姜黄素对肝癌细胞分化相关代谢指标的影响

【目的】研究姜黄素对肝癌细胞BEL-7402诱导细胞分化的机制。【方法】用酶促反应试剂盒检测细胞浆中γ-谷氨酰转肽酶（γ-GT）活性,免疫组化染色检7714细胞浆中甲胎蛋白（AFP）合成情况,放免法检测细胞AFP和白蛋白（ALB）分泌量。观察不同浓度姜黄素对以上指标的影响。【结果】①各实验组γ-GT活性在培养过程中逐渐下降,自d2开始显著下降,d3～5缓慢下降,且较同期培养的对照组显著性降低（P〈0．01）。②细胞免疫组化结果显示,对照组细胞AFP表达较强,着色较深,呈棕黄色,主要成团浓集分布于胞浆中。实验组AFP在胞浆内均匀分布,呈黄色,着色较淡。随姜黄素浓度的增加而阳性程度减弱。③各实验组AFP分泌量均于d2显著下降,d5降至最低值。实验组细胞AFP分泌量较同天培养的对照组细胞显著降低（P〈0．01）。④对照组ALB分泌量自d2开始明显升高,自d5开始有小幅度下降,实验组细胞ALB分泌量较同天培养的对照组细胞显著性升高（P〈0．01）。【结论】姜黄素可影响肝癌细胞BEL-7402代谢指标,诱导其在体外向正常肝细胞分化。     

姜黄素对肝癌细胞Bel7402、QGY7703增殖凋亡及Wnt／β-catenin信号通路的影响

目的观察不同剂量的姜黄素在体外对肝癌细胞Bel7402、QGY7703生长的影响,探讨姜黄素抑制肝癌细胞增殖、促进其凋亡的可能分子学机制。方法 MTT 法检测不同浓度姜黄素对 Bel7402、QGY7703细胞增殖的抑制作用,流式细胞仪分析细胞的凋亡率,Western Blot 法检测姜黄素对Wnt通路中β-catenin蛋白表达的影响,PCR法检测下游靶基因c-myc、VEGF、cyclinD1 mRNA在不同浓度姜黄素作用后表达情况的变化。结果 MTT实验显示：经浓度为5、10、20、40、80μmol/L的姜黄素作用48 h后,肝癌细胞Bel7402、QGY7703的增殖明显受到抑制,抑制率与阴性对照组比较有统计学意义（ P＜0.05）。药物浓度越大,增殖抑制率越明显,呈剂量依赖性（ r＝0.9626,r＝0.9720）。 FCM分析显示：实验组肝癌细胞凋亡率均高于阴性对照组（P＜0.05）,且随着药物浓度的增加,细胞凋亡率逐渐升高,呈剂量依赖性（r＝0.9646,r＝0.9949）。 Western Blot结果显示：经姜黄素作用48 h后的Bel7402和QGY7703细胞,其胞质β-catenin蛋白含量低于阴性对照组,除10μmol/L浓度组外,20、40、80μmol/L浓度组与阴性对照组比较均有统计学意义（ P＜0.05）。药物浓度越大,胞质β-catenin蛋白含量越少,呈剂量依赖性（ r＝-0.9594,r＝-0.9488）。 PCR结果显示：经姜黄素作用后的肝癌细胞,c-myc、VEGF、cyclinD1 mRNA表达量较阴性对照组均有所减少（ P＜0.05）。结论姜黄素能够有效地抑制肝癌细胞的增殖并促进其凋亡,其机制可能与姜黄素下调经典Wnt/β-catenin信号通路有关。     

p73β基因对肝癌细胞的影响

目的扩增及鉴定包含人类p73基因TAp73β转录本蛋白编码区的cDNA片段,将此片段克隆入真核表达载体,转染肝癌细胞,观察其对肝癌细胞生物活性的影响。方法从手术活体组织中提取总RNA,采用RT-PCR技术扩增TAp73β基因全长编码序列CDS（full-length coding sequence）,目的片段回收纯化后用限制性内切酶酶切及测序两种方法鉴定目的片段正确与否并检测其纯度、浓度;并转染肝癌Hep3B细胞,用MTT法进行细胞凋亡检测。结果该扩增片段经限制性核酸内切酶酶切图谱分析,与预期结果吻合,转染的肝癌Hep3B细胞出现凋亡。结论包含人类p73基因TAp73β转录本蛋白编码区的cDNA片段被成功扩增且末端带有限制性核酸内切酶XbaⅠ、KpnⅠ识别序列,它对肝癌细胞有抑制作用,从而为临床上肝癌的治疗提供了新思路。     

