抗细粒棘球蚴单克隆抗体在检测包虫病中的应用

本研究利用ＢＡＳ的生物放大作用［１］，应用生物素－抗生物素抗原斑点试验（ＡＢＣ－ＡＳＴ）［２，３］，将抗细粒棘球蚴单克隆抗体用于检测包虫病患者血清抗原。材料与方法１试剂和药品１．１抗细粒棘球蚴单克隆抗体细胞株诱生腹水由本室采用细胞融合方法，获得稳定分...     

细粒棘球蚴粗抗原的免疫纯化方法及其在免疫诊断中的应用

采用免疫过筛法将细粒棘球蚴囊液粗抗原（ＥｇＣＦ）和头节抗原（ＥｇＰ）与正常人混合血清中杂抗体结合而除去产生非特异反应的粗抗原部分,得到部分纯化的抗原ＥｇＣＦ２,ＥｇＰ２,纯化前后的抗原在酶联免疫吸附试验（ＥＬＩＳＡ）及斑点免疫结合试验（ＤＩＢＡ）中对４５例细粒棘球蚴病（ＣＥ）的诊断阳性率分别为：ＥｇＣＦ９３．３％,ＥｇＰ９５．６％,ＥｇＣＦ２９１．１％,ＥｇＰ２９３．３％,它们的敏感性无显差异。     

棘球蚴病免疫诊断抗原研究进展

棘球蚴病免疫诊断的发展主要反映于对特异性抗原研究的进展。特异性抗原的确定和分离纯化技术及分子生物学技术的发展 ,提高了免疫诊断方法的敏感性和特异性     

人棘球蚴液抗原5种免疫诊断试验诊断泡球蚴病的价值

我们用人棘球蚴液抗原研究了5种免疫诊断试验诊断泡球蚴病的价值。结果:CIEP、E-CIEP、ELISA、ABC-ELISA和IFA的敏感性各为28.3％、95.7％、97.8％、95.7％和100％;假阳性率各为0.7％、0、2.1％、3.5％和0.7％。5种免疫诊断方法中,4种敏感性在95％以上,说明用人棘球蚴液抗原诊断泡球蚴病有实用价值。根据“三S”原则,E-CIEP结合ELISA是诊断和血清流行病学调查泡球蚴病的可靠免疫诊断方法。     

细粒棘球蚴实验感染鼠体液免疫动态的初步结果

采用胶乳凝集试验(LA)、酶联免疫电转移印斑试验(EITB)、酶联免疫吸附试验(ELISA)、斑点-ELISA试验(Dot-ELISA)以及免疫荧光试验(IFA)5种免疫血清学方法,对细粒棘球蚴实验感染鼠的抗体进行了动态观察,结果表明这5种检测方法均能检出抗体,其中以Dot-ELISA及IFA最敏感,于感染后2周即有部分鼠测到抗体。ELISA、EITB和LA出现阳性反应的时间依次为4周、2月和3月。感染8月及1年的病鼠全部阳性,而对照鼠则全部阴性。     

细粒棘球蚴囊液抗原纯化方法的比较评价

对于绵羊肝脏细粒棘球蚴囊液用常规粗制法,通过抗绵羊全血清抗体免疫吸附柱的亲和层析法,Oriol氏纯化法,Burstein氏纯化法,以及将纯化抗原再经酚提取法制备的六种抗原,以SDS-PAGE,免疫电泳,ELISA,IHA等方法进行了抗原得率、纯度、组份、免疫活性和特异性等方面的比较。结果表明:亲和层析抗原得率最高(l6.25％～22.64％),Oriol氏法纯化抗原最低(3.35％)。与囊液粗抗原相比,纯化抗原中Burstein抗原组份最多。经酚提取的纯化抗原组份最少。各种抗原组份数目显然相差明显,但在免疫电泳中均出现弧5沉淀线。酚提取法不能达到将抗原5和抗原B分离的目的。在ELISA和IHA中,Burstein法纯化抗原的活性最高。作者分析了亲和层析抗原活性低于Burstein和Oriol两种抗原的原因可能是亲和层析抗原缺少68kDa和36.5kDa两种宿主组份。因而认为这两个组份可能同时具有寄生虫抗原的性质。在ELISA试验中,各种纯化抗原均与囊虫病人血清产生部分交叉反应,但比粗抗原低。在IHA试验中,纯化抗原均不与囊虫病人血清产生交叉反应。作者推荐由于Burstein法纯化抗原得率高,提纯程序较简单,抗原活性高而且在IHA中没有与囊虫病人血清的交叉反应,因而可作为常规诊断抗原使用。     

