GSK3B基因启动子区多态性与中国北方汉族人群阿尔茨海默病的相关分析

目的研究中国北方汉族人群中糖原合成酶激酶38基因（GSK3B）启动子区rs334558位点基因多态性与阿尔茨海默病（AD）易感性的相关性。方法采用直接测序的方法,对403例AD病例及369名对照外周血DNA的GSK3B基因多态位点rs334558进行基因分型。结果AD组与对照组rs334558位点等位基因和基因型分布相似,等位基因T的频率在AD组和对照组分别为38．8％和37．9％,差异无统计学意义（y。一0．130,P〉0．05）。按照性别或者是否携带AopF~4等位基因分别进行分层分析,发现AD组和对照组之间等位基因频率和基因型分布的差异无统计学意义（,分别为0．331,0．565;P〉0．05）。结论GSK3B基因启动子区多态性位点rs334558可能与中国汉族人群AD发病无关。     

NLRP3基因多态性与中国北方东部汉族人群帕金森病相关性研究

目的探讨Nod样受体家族蛋白3 (Nod-like receptor protein 3,NLRP3)rs4612666及rs7525979位点多态性与中国北方东部汉族人群帕金森病(Parkinson disease,PD)发病风险的相关性。方法采用病例对照研究,共招募400例PD患者(PD组)及400例健康对照者(对照组),应用聚合酶链反应-限制性片段长度多态性方法鉴定NLRP3基因SNPs位点rs4612666和rs7525979。结果 PD组rs4612666等位基因与对照组具有统计学差异,C等位基因频率低于对照组,降低发病风险(OR=0.794,95%CI:0.653～0.967,P=0.021),隐性遗传模型CC/TT+CT分布在PD组与对照组之间差异具有统计学意义(OR=0.667,95%CI:0.481～0.925,P=0.015)。亚组分析中,与对照组比较,女性PD组与早发型PD组等位基因分布差异具有统计学意义(P=0.003,P=0.018)。rs7525979位点的基因型分布和等位基因频率在PD组与对照组比较均无统计学差异(P0.05)。结论在中国北方东部汉族人群中,NLRP3 rs4612666的C等位基因是PD的保护性因素。     

国人颅内动脉瘤SERPINA3基因rs4934A/G多态性检测分析

目的 丝氨酸蛋白酶抑制剂A3基因(SERPINA3)已被证明与芬兰白种人颅内动脉瘤的发病机制相关,在中国汉族颅内动脉瘤患者中检测与分析SERPINA3基因rs4934位点多态性.方法 利用聚合酶链式反应-TaqmanMGB探针方法,比较275例散发性颅内动脉瘤(50.83±10.78)岁和361例正常对照(53.21±10.81)岁之间SERPINA3基因rs4934位点的基因型及等位基因频率的构成.结果 在动脉瘤组和对照组之间SERPINA3基因rs4934位点的基因型及等位基因频率分布差异无统计学意义,用logistic回归纠正性别和年龄因素结果没有改变.结论 在中国汉族人群中颅内动脉瘤和对照组之间SERPINA3基因rs4934位点多态性差异无统计学意义.     

丝裂酶原活化蛋白激酶1基因多态性与中国汉族阿尔茨海默病的关联研究

目的:研究探讨丝裂酶原活化蛋白激酶1(MAPK1)基因在中国汉族阿尔茨海默病(AD)发生过程中的作用。方法:根据《美国精神障碍诊断和统计手册》(DSM-IV)和美国国立神经病、语言功能紊乱和脑卒中研究所及AD和相关疾病协会临床诊断标准(NINCDS-ADRDA),收集中国东部和西南部人群AD患者715例和健康对照者760人。选取MAPK1基因3个标签多态性位点rs2276006、rs1063311和rs2006893。采用SNa Pshot SNP分型技术对这3个SNP位点进行分析。结果:中国东部和西南部人群AD组与对照组间MAPK1基因各位点基因多态性及等位基因分布频率差异无统计学意义(P0.05);东部及西南部人群合并后AD组与对照组间MAPK1基因各位点基因多态性及等位基因分布频率差异无统计学意义(P0.05),连锁不平衡检验显示各SNP位点之间存在强连锁(D'0.95),单体型分析结果显示病例组与对照组间单体型估计频率差异无统计学意义(P0.05)。结论:MAPK1基因可能不是中国汉族AD的主要致病基因。     

