熊果酸诱导结肠癌HT-29细胞凋亡的实验研究

目的探讨熊果酸（UA）诱导结肠癌HT-29细胞凋亡的作用及机制。方法用不同浓度的UA处理HT-29细胞,采用四甲基偶氮唑蓝（MTT）比色法,检测UA对HT-29细胞的增殖抑制效应;采用形态学、TUNEL法和流式细胞术,检测细胞凋亡的发生;应用免疫组织化学S-P法,检测凋亡相关基因caspase-9和bcl-2的表达,并用病理图像分析软件进行半定量分析。结果UA在体外对HT-29细胞有中度增殖抑制效应,在UA作用下,HT-29细胞出现显著的细胞凋亡征象。TUNEL法显示细胞固缩,核染色质聚集或断裂,形成凋亡小体。流式细胞术检测结果显示,在G1期之前出现Sub—G1峰,凋亡率最高为11．63％,UA的作用具有浓度和时间依赖性。在HT-29细胞凋亡过程中,凋亡相关基因caspase-9的表达增强,bcl-2的表达减弱。结论凋亡是UA杀伤肿瘤细胞的机制之一;UA诱导结肠癌HT-29细胞凋亡主要与促进caspase-9的活化、下调bcl-2的表达有关。     

细胞周期蛋白激酶抑制剂诱导尤文肉瘤细胞凋亡作用的机制

目的探讨小分子细胞周期蛋白激酶抑制剂flavopiridol（FP）尤文肉瘤细胞株RD-ES凋亡诱导作用及其调控机制。方法FP作用RD-ES细胞后，光学显微镜观察其形态变化，MTT法测定FP对细胞增殖的抑制率；流式细胞仪检测细胞凋亡；Western blot检测bcl-2，bax，mcl-l和caspase-8的蛋白表达变化。结果MTT实验显示FP对尤文肉瘤RD-ES细胞增殖有抑制作用，其抑制效应具有时间及浓度依赖的特点，流式细胞计数分析表明FP可诱导细胞凋亡，免疫印迹检测显示FP对bcl-2及bax的表达无影响，但细胞凋亡抑制基因mcl-1活性型caspase-8的表达被上调。结论FP可诱导尤文肉瘤细胞株凋亡，其作用不依赖于bcl-2基因的变化，mcl-1基因表达的抑制及caspase-8路径的激活可能为其机制之一。     

全反式维甲酸诱导食管癌细胞凋亡的实验研究

目的探讨全反式维甲酸(ATRA)诱导食管癌EC9706细胞凋亡的作用及其机制。方法用不同浓度的ATRA处理EC9706细胞,采用四甲基偶氮唑盐(MTT)法检测ATRA对EC9706细胞的增殖抑制效应;采用流式细胞仪和原位末端标记(TUNEL)法检测细胞周期的变化和凋亡率;采用免疫组化S-P法,检测凋亡相关基因caspase-3和bcl-2的蛋白表达,并用病理图像分析软件进行半定量分析。结果ATRA对EC9706细胞有增殖抑制和诱导凋亡的作用;流式细胞仪检测显示,在G1期之前可出现Sub-G1峰,凋亡率最高为(32.6±0.4)%,并有浓度和时间依赖性;TUNEL法显示凋亡小体形成;EC9706细胞在凋亡过程中,凋亡相关基因caspase-3的蛋白表达增强,bcl-2的蛋白表达减弱。结论ATRA作用于食管癌EC9706细胞后将引起细胞凋亡的增加,这主要与ATRA能促进caspase-3的活化,并下调bcl-2的蛋白表达有关。     

肠积宁方促进大肠癌细胞株HT-29凋亡及干预相关基因bcl-2及bax表达的实验研究

目的：探讨肠积宁方对人大肠癌细胞株HT-29凋亡及凋亡相关基因bcl-2、bax表达的影响.方法：采用MTT法测定肠积宁方对人大肠癌细胞株HT-29的增殖抑制作用,运用流式细胞仪测定肠积宁方对大肠癌细胞株HT-29凋亡及凋亡相关基因bcl-2、bax表达的影响.结果：肠积宁方能促进人大肠癌细胞株HT-29凋亡,并抑制凋亡相关基因bc1-2、bax的表达,尤其对bcl-2的作用更显著.结论：肠积宁方具有抗肿瘤作用,其抗肿瘤作用机制可能是促进细胞凋亡并抑制凋亡相关基因的表达.     

