辅助性T淋巴细胞22及其效应因子IL-22在自身免疫性肝炎小鼠模型中的表达及意义

目的研究自身免疫性肝炎(AIH)小鼠模型中辅助性T淋巴细胞(Th)22细胞水平及其功能因子IL-22的表达情况,探索其在AIH发病中的意义。方法选取30只4周龄雄性C57BL/6小鼠随机分为对照组(n=6)、AIH组(n=14),剩余10只用于提取肝脏特异性抗原S100。在实验第1天和第7天通过腹腔注射法将新鲜提取的S100与等体积弗氏完全佐剂混合液注射到小鼠腹腔内,第28天成功建立AIH小鼠模型(造模期间AIH组有7只小鼠因注射不当、出现腹水、感染等原因死亡)后,将小鼠经腹腔注射5%水合氯醛(0.1 ml/10 g)麻醉后摘取眼球取血,收集小鼠脾脏采用流式细胞术检测Th22细胞数,RT-PCR检测AHR mRNA水平;收集肝组织用于HE染色观察肝脏病理变化,RT-PCR和免疫印迹法检测肝组织IL-22、IL-22R表达情况;ELISA法检测血清中IL-22细胞因子水平。2组间比较采用t检验。结果对照组小鼠肝组织排列整齐,肝小叶结构清晰,AIH组小鼠汇管区有大量炎症细胞浸润,肝组织出现点状甚至碎片状坏死。AIH组Th22细胞数较对照组明显升高[(0.083±0.052)%vs(1.555±0.812)%,t=-4.405,P0.05]。AIH组小鼠脾脏中Th22转录因子AHR mRNA的相对表达量较对照组有明显升高(0.485±0.096 vs 1.268±0.366,t=-5.452,P0.05)。AIH组肝组织中IL-22 mRNA和IL-22R mRNA的相对表达量均较对照组明显升高(IL-22 mRNA:1.146±0.227 vs 3.813±0.478,t=-12.458,P0.001;IL-22R mRNA:0.276±0.037 vs 1.734±0.248,t=-15.333,P0.001);AIH组肝组织的IL-22及IL-22R的蛋白相对表达量均明显高于对照组(1.040±0.261 vs 0.410±0.077,t=-6.324,P0.05;1.432±0.304 vs 0.830±0.146,t=-6.316,P0.05)。AIH组血清IL-22水平较对照组升高,且差异有统计学意义(t=-15.799,P0.05)。结论 AIH小鼠Th22细胞及IL-22因子的表达水平均明显升高,其可能在AIH的发病中起重要作用。     

EGCG对刀豆蛋白A诱导肝损伤小鼠CXCR3表达的影响

目的观察EGCG对刀豆蛋白A(Con A)诱导的肝损伤小鼠肝组织中CXCR3表达的影响。方法 C57BL/6小鼠分成4组:正常对照组、表没食子儿茶素酸酯(EGCG)对照组、Con A模型组,EGCG+Con A模型组。EGCG对照组及EGCG+Con A模型组小鼠造模前给予EGCG口服(5 mg/kg),10 d后两组模型组小鼠通过静脉注射Con A(15 mg/kg)建造肝损伤模型,采血及留取肝组织,HE法检测肝组织病理变化,ELISA法检测肿瘤坏死因子(TNF)α,干扰素(IFN)-γ及CXCR3的水平,免疫组化法检测肝组织中CXCR3的表达。结果 Con A模型组小鼠肝损伤明显,TNF-α、IFN-γ及CXCR3的表达明显增多,与其他组比较有差异显著(P0.05);EGCG干预的模型组肝损伤减轻伴TNF-α、IFN-γ及CXCR3的表达下降,与Con A模型组比较差异明显(P0.05)。免疫组化结果同样显示Con A模型组CXCR3的表达明显增多,EGCG治疗后表达减少。结论 EGCG对Con A诱导的免疫性肝损伤小鼠有保护作用,其机制可能与调节CXCR3的表达有关。     