姜黄素致HepG-2细胞的凋亡作用及对bcl-2/bax表达的影响

目的:研究姜黄素致人肝癌HepG-2细胞的凋亡作用及bax与bcl-2 mRNA表达的变化,为姜黄素的临床应用提供实验依据.方法:当HepG-2细胞处于对数生长期时,分别加入不同浓度(0、2.5、5、10、20、30 mg/L)的姜黄素处理48 h,MTT试验检测细胞的抑制率;流式细胞仪检测细胞凋亡率;实时荧光定量PCR检测bax和bcl-2mRNA的含量.结果:随着姜黄素浓度的增高,其对HepG-2细胞的抑制作用逐渐增强.当姜黄素浓度为30mg/L时,其抑制率达到(58.23±2.56)%,IC50=25.44 mg/L,而细胞的凋亡率由对照组的(1.1±0.3)%上升到(38.4±1.5)%;bax和bcl-2分别是对照组的(5.00±0.55)倍和(0.28±0.05)倍.结论:姜黄素能抑制HepG-2细胞的生长,诱导细胞凋亡,它的分子机制可能是上调bax基因和下调bcl-2基因的表达.     

金黄色葡萄球菌耐药的临床分析及姜黄素对其抑制效果分析

目的分析金黄色葡萄球菌(SA)耐药情况和姜黄素及其新衍生物对其抑制的效果。方法采用法国梅里埃公司生产的全自动药敏鉴定仪鉴定,用滤纸保藏法保存菌株,姜黄素及其衍生物抑菌效果采用琼脂纸片扩散法进行测试。结果甲氧西林耐药金黄色葡萄球菌(MRSA)呈多重耐药性,但未发现万古霉素耐药SA或万古霉素中介SA。甲氧西林敏感金黄色葡萄球菌(MSSA)除对青霉素、氨苄西林的耐药率为80%以上外,对其余抗菌药物均较敏感。姜黄素衍生物2号药物对SA菌株体外药敏有明显的抑菌环。结论临床治疗SA应根据药敏试验结果,合理使用抗药物。姜黄素衍生物的抑菌效果比姜黄素明显,其中2号衍生物效果最明显。     

辐射对肝癌细胞HepG2多药耐药基因MDR1表达影响的实验研究

目的辐射对肝癌细胞多药耐药性的影响。方法取肝癌细胞株HepG2及HepG2/ADM分别进行X线照射(10Gy),于照射前后分别采用流式细胞仪检测各组细胞表面Pgp变化,采用RT-PCR法检测MDR1表达变化。结果照射前后HepG2细胞表面P-gp阳性表达率分别为:(11.3±1.2)%(、27.4±3.9)%;HepG2/ADM组为:(45.5±5.1)%,(48.1±6.1)%。HepG2组P-gp在细胞膜上的表达较照射前后差异有显著性意义(P<0.01)。结论辐射可诱导肝癌细胞HepG2 mdr1基因表达增强,细胞膜表面Pgp表达增加。对HepG2/ADM耐药性影响较小。     

姜黄素逆转耐药作用与Caspase-3关系研究

目的:探讨姜黄素逆转结肠癌耐药细胞HCT-8/5-FU耐药性与Caspase-3活化的关系。方法:CCK-8法测定姜黄素对耐药细胞耐药逆转作用;荧光显微镜、DNA琼脂糖凝胶电泳及全自动荧光酶标仪观察无细胞毒作用的姜黄素、5-氟尿嘧啶(5-FU)及二者联合作用时细胞凋亡情况、Caspase-3酶活性变化。结果:姜黄素能逆转HCT-8/5-FU耐药性;当姜黄素与5-FU诱导耐药细胞凋亡情况相似时,姜黄素组表达更高的Caspase-3,联合用药诱导耐药细胞凋亡,增强Caspase-3酶活性大于两单用药组之和。结论:姜黄素能逆转结肠癌耐药细胞多药耐药性,解除部分5-FU对耐药细胞Caspase-3活化的抑制,诱导耐药细胞凋亡可能为其逆转机制之一。     