云南元宝枫黄酮诱导个旧肺鳞癌细胞YTMLC凋亡的实验研究

目的研究云南元宝枫黄酮对个旧肺鳞癌细胞(YTMLC)凋亡诱导作用及相关基因表达的影响,为开发应用元宝枫黄酮提供实验依据。方法采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法检测元宝枫黄酮对YTMLC细胞的生长抑制作用,流式细胞术TUNEL法检测元宝枫黄酮对YTMLC细胞凋亡的影响,RT-PCR检测元宝枫黄酮对YTMLC细胞 p53、p21、bcl-2、bax和caspase-3基因表达的影响。结果元宝枫黄酮作用YTMLC细胞48 h后,IC50为（108.53±8.22）mg/L。流式细胞术显示元宝枫黄酮既可以诱导YTMLC细胞凋亡,也可以引起YTMLC细胞坏死。元宝枫黄酮对p53、p21、bax和caspase-3的基因表达均有明显上调作用;对bcl-2基因表达有下调作用。结论云南元宝枫黄酮可以抑制个旧肺鳞癌细胞(YTMLC)体外生长,引起肿瘤细胞坏死,诱导肿瘤细胞凋亡,其诱导肿瘤细胞凋亡的可能机制是通过上调p53、p21、bax和caspase-3基因的表达,下调bcl-2基因表达。     

白藜芦醇对胃癌细胞系SGC-7901细胞增殖和凋亡作用的实验研究

目的:研究白藜芦醇(resveratrol, Res)影响人胃癌细胞SGC-7901增殖及凋亡的机制.方法:使用不同浓度Res处理SGC-7901细胞不同时间后,采用MTT法测定肿瘤细胞生长抑制率;FCM和TUNEL法检测分析细胞周期和细胞凋亡率;免疫细胞化学法检测细胞中bcl-2、bax、caspase-3和Fas蛋白的表达;RT-PCR检测Fas、bcl-2、bax、caspase-3 mRNA的表达.结果:Res对胃癌SGC-7901细胞的生长抑制作用随着Res作用时间的延长和浓度的增加而明显增强(P<0.01,P<0.05),同时能诱导其发生凋亡(P<0.01);Res(150 μmol/L)能明显上调SGC-7901细胞中bax、caspase-3、Fas mRNA及其蛋白的表达,下调bcl-2 mRNA及其蛋白的表达.结论:Res抑制SGC-7901细胞的增殖、诱导细胞凋亡呈浓度、时间依赖性;这可能与Res上调肿瘤细胞Fas、bax和caspase-3的表达及下调bcl-2的表达有关.     

腺病毒介导的IL-24对人大细胞肺癌NCI-H460细胞的体外抑制效应

目的研究腺病毒介导的IL-24基因表达对NCI-H460肺癌细胞抑癌增效作用及分子机制。方法将Ad-IL-24重组腺病毒感染NCI-H460细胞。以Western blot法鉴定IL-24基因在NCI-H460细胞中的表达;MTT法检测重组腺病毒对NCI-H460细胞的生长抑制作用;经Annexin-V-PE/7-AAD染色后流式细胞术（FCM）检测细胞凋亡率变化;RT-PCR检测NCI-H460细胞中bax、caspase-3、bcl-2、survivin等因子的表达。结果腺病毒介导的IL-24基因在NCI-H460细胞中能够有效表达;Ad-IL-24组对NCI-H460细胞的生长具有明显的抑制作用, Ad-IL-24能够上调bax、caspase-3等因子的表达,下调bcl-2、survivin等因子的表达,诱导细胞凋亡。结论腺病毒介导的IL-24 基因在体外可明显抑制人肺癌细胞NCI-H460的生长,诱导其凋亡,其分子机制可能与上调bax、caspase-3等促凋亡因子的表达,下调bcl-2、survivin等凋亡抑制因子的表达有关。     