槲皮素对刀豆蛋白A诱导小鼠急性肝损伤的保护作用

目的探讨槲皮素对刀豆蛋白A(Concanavalin A,Con A)诱导小鼠急性肝损伤的保护作用及其可能的分子机制。方法通过检测Con A注射后8 h血清转氨酶水平及肝组织病理学评估肝损伤;应用酶联免疫法(ELISA)检测TNF-α、IFN-γ、IL-4水平;定量PCR和Western blotting或免疫组织化学检测肝组织mRNA与蛋白的表达。结果与模型组相比,槲皮素预防组显著降低了血清转氨酶水平(P0.05),且组织病理学分析表明肝脏炎症坏死程度明显减轻;与模型组相比,槲皮素预防组显著降低了血清促炎症细胞因子TNF-α、IFN-γ和IL-4的水平(P0.01);槲皮素预防组肝组织NOX4、COX-2和i NOS基因与蛋白的表达均明显低于模型组(P0.05)。结论槲皮素对Con A诱导小鼠急性肝损伤具有保护作用,其发挥有益作用的机制可能与抑制肝脏的炎症反应有关。     

促红素衍生肽对刀豆蛋白A诱导的小鼠急性肝损伤的保护作用

目的探讨外源性给予人工合成的促红素衍生肽(HBSP)对刀豆蛋白A(Con A)诱导的急性免疫性肝损伤的保护作用。方法采用小鼠尾静脉注射Con A建立急性肝损伤模型,造模后2 h给予HBSP治疗(采用尾静脉注射,8nmol/kg,每6小时1次),造模后6、12、24 h分别测定小鼠血清中ALT、AST水平,并进行肝组织病理学检查评估肝损伤程度。测定造模后12 h肝组织中IL-6、IL-1β、TNF-α、IFN-γ、IL-12、IL-4、IL-10、TGF-β表达水平,通过TUNEL及免疫组化检测(分裂型Caspase-3)评估肝脏内肝细胞凋亡情况。结果在Con A诱导的急性肝损伤小鼠模型中,HBSP给药组血清ALT和AST水平显著低于Con A模型组,并且小鼠肝组织炎症坏死程度明显低于Con A模型组。同时,80 nmol/kg的HBSP给药显著提高了注射致死剂量Con A小鼠的生存率。此外,HBSP在mRNA水平抑制肝脏中促炎因子(IL-6、IL-1β、TNF-α、IFN-γ、IL-12)的表达,促进抑炎因子(IL-4、IL-10)的表达,并显著抑制Con A诱导的急性肝损伤相关的细胞凋亡。结论 HBSP对Con A诱导的急性肝损伤具有较好的保护作用,其机制可能与其抑制炎性反应及肝细胞凋亡有关。     

儿茶素调控MAPK通路改善幼鼠过敏性气道炎症反应的机制研究

目的探索儿茶素调控丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)通路改善幼鼠过敏性气道炎症反应的机制。方法选取SPF级BALB/c纯系小鼠50只,根据随机数字表法分为模型组、正常组、阳性对照组、儿茶素低剂量组及儿茶素高剂量组,每组各10只。除正常组外,其他各组小鼠制备过敏性哮喘模型,成功造模后阳性对照组小鼠灌胃剂量为0.5 mg/kg的地塞米松药液,儿茶素低剂量组及儿茶素高剂量组分别灌胃剂量为1 mg/kg、2 mg/kg儿茶素药液,模型组和正常组灌胃等剂量生理盐水,1次/d。观察小鼠支气管肺泡灌洗液(BALF)内分类细胞、总细胞计数及白细胞介素13(IL-13)、IL-5、IL-4水平,检测小鼠肺组织内p-p38MAPK、ERK、p-ERK、p38MAPK蛋白表达及p38MAPK、ERK mRNA表达。结果与正常组比较,模型组小鼠BALF内IL-13、IL-5、IL-4水平均升高。与模型组比较,阳性对照组、儿茶素低剂量组及儿茶素高剂量组小鼠BALF内IL-13、IL-5、IL-4水平升高降低,差异均有统计学意义(P值均<0.05)。与正常组比较,模型组小鼠肺组织内p-p38MAPK、p-ERK蛋白表达升高。与模型组比较,阳性对照组、儿茶素低剂量组及儿茶素高剂量组小鼠肺组织内p-p38MAPK、p-ERK蛋白表达均降低,差异均有统计学意义(P值均<0.05)。与正常组比较,模型组小鼠肺组织内p38MAPK、ERK mRNA表达均上升,差异均有统计学意义(P值均<0.05)。与模型组比较,阳性对照组、儿茶素低剂量组及儿茶素高剂量组小鼠肺组织内p38MAPK、ERK mRNA表达均降低,差异均有统计学意义(P值均<0.05)。结论儿茶素可使过敏性哮喘小鼠气道内炎症反应有效改善,其作用机制可能和抑制ERK/MAPK信号路径激活有联系。     