褪黑素合成酶ASMT基因启动子和第一外显区单核苷酸多态性与儿童孤独症的关联研究

目的探讨参与褪黑素合成的乙酰血清素甲基转移酶(acetylserotonin methyltransferase,ASMT)基因启动子和第1外显子区遗传多态性位点与儿童孤独症是否关联。方法对390例儿童孤独症患者和420例正常对照者的ASMT基因启动子和第1外显子区域进行测序。比较该区域5个单核苷酸多态性(single nucl-eotide polymorphisms,SNPs)位点的等位基因频率、基因型频率和单体型频率在患者组与对照组之间的差异。结果患者组和对照组之间,5个SNPs(rs4446909、rs5989681、rs56690322、rs6644635、rs17149149)等位基因和基因型频率的差异均无统计学意义(P>0.05)。3个SNPs位点rs4446909、rs5989681和rs6644635之间存在连锁不平衡(linkage disequilibrium,LD)(D’值为0.85-0.98)。但此3个SNPs构成的单体型频率在两组间的差异无统计学意义(P>0.05)。结论本研究未发现ASMT基因启动子和第1外显子区域的遗传多态性位点与儿童孤独症关联,提示这些位点可能未参与中国汉族人群孤独症的致病。     

Neprilysin基因单核苷酸多态性与阿尔茨海默病的相关性研究

目的探讨neprilysin基因单核苷酸多态性与中国北方汉族散发性阿尔茨海默病(sporadic Alzheimer's disease,SAD)的相关性。方法应用聚合酶链式反应-限制性片段长度多态性方法对157例SAD患者(AD组)和125例正常对照(对照组)进行neprilysin基因rs3736187位点单核苷酸多态性基因分型后,进行病例-对照相关分析。结果基因型的频率在病例组和对照组中分布差别有统计学意义(P<0.05),其中CC基因型与TT基因型相比,AD组CC基因型频率增高,TT基因型频率降低,CC基因型可以增加散发性AD的发病风险(P<0.05)。等位基因频率在两组中的分布差别无统计学意义(P>0.05)。结论Neprilysin基因rs3736187位点的CC基因型可能通过某种途径增加中国北方汉族散发性阿尔茨海默病的发病。     

脑啡肽酶基因多态性与散发性阿尔茨海默病的关系研究

目的探讨脑啡肽酶(neprilysin,NEP)基因单核苷酸多态性与中国北方汉族散发性阿尔茨海默病(sporadic Alzheimer’s disease,SAD)的关系。方法临床确诊的99例中国北方汉族SAD患者及109例正常对照,提取外周血基因组DNA,聚合酶链反应-限制性片段长度多态性结合DNA直接测序法确定NEP基因rs989692位点及rs6776185位点基因型,分析上述两个位点单核苷酸多态性与AD的关系。结果 AD组和正常对照组NEP基因rs989692位点各等位基因频率及基因型分布无显著性差异(P>0.05);AD组NEP基因rs6776185位点A等位基因频率显著高于正常对照组(88.9%vs 81.2%,P=0.029),AA基因型频率显著高于正常对照组(80.8%vs 67.0%,P=0.024);携带A等位基因者,发生AD的风险是不携带A等位基因者的1.85倍(OR=1.85,95%CI 1.07~3.20);经载脂蛋白E基因(apolipoprotein E,Apo E)ε4等位基因及年龄分层比较,携带ε4基因及年龄<75岁组,AD组A等位基因及AA基因型分布频率仍明显高于正常对照组(P<0.05)。结论 NEP基因rs6776185位点A等位基因和AA基因型可能是中国北方汉族人群SAD的危险因素,可使AD发病年龄提前,并与Apo Eε4等位基因可能具有协同作用。     