别直参抑制人乳腺癌细胞MCF-7体外增殖

[目的]评价别直参对MCF-7细胞体外增殖的影响,并检测其对凋亡相关蛋白bax/bcl-2表达的影响.[方法]采用MTT比色法检测对MCF-7细胞增殖的作用;流式细胞术检测对MCF-7细胞凋亡的影响;免疫组化法检测bax/bcl-2的表达.[结果]别直参高剂量组作用MCF-7细胞24h后,MTT检测增殖率为89.83％,提示有抑制MCF-7细胞体外增殖的作用(P＜0.05);流式细胞术检测高剂量组细胞凋亡率明显升高(P＜0.05);免疫组化法检测高剂量组能上调MCF-7细胞bax的表达,并下调bcl-2的表达.[结论]别直参高剂量组具有一定的诱导MCF-7细胞凋亡效应作用,其机制可能通过上调bax的表达和下调bcl-2的表达.     

依维莫司对前列腺癌PC-3细胞的抑制和凋亡的影响

摘 要：［目的］ 探讨依维莫司对前列腺癌PC-3细胞凋亡及caspase-3表达的影响。［方法］ 体外培养前列腺癌细胞PC-3,使用不同浓度依维莫司(0mol/L、10-9mol/L和10-8mol/L)干预细胞,四氮唑蓝比色法(MTT)和原位细胞凋亡检测法(TUNEL)检测依维莫司对前列腺癌细胞PC-3生长抑制和诱导细胞凋亡的作用,流式细胞术检测其对caspase-3活化的情况。［结果］ 与对照组比较,依维莫司对前列腺癌PC-3细胞抑制和诱导凋亡作用明显(P<0.05),明显增加caspase-3的表达(P<0.05)。［结论］ 依维莫司抑制前列腺癌细胞PC-3增殖,可能通过诱导caspase-3表达活化增强,最终导致细胞凋亡。     

洛铂体外诱导人结肠癌细胞株LOVO细胞凋亡及其作用机制

[目的]探讨洛铂体外诱导人结肠癌细胞株LOVO细胞凋亡及其作用机制。[方法]采用四甲基偶氮唑盐(MTT)法测定不同浓度(500μM、1000μM、2000μM)的洛铂作用于LOVO细胞24h的生长抑制率;原位末端标记技术法(TUNEL)检测LOVO细胞凋亡指数,计算凋亡阈值;流式细胞技术检测细胞周期变化;分光光度法检测半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶(caspase)-3、8、9的表达。[结果]洛铂体外能抑制人结肠癌细胞株LOVO细胞的增殖,且呈剂量依赖性(P<0.05);洛铂能诱导LOVO细胞发生凋亡,凋亡阈值为1000μM;流式细胞技术分析显示洛铂致LOVO细胞周期明显阻滞在S期;分光光度法提示洛铂作用后LOVO细胞caspase-3、8、9表达明显高于阴性对照组(P<0.05)。[结论]洛铂能诱导体外培养的LOVO细胞凋亡,其作用机制可能与洛铂诱导LOVO细胞S期阻滞及促进caspase-8和caspase-9表达,进而促进cas-pase-3表达有关。     

熊果酸诱导人肝癌BEL-7404细胞凋亡的作用及其机制

目的 探讨熊果酸(UA)对人肝癌BEL-7404细胞凋亡的诱导作用及其机制.方法 采用MTT法检测UA对BEL-7404细胞增殖的抑制作用,流式细胞术检测BEL-7404细胞凋亡率,Western blot法检测BEL-7404细胞proeaspase-3、caspase-9、survivin蛋白的表达.并用顺铂(DDP)作为阳性对照.结果 UA和DDP对BEL-7404细胞增殖具有明显抑制作用,并呈浓度、时间依赖性;作用48 h后,阴性对照组、uA 50μmoL/L组、DDP 10 mg/L组的BEL-7404细胞凋亡率分别为(0.83±0.25)%、(16.10±0.30)%、(31.87±0.65)%,差异有统计学意义(P<0.01);作用48 h后,与阴性对照组相比,UA 50μmol/L组、DDP 10 mg/L组的procaspase-3、survivin蛋白表达降低,caspase-9蛋白表达升高,差异有统计学意义(P<0.01).结论 UA能够诱导BEL-7404细胞凋亡,其作用机制与procaspase-3、survivin蛋白表达降低及caspase-9蛋白表达升高有关.     

