弱精子症患者精子外周致密纤维2基因及蛋白的表达

目的:探讨弱精子症患者精子中外周致密纤维2(ODF2)mRNA及蛋白的表达水平,比较ODF2在健康男性与弱精子症患者中的表达差异。方法:根据WHO第5版,收集身体健康无疾病正常男性精液(n=15)和弱精子症患者精液(n=45)共60份,利用计算机辅助精液分析系统(CASA)进行精子统计,将弱精子症分为轻、中、重度3组,采用实时定量PCR和Western印迹对4组标本进行ODF2基因的表达量研究。结果:与正常组相比,轻度弱精子症组精子中ODF2基因表达无明显统计学差异(1.1120±0.5255 vs 0.6880±0.3720,P0.05);中度弱精子症组ODF2基因表达降低,有显著的统计学差异(1.1120±0.5255 vs 0.4833±0.1863,P0.05);重度弱精子症组ODF2基因表达明显降低,有极显著的统计学差异(1.1120±0.5255 vs 0.448 3±0.3408,P0.01)。Western印迹中ODF2的OD值(ODF2/β-actin)在正常组和轻、中、重度弱精子症组分别为:0.4587±0.0521、0.3261±0.0714、0.1454±0.0536和0.1227±0.0457,与正常组相比,轻度弱精子症组无明显统计学差异(P0.05),中度弱精子症组有显著的统计学差异(P0.05),重度弱精子症组有极显著的统计学差异(P0.01)。结论:ODF2基因及蛋白在弱精子症患者精子中的表达下调与精子活动力下降有密切联系,呈正相关性,提示ODF2基因可能参与精子活力的调控。     

外周致密纤维2与精子功能关系的研究进展

弱精子症、畸形精子症是导致男性不育的主要原因,而精子尾部结构的异常和功能的缺失会导致精子活力低下。外周致密纤维2(ODF2)是哺乳动物精子尾部的组成部分,是维持细胞结构的骨架蛋白,因此,该纤维蛋白的异常与精子功能异常密切相关。研究显示,ODF2有许多同名蛋白和同源剪切体,出现在如精子中心体、卵裂胚的纺锤体等部位,也是动物纤毛发生所必需的;同时,ODF2也是微管相关蛋白,与精子获能有关,说明其并非单一的结构蛋白。本文对ODF2蛋白已知的多种功能进行了描述,为进一步系统研究ODF2与精子功能及受精的相关性奠定基础。     

精子蛋白表达下调在成人弱精症中的意义分析

目的:探讨精子蛋白表达下调在成人弱精症中的意义。方法:用iTRAQ标记以及二维高效液相色谱/串联质谱联用的方法研究成年男性正常精子以及轻、中、重度弱精症患者的精子蛋白表达情况。结果:以正常组作为参照,本研究共发现1 073个蛋白质,其中呈递减下调表达的蛋白质73个,分别是参与精子能量代谢过程蛋白质、参与精子运动和细胞循环途径蛋白质、参与精子细胞免疫反应和凋亡途径蛋白质和其他蛋白质,其中部分蛋白与精子活力明显相关。结论:部分精子蛋白质表达下调可能是导致成人弱精症的重要原因之一。     

不同程度弱精子症的精子蛋白质差异表达分析

目的研究不同程度弱精子症蛋白质表达差异,以期揭示蛋白质改变在弱精子症发生、进展中的作用.方法用iTRAQ标记以及二维高效液相色谱/串联质谱联用的方法研究人类正常精子以及轻、中、重度弱精子症患者的精子蛋白表达,通过相关软件分析数据,比较正常精子与不同程度弱精子症精子蛋白间的变化情况.结果本研究发现1073个蛋白质改变与弱精子症相关,而这些蛋白中,蛋白表达是以下调表达占主要形式的.通过Panther进行弱精子症中蛋白质组的蛋白质进行分类,结果发现这些升高蛋白主要涉及15个生物过程;降低的蛋白质中除了涉及上升表达的15个生物过程外,还涉及内环境稳态生物过程蛋白.这些生物过程中,与生殖过程密切相关的蛋白有26个,其中上调有10个,降低的蛋白为16个.结论精子蛋白表达是以下调表达占主要形式的,而这种情况可能是弱精子症发生的一个重要原因.在弱精子症的发生、发展中,多蛋白通过不同的生物学作用和途径交互影响,可能是最终影响精子的发生和活动力的重要原因.     