姜黄素对人肝癌细胞株 He pG2巨噬细胞迁移抑制因子表达的影响

[目的]检测人肝癌细胞株HepG2中巨噬细胞迁移抑制因子（MIF）的表达及释放,探讨姜黄素对HepG2中MIF表达的影响。[方法]反转录聚合酶链反应（RT-PCR）及免疫印迹法（Western Blot）检测对照组及不同浓度姜黄素干预组（10,20,30,40,50μmol/L）HepG2中MIF mRNA及蛋白表达水平;ELISA检测对照组及不同浓度姜黄素干预组（10,20,30,40,50μmol/L ）培基中 M IF蛋白水平。[结果]HepG2高表达MIF mRNA及MIF蛋白,各浓度姜黄素干预均可抑制HepG2中MIF mRNA及MIF蛋白的表达,且呈浓度依赖效应（ P ＜0．05）;HepG2可自分泌MIF蛋白,各浓度姜黄素干预均可抑制 HepG2中MIF 蛋白的释放,且呈浓度依赖效应（ P ＜0．05）。[结论]人肝癌细胞株HepG2可表达及释放MIF ;姜黄素在转录和翻译水平能有效抑制M IF的表达及释放,这可能是其发挥抗肿瘤效应的分子机制之一。     

小凹蛋白对生长抑素与姜黄素抗肝纤维化作用的影响

目的比较小凹蛋白、生长抑素、姜黄素单独及联合应用抗肝纤维化的作用并探讨其作用机制。方法将3种药物分别单独作用于大鼠肝纤维化模型和大鼠肝星状细胞。再将小凹蛋白分别联合生长抑素及姜黄素作用于大鼠肝纤维化模型和大鼠肝星状细胞。检测血透明质酸酶(HA)、Ⅳ型胶原含量(CⅣ);MTT法检测肝星状细胞增殖抑制率;免疫组化法检测转化生长因子-β1(TGF-β1)的表达。结果生长抑素及姜黄素均有抗肝纤维化作用,小凹蛋白可增强姜黄素抗肝纤维化的作用(P<0.05),但未观察到其增强生长抑素抗肝纤维化的作用(P>0.05)。小凹蛋白与姜黄素均可抑制TGF-β1表达(P<0.05),两者联用,抑制作用更强(P<0.05)。结论抑制TGF-β1可能是姜黄素与小凹蛋白抗肝纤维化的共同作用途径之一。     

TACE对肝癌细胞P-GP表达的影响

目的 分析肝动脉栓塞化疗(TACE)对肝癌细胞多药耐药基因表达产物P糖蛋白(P-GP)的表达影响,P-GP和肝癌预后的关系,从耐药基因角度评价TACE对肝癌治疗的价值.方法 采用免疫组织化学S-P法检测30例肝动脉栓塞化疗后二期切除的原发性肝癌(HCC)及癌旁组织中P-GP的表达情况,并以本课题前期研究的30例未经TACE治疗的HCC及癌旁组织中P-GP表达情况作对照.结果 TACE后P-GP在HCC和癌旁组织中阳性率分别为93.3%(28/30)、56.7%(17/30),与未做TACE的阳性率[83.3%(25/30)、30.0%(9/30)]相比,差异均有统计学意义(P<0.05).P-GP阳性病例比P-GP阴性病例生存时间短,P-GP表达不同的肝细胞肝癌病人的生存时间有差别(P<0.05).结论 P-GP参与介导HCC的多药耐药,TACE后肝癌细胞P-GP表达阳性率明显增高,TACE后导致继发性多药耐率增高.P-GP的表达有一定的预后判断意义.     

