血性脑脊液对胚胎神经干细胞增殖和分化的影响

目的 观察体外血性脑脊液培养对神经干细胞增殖和分化的影响,以期为临床治疗这类患者提供依据.方法 提取终止妊娠的16周人胚胎脑细胞,冻存于液氮中.组织复苏后,在DMEM/F12培养基(含EGF、bFGF、B27和N2)中培养14 d可获得形态完好的神经球(神经干细胞).从颅脑外伤患者和非外伤患者分别留取血性脑脊液和正常脑脊液.将制备的胚胎神经干细胞分为两组,分别用血性脑脊液和正常脑脊液培养.动态观察神经干细胞在两组脑脊液中生长、增殖和分化的情况.用免疫细胞化学技术对两组脑脊液中神经干细胞的分化进行标记和鉴定.结果 神经干细胞在两组脑脊液中均能存活、增殖和分化.但神经干细胞在血性脑脊液中分化速度较快,分化比例也较高.在血性脑脊液中,神经干细胞更倾向于向胶质细胞分化;而在正常脑脊液中,神经干细胞更倾向于向神经元分化.结论 血性脑脊液可能会影响神经干细胞的分化速度和分化方向.这一结果对采用神经干细胞治疗颅脑外伤和蛛网膜下腔出血等疾病有一定提示作用.     

多聚赖氨酸和明胶对神经干细胞增殖和分化的影响

摘要 背景：目前大鼠神经干细胞体外诱导分化的研究报道诸多,但其分化过程很难控制,很多实验的操作方法复杂,分化比率也很低。 目的：探索大鼠胚胎前脑神经干细胞体外原代及传代培养方法,并观察其分化规律。 方法：胎鼠在无菌条件下分离出前脑,制备单细胞悬液,以1×1011L-1接种于含N2的DMEM/F12培养基中培养,传代培养过程中加入BrdU,标记神经干细胞球。诱导分化实验分为多聚赖氨酸铺板组、明胶铺板组和无铺板组。采用体积分数20%胎牛血清刺激其分化。免疫细胞化学检测nestin、BrdU及在血清诱导条件下神经干细胞向神经细胞分化的能力。 结果与结论：细胞呈神经干细胞样生长,具有连续增殖能力,可以传代培养。传代神经球中的细胞均呈nestin阳性和BrdU阳性。多聚赖氨酸铺板组和明胶铺板组贴壁后分化为神经细胞能力强于无铺板组(P < 0.01)。多聚赖氨酸铺板组略强于明胶铺板组(P > 0.05)。神经谱系标记物神经胶质纤维酸性蛋白和微管相关蛋白2的免疫细胞化学结果均阳性。结果表明,大鼠胚胎前脑富含神经干细胞,其分化观察,多聚赖氨酸和明胶在诱导神经干细胞分化中作为细胞贴壁支持物提高分化细胞数量的作用,且多分化为星形胶质细胞。 关键词：多聚赖氨酸;神经干细胞;明胶;增殖分化;体外培养 doi:10.3969/j.issn.1673-8225.2010.47.004     

FGF和EGF对神经干细胞增殖及分化的影响

胚胎和成年哺乳动物脑内均存在的神经干细胞,成纤维细胞生长因子和表皮生长因子对神经干细胞的增殖及分化有一定的影响,ＦＧＦ和ＥＧＦ及其受体在胚胎期和成年期表达各异。ＦＧＦ和ＥＧＦ能促进神经干细胞增殖,在不同的条件下对分化和作用不同。     

人脑脊液对鼠神经干细胞增殖分化的影响

目的:研究脑外伤血性脑脊液和脑积水清亮脑脊液对神经干细胞增殖分化的影响.方法:从大鼠脑组织中分离堵养神经干细胞,分别用人的两种脑脊液培养,分为试验组(血性脑脊液组)和对照组(脑积水清亮脑脊液组),于不同时问观察神经干细胞在两组脑脊液中的生长及增殖分化情况;并应用免疫细胞化学技术对两组脑脊液中神经干细胞的分化进行鉴定和比较.结果:神经干细胞在两种脑脊液中均能存活并分化,部分细胞悬浮生长达十余天之久.加脑脊液培养第二天试验组NSE阳性细胞(神经元)的比例比对照组高,有统计学意义(P<0.05);培养第十天试验组GFAP阳性细胞(星形胶质细胞)的比例比对照组高,NSE阳性细胞的比例比对照组低,有统计学意义(P<0.05).结论:神经干细胞在脑外伤血性脑脊液和脑积水清亮脑脊液中均能存活、增殖和分化.两组脑脊液对神经干细胞分化的种类上有差异.     

