艾芬地尔对戊四氮致痫大鼠海马nNOS表达的影响

目的:观察艾芬地尔对戊四氮(PTZ)急性致痫大鼠海马一氧化氮合酶(nNOS)表达的影响,探讨癫痫发生的机制及艾芬地尔的药理作用。方法:将60只大鼠随机分为空白对照组(A组)、PTZ致痫组(B组)、艾芬地尔干预组(C组),通过腹腔注射PTZ建立急性癫痫动物模型,并采用免疫组化技术观察海马nNOS的表达变化情况。结果:模型组各时间点nNOS水平较正常组各相应时间点明显升高(P<0.05);模型组nNOS在24h免疫反应阳性神经元AOD值达到最高;艾芬地尔干预组与模型组相比表达下降,各时间点AOD值均存在显著性差异(P<0.05)。结论:PTZ点燃癫痫大鼠海马组织nNOS表达明显增加,提示nNOS可能参与了戊四氮点燃癫痫的形成过程;艾芬地尔明显减少了nNOS阳性细胞的表达,有利于保护癫痫损伤后神经细胞的功能。     

大鼠急性肺栓塞后TGF-beta对SM_(22)-alpha表达的调节

目的:研究大鼠急性肺栓塞模型肺组织中SM22-alpha的表达变化以及TGF-β信号转导系统对SM22-alpha表达的调节作用。方法:建立大鼠急性肺栓塞模型,分别在急性肺栓塞后1、8、24和48h开胸取出肺组织。常规提取肺组织总RNA和总蛋白,以正常组为对照,采取半定量RT-PCR的方法研究SM22-alpha,TGF-β1和TGF-βR在mRNA水平表达的变化;采用Western-blot方法进一步验证SM22-alpha,TGF-β1,TGF-βR,Smad7以及磷酸化的pSmad2和pSmad3在蛋白水平的表达变化;采用免疫组织化学方法检测大鼠肺组织中SM22-alpha,TGF-β1和TGF-βR在肺栓塞前后表达的变化及其组织分布情况。结果:在大鼠急性肺栓塞后的不同时间点,SM22-alpha的mRNA水平和蛋白水平均逐渐降低,在24和48h下降最为明显。参与SM22-alpha表达调节的TGF-β1和TGF-βR在mRNA水平和蛋白水平的表达也逐渐减低;免疫组化研究表明SM22-alpha主要分布在肺动脉中膜的平滑肌细胞(SMCs),在急性肺栓塞后表达显著降低。TGF-β1和TGF-βR主要分布在肺动脉壁、支气管壁和肺泡壁,急性肺栓塞后TGF-β1和TGF-βR在上述组织内的表达均明显降低。Western-blot检测发现急性肺栓塞后TGF-β信号转导分子中磷酸化的pSmad2和pSmad3在蛋白水平的表达逐渐减低,而对于TGF-β信号转导系统起抑制作用的Smad7分子的表达却明显上升。结论:大鼠急性肺栓塞后肺组织内TGF-β信号转导系统的抑制导致了SM22-alpha的表达下降,从而影响了肺动脉系统内SMCs的收缩功能。     

苯丙胺对大鼠海马结构内胶质原纤维酸性蛋白质表达的影响

目的：观察苯丙胺对大鼠海马结构内星形胶质细胞的影响。方法：SD大鼠130只按随机数字表法分为正常组43只,生理盐水组43只和苯丙胺组44只。苯丙胺组给予大鼠每天肌肉注射O．5mg／kg剂量的苯丙胺1次;生理盐水组注射等体积的生理盐水,正常组不予处理。用水迷宫训练苯丙胺组和生理盐水组大鼠建立空间辨别性学习记忆模型,用免疫组织化学方法和Western免疫印迹定性和定量胶质原纤维酸性蛋白质（GFAP）的表达。结果：苯丙胺组和生理盐水组海马各亚区的GFAP免疫阳性产物的灰度值与正常组相比明显降低,差异有显著性（P〈0．05）,其中苯丙胺组的灰度值最低;苯丙胺组大鼠海马结构内GFAP蛋白表达量比其他两组明显增加（P〈0．05）,苯丙胺组内海马结构GFAP蛋白表达量在模型42d内,随时间增加而增加。结论：在本实验条件下,苯丙胺可引起大鼠海马结构GFAP表达显著升高。     

