LIN28A和LAMP1在膀胱癌细胞系中的表达及意义

目的:探讨LIN28A和LAMP1在膀胱癌细胞系中表达情况,以及两者之间的关系,推测其可能临床意义及对肿瘤进展的影响。方法:采用RT-PCR检测膀胱癌细胞系LIN28A、LIN28B和LAMP1表达,免疫荧光检测LIN28A和LAMP1二者蛋白表达定位;LIN28A敲减后通过qRT-PCR检测LAMP1的mRNA表达变化。结果:5个癌细胞系T24、UM-UC3、J82、5637和SW780和正常移行上皮细胞系SV-HUC-1均表达LIN28A,其中J82也表达LIN28B;5个癌细胞系均表达LAMP1,SV-HUC-1不表达LAMP1;LIN28A和LAMP1蛋白均定位在胞浆;LIN28A敲减后对LAMP1的mRNA表达变化无明显影响,相应蛋白变化需要进一步验证。结论:4个膀胱癌细胞系T24、5637、UM-UC3和SW780可以用于LIN28A与肿瘤相关的机制研究,而J82可用于LIN28B的机制研究。LIN28A对肿瘤细胞和干细胞的调控方面可能具有相似性,敲减后对其靶点mRNA表达量无明显影响,LAMP1蛋白可能对肿瘤细胞侵袭转移具有抑制作用。     

锌指E-盒结合同源异形盒-1在膀胱癌细胞中的表达及对肿瘤细胞侵袭的影响

目的:锌指E-盒结合同源异形盒-1(ZEB1)是上皮-间质转换的重要调控因子。本研究探讨ZEB1在膀胱癌细胞系中的表达情况,以及对膀胱癌发展与转移的影响。方法:采用RT-PCR检测膀胱癌细胞系ZEB1的表达,免疫荧光检测ZEB1蛋白表达定位;转染ZEB1siRNA后通过RT-PCR与Western Blot检测ZEB1的mRNA与蛋白表达变化;以及通过细胞侵袭实验观察ZEB1影响细胞侵袭能力的变化。结果:膀胱癌细胞系UMUC3和5637均表达ZEB1,SV-HUC-1不表达ZEB1;ZEB1蛋白定位于胞核;ZEB1敲低后,其mRNA与蛋白表达降低,膀胱癌细胞系侵袭能力降低。结论:膀胱癌细胞系UM-UC3和5637可用于ZEB1与肿瘤相关的机制研究;ZEB1促进膀胱癌细胞侵袭。     

胰岛素样生长因子ⅡmRNA结合蛋白3对胆囊癌迁移侵袭的影响

目的探究胰岛素样生长因子Ⅱ(insulin-like growth factorⅡ,IGF-Ⅱ)mRNA结合蛋白3(IGF2BP3)对胆囊癌迁移侵袭的作用。方法应用实时定量PCR(qRT-PCR)法检测23份胆囊癌组织和23份癌旁组织中IGF2BP3的表达水平;在胆囊癌细胞中利用小干扰RNA(siRNA)敲减目的基因IGF2BP3;Transwell迁移实验与带胶Transwell侵袭实验检测敲减IGF2BP3后对胆囊癌细胞迁移侵袭能力的影响;细胞免疫荧光法检测敲减IGF2BP3后上皮细胞间充质转化(epithelial mesenchymal transition,EMT)相关蛋白表达水平变化。结果 IGF2BP3在胆囊癌组织中高表达(P0.05);与正常胆管上皮细胞比较,5株胆囊癌细胞系中IGF2BP3高表达;敲减IGF2BP3后,胆囊癌细胞系的迁移侵袭能力明显降低(P0.0001);敲减IGF2BP3后EMT相关蛋白表达水平下调。结论 IGF2BP3通过促进EMT,从而促进胆囊癌侵袭转移。     

极低密度脂蛋白受体基因促进膀胱癌细胞迁移的作用及机制

目的:探讨极低密度脂蛋白受体(VLDLR)对人膀胱癌细胞迁移活性的影响及机制。方法:采用实时荧光定量反转录-聚合酶链反应(RT-qPCR)检测人源膀胱癌细胞(J82、UMUC3与T24)与正常尿路上皮细胞(SV-HUC-1)VLDLR的表达水平;采用小干扰RNA(siRNA)建立VLDLR敲低T24细胞模型,通过划痕实...     