核因子-κB在神经干细胞增殖和分化中的作用

核因子-κB（NF-κB）是一种可诱导的转录因子。在神经系统中，NF-κB由神经元、神经胶质细胞和神经干细胞表达。神经干细胞具有强大的增殖能力和多向分化潜能，在神经系统损伤的修复中起重要作用。近年来的研究发现，NF-κB信号系统参与了中枢神经系统神经干细胞增殖和分化的调控，通过对其机制的深入研究，有望为脑缺血、脑炎、神经变性等疾病的治疗开辟新的途径。文章对NF-κB在神经干细胞增殖和分化中的多重作用进行了综述。     

葡萄糖浓度对原代培养神经干细胞增殖、分化的影响

目的探讨不同浓度葡萄糖对神经干细胞增殖、分化的影响。方法胚胎小鼠脑细胞原代培养并鉴定。生理浓度和高浓度葡萄糖培养及诱导分化后．四唑盐比色（MTT）法及免疫荧光法观察两组不同葡萄糖浓度对神经干细胞增殖、分化的影响。结果原代培养的神经球表达巢蛋白（hestin），神经球分化的细胞表达神经丝200（NF200）和胶质纤维酸性蛋白（GFAP）。与生理浓度葡萄糖相比，高浓度葡萄糖降低了神经干细胞的增殖活力：分化3d后，高糖组的NF200阳性细胞和GFAP阳性细胞比例高于生理浓度组（P〈0．01），而nestin阳性细胞比例则反之（P〈0．01）；分化10d后，神经干细胞完全分化，免疫荧光检测发现生理浓度葡萄糖提高了NF200阳性细胞比例。结论高糖损害了神经干细胞的增殖活性。加速了神经干细胞的早期分化．降低了神经元的分化率。     

低氧对神经干细胞增殖及分化的影响

神经干细胞(neural stem cells,NSCs)是近年来治疗神经系统疾病颇具前景的基因工程细胞,尤其是在神经功能修复方面,具有重要的科学意义及社会应用价值。对于神经功能损伤的治疗,目前仅限于内科药物治疗及外科手术干预,但对于已经丧失的神经功能的恢复和重建,这些治疗措施都无根本性疗效。而神经干细胞的研究和发展为解决这一问题     

细胞因子对神经干细胞增殖和分化的影响

神经干细胞是指具有分化为神经细胞、星形胶质细胞、少突胶质细胞的能力,能自我更新并能够提供大量脑组织细胞的细胞.以前的神经干细胞多来自于胎儿胚胎组织,不仅来源少,而且受到伦理道德的影响,所以其应用也受到了一定的限制.自Reynolds BA 1992从成年哺乳动物中培养出干细胞,提出成年人体内也存在干细胞以来,有关干细胞的研究已成为国内外学者研究的热点.由于成年神经干细胞来源广,不存在伦理道德问题,具有多分化潜能,能够携带外源性治疗基因,且可通过导入原癌基因获得永生细胞系等诸多优点,所以神经干细胞移植为神经退行性疾病的治疗提供了一个新的方向,其应用前景十分广阔.神经干细胞具有多分化潜能,尽管其分化方向主要取决于在神经管中的最初定位以及从神经管迁移后在大脑中的最终定位,但同时也受细胞外的环境因素影响.本文就近年来细胞外的环境因素对神经干细胞的增生和分化作一综述.     

FGF和EGF对神经干细胞增殖及分化的影响

胚胎和成年哺乳动物脑内均存在神经干细胞.成纤维细胞生长因子(FGF)和表皮生长因子(EGF)对神经干细胞的增殖及分化有一定影响.FGF和EGF及其受体在胚胎期和成年期表达各异.FGF和EGF能促进神经干细胞增殖,在不同的条件下对分化的作用不同.     

