心肌组织能量物质快速等浓度洗脱的高效液相色谱技术

测定缺血与缺氧心肌组织中能量物质含量,已成为国内外学者研究心肌缺血患病机制的一项重要生化指标。虽然许多学者已应用高效液相色谱技术检测正常心肌与缺血缺氧或再灌损伤心肌组织中部分能量物质的含量。然而,能量物质中肌酸化合物(肌酸和磷酸肌酸)和腺苷酸(AMP、ADP和ATP)吸收光波长不同,所以难以同     

应用反向高效液相色谱分析离体心脏灌流大鼠心肌组织中的多胺

目的：建立苯甲酰氯柱前衍生反向高效液相色谱分析大鼠心肌组织中多胺的方法。方法：以1，6-己二胺为内标，经苯甲酰氯柱前衍生，氯仿提取衍生物。高效液相色谱分析条件： Hypersil ODS C18柱(250 mm×4.6 mm，5 μm) 为固定相，甲醇与水（V∶V，65∶35）为流动相；流速0.4 mL/min；紫外检测波长229 nm，20 min完成洗脱。结果：多胺标准品浓度1-20 μmol/L，浓度与峰面积比呈良好的线性关系，相关系数(r)均大于0.998。多胺日内及日间变异系数分别为2.96%-5.48%、4.22%-9.30%。离体灌流大鼠心肌多胺含量在纳摩尔水平。结论：建立一种快速、准确、灵敏苯甲酰氯衍生反向高效液相色谱分析心肌组织中多胺的方法，此方法为分析其他生物样品中多胺提供参考。     

超高效液相色谱法测定紫杉醇注射液中的有关物质

目的 建立测定紫杉醇注射液有关物质的超高效液相色谱法。方法 采用Thermo Hypersil GOLD C₍18色谱柱(100 mm×2.1 mm,1.9μm),以水和乙腈为流动相,流速为0.6 ml/min,检测波长227 nm,采用主成分自身对照法测定有关物质含量。结果 在15min内紫杉醇与相邻杂质以及各杂质间分离度均满足要求。检出限和定量限分别为0.053 ng和0.11 ng,质量浓度在1.21～4.85μg/ml范围内线性关系良好,加样回收率为99.84%,RSD为2.80%(n=9)。两批市售样品均检出杂质Ⅰ和杂质Ⅲ,杂质含量均符合Ch P2020规定。结论 本文建立的超高液相色谱法能够准确、快速完成紫杉醇注射液有关物质测定。     

应用荧光高效液相法检测心肌磷脂酶D的活性

 目的：为心肌磷脂酶D活性的检测提供新的可靠、灵敏的实验方法。方法：提取心肌膜脂质，以荧光标记的磷脂酰胆碱及乙醇为底物。高效液相色谱条件：LiChrosphere 100色谱柱（250 mm×4 mm, 5 μm）为固定相，流动相A液为正已烷-丙醇-冰醋酸（82∶17∶1, V∶V∶V），流动相B液为丙醇-水-冰醋酸（85∶14∶1, V∶V∶V），柱温 45 ℃，流速1 mL/min，梯度洗脱。荧光检测：激发波长475 nm，发射波长515 nm。结果：PLD标准品在0.625-40 pmol范围含量与峰面积呈线性关系，相关系数0.999；孵育时间在0-45 min，磷脂酰乙醇生成量与孵育时间呈直线相关；日内及日间变异系数分别为5.6%、6.9%。小鼠心肌样品色谱图见二酯酰甘油、磷脂酰乙醇、磷脂酸3个峰，心肌磷脂酶D活性检测水平为nmol·h^-1·g^-1。结论：荧光高效液相法是检测心肌磷脂酶D活性的简便、快速、准确、灵敏的实验方法。     

快速简便高效液相色谱法测定血中环孢霉素A

用反相高效液相色谱法测定血中环孢霉素A浓度。该法具有灵敏、准确、快速、经济等特点。环孢霉素A和内标环孢霉素C的保留时间分别为8.6分和7.6分。样品萃取过程不需进行酸、碱处理。标准血样提取的最低检测浓度为10μg/L血浆。经提取的标准曲线相关系数为0.9999。方法回收率为97％,日内日问测定变异系数CV,均小于5％。     