胰岛素样生长因子1、载脂蛋白酶E基因多态性与阿尔茨海默病关系的研究

目的探讨河南省汉族人群胰岛素样生长因子1(insulin like growth factor 1,IGF-1)基因rs972936位点多态性、载脂蛋白酶E(Apo E)基因多态性与阿尔茨海默病(Alzheimer’s disease,AD)之间的相关性。方法选取58例AD患者和126例年龄、性别相匹配的健康对照(ND)者为研究对象,柱层析法提取外周血基因组DNA,采用PCR和基因测序技术检测IGF-1基因rs972936位点及Apo E基因型多态分布,并进行对比分析。结果与ND组比较,AD组IGF-1基因rs972936位点3种基因型分布总体差异有统计学意义(χ~2=6.108,P=0.047),其中AD组中GG基因型的频率高于对照组(70.7%51.6%,χ~2=5.935,P=0.015),G等位基因频率明显高于健康对照组(χ~2=6.502,P=0.011);AD组Apo Eε4等位基因频率可能增加AD的患病风险(OR=2.872,95%CI 1.542~5.351)(P=0.001);Apo Eε4等位基因不影响IGF-1基因rs972936位点的基因型或等位基因的分布频率(P0.05)。结论 IGF-1基因rs972936位点多态性与河南汉族人群AD的发病可能有相关性,其中GG基因型、G等位基因可能是AD发病的独立于Apo Eε4等位基因的危险因素。Apo Eε4等位基因是散发性AD的主要危险因素。     

凝溶胶蛋白基因rs3827677位点多态性与阿尔茨海默病关系的研究

目的 探讨河南省汉族人群凝溶胶蛋白(gelsolin,GSN)基因rs3827677位点多态性与阿尔茨海默病(Alzheimer's disease,AD)之间的相关性.方法 选取58例AD患者和126例年龄、性别相匹配的健康对照者为研究对象,柱层析法提取外周血基因组DNA,采用PCR和基因测序技术检测GSN基因rs3827677位点基因型多态分布,并进行对比分析.结果 AD组与对照组GSN基因rs3827677位点基因型均有两种:AG型、GG型,两组间基因型及等位基因的频率差异无统计学意义(x2 =0.055,P=0.814;x2 =0.036,P=0.850).结论 GSN基因启动子区rs3827677位点多态性与河南汉族人群AD的发病可能无明显相关性.     

GSK3β基因3’-UTR多态性与缺血性脑卒中的关系

目的 探讨糖原合成酶激酶3β(GSK3β)基因3’-UTR多态性与缺血性脑卒中的关系。方法 选择本院2017年3月-2019年3月收治的缺血性脑卒中患者91例作为研究组; 另选择本院2017年3月-2019年3月体检健康者80例作为对照组; 采用PCR法检测GSK3β基因3’-UTR多态性位点rs334558和rs6438552等位基因和基因型频率。结果 研究组ADL评分和认知功能障碍发生率高于对照组(P<0.05); 研究组基因位点rs334558等位基因C分布和基因型频率CC高于对照组(P<0.05); 研究组基因位点rs6438552等位基因C分布和基因型频率CC高于对照组(P<0.05)。结论 GSK3β基因3’-UTR多态性与缺血性卒中存在关系; rs334558和rs6438552位点C等位基因可能为缺血性脑卒中的易感基因     

两种3T3光毒性试验方法在防晒化妆品光毒性评价中的应用

背景：评价化妆品光毒性,传统多采用兔或豚鼠动物实验,即将化学物涂抹在动物背部去毛的皮肤上,经一定时间间隔后暴露于UVA 光线下,观察其变化,费时,费力,且给动物带来很大痛苦。各国实验室都在寻找动物替代实验的方法。 目的：采用2种3T3细胞光毒替代试验方法（中性红法与MTT法）作为替代方法评价防晒化妆品引起皮肤光毒性的可能性。 设计、时间及地点：动物替代实验。实验于2008年8月~2008年12月中中国检验检疫科学研究院毒理学实验室完成。 材料：3T3小鼠胚胎成纤维细胞,购于美国ATCC公司。 方法：选用SPF值分别为10,15,30的防晒化妆品霜剂和乳液各一种,作用于3T3 细胞后,暴露或不暴露于紫外线下,用中性红法与MTT法判定细胞毒性情况,分析其细胞存活率,,光刺激因子( PIF) ,以判断待测物质是否具有光毒性。 主要观察指标：PIF值。 结果：防晒化妆品SPF30-2（霜剂）可能有光毒性,2≤PIF<5。MTT与NRU两种方法均得到了相同的结论。 结论：3T3细胞光毒性试验用来评价化妆品的光毒性是可行的,应加强对防晒化妆品的监管。     

Differential distribution of the G protein γ3 subunit in the developing zebrafish nervous system