脑梗死后VEGF及bFGF对神经干细胞增殖分化的机制研究进展

缺血性卒中因其发病机制复杂,迄今为止,仍未发现确切有效治疗方法。随着研究深入, 神经干细胞（neural stem cells,NSCs）作为新的研究靶点,为卒中的治疗提供了新的前景。目前脑梗 死后促进内源神经干细胞增殖分化的影响因素众多,但有研究表明碱性成纤维细胞生长因子（basic fibroblast growth factor,bFGF）及血管内皮生长因子（vascular endothelial growth factor,VEGF）对NSCs 的增殖及分化起到了不容忽视的作用。通过研究VEGF和bFGF在脑缺血后NSCs增殖分化中的作用机 制,为临床脑缺血的靶向治疗提供理论基础。     

NOV对人神经干细胞增殖和分化的影响

目的 探讨NOV蛋白对人神经干细胞(HNSCs)增殖和分化的影响。方法 NOV基因重组质粒转染COS—7细胞，收集COS-7细胞和NOV基因修饰COS—7细胞的条件培养液(COS—CM和NOV—CM)，作用于培养的HNSCs，^3H—TdR掺入液闪检测HNSCs的增殖，免疫细胞化学和流式细胞仪检测HNSCs的分化。结果 (1)NOV—CM能明显促进HNSCs对^3H—TdR的摄入，说明NOV—CM能明显促进HNSCs的增殖，另外NOV—CM的促细胞增殖作用具有一定的量效关系；(2)免疫细胞化学和流式细胞仪结果显示，NOV—CM促进HNSCs向神经元方向分化。结论 NOV蛋白可能具有促进HNSCs增殖和分化的作用。     

细胞毒药物对小鼠肺组织和骨组织间充质干细胞增殖和分化的影响

背景：肿瘤患者接受高剂量化疗时，细胞毒药物不仅对肿瘤细胞产生杀伤作用，对正常组织细胞甚至组织干细胞也产生一定损伤。 目的：探讨细胞毒药物体外对小鼠肺组织间充质干细胞和骨组织间充质干细胞增殖及分化能力的影响。 设计、时间及地点：细胞学体外对照观察，于2007-05/2008-08在解放军军事医学科学院基础医学研究所细胞生物学室和解放军北京军区总医院肿瘤科完成。 材料：清洁级3~5周龄C57BL/6小鼠3只，由解放军军事医学科学院实验动物中心提供。 方法：从胶原酶消化的小鼠肺组织和骨片中分离培养肺组织间充质干细胞和骨组织间充质干细胞，并在含体积分数为10%胎牛血清的α-MEM培养液中培养、传代、扩增。采用MTT法测定马利兰、阿霉素、环磷酰胺、足叶乙甙、甲氨蝶呤、长春新碱、顺铂对两种间充质干细胞生长增殖的影响，参照文献设置药物浓度范围，并设立空白对照，仅加入含体积分数为10%胎牛血清的α-MEM培养液。药物作用后，分别诱导两种间充质干细胞向脂肪和成骨细胞分化。 主要观察指标：不同药物作用后，肺组织间充质干细胞和骨组织间充质干细胞的生长抑制、增殖情况及分化能力。 结果：①在治疗剂量范围内，肺组织间充质干细胞和骨组织间充质干细胞对环磷酰胺、马利兰和甲氨蝶呤耐受，而对长春新碱、足叶乙甙、顺铂、阿霉素中度敏感。肺组织间充质干细胞和骨组织间充质干细胞对环磷酰胺、马利兰的敏感性相似，但小鼠肺组织间充质干细胞对甲氨蝶呤、长春新碱、足叶乙甙、阿霉素的敏感性均低于骨组织间充质干细胞，对顺铂的敏感性高于骨组织间充质干细胞。②与空白对照比较，环磷酰胺、马利兰和甲氨蝶呤作用后对两种间充质干细胞的增殖能力影响较小。③在环磷酰胺、马利兰、甲氨蝶呤、长春新碱和足叶乙甙等药物作用24 h内，两种间充质干细胞仍能被诱导分化为成骨细胞和脂肪细胞。药物作用72 h后，两种间充质干细胞向脂肪和成骨细胞的分化能力减弱甚至消失。环磷酰胺、马利兰和甲氨蝶呤对肺组织间充质干细胞和骨组织间充质干细胞的分化功能影响相对较小。 结论：细胞毒药物对小鼠肺组织间充质干细胞和骨组织间充质干细胞具有毒性作用，但不同组织器官来源的间充质干细胞对细胞毒药物的敏感性存在一定差异；药物作用后可影响两种间充质干细胞的增殖和分化能力。     

TLR配体对大鼠脊髓神经干细胞增殖的影响

目的研究某些ToU样受体(TLR)的配体对脊髓神经干细胞(NPCs)增殖的影响。方法大鼠经单次腹腔注射TLR不同配体,用BrdU跟踪标记增殖的NPCs。结果硫代磷酸含CpG的寡核苷酸(PSCpG-ODN)未引起脊髓NPCs的明显增殖,而PolyI：C、LPS与R848可引起BrdU~ 细胞显著性增加。注射PolyI：C或R848的大鼠脊髓BrdU~ 细胞密度于注射后2～3 d达最高,随后快速降至正常水平。伴随NPCs增殖的还有中枢神经系统(CNS)先天免疫系统的激活,如神经小胶质细胞的活化。结论某些TLR的配体被TLR识别后可能参与脊髓内正常神经细胞的发生过程,提示机体的先天免疫反应可能与组织再生过程紧密相关,对开发促进脊髓损伤再生修复的药剂来说是一有价值的工具。     

