灯台叶总碱与氟康唑联用对耐药白念珠菌株CA23的协同抑菌作用

目的 探讨灯台叶总碱与氟康唑联用对耐药白念珠菌CA23毒力因子的作用和潜在机制。方法 微量稀释法、棋盘法及时间-杀菌曲线测定灯台叶总碱与氟康唑联用效果;荧光探针测定菌株外排泵功能,实时荧光定量PCR法检测耐药相关基因表达;倒置显微镜、扫描电镜观察菌丝诱导培养基中菌株形态转换,RT-qPCR法检测菌丝相关基因表达,添加外源性cAMP验证;卵黄琼脂平板法检测菌株胞外磷脂酶活性。结果 灯台叶总碱与氟康唑对耐药白念珠菌具有较强的协同抑菌作用;联用处理并不能显著抑制菌株的外排功能,与耐药相关基因表达结果一致;两药联用可以抑制在SD和Spider诱导培养基中菌丝生长,且下调菌丝相关基因CYR1、ALS3、RAS1、BCR1、ALS2、TPK2表达,添加外源性cAMP后,能恢复部分药物联用引起的菌株形态变化;两药联用能抑制胞外磷脂酶活性,且对灯台叶总碱存在剂量依赖性。结论 灯台叶总碱与氟康唑联用对氟康唑耐药株表现为协同抑菌作用,其机制与调节Ras1-cAMP-PKA信号通路抑制菌丝生长,并降低胞外磷脂酶活性从而影响耐药白念珠菌毒力因子有关。     

穿心莲内酯诱导白念珠菌生物膜分散细胞凋亡的研究

目的:探讨中药有效成分穿心莲内酯对白念珠菌生物膜分散细胞凋亡的影响。方法:Hoechst33258染色荧光显微镜检测白念珠菌生物膜细胞凋亡的形态;Rh123染色流式细胞仪检测白念珠菌生物膜细胞线粒体膜电位(MMP)变化;DHR染色流式细胞仪检测白念珠菌生物膜细胞内活性氧(ROS)水平。结果:1 000,100μmol.L-1的穿心莲内酯能诱导白念珠菌生物膜细胞核固缩、浓染致密,1 000,100,10μmol.L-1的穿心莲内酯能降低白念珠菌生物膜线粒体膜电位,提高细胞内ROS水平。结论:一定浓度的穿心莲内酯可诱导白念珠菌生物膜分散细胞凋亡。     

黄芩苷体外对白念珠菌凋亡的影响

目的探讨中药有效成分黄芩苷对白念珠菌凋亡的影响。方法采用Hoechst33258染色荧光显微镜检测白念珠菌细胞凋亡的形态;Rh123染色流式细胞仪检测细胞线粒体膜电位(mitochondrial membrane potential,MMP)变化;DHR染色流式细胞仪检测细胞内活性氧(reactive oxygen species,ROS)水平。结果 1 000,100μmol/L的黄芩苷能诱导白念珠菌细胞核固缩与碎裂,并降低白念珠菌MMP;1 000,100,10μmol/L的黄芩苷均能提高细胞内ROS水平。结论黄芩苷可通过线粒体途径诱导白念珠菌凋亡。     

艾叶挥发油诱导白念珠菌凋亡

研究艾叶挥发油(Artemisia argyi essential oil,AAEO)诱导白念珠菌凋亡的活性。实验采用微量液基稀释法检测AAEO对白念珠菌(Candida albicans)SC5314的MIC;采用XTT还原法检测AAEO对白念珠菌SC5314代谢的影响;采用流式细胞仪检测AAEO对白念珠菌SC5314细胞内活性氧(reactive oxygen species,ROS)和线粒体膜电位(mitochondrial membrane potential,MMP)水平的影响;采用Annexin-V/PI法测定AAEO对白念珠菌SC5314细胞凋亡率的影响;采用荧光显微镜观察AAEO对白念珠菌SC5314细胞Caspase酶活性的影响;采用DAPI染色法观察AAEO对白念珠菌SC5314细胞核固缩的影响。结果显示,AAEO对白念珠菌SC5314的MIC为0.5 mL·L~(-1);XTT代谢活性显示AAEO对白念珠菌SC5314代谢呈剂量依赖性的抑制;0.5 mL·L~(-1)的AAEO干预后,白念珠菌SC5314细胞内活性氧水平显著升高、线粒体膜电位显著降低、凋亡比例明显增加、metacaspase活性显著升高、细胞核固缩。AAEO具有诱导白念珠菌细胞凋亡的活性,该作用可能与ROS积累和线粒体损伤相关。     

糙叶败酱提取物抗肿瘤作用机制研究

目的 观察糙叶败酱提取物诱导细胞凋亡过程中自由基和线粒体膜电位的变化.方法 D-101大孔吸附树脂分离糙叶败酱水提物,糙叶败酱提取物作用于S180荷瘤小鼠,观察生命延长率;透射电镜观察细胞凋亡情况,流式细胞仪检测细胞凋亡率,激光共聚焦显微镜检测细胞自由基水平和线粒体膜电位变化.结果 糙叶败酱提取物可引起S180细胞的凋亡,细胞线粒体膜电位降低,自由基水平升高.结论 糙叶败酱提取物引起S180细胞的凋亡,与含药血清对细胞内自由基水平和线粒体膜电位的影响有关.     

