二甲双胍通过调节Treg细胞反应治疗实验性自身免疫性脑脊髓炎

目的给予实验性自身免疫性脑脊髓炎(EAE)小鼠应用二甲双胍(MET)干预性治疗。观察MET对EAE小鼠发病情况及体内Treg细胞反应的作用。方法将雌性C57BL/6小鼠随机分为正常对照组、EAE模型组和MET治疗组,采用髓鞘少突胶质细胞糖蛋白MOG35-55免疫小鼠建立EAE模型。自身免疫后第1天开始,按100mg·kg~(-1)·d~(-1)给予MET治疗组腹腔注射。正常对照组及EAE模型组小鼠给予等量的生理盐水每日腹腔注射作为对照。应用Knoz评分观察小鼠的神经功能评分,流式细胞学检测方法检测小鼠脾细胞中Treg细胞比例,ELISA方法检测脾细胞培养上清及血清中IL-10、TGF-β含量。qPCR方法检测小鼠脾及脊髓中Treg细胞转录因子Foxp3 mRNA表达水平。结果与EAE模型组相比,MET治疗组发病程度减轻(P0.01);脾细胞中Treg细胞比例增高(P0.01),脾细胞培养上清及血清中IL-10、TGF-β含量增加(P0.01);脾组织中Foxp3mRNA表达水平升高(P0.01);脊髓组织中Foxp3mRNA表达水平升高(P0.01)。结论 MET通过提高外周免疫器官及中枢神经系统的Treg细胞数量,增加抑制炎症因子的表达而达到对EAE模型小鼠的保护作用。     

地塞米松对实验性自身免疫性脑脊髓炎小鼠IL-17表达的影响

目的研究地塞米松对实验性自身免疫性脑脊髓炎(EAE)小鼠脑及脊髓组织中IL-17表达水平及脾组织中Th17细胞比例的影响。方法将33只C57BL/6小鼠随机分为对照组、EAE组和地塞米松组。EAE组及地塞米松组小鼠以MOG35-55进行免疫造模。地塞米松组小鼠自免疫当天至处死,隔日给予地塞米松磷酸钠注射液0.07mg·kg~(-1)腹腔注射。对照组及EAE组给予等量生理盐水。观察小鼠的发病情况及神经功能评分。应用苏木精-伊红染色、免疫组织化学染色、实时定量PCR、流式细胞学方法分别检测小鼠中枢神经系统炎症细胞浸润、IL-17阳性细胞表达、IL-17m RNA水平及脾组织Th17细胞比例。结果地塞米松组与EAE组比较,小鼠发病率及神经功能评分明显降低(P0.05)。与对照组比较,EAE组小鼠脑及脊髓组织中炎性病灶数明显增多(P0.05),IL-17阳性细胞数明显增多(P0.05),脊髓组织中IL-17m RNA水平明显升高(P0.05),脾组织Th17细胞比例明显升高(P0.05);与EAE组相比较,地塞米松组小鼠脑、脊髓及脾组织中上述指标明显降低(P0.05)。结论地塞米松可以降低EAE小鼠发病率,减轻发病时神经功能损伤程度以及脑和脊髓内炎性细胞浸润程度,并使IL-17mRNA、蛋白表达水平及Th17细胞比例下降。其神经保护作用可能是通过抑制IL-17/IL-23轴等免疫调节机制而实现。     

髓鞘少突胶质细胞诱导实验性自身免疫性脑脊髓炎小鼠的中枢病理损伤与Th1、Th17细胞分泌炎症细胞因子的变化观察

目的：观察实验性自身免疫性脑脊髓炎（EAE）的中枢神经系统（CNS）病理损伤与Th1、Th17细胞分泌的相关炎症细胞因子的变化,探讨EAE致病的分子免疫学机制。方法：用髓鞘少突胶质细胞（MOG35-55）免疫诱导野生型C57BL／6小鼠制作EAE模型,记录小鼠行为学变化,苏木精-伊红染色观察CNS病理损害,RT-PCR法检测中枢Th1细胞因子γ-干扰素（IFN-γ）、Th17细胞因子IL、17和IL-6的mRNA表达水平。结果：MOG诱导的EAE模型组小鼠出现典型的EAE行为及病理学表现,大脑组织中INF-γ、IL-17和IL-6mRNA表达水平均较CFA对照组有明显升高。结论：在EAE炎症反应的过程中,Th1细胞和Th17细胞激活,各自分泌的炎症细胞因子（INF-γ／IL-6、IL-17）增加,它们可能参与了EAE发病的重要免疫病理机制。EAE的致病并不是单-Th1或者Th17细胞作用的结果,而是两类细胞因子都参与了作用。     

IL-17、RORγt在实验性自身免疫性神经炎中的表达

目的 观察Th17型细胞因子IL-17和Th17细胞特异性转录因子维甲酸受体相关孤儿受体γ的胸腺异构体(RORγt) mRNA在实验性自身免疫性神经炎(EAN)模型中的表达,以探讨Th17细胞在EAN中的作用.方法 用P253-78aa肽段免疫Lewis大鼠,建立EAN模型,观察大鼠发病情况和组织病理改变,并检测淋巴细胞增殖反应,用RT-PCR技术检测IL-17和RORγt在大鼠发病高峰期脾脏、淋巴结和坐骨神经中的表达.结果 EAN组大鼠在第14-16天发病高峰期时平均临床评分为(7.5±1.2),病理学检查可见明显炎性细胞浸润,对P253-78aa的刺激产生强烈淋巴细胞增殖反应,与对照组相比,IL-17和RORγt mRNA在脾脏、淋巴结和坐骨神经中的表达均显著升高(P<0.001).结论 IL-17和RORγt表达上调与EAN的发病相关.     