长链非编码RNA PTENP1在膀胱癌中的表达调控及功能研究

目的:探索长链非编码RNA PTENP1在膀胱癌中的表达调控及其对膀胱癌细胞的生长及转移的影响。方法:在膀胱癌细胞系及组织中应用逆转录实时定量PCR检测长链非编码RNA PTENP1的基础表达。通过甲基化抑制剂5-Aza.dc处理膀胱细胞系后甲基化特异性PCR分析PTENP1基因启动子的甲基化状态。应用逆转录实时定量PCR检测细胞转染效率,细胞增殖实验及迁移侵袭实验检测PTENP1对膀胱癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响。结果:膀胱癌细胞系SCABER、HT-1376、J82、EJ、T24及5637细胞以及膀胱癌临床标本里长链非编码RNA PTENP1与其对照组细胞系和临床标本相比表达减低。并通过在膀胱癌若干细胞系和一定量的临床标本中行MSP检测验证了PTENP1基因存在启动子的甲基化,5-Aza.dc处理细胞系后可以回复或者部分回复PTENP1的表达。增殖及转移实验提示PTENP1能够抑制膀胱癌细胞的增殖细胞迁移和侵袭。结论:膀胱癌中PTENP1基因DNA甲基化参与了PTENP1低表达的调节;PTENP1在膀胱癌起抑癌基因样作用,参与膀胱癌的发生发展。     

MTUS2-AS2在膀胱癌组织中的表达及对膀胱癌细胞增殖和侵袭的影响

目的:探讨长链非编码RNA(lncRNA)MTUS2-AS2在膀胱癌组织中的表达及其对膀胱癌细胞增殖和侵袭的影响。方法:荧光实时定量PCR(qRT-PCR)检测63例膀胱癌组织和癌旁组织、膀胱癌细胞系(BIU-87、J82、T24、5637)和正常膀胱上皮细胞系SV-HUC-1中的MTUS2-AS2表达。以MTUS2-...     

TPM4对人胰腺癌细胞侵袭和迁移的影响

目的 探讨原肌球蛋白4(TPM4)对人胰腺癌细胞侵袭和迁移的影响。方法 采用qRT-PCR检测人正常胰腺导管上皮细胞(HPDE)和人胰腺癌细胞系(ASPC-1、BXPC-3、MIA PaCa-2、PANC-1、SW1990)中TPM4 RNA表达量。采用siRNA或过表达慢病毒感染胰腺癌细胞(MIA PaCa-2、PANC-1),通过qRT-PCR、Western blotting检测各组细胞TPM4的表达,划痕实验及Transwell实验检测各组胰腺癌细胞侵袭和迁移能力。结果 GEPIA数据库中胰腺癌组织TPM4表达明显高于正常胰腺组织(P<0.05),qRT-PCR分析TPM4 RNA在胰腺癌细胞系中表达均高于HPDE(P<0.0001)。与对照组相比,在MIA Paca-2和PANC-1中过表达TPM4促进了胰腺癌细胞侵袭迁移能力(均P<0.01),而敲低TPM4胰腺癌细胞侵袭迁移能力则明显减弱(均P<0.01)。结论 TPM4在胰腺癌细胞中呈现高水平表达,可能在胰腺癌中发挥着癌基因的作用,其并可促进胰腺癌细胞迁移及侵袭能力。     

