CD4~+CD25~+Foxp3~+调节性T细胞增龄性变化及其与老年肺癌的关系

目的探讨CD4~+CD25~+Foxp3~+调节性T细胞(regulatory T cells,Treg)的增龄性变化及其与老年肺癌发生、发展的关系。方法肺癌患者70例和体检健康者60例,分别按年龄(青年18~45岁、中年45~60岁、老年60岁)分为青年肺癌组21例、中年肺癌组25例、老年肺癌组24例和青年健康组20例、中年健康组20例、老年健康组20例。采用流式细胞分析法测定各组外周血CD4~+CD25~+Foxp3~+Treg占CD4~+T细胞的百分率,采用实时荧光定量PCR法测定功能基因Foxp3 mRNA的相对表达量;分析肺癌患者外周血CD4~+CD25~+Foxp3~+Treg细胞百分率与临床特征的关系。结果老年肺癌组外周血CD4~+CD25~+Foxp3~+Treg细胞占CD4~+T细胞百分率[(11.81±2.40)%]及Foxp3 mRNA相对表达量(3.14±1.30)高于中年肺癌组[(11.25±1.84)%、2.53±1.16]和青年肺癌组[(9.05±2.14)%、2.28±1.21],中年肺癌组高于青年肺癌组(P0.05);老年健康组外周血CD4~+CD25~+Foxp3~+Treg细胞占CD4~+T细胞百分率[(9.82±1.19)%]及Foxp3mRNA相对表达量(2.67±0.99)高于中年健康组[(7.81±1.16)%、1.76±0.80]和青年健康组[(6.23±0.91)%、1.17±0.51],中年健康组高于青年健康组(P0.05);相同年龄段,各肺癌组中CD4~+CD25~+Foxp3~+Treg细胞占CD4~+T细胞百分率及Foxp3 mRNA相对表达量均明显高于各健康组(P0.05);肺癌患者外周血CD4~+CD25~+Foxp3~+Treg细胞占CD4~+T细胞百分率在肺癌分期、有无淋巴结转移上差异有统计学意义(F=28.660,P=0.002;t=21.084,P0.001),在不同性别、病理类型上差异无统计学意义(t=2.330,P=0.120;F=0.020,P=0.980)。结论 CD4~+CD25~+Foxp3~+Treg细胞的增龄性变化可能是导致老年肺癌发生、发展的原因之一。     

胃癌CD4+CD25highFoxp3+调节性T淋巴细胞数量和分布及Foxp3基因表达与肿瘤分期的相关性

目的 研究胃癌患者CD4+CD25highFoxp3+调节性T淋巴细胞(Treg)的存在数量、分布情况,及其功能基因Foxp3的表达变化与胃癌临床国际肿瘤淋巴转移分类(TNM)分期的关系.方法 用四色流式细胞术以Foxp3-FITC/CD25-PE/CD4-PerCP/CD3-PC7抗体组合分析20名健康对照者及47例胃癌患者(临床TNM分期Ⅰ期11例、Ⅱ期18例、Ⅲ期10例、Ⅳ期8例)外周血、腹腔积液、肿瘤组织浸润淋巴细胞(TIL)及癌旁淋巴结中CD4+CD25highFoxp3+Treg的数量及分布情况.实时荧光定量PCR技术检测Treg Foxp3 mRNA表达水平.结果 胃癌患者外周血CD4+CD25highFoxp3+Treg占CD4+T淋巴细胞的百分比为(8.03±3.47)%,高于正常健康对照组(5.83±2.93)%,差异具有统计学意义(P＜0.05).胃癌患者腹腔积液、肿瘤浸润淋巴细胞、癌旁淋巴结中Treg占CD4+T淋巴细胞比例均高于外周血,差异有统计学意义(分别为P＜0.05、P＜0.01、P＜0.01).胃癌组织局部TIL和癌旁淋巴结中Treg的Foxp3平均荧光强度显著高于外周血和腹腔积液(P＜0.05).Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ期胃癌患者Treg比例分别为(5.72±1.95)%、(6.45±2.23)%、(9.58±3.13)%、(11.70±2.30)%,这提示Treg与肿瘤TNM分期显著相关(r=0.784,P＜0.01).胃癌患者外周血单个核细胞Foxp3基因mRNA表达水平明显高于健康对照组(P＜0.01).Foxp3基因表达水平与胃癌TNM各分期呈显著相关性(r=0.623,P＜0.05).结论 胃癌患者CD4+CD25highFoxp3+Treg的比例升高,其增高程度与肿瘤临床分期呈显著正相关.胃癌患者外周血和癌组织局部Treg的数量、分布情况及特异性转录因子Foxp3的表达强度均有所不同,提示肿瘤局部免疫抑制功能增强,这可能是产生肿瘤免疫抑制的重要机制,CD4+CD25highFoxp3+Treg将来可作为胃癌患者病情进展的重要判断指标之一.     