重症肌无力患者外周血Th17细胞及其相关细胞因子表达研究

目的研究重症肌无力患者外周血辅助性T细胞17(Th17)及其相关细胞因子水平,探讨其与血清抗乙酰胆碱受体(AChR)抗体水平的相关性。方法纳入2016年9月至2017年12月共30例初诊重症肌无力患者,眼肌型(OMG) 16例、全身型(GMG) 14例。流式细胞术检测外周血单个核细胞Th17细胞比例,实时定量聚合酶链反应检测Th17细胞标志性细胞因子白细胞介素-17A(IL-17A)及其相关转录因子维A酸相关孤儿受体γ(RORγ)mRNA水平,酶联免疫吸附试验检测血浆IL-17A、IL-6、IL-23和抗AChR抗体水平。结果与正常对照组相比,GMG组和OMG组外周血Th17细胞比例(t=-3.312,P=0.002;t=-2.286,P=0.030)及其相关转录因子RORγmRNA表达水平(f=4.408,P=0.001;t=1.991,P=0.049),以及IL-17A水平(t=-4.282,P=0.004;t=-2.788,P=0.007)均高于正常对照组;GMG组IL-23水平亦高于正常对照组(t=-2.267,P=0.031)。重症肌无力患者外周血Th17细胞比例及血浆IL-17A水平与血清抗AChR抗体水平呈正相关(r=0.851,P=0.012;r=0.743,P=0.025)。结论重症肌无力患者外周血Th17细胞数目增加、血浆IL-17A表达水平升高,可能是导致重症肌无力发生与发展的重要原因,二者之间关系尚待进一步研究加以证实。     

马索罗酚对实验性自身免疫性脑脊髓炎小鼠Th1/Th2细胞炎症因子平衡的影响

目的探讨马索罗酚对实验性自身免疫性脑脊髓炎(EAE)小鼠白细胞介素-4(IL-4)、IL-12、干扰素-γ(IFN-γ)表达的调节作用。方法将8~10周雌性C57BL/6小鼠54只随机分成对照组、模型组、治疗组。每组再随机均分为发病后10d及20d亚组,每亚组9只。采用皮下注射髓鞘少突胶质细胞糖蛋白35-55(MOG35-55)多肽0.1mL诱导EAE模型。自发病当天起,治疗组小鼠给予马索罗酚10mg/(kg·d)治疗,模型组及对照组给予等量5%二甲基亚砜(DMSO)10mL/(kg·d)处理。比较3组小鼠临床症状评分。应用实时定量PCR检测小鼠脊髓和脾组织中IL-4、IL-12、IFN-γmRNA表达水平。应用ELISA检测脑组织中IL-4、IL-12、IFN-γ蛋白表达水平。结果与模型组比较,治疗组小鼠临床症状较减轻(P0.05)。与模型组相比,治疗组小鼠10d时脊髓和脾组织IL-12、IFN-γmRNA表达水平降低(P0.05),IL-4mRNA水平增高(P0.05),脑组织IL-12、IFN-γ蛋白水平降低(P0.05),IL-4蛋白水平增高(P0.05);与模型组相比,治疗组20d时脊髓组织IL-12、IFN-γmRNA表达水平降低(P0.05),脑组织IFN-γ含量降低(P0.05)。结论马索罗酚可能通过降低脑、脊髓及脾组织中IL-12、IFN-γ表达,增加IL-4表达,调节Th1/Th2细胞炎症因子平衡,进而改善EAE小鼠疾病严重程度。     

阿米洛利对实验性自身免疫性脑脊髓炎小鼠中枢神经系统中细胞因子表达的影响

目的：观察阿米洛利对实验性自身免疫性脑脊髓炎（EAE）小鼠脑组织中白介素17（IL-17）、白介素10（IL-10）和干扰素-γ（IFN-γ）的影响。方法：C57BL/6小鼠27只随机分成3组：EAE-生理盐水组、EAE-阿米洛利组和空白对照组。用髓鞘少突胶质细胞糖蛋白和完全弗氏佐剂混合抗原乳剂诱导小鼠EAE动物模型。EAE-阿米洛利组免疫当日开始给予阿米洛利10 mg.kg-1干预,连续14 d;EAE-生理盐水组给予相同剂量的生理盐水;空白对照组小鼠不做任何处理。每天评估EAE小鼠神经功能变化;采用苏木精-伊红染色观察病理学改变;ELISA法检测发病高峰期（免疫后第19天）脑组织中促炎因子IL-17和IFN-γ、抑炎因子IL-10改变。结果：与EAE-生理盐水组相比,EAE-阿米洛利组①日均神经功能评分降低（P〈0.05）,最大临床症状评分明显降低（P〈0.01）;而两组间发病率无明显差异。②苏木精-伊红染色：中枢神经系统炎症细胞浸润减少（P〈0.01）。③IL-17和IFN-γ表达降低（P〈0.01）,IL-10表达增加（P〈0.05）。结论：阿米洛利能够减缓小鼠EAE病情,其机制可能与下调中枢神经系统IL-17和IFN-γ的表达,上调IL-10的表达有关。     