miR-802负调控CYLD促进膀胱尿路上皮癌病理发生与发展

目的:本研究主要是miR-802促进上皮-间质转化(EMT)的发展抑制CYLD激活NF-κB信号通路,促进膀胱尿路上皮癌发生与发展。方法:qRT-PCR检测miR-802在膀胱尿路上皮癌肿瘤组织和癌旁正常组织中的表达,膀胱尿路上皮癌细胞系(T24、5637、J82、BIU-87、SW870、UM-CM-3)与非肿瘤正常尿路上皮细胞系SVHUC-1的表达及与临床特征因素的相关性;预测靶基因CYLD,用荧光素酶报告基因法及Western blot检测与miR-802的调控关系;Western blot检测3种EMT相关蛋白表达水平(E-cadherin、N-cadherin及Vimentin)与miR-802的相关性;qRT-PCR检测127例膀胱尿路上皮癌肿瘤组织和癌旁正常组织及膀胱尿路上皮癌细胞系T24、5637、J82、BIU-87、SW870、UM-CM-3与非肿瘤正常尿路上皮细胞系SV-HUC-1中的CYLD mRNA表达;Western blot检测膀胱尿路上皮癌肿瘤组织中CYLD蛋白表达水平;用CCK8法、流式细胞法、Tranwell迁移实验检测了膀胱尿路上皮癌细胞系T24的增殖、迁移及周期S期的聚集;采用Western blot检测CYLD及TNF-α对NF-κB信号通路及相关分子的调控作用。结果:miR-802在膀胱尿路上皮癌患者及膀胱尿路上皮癌各株细胞系中表达均呈现升高趋势,而同时与危险因素分级、TNM分期、淋巴结转移也呈现正相关;miR-802mimics转染组较miR-NC对照组CYLD蛋白的表达量明显降低;miR-802过表达导致N-cadherin与Vimentin的蛋白表达显著升高,而E-cadherin的表达显著降低;CYLD可以作用于膀胱尿路上皮癌,对其有抑制效果;miR-802通过促进EMT的发展,而促进膀胱尿路上皮癌细胞的增殖、迁移及周期S期的聚集,但该效果被CYLD回补;CYLD抑制NF-κB信号通路活性。结论:miR-802促进EMT的发展抑制CYLD激活NF-κB信号通路,促进膀胱尿路上皮癌发生与发展,本研究miR-802有可能成为诊断和预测膀胱尿路上皮癌的潜在生物标志物。     

尼克酰胺对膀胱癌细胞的作用及其机制

目的探究尼克酰胺对膀胱癌细胞的作用及其机制。方法采用浓度梯度的尼克酰胺对膀胱癌细胞系UM-UC-3及T24行加药处理,采用MTT实验、流式细胞检测、Transwell实验检测其表型并与对照组对比,Western blot检测特定相关蛋白加药后改变以探究其作用机制。结果加入尼克酰胺后两种膀胱癌细胞系均出现增殖能力下降、细胞周期G0/G1期阻滞、迁移能力下降、且浓度越高越明显。并且周期相关蛋白Cyclin D1,CDK2,CDK4,CDK6和EMT(上皮-间质转化)相关蛋白E-Cadherin和Vimentin均出现相应改变。结论尼克酰胺可以抑制膀胱癌细胞系的增殖和迁移,并且诱导其G0/G1期周期阻滞,对迁移的抑制是通过对EMT的抑制引起的。     

卵泡抑素对头颈鳞癌细胞增殖、侵袭和迁移的影响及机制探讨

目的 探讨卵泡抑素（FST）对头颈鳞癌细胞增殖、侵袭和迁移能力的影响及机制。方法 采用实时荧光定量PCR(q RT-PCR)和蛋白质印迹法检测头颈鳞癌细胞系HSC-3、Fadu、Tu686以及人正常人口腔上皮细胞HOK中FST的表达水平。利用siRNA和shRNA构建敲低FST的细胞株，通过CCK8、细胞克隆形成、Transwell侵袭迁移和裸鼠皮下成瘤实验，研究敲低FST对肿瘤细胞增殖、侵袭和迁移能力的影响；将敲低FST的细胞株和对照组的总RNA送检转录组测序，对差异表达的基因进行信号通路富集分析，利用qRT-PCR对TGFβ信号通路进行初步验证，通过Western blot和流式细胞技术检测肿瘤细胞凋亡情况。结果 FST在Tu686、Fadu和HSC-3细胞中mRNA及蛋白表达水平均高于HOK细胞。肿瘤细胞敲低FST后穿过Transwell小室的数目显著减少、形成的克隆数目显著减少、肿瘤细胞增殖速度变慢、裸鼠皮下成瘤体积变小。RNA测序结果显示，与对照组相比，敲低FST的肿瘤细胞差异表达的基因在TGFβ信号通路中有明显富集，敲低FST后肿瘤细胞凋亡比例增加，凋亡相关蛋白Casepa...     

