP-1）在乳腺癌组织中的表达及其与临床病理参数的关系.方法 采用免疫组织化学方法 检测106 例乳腺癌组织中TLR4、NF-κB 和AP-1 的表达.分析三者与乳腺癌临床病理因素的关系,以及TLR4与NF-κB、AP-1 的相关性.结果 随着乳腺癌患者T 分期、N 分期、M 分期和临床分期的增加,乳腺癌组织TLR4、NF-κB 及AP-1 的表达均升高（P 均〈 0.05）.随着乳腺癌组织分化程度的降低,NF-κB 的表达升高（P 〈 0.05）.乳腺癌组织中TLR4 和AP-1 的表达呈正相关（P 〈 0.05）.结论 乳腺癌组织TLR4 高表达,激活AP-1 信号通路,促进癌细胞的增殖、浸润及转移,进而影响患者的预后.     

核因子-κB在狼疮肾炎肾组织中的表达及其意义

目的了解狼疮肾炎(LN)肾组织中核因子(NP)-κB的表达并探讨其与LN肾脏病理改变和肾功能损害的关系.方法以NF-κB亚基P65单抗为抗体,采用微波免疫组织化学染色(APAAP法)检测LN肾组织NF-κB表达,并进一步分析其与肾小球内C-myc蛋白表达、LN活动指数、肾脏病理和功能损害的关系.结果狼疮肾炎肾组织中NF-κB表达较正常肾组织显著增高,以WHOⅣ型为最显著.NF-κB在肾小球和肾小管均有表达,但小管表达更显著.LN肾组织NF-κB阳性细胞数与肾小球C-myc蛋白表达量、肾组织活动指数、肾脏病理改变和肾功能损害显著相关.结论NF-κB可能参与了LN的发病机制,肾组织中NF-κB的表达可作为反映狼疮肾组织活动病变和进行性肾损害的参考指标.     

HMGB1介导TLR4/NF⁃κB信号通路干预骨关节炎研究进展

骨关节炎(osteoarthritis, OA)作为临床常见老年退行性疾病，目前尚无有效治疗手段。研究发现OA是一种慢性低度炎性疾病。损伤相关分子模式HMGB1（high mobility group box-1）在OA病理过程中发挥中心分子作用。HMGB1与固有免疫模式识别受体TLR4(toll-like receptor 4, TLR4)结合后激活NF-κB信号通路导致OA软骨退变和滑膜炎等免疫炎症反应。通过综述HMGB1介导TLR4/NF-κB信号通路在OA发病机制中的作用，为靶向阻断HMGB1治疗OA提供理论依据和参考。     

拮抗Toll样受体4的表达对内毒素血症小鼠肾脏损伤的保护作用

目的观察拮抗Toll样受体4（TLR4）的表达对内毒素血症小鼠肾脏损伤的保护作用以及对细胞核因子-κB（NF-κB）p65的影响。 方法采用内毒素（LPS）诱导的小鼠急性肾功能衰竭模型,并应用TLR4单克隆抗体进行干预,观察TLR4单克隆抗体对内毒素血症小鼠的肾脏组织学、血清肌酐（Cr）、尿素氮（BUN）、胱抑素C、白细胞介素（IL）-1β、IL-6水平以及肾组织中TLR4及NF-κB水平的影响。 结果与模型组比较,TLR4单克隆抗体能够明显改善内毒素血症小鼠肾脏组织病理学损害;降低血清中Cr、BUN、胱抑素C、IL-β和IL-6水平（t = 7.20、7.86、9.99、8.79、3.92,P均< 0.05）,并且降低肾组织中TLR4及NF-κB p65水平（t = 20.94、11.21,P均< 0.05）。 结论TLR4单克隆抗体能够保护内毒素血症小鼠肾脏组织损伤,其作用机制可能与调节TLR4/NF-κB信号转导通路有关。     