香莲外洗液逆转白念珠菌耐药的转录组学研究

目的对香莲外洗液诱导白念珠菌标准耐药菌株恢复对氟康唑敏感前后的差异基因进行转录组学研究。方法采用微量肉汤稀释法测定白念珠菌标准耐药菌株最低抑菌浓度值(minimal inhibitory concentration,MIC),观察香莲外洗液诱导下白念珠菌标准耐药菌株恢复对氟康唑敏感所需的代数;通过转录组测序(RNA-Seq)测定和比较原代耐药株、香莲外洗液诱导下恢复敏感株的转录组情况;应用基因本体(gene ontology,GO)方法分析香莲外洗液诱导下恢复敏感菌株的差异表达基因。结果香莲外洗液诱导下的耐药白念珠菌转种至第6代时恢复对氟康唑的敏感性。转录组测序表明,对比原代耐药株,香莲外洗液诱导下恢复敏感株有165个基因RPKM(reads per kilo bases per million reads)指标表达上调,144个基因RPKM指标表达下调。GO分析发现:上下调基因主要归类于GO:0015903(fluconazole transport)。结论香莲外洗液可诱导耐药白念珠菌恢复对氟康唑的敏感性,推测可能与开启氟康唑转运通路有关。     

四君子汤与氟康唑对深部念珠菌病作用及其机制研究

探讨四君子汤与氟康唑对深部念珠菌病的协同治疗作用及其机制.利用小鼠深部念珠菌病模型,观察四君子汤与氟康唑联合应用对小鼠生存率、平均生存天数的影响及肾脏内活菌数和血清内NO、TNF-α含量的变化.联合应用四君子汤与氟康唑能更有效提高感染白色念珠菌小鼠的生存率,延长其平均生存天数,减少其肾脏内菌数,降低由于感染而升高的血清内NO、TNF-α的浓度.四君子汤与氟康唑对深部念珠菌感染有协同治疗作用.其作用可能与四君子汤调节机体免疫,降低炎症介质在体内的残留,改善过度免疫所造成的病理性损伤有关.     

四君子汤与氟康唑对深部念珠菌病作用及其机制研究

探讨四君子汤与氟康唑对深部念珠菌病的协同治疗作用及其机制。利用小鼠深部念珠菌病模型,观察四君子汤与氟康唑联合应用对小鼠生存率、平均生存天数的影响及肾脏内活菌数和血清内NO、TNF－α含量的变化。联合应用四君子汤与氟唑能更有效提高感染白色念珠菌小鼠的生存率,处长其平均生存天数,减少其肾脏内菌数,降低由于感染而升高的血清内NO、TNF－α的浓度。四君子汤与氟康唑对深部念珠菌感染有协同治疗作用。其作用可能与四君子汤调节机体免疫。降低炎症介质在体内的残留,改善过度免疫所造成的病理理损伤有关。     

Gomisin M1协同氟康唑对耐药白念珠菌毒力因子的作用研究

目的 探讨gomisin M1(从五味子科植物中提取的木脂素类成分)联合氟康唑抗耐药白念珠菌的作用及其机制.方法 采用倍比微量稀释法检测gomisin M1联合氟康唑对白念珠菌的最小抑菌浓度;通过时间-生长曲线动态观察gomisin M1联合氟康唑对白念珠菌的抑制作用;采用倒置显微镜观察gomisin M1联合氟康唑在...     