VEGF在膀胱癌细胞中的表达

探讨血管内皮生长因子在膀胱肿瘤发生发展中的作用。方法采用逆转录聚合酶链反应方法检测三种人膀胱癌细胞系和正常膀胱组织中ＶＥＧＦｍＲＮＡ的表达,同时用免疫化学方法检测三种人膀胱癌细胞系ＶＥＧＦ蛋白表达。结果三种膀胱纱均有ＶＥＧＦｍＲＮＡ的表达,正常膀组织无表达;     

胞质分裂蛋白调节因子1通过激活黏附斑激酶调控膀胱癌细胞的迁移和侵袭

目的探讨胞质分裂蛋白调节因子1(PRC1)对膀胱癌细胞迁移和侵袭的影响及黏附斑激酶(FAK)在其中的作用。方法设计合成靶向抑制PRC1的小干扰RNA(siRNA), 分别转染人膀胱癌细胞系EJ和T24, 两种细胞系各分为对照组(转染对照siRNA)和敲低组(转染PRC1 siRNA), 通过实时荧光定量聚合酶链反应(PCR)和蛋白质免疫印迹法检测两组PRC1、FAK、桩蛋白(Paxillin)的mRNA和蛋白质表达水平以及FAK和Paxillin的磷酸化水平。通过细胞迁移和侵袭实验分析两组的迁移和侵袭能力。采用t检验进行组间比较。结果敲低组EJ、T24细胞PRC1 mRNA表达量(0.43±0.11、0.55±0.07)低于对照组(1.00±0.19、1.00±0.20, t=4.533、3.699, P<0.05)。敲低组FAK mRNA表达量(0.95±0.05、1.09±0.14)与对照组差异无统计学意义(1.00±0.20、1.00±0.20, t=0.423、0.622, P>0.05)。敲低组Paxillin mRNA表达量(1.12±0.01、1.02±0.1...     

miR-567在胰腺癌细胞中的表达及其作用机制

目的:探讨miR-567在胰腺癌细胞中的表达及其作用。方法:采用qRT-PCR检测正常胰腺导管上皮细胞系HPDE6-C7及胰腺癌细胞系Panc-1、AsPC-1、HPAC、BxPC-3中miR-567表达。Panc-1细胞转染miR-567过表达慢病毒载体后,分别用CCK-8法、流式细胞术、划痕愈合实验、qRT-PCR、Western blot法检测细胞增殖、凋亡及迁移能力,以及KPNA4 mRNA与蛋白的表达、凋亡相关蛋白表达的变化。结果:miR-567在胰腺癌细胞系Panc-1、AsPC-1、HPAC、BxPC-3中的表达水平均明显低于正常胰腺导管上皮细胞系HPDE6-C7(均P0.05);miR-567慢病毒转染Panc-1细胞后,增殖能力明显减弱,凋亡率明显增加,划痕愈合率明显降低、KPNA4 mRNA与蛋白表达明显下调、而caspase-3及Bax蛋白表达明显上调(均P0.05)。结论:miR-567在胰腺癌细胞中表达降低,升高其表达可抑制胰腺癌细胞的生长与迁移能力,其机制可能与下调KPNA4并上调凋亡相关蛋白表达有关。     

环状RNA circKDM4B调控肝癌细胞增殖及侵袭迁移的实验研究

目的 探索环状RNA circKDM4B对肝癌细胞增殖、凋亡和侵袭迁移的影响,明确其在肝癌进展中所发挥的调控作用。方法 采用核糖核酸酶R（RNase R）消化实验和荧光原位杂交实验（FISH）验证circKDM4B的环状结构稳定性及其在细胞中的定位;利用小干扰RNA（siRNA）敲减肝癌细胞circKDM4B的表达,并通过qRT-PCR实验验证敲减效率;采用细胞计数方法（CCK-8）实验、EdU增殖实验检测circKDM4B对肝癌细胞增殖的影响,流式细胞技术检测其对肝癌细胞凋亡的影响;同时应用划痕实验、Transwell实验检测circKDM4B对肝癌细胞迁移侵袭能力的影响。结果 相较于线性KDM4B mRNA,circKDM4B对RNase R耐受性更加稳定,FISH结果显示circKDM4B主要定位于肝癌细胞质中;在转染了circKDM4B siRNA后,circKDM4B在肝癌细胞表达下调,而亲本基因KDM4B不受影响。CCK-8和EdU增殖实验结果显示,敲减circKDM4B可抑制肝癌细胞的增殖;流式细胞实验显示敲减circKDM4B可明显促进肝癌细胞凋亡;划痕实验和Transwell实验表明敲减circKDM4B后肝癌细胞的侵袭和迁移能力明显减弱。结论 circKDM4B稳定表达于肝癌细胞质中,并具有促进肝癌细胞增殖、侵袭迁移、抑制肝癌细胞凋亡的能力,这提示circKDM4B有望成为新的肝癌治疗靶点。     

