血清真胰岛素化学发光免疫分析方法学研究

建立一种高灵敏度真胰岛素临床常规检测方法.采用两株特异的抗胰岛素单抗体,分别抗胰岛素肽链上两个不同的抗原决定簇,用一株制备固相抗体,另一株标记碱性磷酸酶C,以金刚烷衍生物为发光底物建立化学发光免疫分析(CLIA)法.结果表明本方法灵敏度为0.06μIU/mL,标准曲线量程为1.0～150μIU/mL,批内和批间CV分别为5.0%、7.8%,平均回收率为94.4%.分别测定了男、女成人空腹血清各100份,男性实测范围0.52～11.23μIU/mL,平均值为3.86μIU/mL,女性实测范围为0.75～10.66μIU/mL,平均值为3.62μIU/mL.真胰岛素CLIA法简便快速,能真实反应血清胰岛素的水平,对临床糖尿病的诊疗和病理生理研究具有实用价值.     

人心肌肌钙蛋白Ⅰ酶促化学发光免疫分析方法的建立

目的 建立检测人心肌肌钙蛋白Ⅰ的酶促化学发光免疫分析方法.方法 采用两株抗人心肌肌钙蛋白Ⅰ的单克隆抗体,一株包被聚苯乙烯化学发光板,一株标记辣根过氧化物酶,采用辣根过氧化物酶/鲁米诺/过硼酸钠体系,建立了测定人血清心肌肌钙蛋白Ⅰ的酶促化学发光免疫分析方法,并进行了方法学鉴定.用该法测定80例正常人血清,确定正常参考值范围;测定临床病理样品27例,与Beckman全自动化学发光试剂测定值进行相关性分析.结果 本方法测定范围0.3 ～ 100μg/L,分析灵敏度0.16μg/L;37℃反应时间30min;回收率76.8％ ～ 111.1％;高浓度cTnI血清样品经系列倍比稀释后测定,测定值与稀释度呈线性相关,相关系数0.999;批内、批间变异系数分别为3.90％～6.71％,7.66％～10.34％;与心肌肌钙蛋白T(cTnT)、肌钙蛋白C(TnC)、骨骼肌肌钙蛋白Ⅰ(sKTnI)、骨骼肌肌钙蛋白T(sKTnT)、人心肌脂肪酸结合蛋白(h-FABP)、人心肌肌酸激酶(CK-MB)、人心肌肌红蛋白、C-反应蛋白(CRP)均无交叉;确定临床正常参考值小于0.304μg/L;与Beckman全自动化学发光试剂比较,两者测定值线性相关系数为0.925.结论 该方法反应时间短、特异性强、重复性好,具有应用及推广价值.     

化学发光免疫分析血清C肽方法建立

双抗体夹心一步法建立人C肽(C-peptide) 化学发光免疫分析(CLIA)方法.方法可测范围0.15～15ng/mL,灵敏度0.02ng/mL,批内、批间变异系数(CV)分别为4.2%～6.5%和6.8%～9.3%,与胰岛素无交叉反应,与胰岛素原的交叉反应率为7.3%.本方法与国外同类试剂盒同时检测40份C-肽释放试验血清,相关系数为0.9709.本方法各项指标均满足临床检测要求,达到国外同类产品水平.     

人血清生长激素化学发光免疫分析方法的建立

建立链霉亲和素-生物素双抗体夹心化学发光免疫分析法(CLIA)测量人血清生长激素(GH),并进行临床应用检测.以链霉亲和素包被微孔板,生物素化一株GH单克隆抗体(McAb),辣根过氧化物酶标记另一株McAb,校准品与国家标准品进行溯源,建立GH CLIA法,进行性能参数测试,与国外试剂盒比对.结果表明本法线性范围为2....     