熊果酸诱导卵巢癌细胞SKOV3凋亡的研究

目的探讨三萜类化合物熊果酸（UA）诱导卵巢癌细胞SKOV3凋亡的作用。方法用不同浓度的UA处理体外培养的SKOV3细胞,用MTT法、活细胞荧光染色技术、流式细胞术（FCM）、RT—PCR、细胞免疫化学技术,检测UA对SKOV3细胞的增生抑制和诱导凋亡作用。结果UA抑制SKOV3细胞增生,30μmol／L的熊果酸在作用24h后即表现出较强的增生抑制作用,呈时间和浓度依赖性,并使细胞呈典型的凋亡形态学特征,核质浓集,出现凋亡小体,FCM检测显示40μmol／LUA作用24h后SKOV3细胞开始出现G0／G1期阻滞,72h时早期凋亡细胞达（28．7±2．4）％,并诱导野生型p53基因mRNA及蛋白表达增加。结论UA诱导SKOV3细胞凋亡,上调胞内野生型p53基因表达是所涉及的分子机制之一。     

Ursolic acid inhibits proliferation and stimulates apoptosis in HT29 cells following activation of alkaline sphingomyelinase

BACKGROUND: Ursolic acid (UA) is a plant component with anti-inflammatory and anti-proliferative properties. Its effect on colon cancer is not clear. We studied the anticancer effects of UA on human colon cancer cells. MATERIALS AND METHODS: HT-29 cells were treated with UA. Cell proliferation was determined by cleavage of WST-1. Apoptosis was assayed by cytosolic DNA-histone complex and caspase activity. Sphingomyelinase and alkaline phosphatase were determined against specific substrates. RESULTS: UA dose-dependently decreased cell proliferation and induced apoptosis, accompanied by activation of caspase 3, 8 and 9. Its antiproliferative effect was stronger than those of sulindac and camptothecin and its apoptotic effect stronger than those of boswellic acid and sulindac. UA selectively increased the activity of intestinal alkaline sphingomyelinase, which occurred before activation of caspases. UA had no effect on alkaline phosphatase activity. CONCLUSION: UA has strong anti-proliferative and apoptotic effects on HT-29 cells. The effects may be mediated by alkaline sphingomyelinase activation.     

熊果酸对A549细胞增殖、凋亡的影响及其机制

目的探讨三萜酸类化合物熊果酸(UrsolicAcid,UA)对人肺腺癌A549细胞增殖和凋亡的影响及其分子机制。方法利用噻唑蓝(MTT)比色法观察UA对A549细胞增殖的影响。流式细胞仪检测UA对细胞周期的影响。用Hoechst33258荧光染色观察凋亡细胞核形态变化。利用免疫印迹法(Western-blot法)检测细胞中活化型Caspase-3蛋白及NF-κB表达的变化。结果UA明显抑制A549细胞的生长(P<0.05),并呈时间和浓度依赖。流式细胞仪检测发现UA作用24和48h后A549细胞阻滞在G0/G1期(P均<0.05)。经UA处理后的实验组细胞呈现典型的凋亡核固缩表现,胞核呈致密浓染的颗粒状或块状荧光。胞质检测到活性Caspase-3蛋白的表达增强,并呈时间依赖,同时,NF-κB表达随时间延长而减弱。结论熊果酸在体外对A549细胞具有抗增殖和诱导凋亡的作用。核因子NF-κB参与肺癌细胞的增殖与凋亡调控,UA可通过抑制NF-κB活性,激活Caspase-3,从而诱导细胞的凋亡。     

Combined antitumor effect of ursolic acid and 5-fluorouracil on human esophageal carcinoma cell Eca-109 <Emphasis Type="Italic">in vitro</Emphasis>

Objective:To study the combined antitumor effect and possible mechanisms of ursolic acid with 5-fluorouracil (5-FU) on human esophageal carcinoma cell Eca-109 in vitro. Methods:Eca-109 cells were treated with ursolic acid (10-50 μmol/L) and/or 5-fluorouracil (48.0-768.8 μmol/L) for 48 h in vitro. And then cell proliferation was determined by MTT assay. Cell cycle and apoptosis rate were analyzed by flow cytometry (FCM). The morphological changes of apoptosis were observed by fluorescent microscopy. At last ...     