Fibulin-5表达对膀胱癌细胞迁移和侵袭能力的影响

目的 探讨fibulin-5表达在膀胱尿路上皮癌中的影响作用. 方法 经尿道切除获取膀胱尿路上皮癌标本20例,其中低级别(G_1和G_2)13例、高级别(G_3)7例.蛋白质印迹法检测fibulin-5在膀胱尿路上皮癌和正常膀胱黏膜组织中的表达.将PCR扩增的fibulin-5 cDNA克隆到pMD-19T载体中,构建p-EGFP-fibulin-5质粒.脂质体介导法将p-EGFP-fibulin-5质粒转染到人膀胱癌5637细胞株内,流式细胞仪分选,经G418筛选形成稳定的表达克隆.Boyden小室法检测未转染、转染空载体和转染fibulin-5的膀胱癌细胞迁移和侵袭能力. 结果 正常膀胱黏膜、低级别和高级别膀胱尿路上皮癌组织中fibulin-5蛋白相对表达量分别为1.16±0.28、0.57±0.32和0.44±0.42.与正常膀胱黏膜相比,膀胱癌组织中fibulin-5蛋白表达显著下调(P<0.01),低级别和高级别癌之间差异无统计学意义(P>0.05).转染成功的膀胱癌5637细胞显示绿色荧光.未转染、转染空载体和转染fibulin-5的膀胱癌细胞的迁移细胞数分别为136.9±5.7、139.3±7.7和127.6±3.1,侵 袭细胞数分别为31.7±4.7、31.5±4.8和8.05±3.1.转染fibulin-5后膀胱癌细胞侵袭力明显降低 (P<0.01),其迁移力虽低于对照组但差异无统计学意义(P>0.05). 结论 Fibulin-5蛋白表达减 少可能是膀胱癌发生和发展的机制之一,过表达fibulin-5可以抑制膀胱癌细胞侵袭力.     

LIM激酶1对肝癌细胞增殖、迁移及血管形成能力的影响

目的 探讨LIM激酶1(LIMK1)在人肝癌细胞系Huh7中的表达及其对Huh7细胞的增殖、迁移及促进血管形成能力的影响。方法 检测人正常肝细胞系MIHA和人肝癌细胞系Huh7中LIMK1的mRNA和蛋白水平，siRNA转染Huh7细胞后通过CCK-8实验、克隆形成实验、划痕实验、Transwell实验和内皮细胞管形成实验探究对肝癌细胞增殖、迁移及血管形成能力的影响。结果 LIMK1在Huh7细胞中表达升高；敲低LIMK1后Huh7细胞的增殖及迁移能力显著下降，人脐静脉内皮细胞(HUVECs)体外血管形成能力减弱。结论 LIMK1在Huh7细胞中高表达，敲低LIMK1可抑制Huh7细胞的增殖、迁移及血管形成能力。     