精子发生相关基因VASA在正常和少精子症患者精子中的表达及意义

目的探讨生殖细胞高度特异性基因VASA和信号分子BMP-4在精子发生中的作用和相关机制。方法正常和少精子症患者精液通过Percoll梯度分离获得精子和未成熟生精细胞,采用RT-PCR、real-time PCR、Western Blot和免疫荧光方法分析基因转录产物表达。结果少精子症精子VASA基因转录产物是正常精子的1/5；两种样本精子中均检测到荧光信号,正常组信号强,与Western blot结果相一致；两种样本精子RT-PCR均未检测到BMP-4及其Ⅰ型受体Alk-3表达,但在分离的未成熟生精细胞中均表达。人正常睾丸组织可检测到BMP- 4及其Alk-3表达。结论少精子症患者精子发生过程中VASA基因及其产物发生变化；BMP-4及其受体Alk- 3并不直接上调VASA表达；睾丸组织包括精子所存在的部分转录产物,而精子转录产物并不完全等同于睾丸组织；睾丸组织内表达BMP-4和Alk-3的可能主要是精原和精母细胞。     

蛋白激酶B在人睾丸组织中的表达及意义

目的 探讨蛋白激酶B(PKB)在人睾丸组织中的表达及意义.方法 用免疫组织化学方法检测PKB蛋白在正常翠丸组织中的表达.用荧光定量PCR检测PKB α、PKB β和PKB γ三种异构体mRNA在正常人、严重少弱精子症和非梗阻性无精子症患者的睾丸组织中的表达水平,并用Western Blot方法检测各组睾丸组织中PKB蛋白的表达情况.结果 PKB在正常人睾丸组织的精原细胞、精母细胞、精子细胞的胞质中表达,而磷酸化的PKB主要在初级精母细胞核中表达,精原细胞和精子细胞核中也可见少量表达.PKB α mRNA在正常人和严重少弱精子症的睾丸组织中表达没有差异,均显著高于非梗阻性无精子症患者差异具统计学意义(P<0.05);PKB β和PKB γ mRNA的表达在三组间无差异.Western Blot结果显示正常人和严重少弱精子症患者的睾丸组织中均可见PKB和磷酸化PKB的表达,且两者的表达在两组间无差异(P>0.05);非梗阻性无精子症患者的睾丸组织中PKB和磷酸化PKB未见明显表达.结论 PKB的三种异构体mRNA、PKB及磷酸化的PKB蛋白在正常睾丸组织中均有表达,而非梗阻性无精子症患者的睾丸组织中PKB蛋白无明显表达,推测PKB与生精功能可能有密切联系.     

精子纤维鞘发育不良的研究进展

人类精子鞭毛的超微结构异常将导致精子运动障碍。精子纤维鞘发育不良(DFS)是常染色体隐性遗传病,患者精液中精子95%~100%不活动,呈短、粗和不规则尾畸形。透射电镜见纤维鞘大量紊乱地围绕着不同程度变形的轴丝,无正常的纵柱和肋柱结构,或伴有中心微管及动力蛋白臂缺失。DFS遗传学病因尚未明确,透射电镜检查可以明确诊断。DFS不影响卵细胞胞质内单精子注射的受精率和临床妊娠率,但子代的遗传风险值得关注。     

腺苷酸激酶家族在弱精子症患者精子中的表达特征

目的:探讨腺苷酸激酶(AK)家族在弱精子症患者精子中的表达特征。方法:收集弱精子症患者和正常男性(对照组)精子样本各30例,采用RT-PCR和Western印迹技术检测AK mRNA及蛋白相对表达量。免疫荧光、免疫组化检测目标AK组织定位,并检测其与精子运动能力的关系。结果:RT-PCR显示,AK家族中AK1-AK9在精子中均有表达,且AK1、AK6和AK7的表达在特发性弱精子症患者精子中显著低于对照组。Western印迹结果表明,弱精子症患者精子中AK1、AK6和AK7蛋白与对照组相比也显著降低。在睾丸中AK1和AK7广泛表达于精原细胞、精母细胞和圆形精子细胞的细胞质中,AK6表达于精母细胞和圆形精子的细胞核中。在精子中,AK1和AK7蛋白定位于精子鞭毛部,AK6定位于精子头部。抗体阻断实验显示,AK1、AK6或AK7抗体单独与精子共孵育对精子活动率和前向运动无显著影响,3种抗体一起与精子共孵育后与对照组相比可以显著降低精子活动率[(80.5±2.4)%vs(87.6±3.3)%,P0.05]和前向运动精子百分率[(60.6±3.6)%vs(70.2±2.3)%,P0.05]。结论:AK1、AK6和AK7 mRNA及蛋白在弱精子症患者精子中的表达下调可能与精子活力下降有密切联系。     

