低氧促进肌成纤维细胞表达和分泌结缔组织生长因子及纤维连接蛋白

目的:观察低氧对肾肌成纤维细胞合成和分泌结缔组织生长因子(connective tissue growth factor,CTGF)和细胞外基质纤维连接蛋白(fibronectin,FN)的影响,以了解肌成纤维细胞在肾间质纤维化过程中的作用.方法:(1)采用原代培养正常大鼠肾皮质肌成纤维细胞,以密闭的细胞培养罐造成低氧环境(1%O2 ,体积分数),应用Western blot方法检测低氧和正常氧(21%O2 ,体积分数)条件下低氧诱导因子-1α( hypoxia induced factor-1α,HIF-1α)蛋白的表达,验证所营造的低氧条件是可靠的.(2)用Western blot方法检测在低氧和正常氧条件下,各时间点上细胞及上清液中CTGF和FN蛋白水平.(3) 用RT-PCR方法检测低氧和正常氧条件下,各时间点FN mRNA表达的变化.(4)用明胶酶谱法检测细胞上清液中基质金属蛋白酶-2(matrix metalloprotei- nase-2,MMP-2)和基质金属蛋白酶-9(matrix metalloproteinase-9,MMP -9)的活性.结果:正常氧组HIF-1α蛋白表达微弱,低氧组有较高水平HIF-1α蛋白表达.低氧作用于原代培养的肌成纤维细胞6 h,12 h和24 h后细胞内的CTGF蛋白均比正常氧组增高,分别为175%±52%,347%±67%和143%±27%,以12 h最明显(P＜0.05);低氧刺激24 h时上清液中CTGF蛋白显著增加,是正常氧组的348%±99%(P＜0.05);低氧刺激肌成纤维细胞6 h,12 h和24 h后上清液中FN蛋白水平增加,分别是正常氧组的187%±42%,199%±51%和210%±29%,以24 h 最明显(P＜0.05),而对应时间点上清液中MMP-9和MMP-2活性无明显变化,但细胞内FN蛋白减少,低氧剌激6 h为正常氧组的64%±13%.低氧刺激肌成纤维细胞3 h,FN的mRNA水平开始上升,6 h达到正常氧组的135%±13%(P＜0.05),12 h 下降接近正常氧水平.结论 :低氧可通过促进肌成纤维细胞表达CTGF和FN参与肾间质纤维化的进展.     

丹参酮ⅡA磺酸钠抑制低氧诱导的大鼠肺动脉平滑肌细胞增殖及其机制

目的: 观察丹参酮ⅡA磺酸钠(sodium tanshinone ⅡA sulfonate,STS)对低氧诱导的大鼠肺动脉平滑肌细胞(pulmonary arterial smooth muscle cells,PASMC)增殖的影响及其潜在的作用机制。方法: 将大鼠PASMC分为常氧组、常氧+STS组(5、10、20 ng/mL)、低氧组(3%O2)、低氧+STS组(5、10、20 ng/mL),培养60 h后,采用CCK-8法测定PASMC的增殖率;另将大鼠PASMC分为常氧组、低氧组、低氧+STS组(10 ng/mL),qRT-PCR测定mTOR、eIF2α、c-myc mRNA的相对表达量;再将PASMC分为常氧组、低氧组、低氧+STS组(10 ng/mL)、低氧+雷帕霉素组(20 nmol/L),蛋白质印迹法检测mTOR、p-mTOR、eIF2α、p-eIF2α、c myc蛋白的表达量。结果： 与常氧组比较,低氧组细胞增殖率明显升高(P＜0.05);与低氧组比较,低氧+STS组细胞增殖率明显降低(P＜0.05)。qRT-PCR显示低氧组mTOR、eIF2α和c-myc mRNA相对表达量较常氧组明显升高(P均＜0.05),低氧+STS组3种mRNA相对表达量较低氧组降低(P均＜0.05)。蛋白质印迹显示,与常氧组比较,低氧组mTOR、p-mTOR、eIF2α、p-eIF2α、c-myc蛋白表达均显著升高(P均＜0.05);与低氧组比较,低氧+STS组和低氧+雷帕霉素组的mTOR、p-mTOR、eIF2α、p-eIF2α、c-myc蛋白表达均升高(P均＜0.05);而低氧+雷帕霉素组与低氧+STS组无明显差异(P＞0.05)。 结论： STS可抑制低氧诱导的大鼠PASMC增殖,可能通过抑制mTOR/eIF2α信号通路而发挥作用。     