高效液相色谱法测定血清碘海醇浓度方法的建立和应用

目的 建立利用高效液相色谱法(HPLC)测定血清碘海醇浓度的方法,为碘海醇血浆清除率临床应用及推广提供方法学支持.方法 设定色谱条件,对HPLC测定血清碘海醇浓度的方法进行方法学验证.对33例慢性肾脏病(CKD)儿童同时进行碘海醇清除率与99mTc-DTPA血浆清除率测定,并采用最新Schwartz公式估算肾小球滤过率(eGFR).以99mTc-DTPA血浆清除率为参照,分析碘海醇清除率及eGFR与参照方法的相关性和一致性.结果 在设定HPLC色谱条件下,碘海醇浓度在10～1 000 mg/L范围内线性良好(R2 =0.9998).批间测量和批内测量相对标准偏差(RSD％)＜5％,平均回收率(R％)＞96％.碘海醇血浆清除率、eGFR与99mTc-DTPA血浆清除率的相关系数(r)分别为0.95和0.63,偏差分别为(6.24±10.81)mL/(min·1.73 m2)和(12.11±22.96) mL/(min·1.73 m2).结论 建立了测定血清碘海醇浓度的HPLC法;初步探索并验证了碘海醇血浆清除率评价儿童肾功能的准确、可行.     

高效液相色谱法测定游泳池水中的尿素

目的建立使用HPLC测定游泳池水中尿素的含量。方法使用超纯水为流动相,测定波长190 nm,柱温30℃,流速1.0mL/min,进样量20？L,保留时间定性,峰高定量。结果水中尿素在0.3mg/L~40 mg/L时与峰高成良好的线性关系(Y=2.9175X+0.7399,r=0.9998),检出限为0.3mg/L,回收率99.10~102.24%,精密度RSD为0.34~0.74%。结论本方法操作简便,分析速度快,精密度、回收率均令人满意,满足实际检测需要。     

反相高效液相色谱法测定兔血清中5-氟尿嘧啶的浓度

目的应用反相高效液相色谱法测定兔血清中5-氟尿嘧啶的浓度。方法兔血清样品经乙酸乙酯/异丙醇(84/16)萃取后,水浴氮气吹干,流动相定容后进样。色谱柱为kromasil-C18柱(250mm×4.6mm,5μm),流动相为20mM醋酸铵/乙腈(体积比98.2∶1.8,pH8.05),流速0.8mL/min,紫外检测波长为270nm。结果5-氟尿嘧啶在5～80μg/L浓度范围内呈良好的线性关系。10、20、40μg/L三个浓度的批内RSD分别为11.6%、5.6%、5.4%;批间RSD分别为12.8%、2.7%、6.2%;平均回收率分别为106.7±11.7%、98.0±5.3%、99.3±5.3%。结论本方法可靠、重复性好,具有特异性强、灵敏、精密度与准确度高等特点,满足5-氟尿嘧啶药代动力学研究的要求。     

高效液相色谱法测定川芎中阿魏酸的含量

目的 以川芎常见的阿魏酸为研究对象,建立液相色谱测定方法,为监管药物安全提供技术支持.方法 川芎样品加水研磨并过滤,分别取以上样品的上清液或滤过液;川芎样品直接过0.45μm滤膜后分析.色谱检测条件为:Cis色谱柱,流动相为5∶95的甲醇,5mmol/L三羟甲基氨基甲烷缓冲溶液(pH4.5),流速为1.2ml/min,紫外检测波长205nm,测定结果与国家标准方法进行了比对.结果 对同一川芎样品进行5次测量,其变异系数均小于2%,加标回收率为98.6%.结论 本文首次采用离子对色谱法同时检测川芎中阿魏酸的含量,不需衍生,方法快速、简便,在药物检验中具有实际应用价值.     

反相高效液相色谱法测定血清中的5-羟色胺

建立了一种简便、快速测定血清中5-羟色胺的反相高效液相分析方法。采用的色谱柱为Bondapak C18不锈钢柱(5μm,250mm×4.6mmi.d.),流动相为:甲醇—水—乙酸(70:30:0.1 V/V),流速:1ml/min,荧光监测器,激发波长278nm,发射波长333 nm。结果表明:该方法线性关系良好(r=0.99992),5-羟色胺测定的线性范围为0.10~2.00μg/mL,最低检测限为0.02μg/mL(S/N=3)。5-羟色胺在血清样品中的加标回收率为92.37%~100.12%。该测定方法结果准确,可用于临床研究。     