右美托咪定对神经病理性痛大鼠脊髓Toll样受体4和NF-κB表达的影响

目的 评价右美托咪定对神经病理性痛大鼠脊髓Toll样受体4和NF-κB表达的影响.方法 健康成年雄性Wistar大鼠108只,6～8周龄,体重180 ～ 220 g,采用随机数字表法,将其分为3组(n=36):假手术组(S组)、神经病理性痛组(NP组)和右美托咪定组(D组).采用坐骨神经慢性压榨性损伤法制备神经病理性痛模型,D组于术后即刻开始至处死前1d腹腔注射右美托咪定50μg/kg,1次/d.S组和NP组以等容量生理盐水替代.于术前1d,术后3、7、14 d时测定机械痛阈和热痛阈,并于术后测定痛阈后处死,取L4-6脊髓组织,采用RT-PCR法测定TLR4 mRNA和NF-κB mRNA的表达,采用免疫组织化学法测定脊髓背角TLR4和NF-κB的表达水平.结果 与S组比较,NP组和D组机械痛阈和热痛阈降低,TLR4及其mRNA、NF-κB及其mRNA的表达上调(P＜0.05);与NP组比较,D组机械痛阈和热痛阈升高,TLR4及其mRNA、NF-κB及其mRNA的表达下调(P＜0.05).结论 右美托咪定减轻大鼠神经病理性痛的机制与抑制TLR4和NF-κB表达有关.     

TLR4-siRNA对高氧诱导人肺腺癌细胞株A549炎性因子分泌的影响

目的 评价Toll样受体4(TLR4)-小干扰RNA(siRNA)对高氧诱导人肺腺癌细胞株A549炎性因子分泌的影响.方法 人肺腺癌细胞株A549接种于培养板,培养24h后,采用随机数字表法,将其随机分为4组:对照组(C组)、高氧组(H组)、TLR4-siRNA转染组(TR组)和阴性siRNA转染组(NR组).TR组和NR组分别将TLR4-siRNA或阴性siRNA转染至细胞内.H组、TR组和NR组细胞置于独立培养小室中,通入95％ O2-5％ CO2的混合气体1 L/min 30 min制备高氧模型.采用RTPCR法检测TLR4 mRNA表达,采用流式细胞仪检测TLR4蛋白表达,采用Western bolt法检测NF-κB活性,采用ELISA法检测IL-6和IL-8的浓度.结果 与C组比较,H组和NR组TLR4 mRNA及其蛋白表达上调,NF-κB活性、IL-8和IL-6的浓度升高(P＜0.01),TR组TLR4 mRNA及其蛋白表达、NF-κB活性和IL-8、IL-6的浓度差异无统计学意义(P＞0.05);与H组比较,TR组TLR4 mRNA及其蛋白表达下调,NF-κB活性、IL-8和IL-6的浓度降低(P＜0.01),NR组TLR4mRNA及其蛋白表达、NF-κB活性和IL-8、IL-6的浓度差异无统计学意义(P＞0.05).结论 TLR4-siRNA可显著地抑制高氧诱导人肺腺癌细胞株A549炎性因子的分泌.     