NOR1基因真核表达载体的构建及其对肝癌细胞生长的影响

目的NOR1基因真核表达载体pcDNA3．1（＋）的构建并了解其对肝癌细胞系HepG2生长的影响。方法将NOR；cDNA亚克隆至pcDNA3．1（＋）真核表达载体上，并把重组质粒pcDNA3．1（＋）／NOR，经脂质体转染至HepG2细胞中，运用MTT法、台盼蓝排斥等试验、流式细胞仪等分析NOR，基因对肝癌细胞HepG2生物学活性的影响。结果成功构建了NOR。基因真核表达体pcDNA3．1（＋）／NORl，经pcDNA3．1（＋）／NOR1转染后的HepG2细胞生长速度明显抑制（P〈0．05），且细胞从G0／G1期进入S期明显延缓。结论重组质粒pcDNA3．1（＋）／NOR1能在HepG2细胞内表达，且能影响HepG2细胞的生长。     

姜黄素增强卵巢癌耐药细胞株COC1/DDP对顺铂敏感性的研究

目的:探讨姜黄素的使用与卵巢癌顺铂耐药细胞株COC1/DDP对顺铂化疗敏感性的关系。方法:采用MTT法和TUNEL法检测姜黄素、顺铂单独和联合作用时对COC1/DDP细胞增殖和凋亡的影响;RT-PCR检测上述各组细胞凋亡相关基因Bcl-2、Smac的表达。结果:顺铂的浓度在1.25～5μg/mL时与姜黄素合用后耐药细胞生存率下降明显(P<0.05),尤以2.5μg/mL顺铂和20μmol/L姜黄素联合作用时,耐药细胞生存率下降最明显;顺铂与姜黄素联合用药与单独用药相比,凋亡率明显增加(P<0.05);联合用药与单独用药相比Bcl-2 mRNA的表达明显降低(P<0.05),Smac mRNA的表达明显增高(P<0.05)。结论:姜黄素能够显著抑制COC1/DDP增殖,并能增强该细胞系对顺铂的敏感性,机制可能与降低Bcl-2基因的表达,增加Smac基因的表达有关。     

姜黄素对大鼠肝纤维化的保护作用及其对肝脏NADPH氧化酶4表达的影响

目的：探讨姜黄素对四氯化碳（carbon tetrachloride,CCl4）诱导的大鼠肝纤维化的影响及姜黄素能否抑制肝脏NADPH 氧化酶4（NADPH oxidase 4,NOX4）的表达.方法：腹腔注射CCl4（每周2次,共6周）诱导SD大鼠肝纤维化模型.将SD大鼠随机分成4组：正常对照组（n=10）、单纯给药组（n=10）、模型对照组（n=15）和姜黄素预防组（n=1 5）,姜黄素给药剂量为200 mg/kg体质量.检测血清中ALT、AST及活性氧自由基（reactive oxygen species,ROS）的水平;肝损伤和肝纤维化评估采用肝组织HE染色与天狼星红染色;分别用实时荧光定量PCR、Western blotting和免疫组织化学方法检测肝组织NOX4的表达.结果：姜黄素能减轻CCl4诱导后大鼠的肝损伤与肝纤维化,抑制血清ROS的产生.与模型对照组相比,姜黄素预防组的肝纤维化大鼠肝脏中NOX4 mRNA与蛋白表达水平显著降低.结论：姜黄素能减轻CCl4诱导大鼠发生的肝损伤与肝纤维化,其效应可能与抑制肝脏NOX4过表达有关.     

ATM基因经RNAi表达沉默后对肝癌细胞放射敏感性的影响

目的:探讨ATM基因经RNAi表达沉默后对肝癌细胞放射敏感性的影响.方法:将含有ATM干扰片段的慢病毒转染至原发性肝癌细胞株HepG2细胞制成单细胞悬液,经不同剂量照射后培养细胞,观察干扰前后HepG2细胞照射细胞集落形成率,利用Graphpad prism 5.0软件拟合线性二次曲线模型和单击多靶模型,计算出放射生物学参数.结果:HepG2细胞干扰前后D0值分别为:3.087 0±0.033 7、3.237 3±0.036 7,Dq值分别1.749 0±0.060 9、1.507 6±0.022 0,α/β值分别0.753 0±0.120 9、3.451 0±0.034 0,干扰前后D0、Dq、α/β值差异均有显著性.放射增敏比SER=1.309 9.结论:ATM基因的表达水平可影响肝癌细胞的放射敏感性,ATM基因沉默表达后改变了肝癌细胞的放射生物学参数,起到放射增敏作用.ATM基因可能在原发性肝癌放射敏感性中起重要作用.     