化学发光免疫分析法检测C肽的分析性能验证

目的验证化学发光免疫分析法检测C肽的分析性能。方法参考美国临床和实验室标准化协会(CLSI)系列文件和相关文献,结合科室具体实际,验证深圳新产业MAGLUMI 4000 Plus检测系统检测C肽的基本分析性能。结果C肽低、高浓度批内不精密度、批间不精密度均在可接受范围内;无样本携带污染;C肽原装配套定值标准品检测值与靶值的偏倚小于12.5%,20例临床样本与MAGLUMI 4000检测结果差异无统计学意义(P>0.05),平均相对偏差为3.76%;C肽最大稀释倍数为8倍;功能灵敏度为0.10 ng/mL;C肽浓度范围在0.09~17.25ng/mL线性回归方程为Y=1.008X-0.2891,相关系数r=0.983;20名健康体检者检测C肽的结果为1.042~2.901ng/mL,100%的检测结果在厂家提供的参考区间内。结论深圳新产业MAGLUMI 4000 Plus化学发光免疫分析检测系统检测C肽的基本分析性能与厂家声明或相关文献基本一致,可以替换深圳新产业MAGLUMI 4000,用于临床常规工作的开展。     

时间分辨荧光免疫分析方法学评价

目的：通过内质控的定量分析，对时间分辨荧光分析的方法学进行客观评价。方法：以促甲状腺激素检测为例，对系统探测灵敏度 ，低、中、高持控血清的批内和批间精密度，批间稳定性参数Slope、ED20、ED50、ED80等4项指标，系统探测的准确度（回收试验），系统探测的有效性（平行试验），受试者工作特性曲线（receiver operator characteristic,ROC）等进行定量测定和描述。结果；TSH的最小测定值为0．002μU/mL.低、中、高3种质控样品批内和批间变异系数均小于5％，批间稳定性参数各变异系数均小于5％，与统计学要求相一致，且符合标准曲线质控参数的重现性。回收试验满足临床要求，符合检验统计结果。理论值与实测值间作回归分析，相关系数r=0．999。ROC显示，甲亢诊断的最佳阈值为0．3μU/mL，甲低诊断的最佳阈值为5．0μU/mL。甲亢敏感度为89．3％，特异度为93．3％，准确度为90．1％，阳性似然比为13．4，甲低敏感度为83．8％，特异率为90．9％，准确度为86．4％，阳性似然比为9．2。结论：时间分辨荧光免疫分析方法是一种效果好、准确度高、灵敏度高、特异性强、测试精度良好的自动化免疫分析方法。     

FT3、FT4化学发光免疫分析的方法学指标及评价

近年来，免疫分析技术取得了长足的进展，各种以全自动操作、微量检测、灵敏高效的分析方法如酶免疫分析、化学发光免疫分析（CLIA）、时间分辨荧光免疫分析、电化学发光免疫分析等应运而生，并显示了其广宽的应用前景。本文同时用CLIA和RIA两种检测法对45名正常人和142例甲状腺疾病患者血清标本FT3和FT4。含量进行了测定，比较和评价两种方法的方法学指标和临床诊断价值。     

化学发光标记及发光免疫分析

化学发光标记及发光免疫分析张丽民上海第二军医大学，上海２００４３３化学发光标记（ＣＬＬ）及发光免疫分析（ＬＩＡ）是一种灵敏度高、特异性强、检测快速，无放射危害的分析技术。七十年代末以来，ＣＬＬ及ＬＩＡ得到了迅速发展。本文综述了该项技术的机理、实验技术...     

化学发光免疫分析测定172例患者血浆脑钠肽的临床价值

探讨化学发光免疫分析检测脑钠肽（BNP）浓度的临床诊断意义。将172例患者血浆BNP浓度测定结果按临床诊断分为3组并进行临床分析。结果表明：①心衰组：57例,BNP阳性率为94.7%;②呼吸困难待查组：89例,阳性率41.6%;③心梗后组：26例,阳性率42.3%。血浆BNP浓度测定可作为评估心功能,应用于心力衰竭的诊断、预后和判断等的一项重要补充,是一项简便易行的常规检查,可作为一种新的心脏标志物。     