中药复方脑络欣通含药血清诱导大鼠胚胎神经干细胞增殖分化：与胎牛血清的比较

目的：比较中药复方脑络欣通药物血清与胎牛血清诱导大鼠胚胎神经干细胞增殖分化的差异。方法：分别采用脑络欣通药物血清和胎牛血清诱导大鼠胚胎神经干细胞增殖分化,应用相差显微镜和免疫荧光染色对其进行比较观察。结果：脑络欣通药物血清和胎牛血清均可诱导绝大多数神经干细胞分化成神经元、星形胶质细胞和少突胶质细胞。此外,脑络欣通药物血清还能一定程度上促进培养的神经干细胞增殖。前者诱导干细胞分化的进程比后者要慢,但其分化的神经元在细胞形态学上与发育成熟的神经元更为接近。结论：脑络欣通药物血清能够诱导神经干细胞分化,并使其分化更加成熟,且在一定程度上促进培养的神经干细胞增殖。     

神经干细胞的端粒酶活性与其增殖分化的关系

目的探讨体外培养的神经干细胞端粒酶活性与细胞增殖、分化的关系,以及细胞分化后端粒酶逆转录酶的表达情况。方法采用无血清培养法从新生大鼠脑皮质分离培养神经干细胞；通过免疫荧光细胞染色鉴定神经干细胞；细胞计数法检测细胞的增殖情况；TRAP-ELISA法测定神经干细胞的端粒酶活性：RT-PCR法和Western-blot法测定细胞分化前后的端粒酶逆转录酶的表达。结果从新生大鼠脑皮质分离培养的神经干细胞具有端粒酶活性；体外培养12周内,神经干细胞的端粒酶活性未见变化,细胞的增殖速率亦未见明显不同；神经干细胞分化后端粒酶活性丧失,端粒酶逆转录酶的mRNA和蛋白质也均未见表达。结论在体外培养过程中,大鼠脑神经干细胞的端粒酶活性和细胞增殖速率未见变化；神经干细胞分化后端粒酶活性丧失,可能是由于端粒酶逆转录酶停止表达所致。     

去分化肌肉干细胞神经增殖与分化能力的研究

目的研究和鉴定去分化肌肉干细胞是否具有神经增殖和分化能力。方法使用不同的条件性培养基,对去分化肌肉干细胞依次进行神经增殖和神经分化诱导,并通过形态学、免疫细胞荧光化学、反转录聚合酶链式反应(RT-PCR)等手段加以鉴定。结果①去分化肌肉干细胞在神经增殖培养基诱导下,形成典型神经球(neurospheres)结构,5-乙炔基-2’脱氧尿嘧啶核苷(EdU)标记阳性,抗巢蛋白(Nestin)阳性;RT-PCR提示肌形成蛋白(myogenin)表达水平下调,而Nestin、干细胞抗原-1(Sca-1)表达上调。②经神经分化培养基诱导,神经球细胞可分化为形态学上典型的、抗中间神经丝蛋白(NFm)阳性神经元。结论去分化肌肉干细胞具有神经增殖和分化潜能。     

神经干细胞的基础和临床研究

由于固有观念的束缚,直到最近神经干细胞（neural stemcells）的概念才开始应用于成熟的中枢神经系统研究中。 一、基础研究 1.神经干细胞的定义和特性:1989年,Anderson参照造血系统干细胞的特性,提出了神经干细胞的概念:一类具有自我更新能力、高增殖潜能以及多分化潜能的细胞。关于神经干细胞的概念,目前尚无统一的定义。有人称之为神经祖细胞（neural progenitor cell）或神经前体细胞（neural precursorcell）。但这3个概念还是存在一定差异的,神经干细胞是指具有分化为神经元、星形胶质细胞、少突胶质细胞的能力,能自我更新并足以提供大量脑组织细胞的细胞。祖细胞是相对于干细胞而言,仅具有单潜能或双潜能分化能力或其干细胞样特性只能维持较短的时间。而前体细胞则是一个不太严格的术语,是指在发育进程中较另一种细胞处于更早阶段的细胞,可统称干细胞和祖细胞。     