羟基红花黄色素A缓解脂多糖诱导内皮细胞炎症因子表达升高的研究

目的:研究羟基红花黄色素A(HSYA)抑制脂多糖(LPS)诱导的脐静脉血管内皮细胞(Eahy926细胞)炎症因子表达升高的作用。方法:采用RT-qPCR法测定Toll样受体4(TLR4)、白介素6(IL-6)、白介素1β(IL-1β)和肿瘤坏死因子α(TNFα)mRNA表达水平及ELISA法测定IL-6、IL-1β和TNFα蛋白表达水平。结果:HSYA浓度为5×10-6mol/L、10×10-6mol/L和20×10-6mol/L时可抑制LPS(终浓度为1μg/mL)诱导的Eahy926细胞IL-6、IL-1β和TNFαmRNA(模型组vs.正常组P值均<0.01;HSYA干预中高剂量组vs.模型组P值均<0.01;HSYA干预低剂量组vs.模型组,P值均<0.05)和TNFα蛋白(模型组vs.正常组,P值均<0.01;HSYA干预IL-1β表达的中高剂量组vs.模型组,P值<0.05;HSYA干预TNFα表达的中剂量组vs.模型组,P值<0.05;高剂量组vs.模型组,P值<0.01。HSYA干预IL-6表达的低剂量组vs.模型组,P值<0.05;HSYA干预中高剂量组vs.模型组,P值<0.01)表达的升高,并随HSYA剂量升高可见药效增强。结论:HSYA对LPS诱导的Eahy926细胞TLR4、IL-6、IL-1β、TNFα表达升高有抑制作用。     

成纤维细胞生长因子21对小鼠肝纤维化的作用及其机制

目的探索成纤维细胞生长因子(FGF)21对小鼠肝纤维化的作用及机制。方法将40只雄性ICR小鼠随机分为对照组(n=10)、模型组(CCl4处理)(n=15)、治疗组(CCl4+1.0 mg/kg FGF21处理)(n=15)。连续处理36 d后取血清及肝组织。检测ALT、AST、ALP、TBil、IL-6、IL-1β、TNFα水平;Masson染色观察病理改变;4-羟脯氨酸(4-Hyp)试剂盒检测肝内4-Hyp水平;real-time PCR检测肝胶原蛋白Ⅰ(CollagenⅠ)、α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、TGFβ、IL-6、IL-1β、TNFαmRNA水平。计量资料多组间比较采用单因素方差分析,进一步两两比较采用LSD-t检验。结果 Masson染色结果显示,模型组肝纤维化程度较对照组明显加重,治疗组肝纤维化程度较模型组明显减轻;生化检测结果显示,模型组小鼠血清ALT、AST、ALP、TBil水平明显高于对照组,差异均有统计学意义(P值均0.05);治疗组小鼠血清ALT、AST、ALP、TBil水平较模型组明显下降,差异均有统计学意义(P值均0.05)。血清ELISA检测结果显示,模型组小鼠血清IL-6、IL-1β、TNFα水平明显高于对照组,差异均有统计学意义(P值均0.05);治疗组小鼠血清IL-6、IL-1β、TNFα水平较模型组明显下降,差异均有统计学意义(P值均0.05)。4-Hyp及realtime PCR检测结果显示,模型组4-Hyp以及CollagenⅠ、α-SMA mRNA水平较对照组明显升高,差异均有统计学意义(P值分别为0.004、0.001、0.001);治疗组4-Hyp以及CollagenⅠ、α-SMA mRNA水平明显低于模型组,差异均有统计学意义(P值分别为0.005、0.001、0.001);模型组小鼠肝内TGFβ、IL-6、IL-1β、TNFαmRNA水平较对照组明显升高,差异均有统计学意义(P值均0.001);治疗组小鼠肝内TGFβ、IL-6、IL-1β、TNFαmRNA水平明显低于模型组,差异均有统计学意义(P值均0.001)。结论 FGF21改善小鼠肝纤维化的作用机制与抑制肝内TGFβ和IL-6、IL-1β、TNFα等炎症因子表达有关。     