Ropporin基因在人精子中的表达和意义

目的 检测ropporin基因在人精子中的表达.探讨Ropporin抗体对人精子运动的影响,评价Ropporin蛋白在精子运动中的功能.方法 收集正常男性精子,非连续梯度离心法分离精子,用RT-PCR、免疫印迹和免疫荧光方法检测ropporin基因在精子中的表达和蛋白定位;将纯化精子分别在含不同浓度Ropponn抗体的培养液中孵育(0,0.8,4和20 μ g/mL),在不同时间点(1,2,6h)用精子计算机辅助分析系统(computer-assisted sperm analysis,CASA)检测精子活动力.结果 RT-PCR、免疫印迹和免疫荧光方法均检测出ropporin基因在精子中表达;免疫荧光表明Ropporin主要定位在精子鞭毛的主段和末段;抗体实验显示抗体孵育1h、2h、6h后精子的快速前向运动(a级)和慢速前向运动(b级)均明显受到抑制,并显示剂量依赖性.结论 Ropporin在精子鞭毛的主段和末段上的表达与精子的运动密切相关.     

碳酸酐酶Ⅱ在人睾丸、精子中的表达及其临床意义

目的:观察碳酸酐酶Ⅱ(CA2)在人睾丸、精子中的表达定位及比较CA2在生育男性和弱精子症患者精子中的表达差异。方法:通过免疫组化观察CA2在人睾丸中的定位;通过免疫荧光观察CA2在人精子中的定位;收集健康生育男性和弱精子症患者的精液标本各16份,60%Percoll分离精液标本,排除生精细胞和白细胞,采用Western印迹方法,从蛋白水平检测CA2的表达。结果:免疫组化结果显示CA2在人睾丸中特异性定位于长形精子的尾部;免疫荧光结果显示CA2在人精子的尾部有较强表达。Western印迹结果显示弱精子症患者精子中CA2的表达显著高于生育男性(1.84±0.32vs1.41±0.26,P<0.05)。结论:CA2在睾丸生精周期的长形精子阶段才表达,定位于精子的尾部。CA2在弱精子症患者精子中表达显著增高,提示其可能与精子活动力下降有关。     

精子相关抗原SPAG9在人精液精子中的表达及定位

目的:SPAG9作为MAPK家族中的成员,在精卵融合过程中发挥着重要的作用。本研究检测SPAG9在人精液精子中的表达情况。方法:取人不同组织(肌肉、肝、食管、肺、胃、肾、前列腺、子宫、睾丸、附睾)标本及健康男性的精液精子,为了排除圆形细胞的污染,精液标本经非连续性Percoll梯度离心、分离纯化;采用逆转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)和间接免疫荧光方法,从mRNA和蛋白水平检测SPAG9在精子中的表达。结果:RT-PCR结果显示,SPAG9mRNA不仅在各种不同的组织中有表达,而且在人精液精子中也有表达;间接免疫荧光结果显示,SPAG9蛋白主要定位于人精液精子头部的赤道板和精子尾部鞭毛上。结论:SPAG9在人精液精子中有表达,可能在精子获能和运动中有一定作用。     

Lipid Peroxidation Products in Human Spermatozoa: Detection and Pathogenic Significance

Lipid-Peroxidations-Endprodukte in menschlichen Spermatozoen
Endprodukte der Lipidperoxydation in menschlichen Spermatozoen: Nachweis und pathogene Bedeutung
Produkte der Lipidperoxydation (Schiffsche Basen) wurden in normalen menschlichen Spermatozoen nachgewiesen. Nach Inkubation der Spermatozoen mit einer prooxidativ wirkenden Substanz (FeSO₄) waren diese Produkte vermehrt vorhanden. Als Folge der Zunahme resultierte eine Verminderung der Spermatozoenmotilität. Somit könnten prooxidativ wirkende Substanzen (z.B. Fe bei Hämachromatose, Porphyrine bei Porphyrien, phenolische Prooxidantien) bei bestimmten Formen der Infertilität von Bedeutung sein. In Übereinstimmung damit wäre der therapeutische Effekt von Vitamin E durch dessen antioxidative Wirkung (Hemmung von Lipidperoxidationsreaktionen) zu erklären.     