盐酸戊乙奎醚预先给药对失血性休克大鼠急性肺损伤时TLR4 mRNA表达的影响

目的 探讨盐酸戊乙奎醚预先给药对失血性休克大鼠急性肺损伤时Toll样受体4(TLR4)mRNA表达的影响.方法 健康SD大鼠40只,体重200～250 g,随机分为5组(n=8):假手术组(S组)、失血性休克致急性肺损伤组(ALI组)和低、中、高剂量盐酸戊乙奎醚预先给药组(P1～3组).S组仅行动静脉穿刺,不放血,ALI组股动脉放血至35～45 mm Hg制备急性肺损伤模型,P1～3组分别于放血前30 min股静脉注射盐酸戊乙奎醚0.3、1.0、3.0 mg/kg,随后制备急性肺损伤模型.各组复苏后4 h时处死大鼠取肺,称重后计算肺湿干重比,检测TLR4 mRNA和NF-κB p65蛋白的表达水平,观察病理学结果.结果 与S组比较,ALI组和P1组TLR4 mRNA、NF-κB p65蛋白表达水平及肺湿干重比升高(P＜0.05或0.01),P2.3组差异无统计学意义(P＞0.05);与ALI组比较,P2,3组TLR4 mRNA、NF-κB p65蛋白表达水平及肺湿干重比降低(P＜0.05或0.01);P2组和P3组上述指标比较差异无统计学意义(P＞0.05).P2,3组肺组织病理学损伤程度较ALI组明显减轻.结论 盐酸戊乙奎醚预先给药可通过抑制肺组织TLR4 mRNA表达上调,进而降低NF-κB活性,从而减轻失血性休克诱发大鼠的急性肺损伤.     

HMGB1和NF-κB在肝内胆管结石相关胆管癌中的表达及意义

目的：探讨高迁移率族蛋白1（HMGB1）和NF-κB在肝内胆管结石相关肝内胆管癌组织中的表达及其临床意义。 方法：用免疫组化法检测40例肝内胆管结石相关肝内胆管癌组织（肿瘤组）和40例单纯肝内胆管结石慢性炎症胆管组织（炎症组）及30例正常胆管组织（正常组）中HMGB1与NF-κB的表达,比较各组两种蛋白表达的差异,并分析两种蛋白的表达与肝内胆管结石相关胆管癌患者临床病理特征和预后的关系。 结果：HMGB1与NF-κB在各组织中的表达强度差异均有统计学意义,两者均表现为肿瘤组>炎症组>正常组（均P<0.05）;HMGB1及NF-κB在胆管癌组织中的表达呈正相关（χ2=13.713,r=0.586,P<0.05）。HMGB1的表达与肝内胆管结石相关胆管癌患者肿瘤的分化程度、肿瘤浸润深度、淋巴结转移有关（均P<0.05）,而NF-κB的表达与各因素均无明显关系（均P>0.05）。肝内胆管结石相关肝内胆管癌患者中,HMGB1阳性者其生存率低于HMGB1阴性者（P<0.05）,而NF-κB表达与患者生存率无关（P>0.05）。 结论：HMGB1/NF-κB通路可能参与了肝内胆管结石相关肝内胆管癌的发生与发展,其中HMGB1的表达与肿瘤的恶性程度和患者的预后密切相关。     

利多卡因对LPS诱导大鼠腹腔巨噬细胞NF-κB活性的影响

目的 探讨利多卡因对LPS诱导大鼠腹腔巨噬细胞NF-κB活性的影响.方法 取wistar大鼠腹腔巨噬细胞,以2 × 106/ml的密度接种于12孔培养板,每孔1 ml.纯化处理后随机分为5组,每组10孔.正常对照组(C组)加入RPMI-1640培养液1 ml,L组加入含100 ng/ml LPS的RPMI1640培养液1 ml,LL1组、LL2组和LL3组分别加入含有2、20、200μg/ml利多卡因+100 ng/ml LPS的RPMI-1640培养液1 ml.孵育24 h后,收集上清液,测定高迁移率族蛋白B1(HMGB1)浓度;取细胞沉淀,测定HMGBl mRNA表达水平和NF-κB活性.结果 与C组比较,其他各组HMGB1浓度、HMGB1mRNA表达和NF-κB活性均升高(P＜0.05);与L组及LL1组比较,LL2组和LL3组上述指标降低(P＜0.05).LL3组HMGB1 mRNA表达水平低于LL2组(P＜0.05).结论 利多卡因可抑制LPS诱导大鼠腹腔巨噬细胞NF-κB活化,从而抑制HMGB1的合成与释放.     