G proteins play an essential role in the transduction and propagation of extracellular signals across the plasma membrane. It was once thought that the G protein α subunit was the sole regulator of intracellular molecules. The G protein βγ complex is now recognized as participating in many signaling events. While screening a zebrafish cDNA library to identify members of the protein 4.1 superfamily (Kelly, G.M., Reversade, B., Biochem. Cell Biol. 75 (1997), 623), we fortuitously identified a clone that encodes a zebrafish G protein γ subunit. The 666 nucleotides of the zebrafish G protein γ subunit cDNA encodes a polypeptide of 75 amino acids with high degree of homology to human, bovine, rat and mouse γ subunits. BLAST search analysis of GenBank revealed that the zebrafish γ subunit is 93% identical and 97% similar to the mammalian γ3 subunit. The γ3 gene was mapped to the zebrafish linkage group 21, approximately 10.76 cRays from bf, a gene with sequence homology to the human properdin factor gene. RT-PCR and in situ hybridization analyses first detected γ3 mRNA during late somitogenesis, where it was expressed preferentially in the Vth cranial nerve, the forebrain and in ventrolateral regions of the mid- and hindbrain including the spinal cord. The ability of the zebrafish γ3 subunit to form a signaling heterodimeric complex with a β subunit was tested using a human β2 subunit. The γ3 formed a heterodimer with β2 and the complex was capable of binding calmodulin in a calcium-dependent manner. Overexpression of the β2γ3 complex in zebrafish embryos lead to the loss of dorsoanterior structures and heart defects, possibly owing to an up-regulation of mitogen-activated protein kinase activity and/or decline in protein kinase A signaling. Together, these data imply that a βγ heterodimer plays a role in signal transduction events involving G protein coupled receptors and that these events occur in specific regions in the nervous system of the developing zebrafish.     

Functional rescue of the inactive splice variant of the dopamine D3 receptor D3nf

We previously found that the dopamine D3 receptor can be split at the third cytoplasmic loop into two fragments (D3trunk and D3tail), and that the mixture of the two fragments retains the binding and functional activity of the wild type receptor. The dopamine D3 receptor gene gives rise to several inactive receptor splice variants, one of which is the D3nf. Since this gene variant very closely resembles our D3trunk fragment, in this study we investigated if the transfection of D3nf with D3tail could result in the rescue of a functional dopamine receptor. Our experiments showed that D3tail can indeed rescue the activity of D3nf, and that the pharmacological profile of this split D3nf/D3tail receptor is identical to that of the wild type D3 receptor.     

牛磺酸对3T3-L1前脂肪细胞分化的影响☆

目的：有研究发现，喂食牛磺酸的糖尿病鼠脂肪细胞摄糖的能力增加，但牛磺酸是否能影响脂肪细胞分化，目前还尚不清楚。本实验观察牛磺酸对3T3-L1前脂肪细胞分化的影响，并探讨牛磺酸影响3T3-L1前脂肪细胞分化的机制。 方法：实验于2006-07/09在中南大学湘雅三医院实验中心完成。①实验材料：实验中应用的3T3-L1细胞由中国科学院上海细胞库提供。②实验方法：将3T3-L1细胞用含体积分数为0.10胎牛血清的高糖DMEM培养液培养，内含108 u/L 青霉素，80×1010 U/L链霉素。细胞达汇片后，按5×107 L-1密度接种于培养瓶中，应用0.5 mmol/L IBMX、0.5 mg/L胰岛素和1 μmol/L地塞米松诱导分化，实验组加入牛磺酸，对照组未实施牛磺酸干预。油红O染色观察脂肪细胞分化情况。10， 20 mmol/L牛磺酸分别干预C3T3-L1前脂肪细胞24，48 h，抽提实验组和对照组细胞RNA及蛋白。③实验评估：采用RT-PCR及Western-blot方法观察脂肪分化相关基因的表达变化。 结果：①10 mmol/L 牛磺酸干预后14 d，实验组油红O染色阳性脂肪细胞明显少于对照组。②10，20 mmol/L牛磺酸分别干预3T3-L1前脂肪细胞24，48 h后，对脂肪分化相关基因Insig-2蛋白、PPAR、Insing-2、脂联素、脂联素受体、GLUT-4、AP-2 mRNA表达无明显影响。