三七总皂苷对大鼠脑缺血再灌注海马细胞Ca~(2 )及线粒体膜电位的影响

目的:观察缺血再灌注后海马区细胞内游离钙离子(Ca2 )、线粒体跨膜电位(Δψm)的变化以及三七总皂苷的保护作用。方法:用大脑中动脉栓塞(MCAO)再通法建立大鼠脑缺血再灌注模型,以荧光染色流式细胞仪检测各实验组海马区细胞内游离Ca2 浓度和线粒体Δψm的变化。结果:与假手术组相比,模型组海马区细胞内游离Ca2 浓度显著升高(P<0.01)、线粒体Δψm显著降低(P<0.01),与模型组相比,三七总皂苷组海马细胞内游离Ca2 浓度显著降低(P<0.01)、线粒体Δψm显著升高(P<0.05)。结论:三七总皂苷能抑制缺血再灌注引起的海马区细胞内Ca2 浓度升高,抑制线粒体Δψm下降,保护海马区细胞线粒体功能,这可能是其抗脑缺血再灌注损伤作用机制之一。     

Reversal of fluconazole resistance in multidrug efflux-resistant fungi by the Dysidea arenaria sponge sterol 9alpha,11alpha-epoxycholest-7-ene-3beta,5alpha,6alpha,19-tetrol 6-acetate

The sponge sterol 9alpha,11alpha-epoxycholest-7-ene-3beta,5alpha,6alpha,19-tetrol 6-acetate (ECTA) (1) is the first marine natural product to reverse fluconazole resistance mediated by a Candida albicans MDR efflux pump. The IC(50) of fluconazole is decreased from 300 to 8.5 microM (35-fold enhancement) when combined with 1(3.8 microM). A revised C-6 configuration of 1 is established.     

羽苔素E体外抗真菌活性及逆转氟康唑耐药的初步研究

 目的评价白色念珠菌对羽苔素E的体外敏感性,并观察羽苔素E和氟康唑合用对白念敏感株和耐药株的联合抗真菌作用。方法采用微量稀释法,测定15株白念敏感株和4株白念耐药株对羽苔素E的敏感性,以最低抑菌浓度(MIC)表示。同时观察羽苔素E与氟康唑合用对白念敏感株和耐药株的联合抗真菌作用。结果羽苔素E对敏感株的MIC值为16 mg·L^-1,对耐药株的MIC值与敏感株基本一致。羽苔素E与氟康唑合用,对敏感株和耐药株分别表现出相加和协同的抗真菌活性,并明显减少氟康唑的用量。结论羽苔素E具有中等的抗真菌活性,与氟康唑合用对耐药菌株表现出协同的抗真菌作用,提示羽苔素E有较好的抗真菌作用并有逆转氟康唑耐药的潜力。     

Capisterones A and B, which enhance fluconazole activity in Saccharomyces cerevisiae, from the marine green alga Penicillus capitatus

A whole-cell-based assay using Saccharomyces cerevisiae strains that overexpress Candida albicans CDR1 and MDR1 efflux pumps has been employed to screen natural product extracts for reversal of fluconazole resistance. The tropical green alga Penicillus capitatus was selected for bioassay-guided isolation, leading to the identification of capisterones A and B (1 and 2), which were recently isolated from this alga and shown to possess antifungal activity against the marine pathogen Lindra thallasiae. Current work has assigned their absolute configurations using electronic circular dichroism and determined their preferred conformations in solution based on detailed NOE analysis. Compounds 1 and 2 significantly enhanced fluconazole activity in S. cerevisiae, but did not show inherent antifungal activity when tested against several opportunistic pathogens or cytotoxicity to several human cancer and noncancerous cell lines (up to 35 microM). These compounds may have a potential for combination therapy of fungal infections caused by clinically relevant azole-resistant strains.     

西帕依固龈液联合氟康唑治疗义齿性口炎的疗效观察

目的探讨西帕依固龈液联合氟康唑治疗老年义齿性口炎的疗效。方法选取2013年1月—2013年10月中国人民解放军第451医院收治的义齿性口炎患者42例,随机分为对照组和治疗组,每组21例。对照组口服氟康唑片,1片/次,1次/d,首次剂量加倍。治疗组在对照组基础上给予西帕依固龈液含漱,5 m L/次,含漱时间3 min,3次/d。两组均连续治疗6个月。比较两组的临床疗效,同时观察两组定植菌的菌群变化及口炎复发率。结果治疗后,对照组和治疗组的显效率分别为85.71%、95.24%,总有效率分别为95.24%、100.00%,两组比较差异有统计学意义（P〈0.05）。治疗15 d、治疗后、复诊时两组白色念珠菌、链球菌、乳杆菌的菌落总数均较治疗前显著降低,同组比较差异有统计学意义（P〈0.05）;且治疗组白色念珠菌、乳杆菌的菌落总数少于对照组,两组比较差异有统计学意义（P〈0.05）。对照组和治疗组复发率分别为42.86%、23.81%,两组比较差异具有统计学意义（P〈0.05）。结论西帕依固龈液联合氟康唑治疗老年义齿性口炎具有较好的临床疗效,可降低白色念珠菌和乳杆菌的感染,降低复发率,值得临床推广应用。     