TLR4/NF-κB信号通路在脊髓损伤中的作用

[目的]探讨TLR4/NF-κB信号通路在急性脊髓损伤发病机制中的作用。[方法] SD大鼠随机分为假手术组、损伤组和单唾液酸神经节苷酯组(monosialoganglioside, GM1组)。其中,前一组仅行假手术,后两组采用改良Allen法建立大鼠脊髓损伤模型。术后,GM1组给予静脉GM1,假手术组、损伤组静脉给予等量生理盐水。术后15 d处死动物,行RT-qPCR和Western-blot检测TLR4/NF-κB和炎性因子的mRNA和蛋白的表达。[结果]与假手术组相比,损伤组的TLR4/NF-κB通路和相关炎性因子和mRNA和蛋白表达均显著增加(P0.05)。与损伤组相比,GM1组的的TLR4/NF-κB通路和相关炎性因子和mRNA和蛋白表达显著下降(P0.05)。[结论] TLR4/NF-κB信号通路可能成为治疗继发性脊髓损伤新的作用靶点,GM1主要通过抑制TLR4/NF-κB信号通路而起到治疗脊髓损伤的作用。     

抑制高迁移率族蛋白B1减少大鼠脊髓损伤后星形胶质细胞基质金属蛋白酶-9表达的研究

目的研究抑制高迁移率族蛋白B1(HMGB1)对大鼠脊髓损伤(SCI)后星形胶质细胞(AS)基质金属蛋白酶-9(MMP-9)表达的作用及分子机制。方法改良Allen打击法制作Sprague-Dawley(SD)大鼠SCI模型, 使用丙酮酸乙酯(EP)或甘草甜素(GL)抑制HMGB1作用, 将大鼠分为假手术组、SCI组、SCI+EP(50 mg/kg)组、SCI+GL(100 mg/kg)组, 观察大鼠脊髓AS的胶质纤维酸性蛋白(GFAP)、MMP-9的蛋白表达。体外培养SD大鼠脊髓AS, 建立氧糖剥夺/复氧(OGD/R)模型, 观察OGD 6 h/R 6、12、24、48 h后脊髓AS的MMP-9蛋白表达, 以表达最高的时间点用于后续实验为OGD/R组;通过HMGB1 shRNA或EP抑制HMGB1, 观察HMGB1对OGD/R处理AS的MMP-9蛋白表达的作用;并使用Toll样受体4(TLR4)、β干扰素TIR结构域衔接蛋白(TRIF)及核转录因子-κB(NF-κB)的抑制剂, 观察HMGB1/TLR4/TRIF/NF-κB通路在OGD/R处理AS的MMP-9蛋白表达中的作用机制。结果...     

补肾活血汤防治骨质疏松症的作用机制

目的 基于TLR4/MyD88/NF-κB信号轴揭示补肾活血汤防治骨质疏松症的作用。方法 40只健康SD大鼠随机分为假手术组、模型组、补肾活血汤组以及阿仑膦酸钠组,每组10只,除假手术组外,其余各组造模后,补肾活血汤组予以补肾活血汤10 mL/(kg·d)灌胃,阿仑膦酸钠组给予阿仑膦酸钠片7.35 mg/(kg·d)灌胃,假手术组与模型组给予等量生理盐水灌胃,干预12周后取得大鼠骨组织,分析大鼠骨密度(bone mineral density, BMD)、骨矿含量、血清Ca²⁺、P水平变化;采用ELISA法检测血清中TNF-α、IL-6、IL-1β含量;采用qRT-PCR法检测骨组织中的TLR4、MyD88、NF-κBmRNA表达水平;采用Western blot法检测骨组织TLR4、MyD88、NF-κB蛋白表达水平;采用骨组织转录组学检测TLR4、MyD88、NF-κB表达水平。结果 (1)补肾活血汤组中大鼠骨组织骨矿含量以及血清Ca²⁺、P水平较模型组均升高(P<0.05);(2)补肾活血汤组大鼠股骨和腰椎BMD含量较模型组均明显...     