己酮可可碱抗血吸虫病肝纤维化治疗前后小鼠细胞因子的变化

目的　检测分析己酮可可碱抗小鼠血吸虫病肝纤维化前后血清TNF -α ,IFN -γ水平的变化。方法　建立血吸虫病肝纤维化小鼠模型 ,应用ELISA方法检测血吸虫病肝纤维化小鼠在己酮可可碱治疗前后血清TNF -α ,IFN -γ水平的变化。结果　己酮可可碱治疗可降低血清TNF -α的含量 ,高剂量治疗组与感染组相比P <0 0 1,而低剂量组与感染组相比P<0 0 5 ,高剂量组与低剂量组间有极显著性差异 (P <0 0 1) ;己酮可可碱治疗后可提高IFN -γ的含量 ,高剂量己酮可可碱治疗组和低剂量治疗组与感染组相比P值均小于 0 0 1,高剂量组与低剂量组间有显著性差异 (P <0 0 5 ) ;高剂量治疗组疗效与吡喹酮治疗组相比无统计学上的差异 (P >0 0 5 )。结论　己酮可可碱可明显降低血吸虫病肝纤维化小鼠血清TNF -α ,提高IFN -γ的水平从而发挥其抗肝纤维化的作用 ,作用与剂量呈正相关     

川芎嗪对刀豆蛋白A诱导的小鼠肝纤维化JAK2/STAT3信号通路的影响

目的为探究JAK2/STAT3信号通路与炎性因子白细胞介素6、1β、10(interleukin-6、1β、10)的关系,IL-6、IL-1β、IL-10是否参与刀豆蛋白A(ConA)诱导的小鼠肝纤维化过程以及川芎嗪对其的影响。方法 BALB/C小鼠随机分为5组,正常对照组(A组)10只;ConA模型(B组)15只;川芎嗪低剂量(100 mg/kg)组(C组)15只;川芎嗪中剂量(200 mg/kg)组(D组)15只,川芎嗪高剂量(800 mg/kg)组(E组)15只。通过实时荧光定量PCR检测IL-6mRNA、IL-1βmRNA和IL-10mRNA的表达水平;Western-blot检测JAK2、STAT3和p-JAK2、p-STAT3的表达情况。结果与模型组相比,小鼠经不同剂量川芎嗪干预8周后,IL-6mRNA和IL-1βmRNA表达水平均降低,且与给药剂量呈相关性;IL-10mRNA表达水平升高,且与给药剂量呈相关性;p-JAK2、p-STAT3蛋白表达均降低,且下降程度与给药呈剂量相关性;JAK2和STAT3蛋白表达变化不明显。结论川芎嗪可能通过JAK2/STAT3信号通路及炎性因子IL-6、IL-1β、IL-10对ConA诱导的小鼠肝纤维化产生保护作用。     