姜黄素联合全反式维甲酸诱导耐药的急性早幼粒细胞白血病细胞分化的实验研究

本研究旨在探讨姜黄素联合全反式维甲酸(ATRA)对耐药的急性早幼粒细胞白血病细胞分化的影响及其分子机制。以耐药的NB4-R1细胞为实验对象,对细胞进行计数和细胞形态学观察,应用流式细胞术(FCM)检测姜黄素单用或联合ATRA对NB4-R1细胞增殖、分化的影响;用Western blot检测AKT磷酸化在细胞分化中的变化。结果显示,全反式维甲酸对NB4-R1细胞增殖无影响,但可增强姜黄素对NB4-R1生长的抑制作用。单用姜黄素或全反式维甲酸对细胞分化无影响,姜黄素联合全反式维甲酸可明显诱导细胞CD11b表达,细胞在形态上呈明显分化特征。全反式维甲酸可在短时间内促进NB4细胞AKT第473苏氨酸磷酸化,而对NB4-R1细胞中的AKT磷酸化影响不大。姜黄素可以促进NB4-R1细胞AKT磷酸化,而联合全反式维甲酸可进一步增强AKT磷酸化。结论:PI3K/AKT通路失活可能是导致APL细胞耐药的因素之一,而姜黄素通过活化PI3K/AKT信号通路逆转APL耐药,促进NB4-R1细胞分化。     

外源性PDGF-DD蛋白对肝癌细胞株BEL-7402的体外作用

目的:探讨外源性PDGF-DD蛋白对PDGF-D和β-PDGFR阳性表达的人肝癌细胞株BEL-7402增殖和转移相关基因VEGF及CXCR4表达的影响.方法:浓度为0 ～ 100 pg/mL PDGF-DD蛋白作用于肝癌细胞株BEL-7402 48 h,MTT检测细胞活性;流式细胞仪检测细胞周期;RT-PCR检测VEGF mRNA和CXCR4 mRNA表达.结果:外源性PDGF-DD蛋白干预细胞后,可促进细胞增殖,且在0 ～ 100 pg/mL范围内呈剂量依赖性;周期分布显示G0/G1期细胞比例下降,S期细胞比例增多;且上调VEGF mRNA和CXCR4 mRNA的表达.结论:外源性PDGF-DD能促进BEL-7402细胞增殖,上调VEGF、CXCR4 mRNA的表达.提示PDGF-D及其信号传导系统在肝癌的发生、发展及转移中可能发挥重要的作用,可作为肝癌预后预测指标和治疗靶点.     

姜黄素诱导维甲酸耐药的NB4-R1细胞凋亡及其机制

为了探讨姜黄素对维甲酸耐药的急性早幼粒细胞白血病细胞生长抑制作用及其机制,以耐药的NB4-R1细胞为实验对象,用MTT法检测细胞生长情况,用光学显微镜观察细胞形态特征,用流式细胞术测定细胞线粒体电位变化,用Western blot检测细胞凋亡相关蛋白的表达水平。结果表明,虽然NB4-R1细胞对维甲酸耐药,但对姜黄素的敏感性与对维甲酸敏感的NB4细胞一致,姜黄素至少对NB4-R1细胞的生长抑制作用呈时间和剂量依赖性。细胞形态学检查显示,经20μg/L姜黄素处理后的细胞内出现凋亡小体。流式细胞术检测发现,NB4-R1细胞经姜黄素处理后线粒体膜电位下降。Western blot检测显示,caspase3前体表达下降,活化caspase3表达升高,BCL-XL表达降低,剪切形式的PARP表达水平明显上调。结论:姜黄素能抑制NB4-R1细胞生长并诱导其凋亡。     