核因子-κB抑制剂对内毒素休克大鼠高迁移率族蛋白B1表达的影响及机制

目的观察核转录因子-κB(NF-κB)抑制剂--二硫氨基甲酸酞吡咯烷(PDTC)对内毒素休克大鼠高迁移率族蛋白B1(HMGB1)mRNA表达的影响及机制.方法采用内毒素休克模型,47只大鼠随机分为正常对照组(n=8)、内毒素休克组(n=24)和PDTC拮抗组(n=15),留取肝、肺、肾组织检测HMGB1 mRNA表达及相应器官功能指标的变化.结果内毒素攻击可导致动物肝、肺、肾组织HMGB1 mRNA表达广泛上调,分别于2～6h显著增高(P<0.05),12h呈现进一步升高趋势.PDTC处理后12h,肝、肺、肾组织HMGB1 mRNA表达均显著下调,其中肾组织2～12h趋于伤前范围;同时,血清丙氨酸转移酶、天冬氨酸转移酶、尿素氮、肌酐水平6h明显降低(P<0.05),肺组织髓过氧化物酶活性各时相点均显著低于内毒素休克组(P<0.05).结论NF-κB抑制剂能显著抑制内毒素休克动物组织HMGB1 mRNA的表达,NF-κB信号转导通路参与了内毒素介导HMGB1基因表达的调控过程,并与脓毒症时多器官功能损害密切相关.     

右美托咪定对反复缺血-再灌注脑损伤小鼠学习记忆能力的影响

目的探讨右美托咪定对反复缺血-再灌注(IR)脑损伤小鼠学习记忆能力的影响。方法无特定病原体(SPF)级成年C57BL/6J小鼠60只,按照随机数字表法分为四组:右美托咪定25μg/kg组(L组)、右美托咪定50μg/kg组(H组)、缺血-再灌注组(IR组)和假手术组(Sham组),每组15只。L组和H组小鼠分别经腹腔注射右美托咪定25μg/kg、50μg/kg,30min后采用双侧颈总动脉夹闭术,建立反复IR脑损伤模型;IR组小鼠建立反复IR脑损伤模型;Sham组小鼠只分离双侧颈总动脉,但不夹闭。Sham组和IR组小鼠于缺血前30min分别经腹腔注射等容量的生理盐水。采用Morris水迷宫试验测试小鼠术前及术后的学习记忆能力,随后处死小鼠,留取海马组织并测定其湿/干重比(W/D)和总含水量(TCW),采用伊文斯蓝(EB)法检测血脑屏障的通透性。采用逆转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)测定海马组织Toll样受体4(TLR4)、核调节因子-κB(NF-κB)mRNA表达水平,采用Western blot测定海马组织TLR4、NF-κB蛋白含量。结果术后3、7dIR组小鼠逃避潜伏期及游泳距离均明显长于Sham组,L组和H组小鼠的逃避潜伏期及游泳距离明显短于IR组(P0.05)。IR组小鼠海马组织W/D、TCW和脑组织EB含量明显高于Sham组,L组和H组小鼠海马组织W/D、TCW和脑组织EB含量明显低于IR组(P0.05)。IR组小鼠海马组织NF-κB mRNA、TLR4mRNA和蛋白表达水平明显高于Sham组,L组和H组小鼠海马组织NF-κB mRNA、TLR4mRNA和蛋白表达水平明显低于IR组,H组小鼠海马组织NF-κB mRNA、TLR4mRNA和蛋白表达水平明显低于L组(P0.05)。结论腹腔注射25μg/kg、50μg/kg的右美托咪定均可改善反复IR脑损伤小鼠的学习记忆能力,其机制可能与其抑制海马组织TLR4和NF-κB表达、减轻脑损伤有关。     