落新妇甙对热缺血再灌注损伤肝脏肿瘤坏死因子α与白细胞介素-10表达的影响

目的 观察落新妇甙对热缺血再灌注(I/R)损伤肝脏Th1、Th2型细胞因子表达的影响. 方法 C57BL/6小鼠随机分为4组:假手术组、模型组,落新妇甙小剂量(10 mg/kg)干预组和大剂量(40mg,/kg)干预组.干预组小鼠于缺血前24h和1 h分别给予10mg/kg或40mg/kg的落新妇甙腹腔注射,建立70%部分肝I/R模型.收集肝组织标本,Western blot检测肝组织中肿瘤坏死因子(TNF)α,白细胞介素(IL)-10蛋白含量,RT-PCR检测肝组织TNF α、IL-10 mRNA的水平.多组间比较采用单因素方差分析,两两比较采用SNK法.结果 与I/R模型对照组比较,小、大剂量落新妇甙干预组肝组织中TNF α蛋白表达水平依次降低,与TNF α mRNA的半定量RT-PCR结果 相符(相对表达量分别为1.74±O.12与1.56±0.09、0.82±0.12,P值均<0.05);而IL-10蛋白表达水平依次升高,与IL-10 mRNA的半定量RT-PCR结果 相符(相对表达量分别为0.96±0.08与1.11±0.17、1.47±0.08,P值均<0.05).结论 落新妇甙干预能抑制I/R损伤肝组织中Th1型细胞因子TNFα的高表达,同时促进Th2型细胞因子IL-10的表达.     

多房棘球蚴病患者肝病灶组织差异表达基因的研究

目的探讨多房棘球蚴感染小鼠肝差异基因在多房棘球蚴病患者肝病灶组织中的表达情况及意义。方法选取高通量基因表达数据库中编号为GSE24376的小鼠感染多房棘球蚴基因芯片数据集,分析感染小鼠和未感染小鼠之间的差异表达基因,对差异表达基因进行基因本体(GO)分析。取6例多房棘球蚴病患者肝病灶组织和距离病灶组织2 cm的周围肝组织,采用荧光定量PCR检测2个高表达差异基因mRNA相对转录水平。取45份多房棘球蚴病患者石蜡包埋肝组织样品(炎性反应和肝纤维化改变严重的病灶29份,较少炎性细胞浸润和肝纤维化病变的肝组织16份),采用免疫组化法分析2个高表达差异基因的表达情况。用SPSS 21.0统计学软件对数据进行统计分析。结果生物信息学分析结果显示,共筛选出21个差异表达基因,其中9个基因表达上调,12个基因表达下调。GO分析结果显示,差异基因主要位于细胞内囊泡及细胞外基质等细胞成分中,参与了中性粒细胞的脱颗粒及活化等生物过程,并且具有CC趋化因子受体结合活性及趋化因子活性。高表达差异基因CHI3L3 (在人体中为CHI3L1)和CCL8荧光定量PCR结果显示,6例多房棘球蚴病患者肝病灶组织中CHI3L1和CCL8 mRNA相对转录水平均高于病灶周围肝组织(P <0.01),最高倍数分别达7倍和9倍。免疫组化分析结果显示:29份多房棘球蚴病患者肝组织炎性反应和肝纤维化改变严重的病灶样品中,有20份(占69%)呈CHI3L1蛋白高表达,其主要着色部位位于细胞浆;有22份(占76%)呈CCL8蛋白高表达。16份多房棘球蚴病患者肝组织轻微炎症样品中,2份(占13%)呈CHI3L1蛋白阳性;4份(占33%)呈CCL8蛋白阳性。炎性反应和肝纤维化改变严重的病灶组织中,CHI3L1和CCL8蛋白的阳性表达率分别达96%和97%,均高于轻微炎症肝组织的3%和8%(P <0.01)。结论 CHI3L1和CCL8蛋白在多房棘球蚴病患者肝组织中表达增高,提示二者在机体对虫体的免疫应答过程中发挥了一定作用。     

Profiling of differentially expressed chemotactic-related genes in MCP-1 treated macrophage cell line using human cDNA arrays

AIM: To study the global gene expression of chemotactic genes in macrophage line U937 treated with human monocyte chemoattractant protein-1 (MCP-1) through the use of ExpreeChipTMO2 cDNA array. METHODS: Total RNA was extracted from MCP-1 treated macrophage line U937 and normal U937 cells, reversely transcribed to cDNA, and then screened in parallel with HO2 human cDNA array chip. The scanned result was additionally validated using RT-PCR. RESULTS: The result of cDNA array showed that one chemotactic-related gene was up-regulated more than two-fold (RANTES) and seven chemotactic-related genes were down-regulated more than two-fold (CCR1, CCR5, ccll6, GROβ, GROγ,IL-8 and granulocyte chemotactic protein 2) in MCP-1 treated U937 cells at mRNA level. RT-PCR analysis of four of these differentially expressed genes gave results consistent with cDNA array findings. CONCLUSION: MCP-1 could influence some chemokine and receptor expressions in macrophages in vitro. MCP-1 mainly down-regulates the expression of chemotactic genes influencing neutrophilic granulocyte expression (GROβ, GROγ, IL-8 and granulocyte chemotactic protein 2), and the mRNA level of CCR5, which plays a critical role in many disorders and illnesses.     