不同阶段原发性胆汁性胆管炎患者外周血T淋巴细胞亚群变化

目的了解原发性胆汁性胆管炎(PBC)患者疾病过程中外周血单个核细胞中CD4~+ T细胞及调节性T细胞(Treg)改变。方法采用流式细胞术分析36例PBC患者(PBC组)及15例健康对照者(健康对照组)外周血单个核细胞中CD4~+ T细胞及CD4~+ CD25~+FoxP3~+Treg水平及不同疗效及临床分期PBC患者治疗前后Treg水平变化。结果 PBC组外周血中CD4~+ CD25~+FoxP3~+Treg水平[(3.61±1.82)%]比健康对照组[(9.80±4.70)%]水平显著降低,差异有统计学意义(P0.05)。分析PBC患者治疗前Treg水平及实验室指标相关性,可见PBC患者Treg水平与碱性磷酸酶(r=0.257,P=0.03)、IgM(r=0.241,P=0.045)等生化指标呈正相关;CD4~+ T细胞与年龄呈负相关(r=-0.252,P=0.033)。Treg水平在不同疗效PBC患者组内及组间比较差异均无统计学意义(P0.05),不同阶段的PBC患者比较仅在第2阶段可见显著升高,差异有统计学意义(P=0.033)。结论 PBC患者疾病早期体内Treg水平显著高于其他分期,熊去氧胆酸治疗不影响患者体内Treg水平。     

Th9、Th17、CD4~+CD25~+FoxP3~+调节性T细胞在慢性淋巴细胞白血病患者外周血中的变化

目的探讨慢性淋巴细胞白血病患者外周血中Th9、Thl7和CD4~+CD25~+FoxP3~+调节性T细胞及相关细胞因子的表达水平及意义。方法采用流式细胞仪检测36例CLL患者和45例健康对照组外周血Th9、Th17和Treg细胞的表达率,采用酶联免疫吸附方法(ELISA)检测外周血中细胞因子IL-9、IL-17、TGF-β的表达水平。结果 1)CLL组患者外周血Th9、Th17细胞比例及细胞因子IL-9、IL-17浓度均明显高于健康对照组[(1.29±0.35)%vs(0.74±0.23)%,P0.05;(2.15±0.46)%vs(1.08±0.37)%,P0.05;(24.25±7.05)%vs(16.35±5.42)%,P0.05;(11.47±3.99)%vs(7.36±2.85%),P0.05]。CD4~+CD25~+FoxP3~+细胞比例及细胞因子TGF-β浓度明显低于对照组[(4.76±0.89)%vs(7.26±1.95)%,P0.05;(3.82±1.39)%vs(6.82±2.01)%,P0.05]。2)相关性分析:患者Th9、Th17细胞比例及IL-9、IL-17浓度与淋巴细胞计数负相关(γ_s=-0.374,P=0.034;γ_s=-0.382,P=0.032;γ_s=-0.445,P=0.011;γ_s=-0.413,P=0.024);患者Treg细胞比例及TGF-β浓度与淋巴细胞计数正相关(γ_s=0.416,P=0.023;γ_s=0.403,P=0.028)。结论慢性淋巴细胞白血病患者Th9、Th17与CD4~+CD25~+FoxP3~+调节性T细胞比例失衡,血清IL-9、IL-17和TGF-β水平变化,这些原因可能参与慢性淋巴细胞白血病的免疫发病过程。     

卵巢癌患者外周血Treg细胞检测及临床意义

目的探讨卵巢癌患者外周血淋巴细胞亚群及CD4~+CD25~+调节性T细胞(regulatory T cell,Treg)表达水平的变化及其临床意义。方法采用流式细胞术检测48例卵巢癌患者外周血标本中Treg细胞占CD4~+T淋巴细胞的比率及淋巴细胞亚群分布,分析Treg细胞与卵巢癌患者临床病理参数之间的关系。结果与健康人对照组相比,卵巢癌患者外周血标本中CD3~+、CD4~+T淋巴细胞及CD4~+/CD8~+比值均升高(P均0.01),且Treg细胞占CD4~+T淋巴细胞的比率明显升高(P0.01),而CD16~+CD56~+NK细胞的表达水平显著降低(P0.01);卵巢癌患者外周血标本中Treg细胞占CD4~+T淋巴细胞的比率与患者年龄、组织类型、肿瘤大小、淋巴结转移及是否合并CA125升高均无关(P0.05),而与FIGO分期、分化程度及是否存在腹水密切相关(P0.05)。结论检测外周血Treg细胞可用于评估卵巢癌患者的病情进展。     