促甲状腺素吖啶酯化学发光免疫分析方法的建立

目的 建立一种定量检测人血清促甲状腺素(TSH)的方法.方法 根据双抗体夹心法实验原理,分别用吖啶酯和生物素标记两株不同的单克隆抗体,链霉亲和素包被微粒,通过链霉亲和素-生物素系统分离固相和液相完成检测.结果 本方法的最低检测限为0.01 μIU/mL,线性范围0.3～60μIU/mL,批内变异为1.9％ ～2.3％,总变异为6.4％ ～8.6％,与ROCHE公司的促甲状腺素检测试剂盒(电化学发光法)比对,相关系数r=0.9935.结果 本方法的各项指标均能满足临床检测的要求,可以临床推广应用.     

Comparison of chemiluminescent immunoassay and ELISA for measles IgG and IgM

In the context of measles elimination, the identification of recent infections is important for clinical laboratories. Serological diagnosis is achieved by detecting specific IgG and IgM. Recently an automated chemiluminescent immunoassay (CLIA) (Liaison, DiaSorin, Italy) has been used to quantify the measles antibody. The aim of this study was to compare this assay with Enzygnost ELISA (Siemens, Germany), with final classification of discrepancies by indirect immunofluorescence (Euroimmun, Germany). For measles IgM, 204 sera were analyzed: 50 IgM‐positive, 104 IgM‐negative/IgG‐positive, and 50 from other viral infections (B19V, rubella, mumps, CMV, and EBV). For the measles IgG assay, 162 samples were tested: 106 were positive and 56 were negative. For measles IgM, the sensitivity and specificity of CLIA against ELISA were 94% (95% CI: 83.2–98.6) and 100% (95% CI: 97.1–100), respectively; the corrected figures after the final classification of discrepancies were 100% (95% CI: 91.0–100) and 99.4% (95% CI: 96.1–100), respectively. In relation to IgG, the sensitivity and specificity of CLIA against ELISA were, respectively, 97.2% (95% CI: 91.7–99.4) and 92.9% (95% CI: 82.5–97.7), and 95.5% (95% CI: 89.5–98.3) and 100% (95% CI: 91.8–100) after the final classification. CLIA showed excellent sensitivity and specificity in detecting measles IgG and IgM antibodies, eliminating the need to aliquot specimens before carrying out the assay.     

化学发光酶免疫分析法在乙肝病毒及核心抗体定性检测中的应用分析

目的 通过对比,探讨了化学发光酶免疫分析法在乙肝病毒及核心抗体定性检测中的应用价值.方法 选取2013年5月至2015年5月在我院的疑似乙型肝炎患者80例,抽取空腹血液样本后都分别进行乙肝病毒以及核心抗体的化学发光酶免疫分析法及ELISA法检测,并对其检测结果进行分析.结果 化学发光酶免疫分析法检出乙型肝炎病毒阳性78例,检出率为97.5％;而ELISA检出乙型肝炎病毒阳性76例,检出率为95.0％,两种方法的检出率对比差异无统计学意义(P＞0.05).化学发光酶免疫分析法对于乙肝病毒核心抗体IgM与IgG的检测阳性率分别为80.0％和70.0％,而ELISA法检测两种抗体的阳性率则分别为18.8％和20.0％,化学发光酶免疫分析法对乙肝核心抗体IgM与IgG的检测阳性率明显高于ELISA法(P＜0.05).ELISA法检出HBc-IgM的最低限为0.135 IU/ml,检出HBc-IgM最低限为0.143 IU/ml;化学发光酶免疫分析法检出HBc-IgM最低限为0.032 IU/ml,检出HBc-IgG最低限为0.038 IU/ml.结论 化学发光酶免疫分析法在乙型肝炎检测中具有高的检出率,尤其对乙肝病毒的核心抗体的检测敏感度较高,值得在临床推广应用.     

