百草枯对人胚肺成纤维细胞CTGF表达的影响

目的：探讨百草枯中毒对人胚肺成纤维细胞表达结缔组织生长因子（CTGF）的影响,进一步阐明百草枯致中毒性肺纤维化的发病机理。方法：体外培养人胚肺成纤维细胞（MRC-5）,通过ELISA法检测经过百草枯处理后的细胞CTGF的表达情况。结果：正常MRC-5细胞分泌少量CTGF ,经过不同浓度百草枯处理后的人胚肺成纤维细胞48～72h细胞CTGF浓度随时间变化而明显增加（P＜0．05）,在72h CTGF浓度有大幅度的提高。结论：百草枯中毒后人胚肺成纤维细胞表达CTGF明显上调,明显高于正常细胞,提示在百草枯中毒后肺成纤维细胞CTGF表达增加,进而导致肺纤维化。     

玉金方胶囊对人胚肺成纤维细胞的影响

目的:观察人胚肺成纤维细胞细胞膜表面与微细结构和含玉金方的血清的影响。方法:用含玉金方的血清培养人胚肺成纤维细胞,同时设空白对照组,用电子显微镜观察细胞膜表面及微细结构变化。结果:玉金方组细胞的微细结构与空白对照组细胞的早期现象基本相同,中期、晚期逐渐变化。结论:与空白对照组相比,50代以后,玉金方组细胞有嵴线粒体和粗面内质网较多,溶酶体、空泡小体较少,这提示玉金方有延缓细胞微细结构衰退和延缓细胞衰老的作用。     

人胚肺二倍体细胞KMB17凋亡的形态学发生

无血清培养是诱导细胞凋亡的常规方法,具有简便、快速的特点。用光学显微镜、荧光显微镜及透射电镜观察了人胚肺二倍体成纤维细胞（ＫＭＢ１７）在无血清培养过程中细胞凋亡的形态学发生过程。结果：无血清诱导后１ｈ,光镜下可见致密单层的成纤维状细胞出现疏松状态;３ｈ后,少数细胞（１％～５％）出现圆缩;６ｈ后,成纤维细胞全部由长梭形收缩为圆形,体积缩小。荧光及电镜下可将细胞凋亡形态上分为两个阶段,第一阶段细胞出现     

益气养阴法及其组方抗细胞衰老的实验研究

目的:研究益气养阴法及其组方对体外培养的人胚肺二倍体成纤维细胞衰老的影响。方法:将健康雄性SD大鼠随机分为中药组、维生素E组、生理盐水组,采用益气养阴中药、维生素E胶丸、生理盐水分别灌胃3组大鼠,提取含药血清,将提取的血清培养二倍体人胚肺成纤维细胞(MRC-5)。从第28代开始在培养液中加入10%含药血清培养细胞,观察细胞形态、细胞群体倍增曲线、细胞传代次数、细胞生长曲线情况,并进行组间对比分析。结果:中药组与维生素E组及生理盐水组比较,中药组细胞开始出现衰老的时间及细胞死亡的时间明显延迟,差异有统计学意义(P<0.01);用含药血清培养后,中药组细胞密度较维生素E组及生理盐水组明显增高(P<0.01);中药组细胞传代代数与维生素E组比较差异有统计学意义(P<0.05);而生理盐水组细胞传代代数,明显低于中药组及维生素E组(P<0.01)。结论:益气养阴中药组方可以显著延长体外培养的人胚肺二倍体成纤维细胞的寿命,同时能增强衰老细胞的增殖分裂能力,从而延缓细胞的衰老。     