高效抗逆转录病毒疗法治疗24周AIDS患者Th17和Treg细胞的表达特 点简

目的：观察高效抗逆转录病毒疗法（HAART）治疗24周后获得性免疫缺陷综合征（AIDS）患者辅助性17（Th17）细胞和调节性T（Treg）细胞表达水平的变化。方法选取HAART治疗的45例AIDS患者,将其按CD4＋T细胞计数分成1～100 cells/μl、101～200 cells/μl和201～350 cells/μl三组,于抗病毒前和抗病毒24周后采集静脉血,运用流式细胞仪检测外周血中CD4＋T细胞、Th17和Treg细胞的表达水平,并比较分析其相互关系。结果 AIDS患者治疗24周时Th17细胞在CD4＋T细胞中的表达频率为（1.91±0.84）%,而治疗前为（1.31±0.45）%,差异有统计学意义（t=3.67, P＜0.05）; Treg细胞表达频率在治疗24周时和治疗前分别为（5.97±0.93）%和（8.32±1.12）%,差异有统计学意义（t=3.32,P＜0.05）。治疗24周时,Th17细胞明显升高,CD4＋T细胞基数为201～350 cells/μl患者组其Th17细胞表达频率显著高于101～200 cells/μl和1～100 cells/μl组患者（t分别=2.68、4.51,P均＜0.05）。 Treg细胞表达频率经治疗后显著下降,CD4＋T细胞基数为201～350 cells/μl组患者Treg细胞表达频率下调程度显著高于101～200 cells/μl和1～100 cells/μl组患者（t分别=2.47、3.89,P均＜0.05）。治疗前CD4＋T细胞数与Th17表达的百分率呈正相关（r=0.48, P＜0.05）,与Treg表达的百分率呈负相关（r=-0.30,P＜0.05）。结论 AIDS患者Th17表达水平下降,Treg表达则上升;HAART治疗能有效地上调Th17表达频率,下调Treg细胞水平;CD4＋T细胞基数高的患者较基数低的患者对抗病毒治疗其免疫反应更有效,提示Th17和Treg细胞表达频率可作为HAART治疗有效性的一项判断依据。     

肺癌患者外周血调节性T细胞检测的临床意义

目的:探讨肺癌患者外周血调节性T细胞(CD4+CD25+FoxP3+,Treg细胞)的变化及其与病理参数的相关性。方法:应用流式细胞仪检测56例肺癌患者和18名健康对照者(健康对照组)外周血单个核细胞(PBMC)中Treg细胞占CD4+T细胞的百分率,分析其与年龄、性别、肺癌分期、病理类型以及是否合并胸腔积液等的关系。结果:①肺癌患者外周血Treg细胞百分率高于健康对照组[(6.15±3.15)%比(3.65±2.48)%,P<0.01]。早期组(TNM分期:Ⅰa期～Ⅲa期)[(5.04±2.40)%]、晚期组(TNM分期:Ⅲb期～Ⅳ期)[(6.83±3.09)%]分别与健康对照组[(3.65±2.48)%]比较,Treg细胞百分率均明显升高(P60岁,26例)明显升高[(8.79±3.49)%比(4.86±2.69)%],差异有统计学意义(P0.05)。④肺癌患者外周血中Treg细胞百分率与性别、有无胸水无相关性(P>0.05)。⑤回归分析显示晚期肺癌患者外周血中Treg百分率与年龄呈负相关(P<0.05)。结论:肺癌患者处于免疫抑制状态,其外周血中Treg细胞百分率与肺癌分期、年龄有关。     

流式细胞术检测RA患者外周血CD4^＋CD25^＋FOXP3^＋ Treg细胞及其GITR表达

目的研究FOXP3和糖皮质激素诱导的肿瘤坏死因子受体(GITR)在类风湿关节炎(RA)患者外周血Treg细胞的表达并探讨其临床意义。方法用五色流式细胞术(FCM)检测40例健康体检者、61例RA患者外周血CD4 CD25 FOXP3 调节性T细胞(Treg)及其中GITR的表达情况。结果RA患者组FOXP3的平均荧光强度(MFI)低于健康对照组(P<0.05),CD4 CD25 FOXP3 Treg占CD4 T细胞的比例、CD4 CD25 FOXP3 Treg中GITR的表达率、GITR MFI和健康对照组相比无统计学差异(P>0.05);活动期RA患者的FOXP3 MFI和GITR MFI均显著低于非活动期组(P<0.01和P=0.032),CD4 CD25 FOXP3 Treg占CD4 T细胞中的比例、CD4 CD25 FOXP3 Treg中GITR的表达率与非活动期组相比无统计学差异(P>0.05)。结论RA患者的FOXP3表达低下,活动期组的FOXP3表达低于非活动期组,为其作为RA病情变化的判断指标提供进一步的证据。     