恶性血液病多药耐药基因表达的临床研究

恶性肿瘤治疗失败的主要原因是临床耐药 ,这是广大医学工作者在治疗恶性肿瘤中迫切需要解决的重要课题 ,成人急性白血病ＭＤＲ1表达阳性 ,其化疗效果差[1] 。本文对一组 2 0 1例血液系统恶性肿瘤患者 (治疗前 13 9例及治疗后 62例 )的ＭＤＲ1表达情况进行分析 ,以探讨治疗前及治疗后恶性血液病多药耐药基因的变化。1　材料与方法1.1　一般资料　 2 0 1例恶性血液病均为本院 1996年 5月至1998年 10月住院患者 ;其中急性淋巴细胞白血病 (ＡＬＬ) 3 8例 ,急性非淋巴细胞白血病 (ＡＮＬＬ) 91例 ,恶性淋巴瘤 (ＮＨＬ ) 2 8例 ,其他恶性肿瘤 44例…     

姜黄素对肝星状细胞株CTGF表达的影响

目的:研究姜黄素(curcumin)体外对肝星状细胞(hepatic stellate cell,HSC)的作用,以研究curcumin抗肝纤维化作用的可能机制.方法:MTT法测定curcumin对肝细胞株HSC-T6的抑制率,用RT-PCR检测curcumin对肝细胞株结缔组织生长因子(connectivetissue growth factor,CTGF)mRNA表达的影响,用Western blot法检测对其蛋白质表达的影响.结果:Curcumin对肝细胞株HSC-T6的增殖有抑制作用,且呈时效和量效关系,以10 μmol/L的效果最佳;通过RT-PCR和Western blot法的检测发现curcumin能抑制CTGF的mRNA和蛋白质的表达.结论:Curcumin能在体外抑制HSC的生长,而且可以抑制细胞的CTGF的表达,可能这就是curcumin抗肝纤维化的一个作用机制.     

三七总皂甙对人肝癌细胞的抑制作用

目的：观察三七总皂甙对人肝癌细胞SMMC-7721增殖、凋亡及缝隙连接细胞间通讯的影响。 方法：实验于2005—08／2006—02在江西省分子医学重点实验室完成。①人肝癌细胞株SMMC-7721由江西省医学科学研究所提供，三七总皂甙注射剂（从五加科人参属多年生草本植物三七中提取的有效成分，昆明制药集团股份有限公司）。②以二苯基四氮唑溴盐比色法观察三七总皂甙对SMMC-7721细胞增殖的影响，分为三七总皂甙25，50，100，200，400，800mg／L组，设不加三七总皂甙为空白对照。⑧用流式细胞仪检测细胞周期时相分布及细胞凋亡率，并采用划痕标记／染料示踪技术观察三七总皂甙对SMMC-7721细胞的缝隙连接细胞问通讯功能的影响。 结果：①三七总皂甙对SMMC-7721细胞增殖的抑制作用：随着三七总皂甙浓度增大、作用时间延长，其对SMMC-7721细胞增殖的抑制作用逐渐增强，呈明显的浓度一时间依赖关系，至800mg／L则有细胞毒性。②三七总皂甙对SMMC-7721细胞周期时相分布和细胞凋亡率的影响：不同浓度的三七总皂甙处理细胞72h后，与空白对照组相比，G0／G1期细胞明显增多，S期和G2/M期细胞减少，且三七总皂甙浓度越高，该作用越强，其中三七总皂甙400mg／L组72h后G0／G1期细胞高达87．42％；同时三七总皂甙还能诱导SMMC-7721细胞凋亡，并呈明显的剂量效应正比关系。⑧三七总皂甙对SMMC-7721细胞的缝隙连接细胞问通讯功能的影响：三七总皂甙可上调或恢复SMMC-7721细胞的缝隙连接细胞间通讯的作用，400mg／L三七总皂甙处理72h后，荧光染料传输的范围可达4-5层细胞。 结论：三七总皂甙可抑制SMMC-7721细胞增殖、促进细胞凋亡。使细胞生长阻滞于G0/G1期，同时上调或恢复细胞的缝隙连接细胞问通讯功能，其抗肿瘤作用可能与此有关。