低氧对鼠雪旺氏细胞增殖的影响

目的观察低氧对鼠雪旺氏细胞体外增殖的影响,为雪旺氏细胞扩增培养探索新方法。方法原代分离培养雪旺氏细胞并鉴定,将培养至第三代的细胞分为3组,分别为对照组,10%02组和3%O2组。对各组细胞记数;测定培养液中氧含量和乳酸浓度及各组细胞的增殖指数。结果随着环境氧浓度的下降,细胞培养液中的氧含量也逐渐下降（P〈0.05）,而乳酸浓度逐渐升高（P〈0.05）。低氧组雪旺氏细胞数目比常氧组明显增加,尤以10%O2组更为明显（P〈0.05）,3%O2组在低氧1d和2d时增殖指数低于常氧组,低氧4时,增殖指数增加;而10%O2组增殖指数一直高于常氧组（P〈0.05）。结论轻中度低氧有利于鼠雪旺氏细胞的体外增殖。     

低氧对鼠雪旺氏细胞增殖的影响

目的观察低氧对鼠雪旺氏细胞体外增殖的影响，为雪旺氏细胞扩增培养探索新方法。方法原代分离培养雪旺氏细胞并鉴定，将培养至第三代的细胞分为3组，分别为对照组，10组和3%O2组。对各组细胞记数；测定培养液中氧含量和乳酸浓度及各组细胞的增殖指数。结果随着环境氧浓度的下降，细胞培养液中的氧含量也逐渐下降（P〈0.05），而乳酸浓度逐渐升高（P〈0.05）。低氧组雪旺氏细胞数目比常氧组明显增加，尤以10%O2组更为明显（P〈0.05），3%O2组在低氧1d和2d时增殖指数低于常氧组，低氧4时，增殖指数增加；而10%O2组增殖指数一直高于常氧组（P〈0.05）。结论轻中度低氧有利于鼠雪旺氏细胞的体外增殖。     

低氧对鼠雪旺氏细胞增殖的影响

目的观察低氧对鼠雪旺氏细胞体外增殖的影响,为雪旺氏细胞扩增培养探索新方法。方法原代分离培养雪旺氏细胞并鉴定,将培养至第三代的细胞分为3组,分别为对照组,10%02组和3%O2组。对各组细胞记数;测定培养液中氧含量和乳酸浓度及各组细胞的增殖指数。结果随着环境氧浓度的下降,细胞培养液中的氧含量也逐渐下降(P<0.05),而乳酸浓度逐渐升高(P<0.05)。低氧组雪旺氏细胞数目比常氧组明显增加,尤以10%O2组更为明显(P<0.05),3%O2组在低氧1d和2d时增殖指数低于常氧组,低氧4时,增殖指数增加;而10%O2组增殖指数一直高于常氧组(P<0.05)。结论轻中度低氧有利于鼠雪旺氏细胞的体外增殖。     

白蛋白联合低氧对NRK-52E细胞凋亡的影响

目的:探讨白蛋白联合低氧对肾小管上皮细胞(NRK-52E)凋亡的影响.方法:应用流式细胞技术检测NRK-52E细胞在不同质量浓度白蛋白(0、10、20、30和40 g/L)和常氧(含体积分数为5%CO2的空气)条件下培养24 h的凋亡率,得到最适的白蛋白质量浓度;再应用流式细胞技术检测NRK-52E细胞在30 g/L白蛋白和低氧(体积分数为1%O2、5%CO2和94%N2)联合培养24 h的凋亡率,同时设常氧对照组、低氧对照组和常氧+30 g/L白蛋白培养组.采用RT-PCR检测凋亡相关基因bcl-2和bax mRNA表达.结果:在常氧环境下NRK-52E细胞凋亡率随白蛋白质量浓度的增加而增高(F=55.748,P＜0.001).常氧对照组、低氧对照组和常氧+30 g/L白蛋白培养组及低氧+30 g/L白蛋白培养组NRK-52E细胞凋亡率(F=112.174,P＜0.001)、bax mRNA(F=114.522.P＜0.001)和bcl-2 mRNA(F=63.097,P＜0.001)的表达差异均有统计学意义.低氧+30 g/L白蛋白培养组的凋亡率[(37.36.±4.95)%vs(25.59±3.32)%.P＜0.05)和bax mRNA的表达(2.54±0.19vs1.87±0.19,P＜0.05)高于常氧+30 g/L白蛋白培养组,而bcl-2 mRNA的表达则低于常氧+30 g/L白蛋白培养组[(0.42±0.08)vs(0.66±0.05)](P＜0.05).结论:低氧可加剧向蛋白诱导的NRK-52E细胞凋亡,其机制可能与促进bax mRNA高表达和bcl-2 mRNA低表达有关.     