CD127用于特异性识别调节性T淋巴细胞的方法建立及临床应用评价

目的 建立用膜表面标志CD4+ CD25high CD-/low127界定调节性T淋巴细胞的方法,并评价其临床应用意义.方法 五色流式细胞术以Foxp3-FITC/CD127-PE/CD4-PerCP/CD25-APC/CD3-PC7抗体组合鉴定调节性T淋巴细胞,分选CD4+CD25highCD-/low127细胞鉴定Foxp3 mRNA和蛋白水平的表达情况,比较CD-/low127与Foxp3+界定调节性T淋巴细胞的相关性.用该膜表面标志分析20名健康对照者外周血及35例胃癌患者不同部位CD4+CD25+调节性T淋巴细胞(Treg)细胞的分布特点及意义.结果 用CD4+CD25highCD-/low127界定调节性T淋巴细胞的Foxp3蛋白表达率为87.1%,Foxp3 mRNA高表达.用膜表面抗原CD4+CD25highCD-/low127界定调节性T淋巴细胞与CD4+CD25highFoxp3+具有相关性(r=0.985,P＜0.01).胃癌患者外周血CD25highCD-/low127调节性T淋巴细胞占CD4+T淋巴细胞的比例为(8.67 ±3.52)%,高于健康对照组[(5.12±2.46)%,t=2.542,P＜0.05].胃癌患者腹腔积液、肿瘤浸润性淋巴细胞、癌旁淋巴结中CD4+CD25highCD-/low127调节性T淋巴细胞占CD4+T淋巴细胞比例均高于外周血(分别为t=2.357,P＜0.05;t=6.174,P＜0.01;t=5.481,P＜0.01).胃癌Ⅰ期+Ⅱ期患者外周血CD25high CD-/low127Treg细胞占CD4+T淋巴细胞的比例为(6.04±2.31)%,Ⅲ期+Ⅳ期患者为(10.16±2.29)%,其分期差异具有显著统计学意义(t=2.473,P＜0.05).结论 CD4+CD25highCD-/low127抗体组合可用于鉴定调节性T淋巴细胞.胃癌患者CD4+CD25highCD-/low127调节性T淋巴细胞的比例升高,且增高程度与肿瘤临床分期相关.     

原发性肝癌患者外周血CD39~+,CD73~+调节性T细胞和自然杀伤(NK)细胞的表达及其与肝损伤的相关性

目的分析原发性肝癌(HCC)患者CD39~+和CD73~+调节性T细胞(Treg)表达水平,及其与肝损伤的相关性。方法采用流式细胞术检测220例HCC患者(HCC组)、100例慢性乙肝患者(CHB组)和100例健康体检者(C组)外周血CD4~+Treg细胞中CD39~+,CD73~+,自然杀伤(NK)细胞的表达,比较分析其与丙氨酸氨基转移酶(ALT)、天门冬氨酸氨基转移酶(AST)等肝损伤指标的关系。结果与C组比较,CHB组、HCC组外周血CD4~+Treg细胞中CD39~+[(11.21±1.57),(15.44±2.42)vs(8.14±1.25)]%,CD73~+[(13.86±3.61),(19.52±4.57)vs(10.31±2.56)]%细胞比例明显升高,而NK[(20.13±2.77),(17.05±2.40)vs(24.15±3.65)]%细胞比例明显下降(F=663.61,255.18,182.26,均P0.001)。与CHB组比较,HCC组外周血CD4~+Treg细胞中CD39~+,CD73~+细胞比例明显升高,而NK细胞比例明显下降(P0.001)。并发肝损伤的肝癌患者外周血CD4~+Treg细胞中CD39~+[(17.16±2.54)vs(14.23±2.30)]%,CD73~+[(20.21±4.78)vs(18.04±3.29)]%细胞比例明显高于无肝损伤的肝癌患者,而NK[(15.57±2.31)vs (19.13±2.73)]%细胞比例则明显降低,差异均有统计学意义(F=8.89,3.99,10.09,均P0.001)。CD39~+,CD73~+与NK细胞呈显著负相关(r=-0.452,-0.424,均P0.05)。AST,ALT与CD39~+,CD73~+细胞比例呈显著正相关(r=0.342,0.377,P0.05),与NK细胞比例呈显著负相关(r=-0.352,P0.05)。结论 HCC患者外周血CD39~+,CD73~+Treg表达水平明显升高,且与肝损伤密切相关。阻断CD39~+,CD73~+的表达可能有望成为抗肿瘤免疫治疗的一种安全有效的途径。     

胰腺癌患者手术前后外周血淋巴细胞亚群和血小板变化

目的测定胰腺癌患者手术前后外周血淋巴细胞亚群和血小板(PLT)水平,并探讨其与胰腺癌患者临床病理参数的相关性。方法选取66例胰腺癌患者(胰腺癌组),以64名体检健康者作为对照组。检测所有对象淋巴细胞亚群[CD3~+T细胞、CD3~+CD4~+T细胞、CD3~+CD8~+T细胞、B细胞和自然杀伤(NK)细胞]及PLT水平,分析其与胰腺癌临床病理参数的相关性。结果与对照组相比,胰腺癌组术前外周血CD3~+T细胞和CD3~+CD4~+T细胞水平明显降低(P0.05),CD3~+CD8~+T细胞和PLT水平明显升高(P0.05);胰腺癌组术后CD3~+T细胞和CD3~+CD4~+T细胞水平较术前明显升高(P0.05),PLT较术前明显降低(P0.05);胰腺癌组术后与对照组之间CD3~+T细胞、CD3~+CD4~+T细胞、CD3~+CD8~+T细胞、B细胞、NK细胞和PLT水平差异均无统计学意义(P0.05);胰腺癌组术前外周血CD3~+T细胞、CD3~+CD4~+T细胞、CD3~+CD8~+T细胞、B细胞、NK细胞、PLT水平与患者年龄、肿瘤大小、肿瘤部位、有无神经浸润、分化程度无关(P0.05);外周血CD3~+CD4~+T细胞、PLT水平与胰腺癌不同组织分级、有无淋巴结转移有关(P0.05)。胰腺癌组术前外周血CD3~+CD4~+T细胞水平与PLT水平呈负相关(r=-0.44,P0.01)。结论胰腺癌患者细胞免疫功能术前处于被抑制状态,术后可基本恢复正常。胰腺癌患者术前淋巴细胞免疫异常与PLT水平、胰腺癌组织分级和淋巴结转移相关。     