电压依赖性阴离子通道基因在人精子中的表达及其临床意义

目的:筛选与精子活力相关的基因。方法:将活力正常者与弱精子症者精子cDNA与Affymetrix全基因组芯片进行杂交,筛选出差异表达基因。RT-PCR分析该基因在人体不同组织及精子中的表达,并比较该基因在活力正常和活力低下的人精子中表达的差异。结果:芯片结果分析筛选出差异表达基因:电压依赖性阴离子通道(VDACs)基因。VDACs包括VDAC1、VDAC2、VDAC33个亚型,它们均在人精子中表达。与活力正常组精子VDAC2相对表达量(0.803±0.043)比较,VDAC2在弱精子症组精子的相对表达量(0.568±0.036)显著降低(P<0.01)。结论:VDAC2的表达减少可能与精子中活力降低有关。     

腺苷酸环化酶和磷酸二酯酶在人成熟精子的表达及临床意义

目的:比较腺苷酸环化酶(AC)和磷酸二酯酶(PDE)在活动力正常和活动力低下的人精子表达的差异。方法:收集活动力正常的人精子和a、b级精子低于20%的弱精子症患者的精子,提取总RNA,采用反转录多聚酶链式反应(RTPCR)的方法检测AC和PDE亚型mRNA的表达水平;采用酶联免疫吸附法测定两组样本环磷酸腺苷(cAMP)和环磷酸鸟苷(cGMP)的含量。结果:与活动力正常的精子比较,可溶性腺苷酸环化酶(sAC)表达和cAMP含量在活动力低下的患者精子显著降低(P均<0.01),而磷酸二酯酶4C(PDE4C)的表达显著增加(P<0.01);腺苷酸环化酶3(ACIII)的表达和cGMP的含量在活动力正常和活动力低下的精子差异无显著性(P>0.05)。结论:精子sAC的表达减少和PDE4C的表达增加是精子活动力低下的原因之一。     

Motility Related to the Presence of Carnitine/Acetyl-Carnitine in Human Spermatozoa

Total carnitine, acetylcarnitine and carnitine acetyl transferase (E.C. 2.3.1.7) were measured in the plasma and spermatozoa fractions of 41 samples of human semen and the correlation with sperm motility and sperm density examined.
It was confirmed that the concentration of total carnitine as well as of acetylcarnitine was 2–25 times higher and the activity of carnitine acetyl transferase 20–15 fold higher in spermatozoa than in seminal plasma. Sperm motility correlated with the concentration of acetylcarnitine (r = 0.6, P < 0.01) and of total carnitine (r = 0.55, P < 0.01) but not with the concentration of free carnitine nor with the activity of carnitine acetyl transferase in the spermatozoa. No correlation was found between sperm motility and the concentrations of acetylcarnitine, free carnitine or total carnitine in the seminal plasma.
It is concluded that the amount of carnitine present in the spermatozoa probably provides a better index of epididymal function than the carnitine in the seminal plasma as the latter in influenced by af variable contribution from the other accessory sex organs.     

结直肠癌中抑癌基因ING1的表达及其意义

目的:探讨p33ING1在结直肠癌中的表达及意义。方法:应用免疫组化S-P法检测60例结直肠癌组织及相应正常黏膜组织中p33ING1的表达。结果:结直肠癌组织、相应正常黏膜组织中p33ING1蛋白的阳性表达率分别为43·3%(26/60)、100%(60/60)。p33ING1在无淋巴结转移组及淋巴结转移组癌组织中的阳性表达率分别为57·6%(19/33)、25·9%(7/27)(P<0·05);在Dukes A、B期、Dukes C、D期病例中分别为56·7%(17/30)、30·0%(9/30)(P<0·05)。结论:p33ING1在结直肠癌组织中低表达,在结直肠癌的发生、发展中可能起重要作用。     

Hyperactivation of Human Spermatozoa: Measurement of Motility before and after Incubation

The motility rate of sperm during capacitation process was determined by calculating a sperm motile efficiency index (SMEI) using a hemocytometer. The SMEI values for the sperm from 100% of normal fertile men and 64% of infertile patients increased significantly by the fourth hour of incubation, while for 36% of infertile patients there was no increase. A correlation between the increase of SMEI and original motility, original SMEI and original semen amount was not possible. In addition, a decrease of the SMEI value was observed after sperm incubated for 3 hours were added to the seminal plasma of the donor. It is concluded that in human spermatozoa "hyperactivation and dehyperactivation" can be measured by SMEI.