长期低氧对骨肉瘤细胞增殖与分化的影响

目的 观察长期低氧对骨肉瘤细胞增殖、分化及骨肉瘤干细胞自我更新能力的影响.方法 采用噻吩蓝(MTT)比色法观察低氧对骨肉瘤细胞系MG63增殖的影响.后续试验分为两组:第1组为低氧处理组,将MG63细胞在低氧环境下培养1周后进行实验;第2组为常氧对照组.应用实时定量聚合酶链反应(real-time PCR)检测两组骨肉瘤细胞的成骨分化基因(Runx2和OC)、胚胎干细胞标志基因Oct3/4、原癌基因c-Myc及低氧诱导因子(HIF)-1a、2a的表达.采用无血清悬浮球培养法观察并比较两组细胞肉瘤球数目和体积的差异.采用免疫组织化学染色法检测两组细胞中HIF-1a和HIF-2a蛋白的表达.结果 培养第6、9天,低氧处理组的光密度(D)值为0.128±0.020、0.700±0.060,分别显著高于常氧对照组的0.073±0.050、0.480±0.120(P值均＜0.05).低氧处理组MG63细胞骨肉瘤球的数目为(24±10.97)个,显著高于常氧对照组的(1 3±3.95)个(P＜0.05);低氧处理组MG63骨肉瘤球的体积显著大于常氧对照组.与常氧对照组比较,低氧处理组细胞的成骨标志基因Runx2和OC均显著下调(P值均＜0.05),胚胎干细胞标志基因Oct3/4和原癌基因c-Myc表达均显著上调(P值均＜0.05),HIF-2α表达显著上调(P＜0.05);免疫组织化学染色检测到MG63细胞中有HIF-1a和HIF-2a蛋白表达.结论 长期低氧可促进骨肉瘤细胞MG63的增殖,抑制其成骨分化,并促进骨肉瘤球的自我更新能力,增强其干细胞特性.HIF-2a蛋白可能在这些过程中发挥关键作用.     

不同数目骨髓间充质干细胞移植对大鼠肺损伤的抑制作用

目的 研究不同数目的骨髓间充质干细胞(mesenchymal stem cells,MSCs)静脉移植对野百合碱( monocrotaline,MCT)诱导大鼠肺损伤的抑制作用.方法 全骨髓贴壁法培养Wistar大鼠MSCs,取第3～5代细胞进行移植.健康雄性Wistar大鼠20只由颈外静脉移植MSCs,按移植细胞个数分为5×105组、1 ×106组、5×106组和对照(生理盐水)组(n=5),测定移植前、移植后5 min,30 min及24 h的RVSP.另40只随机分组(n=10):①MCT/MSCs 5×105组;②MCT/MSCs 1×106组;③MCT组;④对照组,腹腔注射60 mg/kgＭCT(对照组注射等量生理盐水),同时分别移植MSCs 5×105个、1 ×106个或等量PBS液体.4周后检测大鼠右心室收缩压(right ventricular systolic pressure,RVSP)、RV/( LV+S)重量比值;肺组织苏木素－伊红染色、地衣红染色和平滑肌Actin免疫组织化学染色.统计数据采用SPSS 11.0软件,对各组数据进行单因素方差分析检验.结果 少于1×106个MSCs颈外静脉移植是安全的.MSCs颈外静脉移植4周后,MCT/MSCs 1×106组RVSP(35.6±8.4) mmHg与MCT组(47.2±10.5)mmHg相比明显下降(P＜0.05),心室比0.3572±0.0923明显低于MCT组0.4454±0.0935 (P＜0.05),而MCT/MSCs 5×105组RVSP为(42.5±11.3)mmHg,心室比0.4003±0.0725,与MCT组相比无明显下降(两者P ＞0.05);病理染色可见肺组织肺小动脉中,MCT/MSCs 1×106组中膜厚度分布为(19.2±3.8)％,较MCT组(26.4±4.9)％明显变薄(P＜0.05);而MCT/MSCs 5×105组(23.3±3.6)％较MCT组相比无显著差异(P＞0.05).结论 MSCs颈外静脉移植对MCT诱导的肺损伤具有抑制作用,1×106个细胞较5×105个细胞移植抑制作用显著.     