老年消化道肿瘤患者外周血CD4+CD25high调节性T细胞的表达及其临床意义

目的:通过对CD4+CD25high调节性T细胞(CD4+CD25high Treg)在老年消化道肿瘤患者外周血中表达情况的研究,探讨其与肿瘤发生、发展的关系.方法:采用流式细胞术检测26例健康青年人、26例健康老年人及41例老年消化道肿瘤惠者外周血CD4+CD25high Treg的水平,并进行统计学分析.结果:与健康青年人相比,健康老年人外周血CD4+CD25high Treg水平升高[(1.98±0.50)%vs(1.73±0.22)%,P＜0.05];而老年消化道肿瘤患者外周血CD4+CD25high Treg水平比健康老年人显著升高[(3.53±1.83)%vs(1.98±0.50)%,P＜0.01];进一步的分层分析显示:随着疾病的进展,外周血CD4+ CD25high Treg水平升高,在肿瘤进展期(Ⅲ～Ⅳ期)尤其明显,与Ⅰ～Ⅱ期比较,差异有统计学意义[(4.06±1.24)%vs(2.82±0.76)%,P＜0.05].结论:老年消化道肿瘤患者外周血CD4+CD25high Treg比率升高,可能在老年消化道肿瘤的发生、发展中起重要作用.     

外周血CD4~+T淋巴细胞亚群与自然杀伤细胞在非小细胞肺癌患者中的表达及临床意义

目的分析非小细胞肺癌(NSCLC)患者外周血CD4~+T淋巴细胞亚群与自然杀伤细胞(NK细胞)表达及其临床意义。方法本院收治的94例NSCLC患者(观察组)及同期健康体检者89例(健康组)。比较不同人群,不同病理类型、不同临床分期,有、无淋巴结转移NSCLC患者外周血CD4~+T淋巴细胞亚群、自然杀伤细胞情况。结果 NSCLC组NK细胞、Th1、Th1/Th2、Th17、Th17/Treg表达低于健康组,Th2、Treg表达高于健康组(P0. 05);鳞癌与腺癌患者NK细胞、Th1、Th2、Th1/Th2表达比较,差异无统计学意义(P 0. 05),腺癌患者Th17、Th17/Treg表达低于鳞癌患者,Treg表达高于鳞癌患者(P0. 05); I～II期患者NK细胞、Th1、Th1/Th2、Th17、Th17/Treg表达高于III～IV期患者,Th2、Treg表达低于III～IV期患者;有、无淋巴结转移患者NK细胞、Th17、Treg、Th17/Treg表达比较,差异有统计学意义(P0. 05);死亡组NK细胞、Th2、Th1/Th2、Th17、Th17/Treg表达低于生存组,Th1、Treg表达高于生存组(P0. 05)。结论外周血CD4~+T淋巴细胞亚群、NK杀伤细胞在NSCLC的发展与发生中发挥着重要的作用,在一定程度上可反映出患者病情变化,对了解患者免疫机制有重要的参考价值。     

高效抗反转录病毒疗法治疗24周艾滋病感染者外周血中PD-1/PD-L1的变化特点

目的探讨高效抗反转录病毒疗法(highly active antiretroviral treatment,HAART)治疗24周AIDS患者外周血程序性死亡因子(programmed death-1,PD-1)和配体(Programmed cell death 1 ligand l,PD-L1)表达水平的特点变化。方法选取HAART治疗的45例艾滋病感染者(AIDS),按CD+4T细胞计数分成1~100 cells/μl、101~200cells/μl和201~350 cells/μl三组,于抗病毒前和抗病毒24周时采集静脉血,同时选取21名健康体检者作对照。运用流式细胞仪检测外周血中CD+4T细胞表面PD-1和PD-L1的表达水平,实时荧光定量PCR仪检测血浆病毒载量,数据处理采用t检验,相关性分析采用Pearson相关。结果 AIDS感染者治疗前PD-1/PD-L1的表达频率为(1.16±0.26)%和(0.63±0.140)%,均显著高于健康对照组(t分别为6.31和4.27,P=0.000)。抗病毒治疗24周时PD-1/PD-L1在CD+4T细胞中的表达频率分别为(0.76±0.14)%和(0.52±0.06)%,与治疗前相比PD-1表达水平显著下降(t=3.77,P=0.000),PD-L1的表达频率也有所下降,但差异无统计学意义(t=1.78,P=0.056)。CD+4T细胞基数为201~350 cells/μl患者组其PD-1表达频率在治疗24周后平均下调率明显高于另二组(38.54%vs.25.66%和23.77%),而PD-L1的表达也高于1~100 cells/μl和101~200 cells/μl二组(18.97%vs 15.87%和12.31%)。治疗前与治疗后AIDS感染者CD+4T细胞数与PD-1表达百分率呈显著负相关(r=-0.434,-0.317,P=0.009和0.031),与病毒载量呈显著正相关(r分别为0.499和0.319,P为0.0049和0.032)。PD-L1表达频率在治疗前与治疗后与CD+4T细胞数呈显著负相关(r=-0.454和-0.314,P=0.002和0.012),与病毒载量在治疗前后呈显著正相关(r=0.513和0.428,P=0.000和0.004)。结论 AIDS感染者外周血PD-1/PD-L1的表达水平增加,且与疾病进展密切相关。     