新藤黄酸抑制人乳腺癌细胞株MCF-7增殖的实验研究

目的 探讨新藤黄酸对人乳腺癌细胞株MCF-7的增殖抑制情况及其作用机制。方法 0.5～20μg／ml新藤黄酸处理MCF-7细胞72h,四甲基偶氮唑盐（MTT）法检测MCF 7细胞增殖抑制率;流式细胞术Annexin V-FITC/PI双染色检测细胞凋亡率;线粒体膜电位检测试剂盒（JC-1）检测线粒体跨膜电位变化;Western blotting检测Fas、FasL、caspase-3、caspase-8、caspase-9、Bax和Bcl-2蛋白表达水平。结果 0.5～20μg／ml新藤黄酸均能够抑制MCF-7细胞增殖,且增殖抑制作用呈浓度依赖,半数抑制浓度（IC₅₀）为1763 μg／ml。0.5～3.0μg／ml新藤黄酸即可诱导MCF-7细胞凋亡,凋亡作用呈时间和浓度依赖。0.5μg／ml新藤黄酸处理MCF 7细胞48h后早期凋亡率为3.7％,总凋亡率为7.2％,72h早期凋亡率为6.7％,总凋亡率为13.7％;3μg／ml新藤黄酸48h后早期凋亡率为69.5％,总凋亡率为71.7％,72h早期凋亡率为76.9％,总凋亡率为81.5％。0.5、1.0、1.5 μg／ml新藤黄酸导致线粒体跨膜电位下降的细胞比例升高,促凋亡相关蛋白 FasL、caspase-3、caspase-8、caspase-9表达水平呈浓度依赖性上升,Fas和Bax蛋白表达水平变化不大,抗凋亡蛋白Bcl-2表达水平则呈浓度依赖性下降。结论 新藤黄酸通过诱导人乳腺癌细胞株MCF-7凋亡,抑制细胞增殖,其诱导凋亡的分子机制与死亡受体及线粒体凋亡途径密切相关。     

熊果酸联合顺铂对卵巢癌干细胞的增殖、凋亡、侵袭和迁移的影响

目的:观察熊果酸（ursolic acid,UA）联合顺铂(DDP)对卵巢癌干细胞增殖、凋亡、侵袭及迁移能力的影响及其作用机制。方法:通过体外无血清悬浮培养人卵巢癌SKOV3干细胞并进行细胞鉴定。实验分为SKOV3干细胞组、熊果酸组、熊果酸联合顺铂组。MTT法检测干细胞的增殖,Transwell实验检测干细胞侵袭与迁移能力,采用Annexin V/PI双染法流式细胞术检测干细胞凋亡。Real-time PCR检测上皮间质转化（epithelial-mesenchymal transition,EMT）相关标记分子Vimentin、N-cadherin、E-cadherin、Fibronectin、Twist的mRNA表达情况,Western-blot检测E-cadherin、Vimentin、Twist蛋白表达情况。结果:熊果酸对SKOV3干细胞增殖有显著抑制作用,呈剂量依赖性（P＜0.05）;流式细胞术显示熊果酸组、熊果酸联合顺铂组均可提高SKOV3干细胞的凋亡率,与SKOV3干细胞组相比有统计学差异（P＜0.05）;熊果酸组、熊果酸联合顺铂组可有效抑制SKOV3干细胞的侵袭和迁移能力（P＜0.05）;Real-time PCR测定熊果酸组、熊果酸联合顺铂组作用SKOV3干细胞后EMT基因表达水平,结果显示Fibronectin、Twist、Vimentin、N-cadherin表达降低,E-cadherin表达升高（P＜0.05）;Western-blot结果显示熊果酸组、熊果酸联合顺铂组可上调E-cadherin蛋白的表达,下调Vimentin、Twist蛋白的表达;与熊果酸组相比,熊果酸联合顺铂组对干细胞凋亡率更高,迁移和侵袭能力更低,E-cadherin表达更高,Vimentin和Twist表达更低,以上差异均有统计学意义（P＜0.05）。结论:熊果酸对卵巢癌干细胞有抑制增殖、侵袭和迁移,诱导凋亡的作用,联合顺铂作用效果更优,其机制可能与逆转EMT有关。     