棘球蚴病免疫诊断抗原研究进展

棘球蚴病免疫诊断的发展主要反映于对特异性抗原研究的进展。特异性抗原的确定和分离纯化技术及分子生物学技术的发展。提高了免疫诊断方法的敏感性和特异性。     

三株分泌抗细粒棘球蚴囊液抗原单克隆抗体的杂交瘤细胞的建立和初步鉴定

以羊肝细粒棘球蚴囊液抗原免疫BaLb/c鼠脾细胞与SP2/o骨髓瘤细胞常规方法融合。用人肝棘球蚴囊液抗原间接ELISA法检测,获得3株稳定分泌抗体的杂交瘤细胞株,2G_4、2F_1和2F_(10)。对人肝包囊液抗原ELISA的终点分别为1∶204800,1∶819200和1∶3200。对纯化羊肝包囊液抗原致敏羊血球IHA的终点均为1∶512,但3株单抗等量混合后IHA滴度达1∶4096。对猪囊尾蚴抗原的ELISA滴度分别为1∶4000、1∶2000和1∶2000。对泡球蚴抗原ELISA滴度分别为1∶2000、1∶1000和1∶2000。交叉阻断ELISA试验的结果初步显示此3株单抗可能识别不同的抗原表位。3株细胞在液氮中冻存两年复苏后,仍继续稳定分泌抗体。     

人、沙鼠、小鼠泡球蚴抗原诊断泡球蚴病的比较研究

用同一组47例泡球蚴患者和115例对照血清比较研究了人、沙鼠和小鼠泡球蚴抗原的诊断价值。人、沙鼠和小鼠泡球蚴抗原的阳性率各为97.8％、100％和97.8％,三者无显著差异(P>0.05)。三者的假阳性率也无显著差异(P>0.05)。用沙鼠泡球蚴抗原检测时,95.74％病例的消光值在0.70以上,非常显著地高于人(48.94％)和小鼠(57.45％)抗原,P均<0.01。在1:1600以上抗体滴度组中,沙鼠泡球蚴抗原检出74.47％病例,非常显著地高于人(6.38％)和小鼠(29.79％)泡球蚴抗原(P均<0.01)。以滴度几何均数计,沙鼠泡球蚴抗原检测最高为1:1209,是小鼠泡球蚴检测的2.89倍和人泡球蚴抗原检测的3.32倍。说明在诊断人体泡球蚴病时宜用沙鼠泡球蚴抗原。以SDS-PAGE分离的人、沙鼠和小鼠泡球蚴抗原的蛋白质带数各为23、36和15。讨论了蛋白质带数与泡球蚴病诊断的关系。     

不同源包虫囊液作为人体包虫病诊断性抗原的免疫化学分析

本文采用免疫印迹、免疫电泳(IEP)及ABC-ELISA等免疫化学方法系统地比较分析了羊、牛、人源细粒棘球蚴囊液(EgCF)作为人体囊型包虫病诊断性抗原的差别,发现三者蛋白组分及免疫原性蛋白大同小异;IEP中三源EgCF形成迁移距离不同但能识别同一抗体的沉淀弧,由此推知三源EgCF中寄生虫抗原决定簇相同而其载体蛋白有别;ABC-ELISA结果表明三源EgCF对30例包虫病人反应无显著差別。     

猪囊尾蚴液、固相多种抗原对囊虫病免疫诊断效果评价

目的　筛选适合多种寄生虫病流行区使用的特异性较高的囊虫病免疫诊断抗原。　方法　制备猪囊尾蚴各类型液相抗原和固相抗原 ,用ELISA或IEST检测囊虫病流行区患者阳性血清抗体 ,比较各种抗原的敏感性和特异性。　结果　猪囊尾蚴全囊及囊液尿素溶性抗原与水溶性纯化抗原ELISA检测囊虫抗体的特异性差异无显著性 (P >0 .0 5 )。固相抗原IEST有敏感性好、操作简易的特点。　结论　猪囊尾蚴全囊尿素溶性纯化抗原是较理想的囊虫病ELISA诊断抗原 ,有诊断应用价值。固相石腊切片抗原IEST较为适合流行区现场或基层应用。     

循环抗原阳性对弓形虫病诊断价值的研究

应用双抗体ＥＬＩＳＡ检测弓形虫循环抗原（ＣＡｇ）阳性者的血液及组织液样本４１例，进行病原学对照检查，结果２９例检获弓形虫，两者的符合率达７０．７％。不同样本中的虫体检出率依次为羊水３／３，乳汁１／１，胚胎组织１／１，脑脊液２１／３０，血清３／６。另外，对２９例疑似中枢神经系统弓形虫病患者，取脑脊液进行不同免疫学指标检测。结果，ＣＡｇ于发病３ｄ即可测出，总阳性数为２６例；ＩＨＡ抗体于发病５ｄ出现阳性，阳性数为４例；ＥＬＩｓＡ一ＩｇＭ及ＩｇＧ抗体在发病７ｄ后逐渐出现阳性，阳性数分别为５例和１例。研究结果证实，ＣＡｇ作为弓形虫早期、急性感染的一个指标，具有重要的诊断学意义。     