A rapid method for the determination of cyclosporin A in blood by high performance liquid chromatography

The purpose of this paper is to propose a method for the determination of cyclosporin in whole blood by means of HPLC with UV detection. After a one step extraction into ether, the organic layer is washed NaOH and evaporated to dryness. The residue is reconstituted in a mixture of acetonitrile and water (40/60) (V/V) and injected into the chromatograph. The C8 reversed phase column is warming at 75 degrees C temperature. The mobile phase consists of acetonitrile and water (60/40) (V/V) and the wavelength is set at 210 nm. The technique is rapid, sensitive, reproducible and well suited for therapeutic monitoring and for pharmacokinetic studies.     

在人心脏换瓣手术中心肌缺血再灌注损伤时能量代谢的变化

本文对7例风湿性心脏病患者心脏换瓣手术时,不同阶段心肌能量有关物质的变化进行了研究,按取材阶段分为:Ⅰ心脏停跳立即、Ⅱ停跳后40分钟、Ⅲ复跳即刻和Ⅳ复跳后20分钟四个时点。在上述时间分别采取右心房切口处微量心肌样品,经处理用快速等浓度洗脱的高效液相色谱技术(HPLC),测定各组心肌样品中能量有关物质:肌酸(Cr)、磷酸肌酸(PCr)、次黄嘌呤(Hypo)、尼克酰胺腺嘌呤二核苷酸(NAD)、腺苷一磷酸(AMP)、腺苷二磷酸(ADP)和腺苷三磷酸(ATP)含量。结果表明:ATP含量是复跳20分钟<复跳即刻<停跳40分钟<停跳立即。PCr也有相同的变化趋势。与ATP比较ADP、AMP、Cr和Hypo呈负相关变化;NAD亦有降低趋势。综上所述,心脏外科手术中,目前采用的高钾晶体稀释血低温保护液对心肌的保护作用,从能量有关物质的变化来看,尚显不足,有待进一步改进。     

Optimized method for the determination of phosphoarginine in abalone tissue by high-performance liquid chromatography

A rapid high-performance liquid chromatography method for the determination of phosphoarginine (PArg) in invertebrate tissue has been redeveloped and validated. The method employs a reversed-phase amino column and a KH2PO4-acetonitrile mobile phase. PArg peak identity was confirmed by comparison with a known standard and via enzymatic conversion. Additionally linear calibration data, low intra-assay variability (<4%), and a detection limit of 5 pmol were determined. The method was demonstrated using PArg extracted from red abalone (Haliotis rufescens) adductor muscle. Validation of the extraction procedure was also completed, including the measurement of a 100.2+/-0.9% extraction efficiency.     

高效液相色谱法在异常血红蛋白病筛查中的应用

目的 应用高效液相色谱法(HPLC)检测人群中异常血红蛋白病发生情况.方法 收集2009年10月至2011年9月本院住院及门诊患者6297例,采用HPLC检测各种异常血红蛋白,缺口-PCR(gap-PCR)检测缺失型α地中海贫血基因型,反向斑点杂交法(RDB)分析非缺失型α地中海贫血和β地中海贫血基因型.结果 应用HPLC检测6297份标本,共发现68例11种异常血红蛋白,分别为血红蛋白(Hb)E 37例(其中2例为Hb E合并β-地中海贫血)、Hb Q 10例(其中Hb Q-Hb H 2例)、Hb S 3例(1例Hb S纯合子和2例Hb S杂合子)、Hb D-Iran 4例、Hb Manitoba 4例、Hb J-Bangkok 5例、Hb C 1例、Hb Lepore 1例、Hb J-Mexico 1例、Hb Osu-Christiansborg 1例和Hb K(o)ln 1例.异常血红蛋白病的发病率为1.08％(68/6297).结论 HPLC能快速、准确地鉴定各种异常血红蛋白,是一种筛查异常血红蛋白病的理想工具.     