化学发光法孕中期三联筛查高危孕妇221例产前诊断结果分析

目的探讨孕中期母血AFP、β-hCG、uE3三联筛查在减少出生缺陷中的应用价值。方法采用化学发光法对孕14-20w的孕妇进行血清学筛查。通过检测母血AFP、β-hCG、uE3三种激素并结合孕妇年龄、孕周、体重等因素,用ACCESS2配套的产前筛查软件综合评价孕中期孕妇之胎儿患21-三体综合征、18-三体综合征和神经管缺陷的风险度。对其中筛查高危的孕妇进行产前诊断,并对产前诊断临床资料进行回顾分析。结果在筛查的2834例孕妇中,风险度超过筛查标准的共221人,其中21-三体综合征高危妊娠179例,筛查阳性率为6.33%,18-三体综合征高危妊娠28例,筛查阳性率为0.98%,经过羊水染色体核型分析,出生缺陷监测和新生儿外周血染色体核型分析,共确诊3例21-三体综合征患儿,未见18-三体综合征患儿。检出神经管缺陷高危妊娠14例,筛查阳性率为0.5%,均经过彩超检查,共检出3例神经管缺陷胎儿。结论化学发光法孕中期三联筛查对于诊断胎儿染色体病及神经管缺陷具有重要的临床价值,可有效降低染色体病及神经管缺陷患儿的出生率,并对预测不良妊娠结局具有一定的应用价值。     

Comparison of a chemiluminescence immunoassay and an enzyme immunoassay for detection of IgM antibodies against measles,mumps, rubella,cytomegalovirus (CMV), Epstein Barr virus (EBV), and human herpes virus (HHV) -1 and -2 infections

PurposeOutbreaks of vaccine-preventable viral diseases have been increasingly reported globally over the past few years. The burden of congenital viral infections, their impact on physical and mental development and the resulting economic loss to the family and the community are also well known. IgM antibody detection has been convenient in the diagnosis of acute viral infections, particularly in settings with limited resources where molecular tests are not feasible.MethodsThis is a comparative study between a chemiluminescence immunoassay (Liaison, DiaSorin, Saluggia, Italy) and an enzyme linked immunosorbent assay (ELISA) (Euroimmun, Lubeck, Germany) for the detection of IgM antibody against measles, mumps, rubella, CMV, EBV and HHV-1 and -2 viruses using a total of 345 samples. Results are expressed as agreement using kappa statistics.ResultsIn this study, CLIA is perfectly comparable to ELISA for the detection of IgM antibodies against measles (0.86) and mumps (0.92) with a moderate agreement for rubella (0.52), CMV (0.57), EBV (0.50), and HHV-1 and -2 (0.47) assays. However, a PABAK (prevalence-adjusted bias-adjusted kappa) showed improved agreement for rubella (0.64), CMV (0.65), EBV (0.60), and HHV-1 and -2 (0.88) assays.ConclusionsIgM antibody assays (CLIA and ELISA) against measles and mumps virus can be comparably used depending on the laboratory setup, throughput and expertise.     

氯霉素磁分离酶联免疫(MEIA)检测方法的建立

目的:采用磁分离酶联免疫分析法(MEIA)建立定量检测氯霉素(CAP)的一种高灵敏度方法.方法:采用免疫竞争法,用异硫氰酸荧光素(FITC )标记抗CAP抗体,碱性磷酸酶(AP)标记CAP,以羊抗FITC抗体包被的免疫磁珠作为固相分离载体,单磷酸酚酞做显色底物,建立检测CAP的MEIA法.结果:成功建立了检测CAP的MEIA法,检测时间为40 min,检测灵敏度为0.03μg/L,线性范围为0.1～8.1μg/L,批内变异系数(CV) 3.9%-5.3%,批间CV 4.8%-8.1%,回收率为97%～101.5%,与国标方法液相色谱一串联质谱法的检测结果对比,相关系数r=0.9817.结论:检测CAP的MEIA法的灵敏度及准确率高、检测时间短,为食品中氯霉素残留的监测提供了一种新的免疫分析方法.     