GDNF和NO对局灶性脑缺血大鼠皮质和尾壳核神经干细胞增殖和分化的影响

目的观察胶质细胞源性神经营养因子（GDNF）对局灶性脑缺血大鼠皮质和尾壳核神经干细胞（NSCs）增殖分化以及nNOS阳性神经元分布的影响，探讨GDNF和NO对内源性NSCs增殖分化影响的作用机制。方法制作右侧局灶性脑缺血模型，左侧脑室注射GDNF，5-溴脱氧尿嘧啶（BrdU）标记DNA合成期（S期）细胞，免疫组化观察正常组、假手术组、脑缺血组、生理盐水组和GDNF组大鼠局灶性脑缺血90min后再灌注时间分别为3d、7d、14d、21d、28d的BrdU／nNOS、BrdU／NeuN、BrdU／GFAP双标阳性细胞。结果GDNF组较脑缺血组和生理盐水组行为学恢复明显；脑缺血后皮质和尾壳核BrdU和nNOS阳性细胞增多，BrdU／nNOS（38．23％±6．87％）、Br—dU／NeuN（52．38％±13．29％）、BrdU／GFAP（13．51％±8．78％）双标细胞阳性率明显增加，与其它组比较均有显著性差异（P〈0．05）。结论局灶性脑缺血激活内源性NSCs，GDNF可调节NO释放，促进NSCs增殖、分化。     

人脑胶质瘤干细胞增殖和分化过程中NOTCH-1信号通路的调控

背景：研究发现NOTCH-1信号通路在神经干细胞或神经前体细胞的自我更新、增殖及分化中起重要作用。 目的：探讨NOTCH-1信号通路在人脑胶质瘤干细胞增殖和分化过程中的调控作用。 设计、时间及地点：开放性实验,于2005-01/2007-03在解放军第三军医大学新桥医院完成。 材料：人脑胶质瘤组织、正常成人脑组织由解放军第三军医大学新桥医院神经外科提供。U251胶质瘤细胞株由解放军第三军医大学新桥医院神经外科吕胜青副教授惠赠;CHG-5胶质瘤细胞株由解放军第三军医大学西南医院病理研究所卞修武教授、姚晓红博士惠赠。 方法：取人脑胶质瘤组织、正常成人脑组织、U251及CHG-5胶质瘤细胞株,采用免疫磁珠法分选获得CD133+脑胶质瘤干细胞,加入DMEM/F12无血清培养基进行增殖培养,形成细胞克隆后,加入含体积分数为10%胎牛血清的培养液,2 h后行抗CD133和抗巢蛋白免疫荧光双标染色。 主要观察指标：人脑胶质瘤干细胞的生长和鉴定,采用WST-8法、免疫组化实验、流式细胞仪、免疫荧光双标实验检测NOTCH-1信号通路蛋白的表达。 结果：在无血清培养基中,细胞呈悬浮生长,培养24~48 h可见单个细胞开始分裂生长,形成肿瘤球,将肿瘤球转入含胎牛血清的培养基后,4 h周边细胞伸出突起并逐渐分化,24 h后肿瘤球迁移出的细胞增多,形成单细胞层。肿瘤球能同时表达干细胞标志物CD133和巢蛋白,CD133+脑胶质瘤干细胞核浆比例达2/3~3/4,突起少,胞浆中线粒体等细胞器较少,核糖体丰富,未见胶质丝等分化结构,符合干细胞超微结构特点。NOTCH-1蛋白在人脑胶质瘤组织中的表达明显强于正常成人脑组织（P < 0.01）,在CD133+ U251及CHG-5胶质瘤细胞中有很强的表达,在GFAP+和MAP2+ U251及CHG-5胶质瘤细胞中的表达强弱不等,在MBP+ U251及CHG-5胶质瘤细胞中呈弱表达或不表达。在脑胶质瘤干细胞增殖过程中能检测到较强的NOTCH-1信号通路关键基因NOTCH-1,CBF-1,HES-1 mRNA及NOTCH-1,HES-1蛋白表达;而在细胞分化时NOTCH-1信号通路关键基因NOTCH-1,CBF-1,HES-1 mRNA和HES-1蛋白表达逐渐减弱。 结论：NOTCH-1信号通路的关键蛋白分子NOTCH-1在人脑胶质瘤组织和胶质瘤细胞株中均有表达,而在正常成人脑组织中仅微弱表达。NOTCH-1信号通路关键基因NOTCH-1和HES-1的表达强弱可能参与了胶质瘤干细胞增殖和分化的调控。