抑郁障碍患者下丘脑-垂体-肾上腺轴调节异常对辅助性T细胞17分化发育的影响

目的 探讨抑郁障碍患者的下丘脑-垂体-肾上腺(hypothalamus-pituitary-adrenal,HPA)轴功能异常对辅助性T细胞17(Th17 细胞)分化发育的影响.方法 纳入包括单相抑郁和双相抑郁在内的首次发病未用过药的抑郁发作患者32例及正常对照25名,测定受试者的血浆促肾上腺皮质激素(adrenocorticotrophic hormone, ACTH)、血清皮质醇和细胞因子IL-17的浓度,采用逆转录-聚合酶链反应检测受试者外周血单个核细胞(peripheral blood monouclear cells, PBMC)中糖皮质激素受体(glucocorticoid receptor,GR)和维甲酸相关核孤儿受体γt (retinoid-related orphan receptor gammat,RORγt) mRNA的表达水平.结果 抑郁障碍患者组和正常对照组的PBMC中GR mRNA的表达分别为25.14%和39.56%,患者组显著下降(Z=-2.76,P<0.01);患者组RORγt mRNA的表达、血清IL-17浓度分别为68.70%、83.83 ng/L,而对照组为24.74%、65.60 ng/L,患者组两个指标均显著升高(Z=-3.00,P<0.01;Z=-2.33,P<0.05).患者组中GR mRNA与RORγt mRNA的表达、IL-17浓度均呈负相关(r=-0.70,P<0.01;r=-0.47,P<0.05);未见其余指标间存在相关(P>0.05).结论 HPA轴负反馈调节异常对Th17细胞的分化发育及炎性诱导起重要作用.     

MG患者外周血Th17细胞与AChR抗体产生的关系研究

目的探讨重症肌无力(MG)患者外周血中Th17细胞及相关细胞因子白细胞介素17(IL-17)在MG发病中的作用。方法收集40例MG患者和10名健康人(对照组)外周血标本,采用流式细胞术检测外周血单个核细胞(PBMCs)中Th17细胞比例,反转录酶-聚合酶链锁反应(RT-PCR)检测PBMCs中维甲酸受体相关孤儿受体γt(RORγt)mRNA水平,ELISA检测血清中IL-17水平,放射免疫沉淀法检测血清中抗乙酰胆碱受体抗体(AChR-Ab)滴度;分离PBMCs中CD4~+T细胞和CD19~+B细胞与金黄色葡萄球菌肠毒素B(SEB)进行共培养,培养系统中加入人IL-17和(或)IL-21中和抗体,放射免疫测定法检测培养液中AChR-Ab滴度。采用MG评分(quantitative MG scoring system,QMGs)对MG的严重程度进行评估,并对MG患者的Th17细胞比例、RORγt mRNA和IL-17水平与病情QMGs的相关性,以及MG患者抗AChR-Ab滴度与PBMCs中Th17细胞比例的相关性进行分析。结果 MG患者PBMCs中Th17细胞比例[1.11%(0.90%,1.34%)]高于健康对照组Th17细胞比例[0.26%(0.08%,0.36%)](z=5.494,P0.001),且与疾病严重程度呈正相关(r=0.4394,P=0.0046);血清中IL-17水平和PBMCs中RORγt mRNA相对表达[分别71.46(53.91,104.76)pg/mL、2.63(1.94,3.12)]均较健康对照组[分别18.82(12.73,29.80)pg/mL、1.13(0.98,1.28)]显著增高(均P0.001);MG患者血清中抗AChR-Ab滴度[2.34(1.19,3.60)nmol/L]较健康对照组[-0.08(-0.24,-0.03)nmol/L]显著增高(z=4.662,P0.001),且与Th17细胞比例呈正相关(r=0.7066,P=0.0001)。MG患者外周血T、B细胞与SEB共培养后抗AChR-Ab水平高于未加入SEB时及健康对照(均P0.01);加入抗人IL-21或IL-17中和抗体后,两者AChR-Ab滴度与未加入抗体时AChR-Ab滴度比较均降低(均P0.05),且均仍高于MG患者未加入SEB时及健康对照(P0.01);在培养上清中同时加入抗人IL-21和IL-17中和抗体时AChR-Ab滴度明显低于加入单种抗体时,而与未加入SEB时及健康对照差异无统计学意义(均P0.05)。结论 MG患者外周血中Th17细胞可能通过IL-17促进AChR-Ab产生,参与疾病的病理过程。