Human myometrial genes are differentially expressed in labor: a suppression subtractive hybridization study

Human parturition is effected by a cascade of factors, of which many are unknown. We aim to identify the genes that are changed by labor in the human myometrium by suppression subtractive hybridization. We also seek to ascertain whether these genes are differentially expressed in the myometrium at the upper or fundal and lower segments of the uterus. Term myometrial tissues were obtained from laboring and nonlaboring women undergoing cesarean section after obtaining informed consent. Total RNA was used in suppression subtractive hybridization (CLONTECH PCR Select) to produce two subtracted cDNA libraries enriched for genes expressed during or before labor, labor and not-in-labor libraries, respectively. Dot blot screening of 400 positive clones, constituting 20% of the two subtracted libraries, revealed 30 differentially expressed clones, 14 of which were up-regulated by labor. Among the 10 known genes that were up-regulated in labor, 6 had apparent immune regulatory and inflammatory roles. Three are well-known inflammatory mediators and modulators that were previously linked with parturition: IL-8, manganese superoxide dismutase (MnSOD), and metalloproteinase-9. Three others, interferon-inducible 1-8d gene, elongation factor 1alpha, and nucleophosmin, have not been previously linked with labor. Constitutively expressed genes, including cyclophilin and alpha-actin, were found to be altered by labor. Quantitative real-time RT-PCR using Taqman probes further confirmed the up-regulation of some of these genes. The amounts of the specific genes assayed were standardized to 18S ribosomal RNA and are expressed as mean +/- SEM. Quantitative real-time RT-PCR showed that IL-8 mRNA rose from 0.003 +/- 0.002 in nonlaboring samples (n = 38) to 0.24 +/- 0.11 (n = 20) in gestational-age-matched spontaneously laboring women (P = 0.035). Similarly, MnSOD rose from 0.11 +/- 0.02 (n = 24) to 1.23 +/- 0.56 (n = 24) in gestational-age-matched women (P = 0.047). Additionally, cyclophilin, often used as a constitutive or housekeeping gene marker, increased from 0.0008 +/- 0.0002 (n = 6) to 0.002 +/- 0.0004 (n = 6; P = 0.008) during labor. Notably, MnSOD mRNA was differentially distributed between the upper (0.63 +/- 0.18) and lower (0.15 +/- 0.05; n = 15; P = 0.022) segments of the uterus, but IL-8 was not (n = 17; P = 0.97). Induced labor further showed significantly higher levels of IL-8 (0.63 +/- 0.21; n = 14) than spontaneous labor (0.22 +/- 0.11; n = 20; P = 0.046), but not MnSOD (P = 0.1). This work identifies novel as well as known genes that were not previously associated with parturition. It extends previous data indicating that there is differential expression of some, but not all genes within the gravid human uterus. Inflammatory genes constitute a major proportion of the known genes found to be up-regulated in labor, lending support to the hypothesis of an inflammatory mechanism for human parturition. This work further indicates that many factors associated with human labor and their complex interactions remain to be elucidated.     