肺癌H460细胞与胚肺成纤维细胞相互作用对基质金属蛋白酶-2的表达影响

目的：研究肺癌H460细胞和胚肺成纤维细胞相互作用对基质金属蛋白酶-2（MMP-2）表达的影响．方法：在单层平面培养条件下,H460细胞和胚肺成纤维细胞条件培养基或胚肺成纤维细胞和H460细胞条件培养基共同培养,胚肺成纤维细胞分别按1：1,1：2,1：4,1：8与H460细胞共同培养．三维胶原立体培养条件下,H460细胞和胚肺成纤维细胞共同培养,72h后明胶酶谱法测定培养基中MMP-2的表达．结果：胚肺成纤维细胞条件培养基不能促进H460细胞MMP-2酶原和活化酶的表达,但H460细胞条件培养基能促进胚肺成纤维细胞MMP-2酶原和活化酶的表达．胚肺成纤维细胞分别按1：1,1：2,1：8与肺癌H460细胞时共同培养时,MMP-2酶原和活化酶的表达均增强;按1：4与肺癌H460细胞共同培养时MMP-2酶原表达有所增加,但活化酶未见改变．三维胶原立体H460细胞和胚肺成纤维细胞共同培养时MMP-2酶原和活化酶的表达均增强且高于单层平面培养．结论：肺癌H460细胞与胚肺成纤维细胞相互作用能通过上调MMP-2的表达和活化影响肺癌侵袭和转移．     

人胚肺成纤维细胞感染人巨细胞病毒不同时间病毒载量的分析

目的:检测人巨细胞病毒(HCMV)感染人胚肺成纤维细胞(HELF)后不同时间点HCMV DNA载量,以明确HCMV感染HELF的时效性.方法:将HCMV接种HELF细胞,收集感染后3,5,8,10,15,20,30,60,120 min时间点细胞,提取病毒DNA,以即刻早期1基因(IE-1)为靶基因进行荧光定量PCR检...     

补肾活血方对人胚肺成纤维细胞中IL-17A的影响

目的 探讨补肾活血方对人胚肺成纤维细胞的作用机制.方法 应用TGF-β1诱导人胚肺成纤维细胞,将实验细胞分为空白组(A组),TGF-β1造模组(B组),TGF-β1处理+最佳浓度含药血清干预1 h组(C组),TGF-β1处理+shRNA-IL-17A组(D组),TGF-β1处理+最佳浓度含药血清干预1 h+IL-17A...     

人胚肺二倍体细胞KMB_(17)凋亡的形态学发生

无血清培养是诱导细胞凋亡的常规方法 ,具有简便、快速的特点 .用光学显微镜、荧光显微镜及透射电镜观察了人胚肺二倍体成纤维细胞 (KMB1 7)在无血清培养过程中细胞凋亡的形态学发生过程 .结果 :无血清诱导后 1h ,光镜下可见致密单层的成纤维状细胞出现疏松状态 ;3h后 ,少数细胞(1%～ 5% )出现圆缩 ;6h后 ,成纤维细胞全部由长梭形收缩为圆形 ,体积缩小 .荧光及电镜下可将细胞凋亡从形态上分为两个阶段 ,第一阶段细胞出现典型的凋亡特征 ,细胞圆缩、出芽、核染色质凝缩、成块状或新月状分布于核膜边缘 ;第二阶段 ,在细胞凋亡晚期出现坏死症状 :电镜下整个细胞崩解成碎片 .结果表明 :无血清培养诱导的凋亡在凋亡的晚期由于营养过度缺乏易出现二次坏死现象 .首次报道用于生物制品生产的人胚肺二倍体细胞在无血清诱导下凋亡发生的形态学特征 .     

人成纤维细胞的原代培养及鉴定

目的建立不同组织来源成纤维细胞的培养方法并比较其培养差异。方法用消化法和贴壁法分离人胚胸主动脉成纤维细胞与人胚肺成纤维细胞,利用差速培养法纯化成纤维细胞,并对所培养的细胞进行倒置显微镜观察和苏木素-伊红染色,观察成纤维细胞形态,并对培养的细胞行波形蛋白免疫染色鉴定。结果接种24 h后人胚胸主动脉成纤维细胞全部贴壁,48 h后细胞体积增大并伸出伪足,形状以梭形或不规则形为主;而消化的人胚肺组织中细胞形态不一,经继续培养4～5代后,培养物完全由成纤维细胞构成。结论用胶原酶Ⅰ消化人胚胸主动脉成纤维细胞效果好,而用胰蛋白酶液消化人胚肺成纤维细胞效果较好,用差速生长纯化的成纤维细胞可用于实验研究。     