肝移植患者外周血CD39^＋和CD73^＋调节性T细胞的表型特点分析

目的了解肝移植术后患者和健康人群外周血中CD39和CD73在调节性T细胞中的表达特点。方法自2008年6月至2012年12月对76例良性终末期肝病的患者行原位肝移植术,常规术后随访。所有患者肝移植出院后一年内复查外周血CD4＋CD25＋CD39＋T细胞占CD4＋CD25＋T细胞百分比,同时检测CD4＋CD25＋CD39＋T细胞中FoxP3的百分比,CD4＋CD25＋CD73＋T细胞占CD4＋CD25＋T细胞百分比,CD4＋CD25＋CD73＋T细胞中FoxP3的百分比,以及CD4＋CD25＋CD127-T细胞中FoxP3的百分比。检测时患者肝功能良好,无合并感染及新发恶性肿瘤。另选取年龄、性别无统计学差异的60名健康人为健康对照组。结果肝移植术后患者与健康对照组相比,外周血中CD4＋CD25＋CD39＋占CD4＋CD25＋T细胞的百分比明显降低（P=0.001）。肝移植组与健康对照组外周血绝大多数的CD4＋CD25＋CD39＋T细胞的FoxP3阳性,且两组间FoxP3阳性率无统计学差异[（79.67±7.98）%vs.（82.40±7.01）%,P〉0.05]。两组外周血中CD73＋占CD4＋CD25＋T细胞的百分比无统计学差异[（14.97±4.91）%vs.（13.82±4.47）%,P〉0.05],大约20%的CD4＋CD25＋CD73＋T细胞FoxP3阳性,且两组间FoxP3阳性率无统计学差异[（18.78±5.53）%vs.（19.19±5.89）%,P〉0.05]。两组大约70%的CD4＋CD25＋CD127-T细胞FoxP3阳性,且两组间FoxP3阳性率无统计学差异[（67.43±6.41）%vs.（69.37±5.15）%,P〉0.05]。结论在肝移植患者和健康人群中,CD39＋Treg可能是主要发挥免疫调节作用的细胞群,可以作为鉴定Treg细胞的表面标志之一。与健康对照组相比较,外周血CD4＋CD25＋CD39＋Treg细胞在成人肝移植患者中明显降低。     

梅毒患者外周血程序性死亡分子1的表达水平及临床价值研究

目的分析梅毒患者外周血程序性死亡分子1(PD-1)的表达水平及临床价值。方法将2018年6月至2019年6月在该院就诊的60例梅毒患者纳入梅毒组,另选取同期该院30例体检健康志愿者作为对照组。采用酶联免疫吸附试验(ELISA)法检测外周血PD-1水平,比较2组外周血PD-1水平及不同临床特征的梅毒患者外周血PD-1水平。采用Spearman相关性分析外周血PD-1与梅毒患者临床特征的相关性。采用流式细胞术检测外周血CD4~+CD25~(+hight)调节性T细胞(Treg)、CD4~+CD25~(+low)Treg、CD4~+CD25~(+low)Treg/CD4~+CD25~(+hight )Treg及其细胞表面上的PD-1水平。结果梅毒组外周血PD-1水平显著高于对照组(P0.05);不同性别、年龄的梅毒患者外周血PD-1水平比较,差异无统计学意义(P0.05);但梅毒快速血浆反应试验(RPR)滴度为1∶8患者外周血PD-1水平显著高于1∶1、1∶2、1∶4患者,临床分期Ⅱ期患者外周血PD-1水平显著高于Ⅰ期患者(P0.05)。Spearman相关分析结果显示,外周血PD-1与RPR滴度、临床分期呈正相关(r=0.659、0.433,P0.01)。梅毒组外周血CD4~+CD25~(+hight )Treg、PD-1~+/CD4~+CD25~(+hight )Treg、PD-1~+/CD4~+CD25~(+low)Treg细胞高于对照组,CD4~+CD25~(+low)Treg/CD4~+CD25~(+hight )Treg显著低于对照组(P0.05)。结论梅毒患者外周血PD-1存在高表达现象,且表达水平与病情密切相关。     