包虫病人循环抗原的检测及应用价值的探讨

利用亲和层析纯化的抗包虫免疫球蛋白以双抗体ELISA法检测包虫抗原,对经亲和层析纯化的包虫抗原的检出下限可达40ng/ml。以1:2健康人混合血清稀释抗原时,检出下限为2.5μg/ml。用此法检测79例包虫病人的循环抗原,阳性率为40.51％。其中肝包虫病人阳性率为38.98％,肺包虫病人为33.33％。血清抗体阳性的包虫病人循环抗原检出率为33.33％,抗体阴性者中为43.75％。在抗体阴性的肺包虫病人中循环抗原的阳性率可达50％。循环抗原的测定在血清抗体阴性包虫病人的免疫学诊断中具有辅助意义。     

新疆包虫病流行病学基线的调查研究——I.人类包虫病的血清流行病学调查

1984～1989年期间,应用ELISA和IHA两种血清学方法,在新疆十二个有代表性的地区进行居民血清流行病学调查的结果表明,在新疆全境均有包虫病的感染存在。根据居民血清ELISA阳性率,参照家犬细粒棘球绦虫成虫感染率和绵羊细粒棘球蚴感染状况,可将全区划分为三种不同程度的地方性流行区。天山、阿尔泰山和昆仑山区域的牧业和农牧业区居民的血清阳性率在20％以上,属于重度地方性流行区。准噶尔盆地和塔里木盆地的绿洲农业地带包括荒漠牧场,居民血清阳性率在10％以上,属于中度地方性流行区。帕米尔高原的塔什库尔干和塔里木盆地东南缘的一些干旱农业区居民血清阳性率在10％以下,属于轻度地方性流行区。作者认为在流行程度的划分上,不能单纯以血清阳性率而定,还应考虑到家犬和绵羊的感染程度。血清IHA的阳性率大致与ELISA结果相关。但南疆地区居民血清IHA阳性率极低,不与ELISA结果相关。不同民族血清阳性率不同,同一民族在不同地区之间也有明显差异。女性的阳性率高于男性。在血清阳性率的年龄分布上,南北疆不同。北疆居民血清阳性率的高峰在10～14岁年龄段,而南疆在20～24岁年龄段。由血清阳性率反映的包虫病感染的相对危险性以从事游牧生活的地区最高。作者讨论了这些现象的原因。     

单克隆抗体Dot-ABC-ELISA检测包虫病人循环抗原

作者用活化生物素标记抗细粒棘球蚴抗原单克隆抗体（ＭｃＡｂ）１Ｄ８，以聚氯乙烯（ＰＶＣ）白色薄膜凹孔板为载体，建立了ＭｃＡｂ－Ｄｏｔ－ＡＢＣ－ＥＬＩＳＡ检测包虫病人循环抗原的方法。测定人源包虫囊液抗原的灵敏度为６ｎｇ／３μｌ样品．９２例确诊包虫病人血清循环抗原检出率为７６．１％（７０／９２），在抗体阳性者中循环抗原检出率为８１．６％（６２／７６），抗体阴性者中检出率为５０％（８／１６）。１００份正常人和１２２份羹虫病等其它寄生虫病人血清，仅１份囊虫病人血清出现交叉反应．测定循环抗原对包虫病人，尤其是血清抗体阴性者的免疫诊断有重要价值．本法简便、快速，适于推广．     

原头节抗原IFAT和IEST诊断人体包虫病的比较研究

以冰冻保存的绵羊棘球蚴内原头节为抗原作间接荧光抗体试验(IFAT)和间接免疫酶染色试验(IEST),检测对包虫病人、非包虫病人及键康人的敏感性、特异性及交叉反应性,并与间接血凝试验相比较(IHAT)。结果表明IFAT的敏感性和特异性分别为90.36％和97.67％;IEST的敏感性和特异性分别为96.55％和100.0％;两种方法均高于IHAT的敏感性(85.54％)和特异性(95.35％)。三种方法对血吸虫感染者和癌症病人血清均无交叉反应,但对囊虫病人的交叉反应率为IFAT(51.35％)>IHAT(37.84％)>IEST(21.62％)。以原头节为抗原IEST诊断人体包虫病敏感性高、特异性强,适用范围广,不需特殊设备,具有现场应用价值。     

旋毛虫幼虫排泄分泌抗原用于诊断人旋毛虫病的可行性探讨

作者将自行分离制备的旋毛虫肌肉期幼虫２４小时排泄分泌抗原，用间接ＥＬＩＳＡ共检测３４份旋毛虫病人血清，３２份为阳性，阳性率９４％．而８２份正常人血清均为阴性反应。且不与蛔虫病人、囊虫病人血清发生交叉反应，但与肺吸虫及血吸虫病人血清发生交叉反应。经用ＳＤＳ－ＰＡＧＥ及铵银染色后显示，该抗原含有１１种蛋白组份，分子量介于９６ｋＤ－１７．６ｋＤ之间。有３条主带，分子量分别为４０、４８、５３ｋＤ。酶联免疫印迹试验表明旋毛虫病人血清能特异识别分子量为４８ｋＤ蛋白。而肺吸虫及血吸虫病人血清所能识别的区带均小于４０ｋＤ。该结果表明４８ｋＤ蛋白抗原组分在人旋毛虫病上具有潜在诊断价值，而酶联免疫印迹试验不失为一种可行的人旋毛虫病的诊断方法。