Rho/Rho激酶信号通路在低氧致肺纤维化中的作用及法舒地尔的干预效应

目的 观察人胚肺成纤维细胞低氧培养24 h对致纤维化相关因子表达的影响及不同浓度法舒地尔(6、12、25 μmol/L)的干预作用.方法 以人胚肺成纤维细胞(MRC-5)为研究对象,体外构建以HIF-1α蛋白的高表达为特征的低氧微环境,低氧(37 ℃、5%CO2 、2%O2 、93%N2) 培养0、6、12、24 h,Western blot法检测各低氧时间点RhoA、ROCK1、CTGF蛋白的表达及以低氧24 h为对照组,观察低氧24 h下不同浓度法舒地尔对结缔组织生长因子(connective tissue growth factor,CTGF)蛋白表达的影响;RT-PCR、MTT法分别检测低氧24 h下不同浓度法舒地尔对人胚肺成纤维细胞(MRC-5)CTGF mRNA表达和细胞活力的影响,均以低氧24 h为对照组.以常氧(21%O2,74%N2,5% CO2)24 h及低氧24 h为对照,ELISA 法测定低氧24 h下不同浓度法舒地尔对细胞上清Ⅰ型胶原(Col Ⅰ)表达的影响.结果①随着低氧作用时间延长,RhoA、ROCK1、CTGF蛋白表达上调并逐渐增强.②低氧24 h下不同浓度法舒地尔(6、12、25 μmol/L)对CTGF蛋白及mRNA水平均有抑制作用(P<0.05,P<0.01).③与低氧24 h对照组比较,低氧24 h下不同浓度法舒地尔(6、12、25 μmol/L)均对细胞上清ColⅠ的合成及细胞增殖活性均有抑制作用(P<0.01).结论 低氧可能是通过激活Rho/Rho激酶信号通路促发CTGF的高表达进而引发肺成纤维细胞细胞外基质表达增加等一系列促纤维化反应,而法舒地尔通过抑制Rho/Rho激酶信号通路来干预低氧致纤维化因子的转录和表达.     

人正常卵巢组织中成纤维细胞的培养

目的:通过分离?纯化?培养及鉴定,获得典型人卵巢成纤维细胞?方法:采用酶消化+反复贴壁法,获得纯化成纤维细胞,通过形态学观察和免疫细胞化学染色,对所得细胞进行特征性标志及生物学特性的检测,进一步阐述细胞特征,并绘制细胞生长曲线?结果:形态学上,正常卵巢成纤维细胞形态多样,大部分为梭形?条索形,还有三角形?多角形和不规则形等,并具有伪足样外形;其生长潜伏期较长,12~14 d可传代;免疫细胞化学上,波形蛋白(vimentin)表达强阳性,结蛋白(desmin)?成纤维细胞特异性蛋白1(FSP-1)表达弱阳性;在较早期传代的细胞中,CK-7及CK-P呈少量阳性,随着细胞的纯化,其阳性表达渐行减少直至完全消失;肌动蛋白α(α-SMA)部分细胞表达阳性?而卵巢黏液性细胞标志CK-20?血管内皮细胞标志CD31?间充质细胞标志CD90?雌?孕激素受体(ER?PR)以及基质金属蛋白酶(MMP-2? MMP-3?MMP-9)?肿瘤标志物CA125?CA19-9?癌胚抗原(CEA)?成纤维细胞激活蛋白α(FAP-α)?血小板衍生生长因子受体α(PDGFR-α)均阴性?结论:成功获得人卵巢成纤维细胞,为研究卵巢癌及其相关成纤维细胞提供了必要的细胞学工具?     