慢性淋巴细胞白血病患者外周血Th17和Treg细胞比率的平衡关系研究

本研究通过检测慢性淋巴细胞白血病(CLL)患者外周血中Th17和CD4+CD25+Foxp3+调节性T(Treg)细胞的比率及其平衡关系,探讨其在CLL发病机制中的作用及临床意义。CLL患者根据外周血淋巴细胞计数及治疗情况,分为初发组30例和治疗后缓解组15例,另设健康对照20例。用流式细胞术(FCM)检测CLL患者和健康对照者外周血中T细胞亚群及Th17和CD4+CD25+Foxp3+Treg细胞占CD4+T细胞的比率。结果显示,初发组CLL患者外周血CD3+CD4+T细胞和Th17细胞的比率均明显高于健康对照组(P<0.05),CD3+CD8+T细胞和CD4+CD25+Foxp3+Treg细胞表达率明显低于健康对照组(P<0.05),Th17/Treg细胞比值明显高于健康对照组(P<0.05);缓解组CLL患者Th17细胞比率与健康对照组相当,而CD4+CD25+Foxp3+Treg细胞表达率明显低于健康对照组(P<0.05),Th17/Treg细胞比值明显高于健康对照组(P<0.05);缓解组CLL患者Th17细胞比率显著低于初发组(P<0.05)。结论:CLL患者外周血T细胞紊乱以CD4+T细胞的增加为主,Th17细胞比率增加和CD4+CD25+Foxp3+Treg细胞比率降低导致Th17/Treg细胞比率失衡,该免疫失衡在CLL的发生发展中可能起重要作用。     

原因不明反复自然流产患者外周血TLR2、TLR4表达及CD4+ CD25+ Treg细胞的变化

目的探讨原因不明反复自然流产(URSA)患者外周血TLR2、TLR4的表达及CD4+CD25+调节性T(Treg)细胞变化的关系。方法用实时荧光定量PCR及流式细胞术检测35例URSA患者、24例妊娠孕妇外周血单个核细胞(PBMC)中TLR2、TLR4mRNA及其蛋白质的表达;流式细胞术检测CD4+CD25+Treg细胞的比例,并分析表达TLR2、TLR4蛋白与CD4+CD25+Treg细胞的相关性。结果 URSA组PBMC中TLR2、TLR4 mRNA分别为0.52±0.04、3.26±1.37;表达TLR2、TLR4蛋白的PBMC比例分别为(32.36±4.18)%、(41.29±3.67)%;与妊娠对照组相比,URSA组外周血TLR4 mRNA及表达TLR4蛋白的PBMC比例差异显著(t分别为19.84和21.85,P均<0.05);URSA组CD4+CD25+Treg细胞的比例为(2.75±0.62)%,显著低于妊娠对照组的(5.17±0.65)%,差异有统计学意义(t=48.40,P<0.01);URSA患者表达TLR4蛋白的PBMC与CD4+CD25+Treg细胞的比例降低呈显著相关(r=0.724,P<0.05)。结论 URSA患者外周血中低表达的CD4+CD25+Treg细胞、高表达的TLR4可能参与了URSA的发生。     

脓毒症患者辅助性T细胞17和CD4+CD25+调节性T细胞表达及血必净注射液的干预作用

目的 观察脓毒症患者外周血辅助性T细胞17(Th17)及CD4+CD25+调节性T细胞(Treg)的水平,并探讨其意义及血必净注射液的干预作用.方法 ①将64例重症监护病房(ICU)脓毒症患者按疾病严重程度分为脓毒症组(26例)、严重脓毒症组(21例)、脓毒性休克组(17例),同时选取18例健康体检者作为对照组.观察不同严重程度脓毒症患者外周血Th17和CD4+CD25+Treg的表达及其与病情严重程度的关系.②按随机原则将64例患者分为常规治疗组(25例,给予常规集束化治疗)和血必净治疗组(39例,在常规治疗基础上加用血必净注射液50 ml静脉滴注,每日2次),两组均以7 d为1个疗程.入ICU当日和治疗7 d用流式细胞术检测外周血Th17及CD4+CD25+Treg表达,观察血必净注射液的干预作用.结果 ①健康对照组Th17表达率为(0.84±0.29)%,CD4+CD25+Treg表达率为(0.43±0.20)%;脓毒症患者细胞表达均较健康对照组明显升高(均P<0.05),其中Th17表达以严重脓毒症组最高[(3.18±0.84)%],CD4+CD25+Treg 表达以脓毒性休克组最高[(3.28±0.76)%].脓毒症患者CD4+CD25+Treg与急性生理学与慢性健康状况评分系统Ⅰ(APACHE Ⅰ)评分和血乳酸均呈正相关(r1=0.519,r2=0.451,均P=0.01).②与常规治疗组比较,血必净注射液能更有效降低脓毒症患者Th17和CD4+CD25+Treg的异常表达[Th17:(1.72±0.69)%比(2.35±0.81)%,CD4+CD25+Treg:(1.78±1.00)%比(2.30±0.85)%,均P<0.05],纠正免疫平衡紊乱,缩短住ICU时间[(4.7±2.6)d比(7.5±4.3)d,P=0.0023,使脓毒症患者28 d病死率有降低趋势(20.5%比28.0%,P>0.05).结论 脓毒症患者外周血Th17和CD4+CD25+Treg表达增加,且与病情严重程度呈正相关,提示Th17和CD4+CD25+Treg在脓毒症发生发展的免疫机制中可能起着重要作用.血必净注射液能有效降低脓毒症患者Th17和CD4+CD25+Treg的异常表达,有降低脓毒症患者病死率的趋势.