沉默蛋白激酶C 对高糖刺激成纤维细胞Toll 样受体及核因子kappa B 基因表达的影响

目的:探索siRNA 沉默蛋白激酶C(PKC)对高糖刺激成纤维细胞在Toll 样受体(TLRs)信号传导通路中TLRs 及核因子kappa B(NF-κB) 表达的影响。方法:高糖刺激下用real-time PCR 检测TLR2、TLR4 的表达水平,确定何种受体发生改变后进行后续实验。设计并合成针对PKC 不同亚单位的特异性siRNA :PKC-αsiRNA、PKC-βsiRNA、PKC-δsiRNA,在高效率转染的基础上,对PKC 进行沉默,高糖刺激后用real-time PCR 方法检测TLRs、NF-κBp50 和NF-κB p65 的表达情况,以低糖培养作对比。结果:成纤维细胞中高糖刺激下TLR2 的mRNA 水平显著升高(P ＜ 0.05),而TLR4 的mRNA 表达无明显变化(P ＞ 0.05)。在高糖刺激下PKC-αsiRNA、PKC-δsiRNA 可下调TLR2、NF-κB p65的mRNA 水平(P ＜ 0.05),而PKC-βsiRNA 对TLR2、NF-κB p65 的mRNA 水平无影响(P ＞ 0.05)。与低糖培养条件对比,高糖刺激下NF-κB p50 水平无改变(P ＞ 0.05),而且PKC-α siRNA、PKC-β siRNA 和PKC-δ siRNA 转染后不改变细胞中NF-κB p50 的水平。结论:成纤维细胞信号传导通路中PKC-α、PKC-δ 位于TLR2、NF-κB p65 的上游。     

氯沙坦对实验性糖尿病大鼠肾脏的炎症抑制作用

目的：观察氯沙坦对糖尿病大鼠肾脏的炎症抑制作用。方法：采用链脲佐菌素（streptomtoein，STZ）65mg／kg腹腔注射建立糖尿病大鼠模型。试验分正常对照组、模型组、治疗组，后一组于模型成功后1周给予氯沙坦20mg／kg灌胃，共12周。分别测定3组24h尿蛋白排泄量、血肌酐、肾重／体重、血浆C反应蛋白（CRP）及肿瘤坏死因子-α（TNF-α）水平；观察肾脏病理形态学变化；应用免疫组化法检测肾组织T011样受体4（TLR4）、核因子-κB（NF-κB）的蛋白表达；RT-PCR检测肾组织TLR4的核酸表达。结果：模型组与对照组相比：模型组大鼠24h尿蛋白、血肌酐、尿素氮、肾重／体重明显升高，肾小球肥大，细胞增生，PAS阳性物质沉积增多；血CRP、TNF-α含量及肾组织TLR4、NF-κB的表达明显增加。经氯沙坦治疗后大鼠血CRP、TNF-α含量下降，肾组织TLR4、NF-κB的表达亦减弱，治疗前后比较存在差异（P〈0．05）。结论：氯沙坦对糖尿病肾病具有保护作用，其作用机制还可能是通过下调NF-κB、TLR4的表达，降低血浆CRP、TNF-α含量，抑制炎症反应而减少糖尿病肾病损伤。     

TLR4在高糖诱导的HK-2细胞凋亡中的作用

目的:探讨TLR4在高葡萄糖诱导的HK-2细胞凋亡中的作用及机制。方法:设置不同的葡萄糖干预浓度梯度和时间梯度,采用WB的方法检测TLR4和NF-κB的表达情况以研究TLR4和NF-κB的表达与葡萄糖刺激的浓度和时间关系;使用TLR4和NF-κB特异性阻断剂处理HK-2细胞以探究阻断TLR4/NF-κB后对下游的影响,实验分为对照组、高糖组、TLR4阻断组和NF-κB阻断组,采用RT-PCR和WB的方法检测PGC-1α和剪切的caspase-3的表达,采用免疫荧光技术在共聚焦显微镜下观察Cyt C的分布,并用荧光显微镜观察细胞核及DNA的损伤情况。结果:TLR4的蛋白表达与葡萄糖刺激呈浓度和时间依赖关系(P 0. 05),高葡萄糖环境下磷酸化的NF-κB p65蛋白表达升高,以干预2 h组升高最为显着(P 0. 05);高葡萄糖刺激后PGC-1α的表达减少、Cyt C重分布、剪切的caspase-3的表达增多、细胞核碎裂及细胞DNA损伤增加,而TLR4/NF-κB阻断后上述高葡萄糖导致的变化被逆转(P 0. 05)。结论:TLR4/NF-κB在高葡萄糖环境中被激活并介导高葡萄糖所致PGC-1α的下调、线粒体功能障碍及细胞凋亡。     