人胚胎成纤维细胞的分离、培养和鉴定及人胚胎生殖细胞体外生长所需细胞因子的表达

目的：从人胚胎生殖腺嵴和肠背系膜中分离、培养及鉴定人胚胎成纤维细胞(hEFs),检测hEFs表达人胚胎生殖细胞（hEG）体外生长所需的重要细胞因子。方法：利用酶消化法从孕5～9周龄人胚胎的生殖腺嵴和肠背系膜中分离培养hEFs,检测其生物学特性（细胞形态、细胞生长特点、细胞周期）。采用逆转录多聚酶链反应（RT-PCR）检测hEFs表达成纤维细胞特异性标志（脯氨酰4-羟化酶β亚单位）和上皮细胞特异性标志（细胞角蛋白4）的情况,对该细胞进行鉴定。应用RT-PCR检测hEG生长所需的重要细胞因子的表达,即碱性成纤维细胞生长因子（bFGF）和白血病抑制因子（LIF）。结果：从人胚胎生殖腺嵴和肠背系膜中成功地分离培养出hEFs,该细胞可传25代以上,且经过传代及冻存复苏后生物学特性无改变;hEFs表达脯氨酰4-羟化酶β亚单位,不表达细胞角蛋白4,确定其为成纤维细胞;该成纤维细胞表达bFGF和LIF。结论：成功地分离和培养了人胚胎生殖腺嵴和肠背系膜来源的成纤维细胞,证明其表达对于hEG体外生长起重要作用的细胞因子。     

猕猴胚胎干细胞的分离培养和鉴定

目的从体外培养成熟囊胚中分离并鉴定猕猴胚胎干细胞(embryonic stem cell,ES cell).方法猕猴卵母细胞经体外成熟培养、体外受精和早期胚胎体外成熟培养后,获得猕猴囊胚.当囊胚由透明带自然孵出后,用细玻璃针剥离囊胚中的内细胞团(inner cell mass,ICM)并与饲养细胞进行共培养.由ICM分离,培养并鉴定胚胎干细胞集落.结果由4只FSH超排猕猴中共取得92个处于GV期的猕猴卵母细胞,选取其中的22个用HECM-10培养基培养后,获得6个高质量的囊胚,由此6个囊胚中分离得到3个内细胞团,并由此最终获得1株猕猴ES细胞,即RS5细胞.RS5细胞具高比例核/质比,核仁多,其细胞集落边缘平整,其内各单个细胞清晰.经约5个月的连续传代后,仍保持了正常二倍体的核型,其染色体数目为42条.碱性磷酸酶细胞组织化学染色为阳性,说明RS5细胞为未分化态的胚胎干细胞.经高密度和长时间培养后,RS5细胞可进一步分化为多种类型细胞.结论 RS5细胞株具有自我更新能力和多分化潜能,属于胚胎干细胞.     

细菌内毒素对钛板上人牙龈成纤维细胞生物学形态及OPG表达的影响

目的:通过研究不同浓度的细菌内毒素对钛板上人牙龈成纤维细胞及其产物骨保护蛋白(osteoprotegerin,OPG)的影响,了解内毒素对种植体软组织以及骨组织愈合的作用?方法: 人牙龈组织块培养并用免疫荧光染色方法进行组织来源鉴定,用0?10?100 μg/ml浓度的细菌内毒素分别刺激钛板上的牙龈成纤维细胞,扫描电镜观察牙龈成纤维细胞的形态,并用ELISA法检测OPG的含量并进行统计学分析?结果:10 μg/ml细菌内毒素刺激的牙龈成纤维细胞较正常组细胞伪足增多,细胞基质分泌增加,而100 μg/ml组的细胞数量及基质分泌明显减少?ELISA法表明低浓度条件下,OPG的含量随着细菌内毒素浓度增多而增加,但100 μg/ml 组OPG含量显著降低?结论:低浓度细菌内毒素可以促进牙龈成纤维细胞生长及分泌细胞基质OPG,而高浓度细菌内毒素则抑制牙龈成纤维细胞增殖且OPG表达降低?     