Abstract：

Objective To study the level and significance of T helper 17(Th17)and CD4+CD25+regulatory T cells(Treg)in peripheral blood of patients with sepsis and to evaluate the effects of Xuebijing of Anhui Provincial Hospital were divided into three groups:sepsis group(n=26),severe sepsis group (n=21),and septic shock group(n=17).Eighteen healthy individuals served as controls.The comparison in the expression of Th17 and CD4+CD25+Treg within groups and the correlation between their levels and group(n=25,received routine bundle treatment)and Xuebijing treatment group(n=39,received bundle treatment+Xuebijing treatment).Patients in Xuebijing treated group were given 50 ml Xuebijing injection two times per day in addition to routine bundle treatment.Seven days constituted one course of treatment.The expressions of Th17 and CD4+CD25+Treg of 64 patients on the 1 day and 7 days after treatment were detected by flow cytometry.The effects of Xuebijing injection on the patients were evaluated.Results in control group,and they were lower than that of patients with sepsis(P<0.05).The expression rate of Th17 was higher in severe sepsis group [(3.18±0.84)%]than that of other two groups(P<0.05).Moreover,The expression rate of CD4+CD25+Treg was highest [(3.28±0.76)%]in septic shock group (P<0.05),and it was positive correlated with acute physiology and chronic health evaluation Ⅰ(APACHE routine group,our study indicated that Xuebijing injection could reduce the abnormal expression of Th17[(1.72±0.69)%vs.(2.35±0.81)%,P<0.05] and CD4+CD25+Treg[(1.78±1.00)% vs.(2.30±0.85)%,P<0.05] and decrease length of stay in ICU[(4.7±2.6)days vs.(7.5±4.3)days,P=0.002].It also lowered 28-day mortality of patients with sepsis,but the difference between two groups was not significant(20.5%vs.28.0%,P>0.05).Conclusion The expression of Th17 and CD4+CD25+Treg was increased in sepsis patients and was positively correlated with severity of sepsis,suggesting that they may play an important role in pathogenesis of sepsis.Xuebijing injection could decrease the abnormal expression of Th17 and CD4+CD25+Treg and tend to decrease the fatality rate of sepsis.     

再生障碍性贫血患者CD4+ CD25+ CD127low调节性T细胞及Notch1表达水平的变化

目的 测定再生障碍性贫血(AA)患者治疗前后外周血CD4+ CD25+ CD127low调节性T细胞(Treg)的数量及叉头翼状螺旋转录因子(FOXP3)mRNA、Notch1 mRNA的表达水平,探讨Treg在AA发病中的作用及其机制.方法 流式细胞术检测29例初发AA患者、14例环孢素(CsA)治疗后恢复期及11例治疗后未恢复期患者外周血中CD4+ CD25+ CD127low T细胞、CD4+ CD25+ T细胞的数量,并与正常对照比较;采用RT-PCR检测FOXP3 mRNA和Notch1 mRNA的表达水平,分析两者相关性.结果AA初发组及治疗后未恢复组患者外周血中活化CD4+ CD25+ T细胞占CD4+ T细胞比例分别为(4.3±0.7)%、(4.2±0.6)%,明显高于正常对照组[(2.4±0.8)%](P＜0.05).CsA治疗后恢复组患者比例下降为(2.6±0.7)%(P＜0.05),与对照组比较差异无统计学意义.AA初发组及未恢复组CD4+ CD25+ CD127low T细胞在CD4+ T细胞中的比例分别为(2.4±1.2)%、(2.5±1.1)%,较正常对照组[(7.1±2.7)%]及恢复组[(5.3±1.0)%]明显降低(P值均＜0.01);但后两组比较差异无统计学意义.AA初发组患者FOXP3 mRNA及Notch1 mRNA分别为(0.260±0.011)和(0.018±0.005),较正常对照[(1.307±0.011)和(0.308±0.028)]表达明显下调(P值均＜0.01),治疗后分别为(1.287±0.012)和(0.281±0.013),表达较初发组显著提高(P值均＜0.01),与对照组比较差异无统计学意义(P值均＞0.05).AA患者CD4+ CD25+ CD127low T细胞、FOXP3均与Notch1表达呈正相关性(P值均＜0.01).结论AA患者外周血CD4+ CD25+ CD127low Treg减少,其抑制作用减弱,导致自身反应性T细胞过度活化,抑制造血.其作用机制之一可能与靶细胞表面Notch1分子表达降低相关.