血清C肽浓度测定的临床意义探讨

目的： 研究血清C肽浓度及胰岛素与C肽比值的临床意义。方法：用放射免疫分析测定2型糖尿病和肾功能不全患者血清C肽、胰岛素浓度,并计算胰岛素与C肽比值。结果：肾功能不全组病人血清C肽、胰岛素水平显著高于糖尿病各组,且胰岛素与C肽比值显著低于糖尿病各组（P〈0．01）;在糖尿病各年龄组中,胰岛素水平无明显变化（P〉0．05）;但血清C肽水平随年龄增大而升高,而胰岛素与C肽比值则显著下降（P〈0．01）。结论：测定血清C肽水平及胰岛素与C肽比值有助于了解糖尿病患者的肾功能状况,值得进一步深入探讨。     

A sensitive chemiluminescent enzyme immunoassay for carbofuran residue in vegetable,fruit and environmental samples

Using the direct competitive chemiluminescent enzyme immunoassay (CLEIA), a rapid, highly selective and sensitive method for carbofuran determination was developed. Several physicochemical parameters such as chemiluminescent sensitiser, assay buffer, blocking substance and working concentration were optimised. Under the optimum conditions, the CLEIA method for carbofuran determination was generated successfully. The detection sensitivity of the IC₅₀ value was 4.2 ng/mL at a practical working concentration ranging from 0.4 to 50 ng/mL, and the limit of detection (LOD) for carbofuran was 0.5 ng/mL. Recoveries of carbofuran spiked into vegetable, fruit and environmental samples were determined by CLEIA after sample matrix effect testing. Finally, the confirmation test between CLEIA and LC-MS/MS was finished. The results showed that CLEIA method had higher sensitivity than enzyme-linked immunosorbent assay method, and the LOD of a variety of samples reached the carbofuran's maximum residue limit value laid down by Codex Alimentarius Commission.     

吗啡和甲基安非他明单克隆抗体联合胶体金检测试卡的研制

目的:研制吗啡-甲基安非他明单克隆一步法毒品二合一胶体金检测试卡,用于毒品的检测和可疑人群的筛查。方法:应用杂交瘤技术制备抗吗啡-甲基安非他明的单克隆抗体(McAb);ELISA方法检测McAb效价;免疫胶体金技术制备二合一胶体金检测试卡。结果:①ELISA法检测McAb的效价:抗吗啡McAb的效价为1∶3.2×103,抗甲基安非他明McAb的效价为1∶1.6×103。②检测试卡的灵敏度:检测尿中吗啡的最低浓度为300ng/ml,甲基安非他明的最低浓度为1000ng/ml;③检测试卡的特异性:7天以上未吸毒者饮用可口可乐、口服感冒药及吸烟等其尿中未检出阳性反应。④与Pan Probe Biotech公司的单一检测吗啡和甲基安非他明试纸灵敏度对比实验显示出吸毒后4~5天的尿样仍呈阳性反应。结论:由于具有高度敏感性和特异性,以及快速、直观等优势,本试卡在毒品滥用筛查工作中有重要的定性判别意义。     

酶联免疫发光法检测金葡菌肠毒素(SE)B和SEC1方法的建立

目的：比较酶联免疫测定法（ELISA）和酶联免疫化学发光法（CLIA）在检测SEB、SECl中的敏感性及稳定性。方法：常规法制备、纯化抗SEB和SEC1单克隆抗体（mAb），以碱性磷酸酶（AP）标记的FMMU-SEB．D6和FMMU-SEC1．C4mAb为检测抗体，FMMU-SEB．B4和FMMU-SEC1．G8mAb为包被抗体，以单磷酸酚酞（PMP）为显色底物，以LumigenAPS-5为发光底物。结果：成功地建立了敏感、特异检测SEB、SEC1的ELISA和CLIA方法，CLIA较传统ELISA具有灵敏度高、线性范围宽和省时等优点。结论：CLIA法是一种比传统ELISA更优越的免疫学检测方法，在可疑SE污染标本检测、流行病学调查等领域具有良好的应用前景。