痰热清注射液与抗生素对多重耐药铜绿假单胞菌外排泵的作用

目的:研究痰热清与临床常用抗生素对多重耐药铜绿假单胞菌(multidrug resistant Pseudomonas aeruginosa,MDR-PA)的相互作用,以及对细菌外排泵的作用研究。方法:利用抗生素对细菌进行药敏实验。纸片扩散法(Kirby-Bauer,K-B)结合外排泵抑制剂(50 mg·L~(-1))检测抑菌圈直径以及实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)检测外排泵基因表达量筛选外排泵阳性菌株。KB法观察痰热清(终质量浓度3 g·L~(-1))与抗生素对抑菌圈直径的变化。菌株与痰热清、抗生素亚抑菌浓度共培养进行Real-time PCR检测。KB法观察痰热清持续作用外排泵阳性菌后对抑菌环直径的影响。结果:经鉴定筛选得到两株MDR-PA外排泵阳性菌株。痰热清与阿洛西林、氨曲南、美罗培南、头孢他啶、头孢哌酮、舒普深均有协同抗菌作用。在抑制细菌外排泵基因表达水平方面,4种药物按作用效果强弱比较为头孢哌酮痰热清头孢他啶舒普深。痰热清持续作用外排泵阳性菌株后与头孢他啶、头孢哌酮、舒普深联合用药疗效较好。结论:痰热清与头孢他啶,头孢哌酮,舒普深可通过下调细菌外排泵基因表达,使细菌耐药性减弱,降低抗生素临床使用剂量,从而起到抑菌作用。     

散结乳癖膏对白色念珠菌的体外抑菌作用研究

目的研究散结乳癖膏对白色念珠菌的抑菌作用及其作用机制,为临床治疗女性外生殖道感染疾病新制剂的研制奠定基础。方法采用倍比稀释法检测散结乳癖膏最低抑菌浓度(MIC)及最低杀菌浓度(MBC);采用MTT法确定散结乳癖膏对白色念珠菌的抑菌率,激光共聚焦显微镜下观察不同浓度药物作用于白色念珠菌后的效果,同时对其进行红绿荧光染色定量分析,观察药物作用后细菌的形态变化。结果倍比稀释法结果显示散结乳癖膏药物对白色念珠菌的最低抑菌浓度为25 mg·mL^-1,最低杀菌浓度为50 mg·mL^-1。MTT法结果显示在本实验所测的浓度范围内,散结乳癖膏药物对白色念珠菌的抑菌率可随着给药浓度的增加而显著增强其抑菌率(P<0.05)。在激光共聚焦显微镜下可清楚观察到散结乳癖膏作用于白色念珠菌,减少生物膜内活菌量并可以使之存活率降低,且破坏白色念珠菌生物膜并使其活性降低(P<0.05,P<0.01)。结论散结乳癖膏药物对白色念珠菌起到了显著的抑制作用,并具有对白色念珠菌生物膜破坏的能力。     

金莲花药渣发酵提取物拮抗白色念珠菌的体内外实验研究

目的：观察金莲花药渣发酵提取物（Extraction of Globeflower Residue Fermentation,EGRF）体外对白色念珠菌抑杀效果及体内对小鼠念珠菌性阴道炎的治疗效果。方法：通过试管法配合平皿法检测EGRF对白色念珠菌的最小抑菌浓度（Minimum Inhibitory Concentration,MIC）和最小杀菌浓度（Minimum Bactericidal Concentration,MBC）;构建小鼠白念珠菌性阴道炎模型,将造模成功小鼠随机分为正常对照组,模型组,EGRF低、中、高剂量组（EGRF给药浓度分别为：40、80、160 mg?kg^-1）,氟康唑组（20 mg?kg^-1）,共6组。各药均阴道内给药,每天1次,连续给药7天,观察小鼠外阴炎症反应程度、阴道念珠菌转阴率、阴道灌洗液载菌量和阴道粘膜的病理改变。结果：EGRF对白色念珠菌的MIC为0.31 mg?mL^-1,对白色念珠菌的MBC为1.25 mg?mL^-1,EGRF和氟康唑的效价单位比MIC为2?1,MBC为1?1。与模型组相比,EGRF及氟康唑治疗组的小鼠外阴炎症反应程度减轻及分泌物中念珠菌数量随着给药时间增加而显著减少;小鼠阴道灌洗液白色念珠菌转阴率增加,载菌量明显减少;小鼠阴道组织病理改变有不同程度的减轻,有明显剂量依赖性,高剂量组与氟康唑组相近。结论：EGRF于体外对白色念珠菌抑杀作用显著,对小鼠白色念珠菌性阴道炎疗效较好。