血管紧张素Ⅱ诱导Toll样受体4在腹膜间皮细胞的表达及其对脂多糖诱导CD40表达的影响

目的 观察血管紧张素Ⅱ（AngⅡ）对原代培养大鼠腹膜间皮细胞（RPMC）Toll样受体4（TLR4）表达的影响及其在脂多糖（LPS）诱导的核转录因子κB （NF-κB）活化及CD40表达中的作用。 方法 分离及培养RPMC。用不同浓度AngⅡ（10－9、10－8、10－7、10－6 mol/L）刺激细胞及用10-7 mol/L AngⅡ刺激细胞不同时间（mRNA为1、2、4、8、12、24、48 h和蛋白为6、12、24、36、48 h），观察血管紧张素1型受体（AT1R）阻滞剂洛沙坦（10－5 mol/L）和血管紧张素2型受体（AT2R）阻滞剂PD123177（10-5 mol/L）对AngⅡ诱导TLR4表达的影响。将细胞随机分为下列4组：对照组、AngⅡ (10－7 mol/L)组、LPS(1 mg/L)组、AngⅡ (10－7 mol/L)+LPS(1 mg/L)组，观察AngⅡ对LPS诱导的NF-κB激活和CD40表达的影响。RT-PCR检测TLR4、CD40 mRNA表达；Western印迹检测TLR4、IκBα、磷酸化IκBα（p-IκBα）、NF-κB p65、磷酸化NF-κB（p-p65）蛋白表达；免疫荧光检测细胞NF-κB p65亚单位的表达及分布。 结果 (1)10－9、10－8、10－7、10－6 mol/L AngⅡ作用RPMC 12 h，TLR4 mRNA表达分别增加70.5%、89.5%、102.9%和121.9%；作用24 h TLR4蛋白表达分别增加12.1%、27.7%、51.2%和41.6%。AngⅡ（10－7 mol/L）作用RPMC不同时间，TLR4 mRNA表达高峰为8 h和12 h（P < 0.01），蛋白表达高峰为12 h和24 h（P < 0.01）。(2)洛沙坦阻断后，AngⅡ诱导的TLR4表达与未阻断组比较，下调33.5%（P < 0.05）。PD123177对AngⅡ诱导的TLR4表达无显著影响（P > 0.05）。(3) 与正常对照组比较，LPS作用60 min p-IκBα/IκBα、p-p65/p65表达分别上调362.6%（P < 0.01）和67.4%（P < 0.05）；作用4 h CD40 mRNA表达上调299.9%（P < 0.01）；与LPS组比较，AngⅡ预刺激24 h加LPS作用60 min，p-IκBα/IκBα、p-p65/p65表达分别上调49.1%（P < 0.01）和29.3%（P < 0.05）；作用4 h CD40 mRNA表达上调56.8%（P < 0.01）。(4)免疫荧光结果显示正常对照组与AngⅡ组细胞中，p65信号定位于细胞胞质；LPS作用60 min，p65信号从胞质进入胞核；AngⅡ+LPS组NF-κB p65胞核信号显著增强。 结论 AngⅡ呈浓度、时间依赖性诱导RPMC TLR4表达，并显著增强LPS诱导NF-κB激活及CD40的表达。提示腹膜组织局部产生的AngⅡ可能对LPS诱导的腹膜组织炎性反应具有放大作用。