模拟低氧对舌鳞癌SCC-15细胞系中SOX2和OCT4表达的影响

目的 研究模拟低氧条件对舌鳞癌SCC-15细胞增殖、周期、凋亡的影响,及SOX2和OCT4蛋白、mRNA的表达变化.方法 体外培养舌鳞癌SCC-15细胞,加入模拟低氧物去铁胺(desferrioxamine,DFO)模拟低氧环境,为模拟低氧组,同时设置不加DFO的常氧组为对照,采用CCK-8法检测SCC-15细胞的增殖率;流式细胞技术检测SCC-15细胞的周期和细胞凋亡率;蛋白质印迹法检测常氧组和模拟低氧组SCC-15细胞中低氧诱导因子1α(HIF-1α)、SOX2及OCT4蛋白的表达;qPCR检测常氧组和模拟低氧组SCC-15细胞中HIF-1α、SOX2及OCT4mRNA的表达.结果 与常氧组相比,模拟低氧组SCC-15细胞的增殖受到抑制(P＜0.05),G1期细胞所占比例上升、S+G2期细胞所占比例下降(P＜0.05),细胞凋亡率未见明显变化(P＞0.05);蛋白质印迹法结果显示,与常氧组比较,模拟低氧组SCC-15细胞中HIF-1α、SOX2、OCT4蛋白的表达均升高,且HIF-1α、OCT4蛋白的升高幅度大于SOX2蛋白,差异有统计学意义(P＜0.05,P＜o.01);qPCR结果显示,两组SCC-15细胞中HIF-1α mRNA水平差异无统计学意义(P＞0.05),而模拟低氧组SCC-15细胞中SOX2、OCT4 mRNA的表达水平高于常氧组(P＜0.05).结论 DFO可以有效模拟低氧环境,促进SOX2和OCT4的蛋白和mRNA表达水平升高.     

苦参碱对常氧及低氧下人肺成纤维细胞增殖、结缔组织生长因子和低氧诱导因子1α表达的影响

目的研究不同浓度苦参碱对常氧及低氧下人肺成纤维细胞株MRC-5的增殖及结缔组织生长因子(CTGF)、低氧诱导因子1α(HIF-1α)表达的影响。方法采用MRC-5常规体外培养传代,细胞培养至80%融合时,将细胞分组,分别在常氧(21%O2,74%N2,5%CO2)及低氧(1%O2,94%N2,5%CO2)下采用不同浓度苦参碱(终浓度0～3.2mmol/L)干预24h。按培养条件不同分为8组:常氧组(N0组)、常氧+苦参碱0.2mmol/L组(N0.2组)、常氧+苦参碱0.4mmol/L组(N0.4组)、常氧+苦参碱0.8mmol/L组(N0.8组)、低氧组(H0组)、低氧+苦参碱0.2mmol/L组(H0.2组)、低氧+苦参碱0.4mmol/L组(H0.4组)和低氧+苦参碱0.8mmol/L组(H0.8组)。采用四氮甲基唑蓝比色法(MTT法)检测细胞活性,采用Westernblot法检测细胞CTGF、HIF-1α蛋白表达情况。结果低氧对各组细胞增殖有促进作用(P0.05);苦参碱对常氧及低氧下细胞增殖有抑制作用(P0.05),具有浓度依赖性。CTGF、HIF-1α在常氧下有低水平表达,低氧下表达明显增强(P0.01);苦参碱对常氧及低氧下CTGF、HIF-1α的表达均有抑制作用(P0.05)。结论苦参碱对常氧及低氧下培养的MRC-5细胞增殖有抑制作用,对细胞CTGF和HIF-1α表达有抑制作用,且具有一定浓度依赖性。     