SRPK1基因对膀胱癌细胞生物学行为的影响及机制研究

目的观察丝氨酸/精氨酸蛋白特异性激酶1(SRPK1)对膀胱癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响, 并进一步探究其分子机制。方法利用Oncomine癌症数据库分析SRPK1基因在膀胱癌组织及正常膀胱组织中的表达;构建SRPK1特异的慢病毒干扰质粒(sh1和sh2)和阴性对照质粒(NC), 包装慢病毒颗粒, 分别感染T24细胞和5637细胞。设空白对照组(T24和5637)、阴性对照组(T24/NC和5637/NC)、干扰组1(T24/sh1和5637/sh1)和干扰组2(T24/sh2和5637/sh2);采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)和Western blot检测各组细胞中SRPK1 mRNA和蛋白水平的表达变化;采用CCK-8法检测各组细胞增殖能力的变化;采用Transwell细胞迁移和侵袭实验检测各组细胞迁移和侵袭能力的变化;采用Western blot检测各组细胞上皮间质转化(EMT)及AKT通路相关蛋白表达变化。结果 Oncomine癌症数据库中SRPK1 mRNA在膀胱癌组织中的表达明显高于正常膀胱组织(P<0.001)。通过qRT-PCR和Western blot检...     

PBK/TOPK表达对膀胱癌BIU-87细胞株增殖及迁移的影响

目的 探讨PBK/TOPK在膀胱癌中的表达及其表达对BIU-87细胞株增殖及迁移的影响。方法 采用QRT-PCR及Western blot检测3例配对膀胱癌及癌旁正常组织中PBK/TOPK的表达。随后,对膀胱癌BIU-87细胞株中PBK/TOPK的表达分别干扰及过表达,通过CCK-8实验检测细胞的增殖,Transwell实验检测细胞的迁移能力。结果 结果一致表明PBK/TOPK在膀胱癌中的表达明显高于癌旁正常组织(P<0.05)。干扰PBK/TOPK表达后,BIU-87细胞的增殖及迁移能力下降(P<0.05) ;而PBK/TOPK过表达后,BIU-87细胞的增殖及迁移能力增强(P<0.05) 。结论 PBK/TOPK高表达于膀胱癌,有助于膀胱癌细胞的增殖及迁移。     

MDM4表达在肾细胞癌中的临床相关性与作用研究

目的:通过研究肾细胞癌(RCC)组织MDM4的mRNA和蛋白表达水平,分析其与RCC临床病理特征的相关性,并利用细胞系研究MDM4对RCC细胞迁移和侵袭能力的作用,探讨其潜在的作用。方法:选取2014年1月～2017年2月在我院行手术切除治疗的RCC组织标本82例和癌旁组织标本20例为研究对象,应用实时荧光定量PCR和Western blot分别检测MDM4的表达水平。收集患者性别、年龄、病理分级等临床病理资料,并分析其与MDM4mRNA表达的相关性。体外应用RCC细胞系研究MDM4对RCC细胞迁移和侵袭能力的影响。结果:与癌旁组织相比,MDM4 mRNA和蛋白在RCC组织中表达显著上调。统计学分析发现,MDM4mRNA的表达与RCC病理TNM分期和远隔转移呈正相关(P0.01)。肿瘤细胞系ACHN细胞中MDM4表达显著高于其他肿瘤细胞系及人正常肾小管上皮细胞HK-2(P0.01)。体外沉默MDM4显著抑制ACHN的细胞增殖、迁移和侵袭。结论:MDM4表达与RCC的恶性特征及癌细胞增殖、迁移和侵袭能力密切相关,有望成为RCC的潜在治疗靶点。     

胰腺癌细胞系PC1.0、PC-1、MEK1/2仓鼠模型的建立及成瘤特性的比较

目的:观察不同肿瘤细胞系在仓鼠体内种植生长的差异,阐明不同胰腺癌细胞系的侵袭转移特性。方法:胰腺癌细胞系PC1.0、PC-1、MEK1/2行仓鼠胰腺原位种植、腹腔注射,建立不同的胰腺癌细胞侵袭动物模型。结果:高侵袭转移PC1.0组在肿瘤组织生长大小、腹水出现情况、肿瘤腹腔转移情况明显高于其他3组细胞;MEK1基因敲减组在胰腺种植、腹腔种植肿瘤组织生长比MEK2基因敲减组生长减小,腹膜及肝脏转移及周围脏器侵袭比MEK2基因敲减组增多。结论:PC1.0肿瘤生长旺盛且转移多;PC-1肿瘤生长一般且转移少;MEK1基因敲减肿瘤生长受抑制,但侵袭转移正常;MEK2基因敲减肿瘤生长不受抑制,但侵袭转移受抑制。