支气管哮喘患者记忆CD+4T淋巴细胞活化相关基因的研究

目的 筛选及鉴定支气管哮喘(简称哮喘)患者记忆CD+4 T淋巴细胞活化相关基因.方法 使用差异显示聚合酶链反应(DDPCR)方法筛选哮喘患者和健康人记忆CD+4 T淋巴细胞差异表达基因,采用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)法检测差异表达基因的mRNA表达水平.统计学处理采用SPSS 10.0软件.计量资料采用-x±s表示,组间比较采用双因素方差分析,P＜0.05为差异有统计学意义.结果 经DDPCR克隆获得了19条差异片段,经同源性分析显示其中2条片段分别与白细胞介素-7(IL-7)和MM-1基因高度同源,采用RT-PCR检测进一步证实了这2个基因在哮喘患者激活的记忆CD+4 T淋巴细胞中表达白细胞介素-7和MMI基因激活后分别为0.390±0.029、0.629±0.047(F值分别为983、1264,P均＜0.05).结论 哮喘患者激活的记忆CD+4 T淋巴细胞中IL-7和MM-1基因的上调表达可能是哮喘患者与健康人对于变应原出现不同反应的分子机制之一.     

食管鳞状细胞癌组织中基因表达差异的初步分析

目的 应用寡核苷酸芯片技术分析食管鳞状细胞癌、癌旁、正常组织中基因表达差异,探讨与食管鳞状细胞癌发生、发展相关的基因变化.方法 Trizol一步法抽提食管癌、癌旁、正常组织中总RNA,纯化后逆转录为cRNA,经荧光标记、纯化,与Agilent寡核苷酸芯片(21 074探针)杂交,应用Agilent扫描仪获取图像,特征提取软件定量分析处理.挑选明显差异表达的基因进行实时荧光定量逆转录-PCR、免疫组化、免疫印迹验证.结果 ①经寡核苷酸芯片技术筛选差异表达基因的结果显示:上调38个、下调61个.②实时荧光定量逆转录PCR验证提示:差异较大的上调基因有CTHRC1、INHBA、SPP1、LUM、HRK,其中CTHRC1差异最为显著.③免疫组化:CTHRC1在食管鳞癌组织中有增强表达,表达率为56.5%(26/46).在淋巴结转移组中的阳性表达率显著高于无淋巴结转移组(P<0.05).④免疫印迹:在食管癌细胞株TE-13及Eca-109中均检测到CTHRC1的表达.结论 CTHRC1可能是食管鳞癌最为重要的生物分子之一.     

Microarray analysis of endothelial differentially expressed genes in liver of cirrhotic rats

BACKGROUND & AIMS: There is a long-standing interest in the identification of endothelial-specific pathways for therapeutic targeting in cirrhosis. Therefore, the aim of this study was to evaluate differences in gene expression patterns between liver endothelial cells (LECs) from control and cirrhotic rats by using microarrays. METHODS: LECs were obtained by isopycnic centrifugation. LECs gene expression was then analyzed on high-density oligonucleotide microarrays. RESULTS: Analysis of gene expression revealed that most of the differentially expressed mRNA in cirrhosis are associated with extracellular matrix remodeling, inflammation, antioxidant/stress response, and cell signaling. CONCLUSIONS: The collective expression changes observed within some functional groups of genes indicate that LECs in cirrhotic livers may contribute to lymphangiogenesis, enhancement of fibrogenesis and inflammatory processes, changes in cell-cell interaction with up-regulation of adherens junction proteins, and alterations in the intrahepatic vascular tone because of the down-regulation of genes involved in vasodilatation.     

应用基因芯片技术研究甲状腺乳头状癌的基因表达

目的　应用基因芯片技术研究甲状腺乳头状癌 (PTC)和正常成人甲状腺组织基因的差异表达。方法　分别用Cy5和Cy3两种不同的荧光染料通过逆转录反应将PTC组和对照组甲状腺组织的mRNA分别标记成探针 ,并与载有一组靶基因的基因表达谱芯片进行杂交。通过扫描荧光强度 ,计算机软件分析 ,寻找两组差异表达基因 ,并用RT PCR、免疫组化对其中两条基因进行验证。结果　共有 65条差异表达基因 ,其中表达增加的有 48条 (2 .0倍以上 ) ,表达降低的有 17条 (0 .5倍以下 )。RT PCR、免疫组化结果与芯片扫描结果一致。结论　基因芯片是筛选PTC与正常成人甲状腺组织差异表达基因的有效方法。通过筛选所得差异基因提示 ,PTC的发病涉及细胞外基质、细胞因子、受体信号转导等多个方面。