麻疹的双相移位研究进展

近年新生儿、婴儿、成人麻疹患者逐年增加,临床表现一般仍较典型,成年人麻疹患者全身中毒症状较重。麻疹抗体检测结果阳性是主要的诊断依据。麻疹发病的双相移位的机理可能是,免疫保护力不足,婴儿出生时麻疹抗体力低。孕期母传胎的麻疹抗体减弱,母经乳汁传给婴儿的抗体减弱,成人麻疹抗体水平逐年下降。预防措施是怀孕前给予育龄妇女麻疹疫苗接种,鼓励母乳喂养,麻疹疫苗计划免疫适当提前,在成人追加麻疹疫苗的免疫,加强病毒变异的研究等。     

正常增殖期子宫内膜细胞增生状态的定量观察

以＾３氢－胸腺嘧啶核苷放射自显影法及ＨＥ染色，观察并分别测定了１８例正常子宫内膜增殖中期，１５例增殖晚期的腺上皮细胞或间质细胞的标记指数、分裂指数。结果显示：子宫内膜增殖晚期腺上皮细胞或间质细胞之ＬＩ均明显高于增殖中期。同时，增殖晚间质细胞之ＭＩ也明显高于增殖中期，即此两种细胞在增殖晚期中增生明显，其增生状态初步获得了定位定量测定的正常值。     

人工全髋关节置换术的手术配合

目的：介绍人工全髋关节置换术的手术配合做法;方法：主要在手术配合的六个方面,解决防感染、防栓塞等问题。结果：30例人工全髋关节置换术均获成功,结论：手术配合是护士责任心和基本功的全面体现,对提高手术效果有至关重要的影响。     

80例局限性银屑病误诊原因分析

本文报告80例局限于小腿或手或足的银屑病。均经皮肤组织病理检查确诊。因部位比较特殊。受多种理化因素影响,使皮疹形态发生轻重程度不同的变化,常看不到典型损害,因而误诊为神经性皮炎,湿疹,慢性皮炎及癣等。作者对误诊原因进行了分析后,提出了鉴别诊断方法。     

腰椎间盘突出症再次手术的原因分析

目的解决腰椎间盘突出症手术中神经压迫。方法对1980～1998年再手术资料进行统计分析,讨论分析再手术原因,再次手术前影像学检查,观察病理变化以确定再手术方法。结果对11例随访6个月～1年,优7例(68．4％),良3例(36．8％),差1例(2．8％)。结论初次手术前详细查体和分析X线片,术中用导尿管和神经剥离探查,尽量避免髓核遗留,手术范围不宜太大,尽量减少对软组织和脊柱结构的破坏,避免形成硬膜囊与神经根粘连而致单纯形疤痕。     

妊娠晚期重度妊高征的监测

重度妊高征表现为高血压、蛋白尿、浮肿等症状 ,严重可以导致母婴死亡。对妊娠足月的重度妊高征 ,可以根据其临产与否及宫颈条件 ,立即决定其为阴道分娩或是剖宫产术。对于妊娠晚期的重度妊高征 ,因其胎龄不足月 ,胎儿生长发育及胎肺成熟度情况需通过一定时间的治疗 ,根据其病情变化来决定其治疗方案或终止妊娠的时机[1,2 ] 。这就需要我们对这一阶段的治疗进行监测 ,防止母儿并发症的发生。现将 2 0 0 0年至今我院收治妊娠晚期重度妊高征 30例的监测结果回顾分析如下。1　资料和方法1.1　研究对象　选择孕 31～ 36周重度妊高征 30例 ,其中 …     

尿微量白蛋白检测在继发性肾脏疾病中的临床意义

目的探讨尿微量白蛋白（m-Alb）检测在继发性肾脏疾病中的临床意义。方法采用Beckman Immage全自动特种蛋白分析仪对糖尿病组、高血压组、心脏病组患者进行了m-Alb测定,同时与健康组结果作对比。结果m-Alb检测糖尿病组为3.7±5.26mg/dl,高血压组为7.5±8.18mg/dl,心脏病组为7.8±3.76mg/dl,健康组为0.66±0.48mg/dl,各试验组m-Alb增高百分率为糖尿病组48.9%,高血压组37.5%,心脏病组26.9%。结论尿蛋白阴性的糖尿病、高血压、心脏病患者进行m-Alb检测,可以监测病程的进展。