特发性肺纤维化病人肺成纤维细胞过度表达单核细胞趋化蛋白-1

目的研究凝血酶对正常人肺成纤维细胞（normalhuman lung fibroblasts,N-LF）和特发性肺纤维化（idiopathic pulmonary fibrosis,IPF）病人肺成纤维细胞（F-LF）单核细胞趋化蛋白-1（MCP-1）表达的影响。方法 N-LF和F-LF细胞分别培养于96孔培养板内,凝血酶诱导4和24h后,收集上清液并用ELISA方法检测MCP-1蛋白水平。结果凝血酶可诱导N-LF和F-LF细胞释放MCP-1,但F-LF细胞的MCP-1分泌水平远远高于N-LF细胞。结论人肺成纤维细胞在肺纤维化过程中过度合成和释放MCP-1,凝血酶可进一步促进其过度表达MCP-1。     

苯扎氯铵对人Tenon囊成纤维细胞增殖的影响

目的观察苯扎氯铵对体外培养的人Tenon囊成纤维细胞的增殖的影响。方法体外培养人眼Tenon囊成纤维细胞。配制苯扎氯铵溶液,使其浓度依次为20、2～(2×10-7)μg/mL,采用噻唑蓝(MTT)比色法检测不同浓度的苯扎氯铵作用下细胞的增殖,并在光学显微镜下观察细胞的形态变化。结果较高浓度组(浓度≥0.2μg/mL)的苯扎氯铵对人Tenon囊成纤维细胞存在明显的杀伤作用,20μg/mL时细胞几乎全部死亡,A值与阴性对照相比明显减少(P<0.01),浓度为2和0.2μg/mL时细胞形态变化明显。较低浓度组(浓度<0.2μg/mL),A值和细胞形态较阴性对照均没有明显变化(P>0.05)。比较不同时间下的剂量效应曲线,4和24h没有显著差异(P>0.05)。结论苯扎氯铵0.2μg/mL及以上浓度对体外培养的成纤维细胞具有细胞毒性,低浓度时则对细胞增殖没有明显的影响。     

无花果叶水提物对体外培养瘢痕疙瘩成纤维细胞增殖的抑制

目的探讨无花果叶水提物对人瘢痕疙瘩成纤维细胞的生长抑制作用。方法用无花果叶水提物处理体外培养的人成纤维细胞后,进行细胞形态学检测,细胞增殖试验（MTT法）、氯胺T法检测无花果叶提取物对成纤维细胞胶原蛋白合成的抑制。结果无花果叶提取物处理后,成纤维细胞增殖活性降低;同时,胶原蛋白的合成受到抑制。结论无花果叶提取物对瘢痕疙瘩成纤维细胞的增殖有显著地抑制作用,并抑制其合成胶原蛋白。     

稳定表达Ras的人成纤维细胞改变自噬活性的细胞效应

目的研究人成纤维细胞稳定过度表达癌基因Ras 对自噬的影响。方法以自噬抑制剂氯喹、自噬关键基因ATG7 的
siRNA、自噬促进剂雷帕霉素处理转染了H-RasV12或空载体的BJ细胞,观察其对细胞增殖、衰老和死亡指标的影响。结果氯
喹处理后,Ras稳定过度表达的BJ细胞衰老现象更加明显且细胞死亡率显著升高,ATG7 siRNA亦可以促进细胞衰老,而雷帕霉
素处理后死亡率同样显著升高,但存活细胞的衰老减轻。在对照细胞,氯喹促进细胞衰老和死亡的细胞效应发生迟缓,ATG7
siRNA和雷帕霉素处理则无明显作用。结论人成纤维细胞稳定过度表达癌基因Ras后,自噬活性受到抑制且抑制程度受到严
格的控制,改变自噬活性可对细胞衰老和存活产生显著影响。
     

不同结构粒细胞集落刺激因子对3.0Gy(60)Coγ射线照射恒河猴的治疗作用

目的 本研究旨在观察不同结构重组人粒细胞集落刺激因子(rhG-CSF)吉粒芬和GW003对急性放射病猴的治疗作用.方法 18只成年恒河猴用(60)Coγ射线全身双侧一次均匀照射3.0Gy,实验分为照射对照、吉粒芬(rhG-CSF)和GW003治疗共3组,每组6只动物.吉粒芬治疗组动物于照射后0～13 d给予吉粒芬5μg...