尼美舒利联合西妥昔单抗对结肠癌细胞凋亡及相关基因表达的影响

目的:研究环氧合酶-2(cycloxygenase 2,COX-2)抑制剂尼美舒利(nimesulide)和表皮生长因子受体(epidermal growth factor receptor,EGFR)单克隆抗体西妥昔单抗(cetuximab,C225)联用对结肠癌HT-29细胞株细胞增殖和凋亡的影响及其作用机制.方法:MTT法检测细胞增殖状态,吖啶橙/溴化乙锭(acridine orange/ethidium bromide,AO/EB)染色法及流式细胞仪检测细胞凋亡情况,RT-PCR检测COX-2和非甾体类消炎药活化基因-1(nonsteroidal anti-inflammatory drug-activated gene,NAG-1)的mRNA表达水平,Western印迹法检测EGFR通路下游相关蛋白Akt的磷酸化活性.结果:尼美舒利与C225联合作用于HT-29细胞48 h后,该组细胞的生长抑制率明显高于尼美舒利组[(72.8±2.3)% vs(51.8±1.8)%,P<0.05].AO/EB染色观察到尼美舒利与C225联用组HT-29细胞发生典型的凋亡形态学改变,且FCM检测显示48 h时联用组的细胞凋亡率[(57.67±0.86)%]显著高于尼美舒利[(33.27±1.47)%]和C225单用组[(6.27±0.55)%,P<0.05].C225下调COX-2 mRNA的表达,各药物干预组NAG-1 mRNA 的表达均上调,联用组对Akt磷酸化的抑制作用明显强于尼美舒利和C225单用组.结论:尼美舒利与C225联用可增强二者各自对细胞的促凋亡作用,其作用机制可能是EGFR信号通路参与了结肠癌细胞内COX-2基因的表达调控,最终通过其下游促凋亡基因NAG-1、pAkt的蛋白表达变化,影响结肠癌HT-29细胞的增殖与凋亡.     

siRNA沉默livin的表达对人结肠癌HT-29细胞增殖、凋亡及侵袭的影响

目的:探讨小干扰RNA(small interference RNA,siRNA)沉默人结肠癌HT-29细胞livin表达对HT-29细胞增殖、凋亡和侵袭的影响。方法:合成靶向livin的双链siRNA(livin-siRNA),转染HT-29细胞,RT-PCR及Western blotting检测HT-29细胞中livin mRNA及蛋白的表达,MTT实验检测HT-29细胞的增殖,流式细胞术检测HT-29细胞周期分布及凋亡,细胞侵袭实验检测HT-29细胞侵袭性的变化,caspase-3活性检测试剂盒检测caspase-3活性的变化。结果:Livin-siRNA转染后48 h,与空白组、阴性对照组及脂质体组相比,livin-siRNA转染组HT-29细胞中livin mRNA水平明显下降(0.073±0.007 vs 0.395±0.082、0.423±0.025、0.418±0.032,P<0.05),其蛋白表达也明显下调(0.106±0.003 vs 0.456±0.065、0.473±0.078、0.491±0.045,P<0.05)。转染96 h后,livin-siRNA组HT-29细胞增殖能力明显低于对照组及脂质体组(0.564±0.102 vs0.833±0.127、0.860±0.153,P<0.05),且细胞凋亡率升高[(16.5±2.8)%vs(2.4±0.5)%、(3.7±1.0)%,P<0.05]。侵袭实验显示,livin-siRNA转染后,穿过Matrigel膜的HT-29细胞数量明显少于对照组及脂质体组[(31.3±4.5)vs(101.3±8.6)、(97.4±7.8)个,P<0.05)]。livin-siRNA组HT-29细胞的caspase-3活性低于对照组(0.160±0.023 vs 0.347±0.058,P<0.05)。结论:siRNA沉默livin的表达可抑制HT-29细胞的增殖,诱导细胞凋亡,抑制细胞的侵袭。