吡格列酮对心肌梗死大鼠心肌能量代谢及血流动力学的影响

目的: 探讨吡格列酮对心肌梗死后大鼠心肌能量代谢及血流动力学的影响。方法: 采用开胸结扎冠状动脉左前降支建立心肌梗死模型,取术后72 h存活的20只大鼠随机分为手术组(MI组,n=10)和吡格列酮干预组(P组,n=10,吡格列酮3 mg·kg^-1·d ^-1灌胃8周),另设假手术组(SH组,n=10)。分别喂养8周后用Western blotting法测定大鼠心肌组织中过氧化物酶体增殖物激活受体γ(PPARγ)的蛋白表达水平。用生物组织氧耗测量仪测定线粒体氧化呼吸活性,高效液相层析法(HPLC)法测量线粒体内腺苷酸含量;氚标记二磷酸腺苷(-ADP)掺入法检测线粒体膜腺苷酸转运体(ANT)转运活性,经颈动脉插管测定血流动力学参数,并计算心室重塑指标。结果: 与SH组比较,MI组PPARγ的蛋白表达水平明显下调(P<0.01),线粒体内高能磷酸盐含量、呼吸活性和ANT转运活性明显降低(P<0.01),血流动力学指标紊乱(P<0.01); 与MI组比较,吡格列酮8周干预升高PPARγ的蛋白表达水平,改善心梗后心衰大鼠线粒体呼吸活性及ANT转运活性,增加线粒体内高能磷酸盐含量(P<0.01),但血流动力学指标改善不显著。结论: 心肌梗死后心力衰竭过程中,吡格列酮干预活化PPARγ,升高PPARγ蛋白的表达,可改善心力衰竭大鼠心肌能量代谢;但对血流动力学指标改善不显著。     

缺氧对大鼠心肌线粒体能量代谢和腺苷酸转位酶活性的影响

目的： 探讨高原低压缺氧暴露过程中大鼠心肌能量代谢及腺苷酸转位酶活性变化特点。 方法： 雄性Wistar大鼠随机分为正常对照组、缺氧1 d组、5 d组、15 d组和30 d组。缺氧组于模拟海拔 5 000 m高原低压舱内连续缺氧23 h/d。提取心室肌线粒体，Clark氧电极法测定线粒体氧化呼吸活性；HPLC法测量线粒体内腺苷酸含量；［3H］-ADP掺入法测量线粒体ANT转运活性。 结果： 大鼠经缺氧1 d、5 d、15d 后， ST3和RCR显著降低，缺氧30 d时ST3仍显著低于对照组， ST4在缺氧1 d、5 d、15 d时显著升高，缺氧30 d时降低，RCR在30 d时接近正常。缺氧1 d和5 d心肌线粒体ATP含量、ANT活性明显下降，缺氧15 d时接近正常，缺氧30 d时则再次降低。 结论： 缺氧对心肌线粒体氧化呼吸功能的抑制是导致线粒体内ATP含量下降的主要原因。缺氧过程中ANT活性与线粒体内ATP含量成协调变化。     

制备型高效液相色谱在生物医药制品领域的应用

 制备型高效液相色谱（preparative high performance liquid chromatography，Prep-HPLC）是一种使用高压、大流量液体输送系统在高分辨率、大内径、高载量分离柱上进行样品高纯度分离的液相色谱制备方法。应用该方法分离的产品在纯度、回收率、分离效率等方面远远优于传统的制备方法，因此在生物制品和药物研究、生产领域得到广泛应用^[1-3]。本文就近年来 Prep-HPLC 方法的研究进展及其在生物医药制品领域的应用做一综述。 1 Prep-HPLC 在蛋白质和多肽分离制备中的应用 蛋白质和肽类药物活性强，生物功能明确，特异性高，有利于临床应用，已成为医药产业中的一大类重要产品。但这些产品无论是来自于生物体内还是由化学合成，往往都带有复杂的混合成分，而总目的蛋白或肽类的丰度又低，给分离纯化带来困难，需要多种方法联合使用以获得纯度满意的产品。在此过程中，Prep-HPLC 通常在分离的最后阶段被用作获得高纯度产品的关键方法^[4]。......     

Simple and rapid high-performance liquid chromatography method for the determination of ofloxacin concentrations in plasma and urine

A high-performance liquid chromatographic method for the determination of ofloxacin in human plasma and urine was developed. The method involved deproteinisation of the sample with perchloric acid and analysis of the supernatant using a reversed-phase C18 column and fluorescence detection at an excitation wavelength of 290 nm and an emission wavelength of 460 nm. The assay was linear from 0.5 to 10.0 microg/ml. The relative standard deviation of intra- and inter-day assays was lower than 5%. The average recovery of ofloxacin from plasma was 93%. The method was evaluated in samples from healthy subjects whose drug levels were already measured by microbiological assay.