戊四氮致痫大鼠延髓内脏带内Fos, GFAP和TH的表达

目的 研究戊四氮诱导大鼠癫痫发作后延髓内脏带（MVZ）内神经元和星形胶质细胞的反应。方法 用抗Fos蛋白，抗酪氨酸羟化酶（tyrosine hydroxylase,TH)和抗胶质原纤维酸性蛋白（GFAP）的三重免疫荧光组织化学方法结合激光共聚焦显微镜技术。显示癫痫发作1h后MVZ内反应性神经元与星形胶质细胞的分布。结果 MVZ内的Fos阳性神经元和GFAP阳性星形胶质细胞明显增多，三重免疫组化方法显示反应性神经元（Fos阳性）与反应性星形胶质细胞（GFAP阳性）关系密切，发现3种不同标记的“神经元-星形胶质细胞复合体（N-ASC）”：即TH /Fos /GFAP 三标记复合体TH /GFAP /Fos-和Fos /GFAP /TH-二标记复合体。结论 MVZ内的神经元和星形胶质细胞在癫痫发作时反应强烈。可能以N-ASC作为功能单位参与癫痫发病的调节。     

大鼠趋化素样因子1mRNA在哮喘大鼠肺组织中的表达

目的观察大鼠趋化素样因子1(rCKLF1)的mRNA在支气管哮喘大鼠肺组织的表达。方法将30只SD大鼠分为对照组(N组)及哮喘组,根据激发时间(1d、3d、7d、14d)不同将哮喘组分为A、B、C、D4组。哮喘激发后取右肺中叶提取组织总RNA。逆转录后行实时荧光定量PCR。了解rCKLF1mRNA的表达。结果rCKLF1在哮喘大鼠的肺组织中表达上调,并呈动态变化,7d达峰值,为正常的12.2倍。结论CKLF1与哮喘的病理生理过程有关。     

锂-匹罗卡品致痫大鼠海马结构nNOS、iNOS及活化Caspase-3蛋白表达的动态变化

目的 探讨大鼠癫痫持续状态（SE）后海马结构神经型一氧化氮合酶（nNOS）、诱导型一氧化氮合酶（iNOS）及活化Caspase-3蛋白表达的动态变化及其相互关系。 方法 采用锂-匹罗卡品腹腔注射建立大鼠SE模型,用免疫组织化学及免疫印迹法在2h、6h、3d及7d不同时相点检测大鼠海马nNOS、iNOS 及活化Caspase-3蛋白的表达。 结果 大鼠海马nNOS的蛋白表达在SE后2h开始迅速增高,在6h时达到高峰,之后逐渐降低,但在3、7d时仍显著高于对照组（P均<0.01）。iNOS蛋白的表达在SE后6h时开始持续增高（P<0.01）,并在7d时达到高峰（P<0.01）。活化Caspase-3蛋白的表达在3d开始增高（P<0.01）,7d时达到高峰（P<0.01）。 结论 大鼠在SE后海马的nNOS、iNOS及活化Caspase-3的表达均有不同程度的增高,提示一氧化氮合酶的反应产物一氧化氮可能与癫痫发作后海马结构内的神经元受损有关,而神经元受损与凋亡之间的关系亦密不可分。     

严重烫伤后脑内GFAP表达变化与血脑屏障功能的关系

目的:探讨严重烫伤后星形胶质细胞的形态学变化、GFAP表达与血脑屏障功能的关系。方法:建立严重烫伤大鼠模型。健康SD大鼠,随机分为正常组,假烫伤组,烫伤组,烫伤后又设3、6、12、24、48h5个时间点,用透射电镜观察血脑屏障超微结构变化;紫外分光光度计检测脑伊文蓝含量。免疫组化观察脑GFAP表达。结果:烫伤后星形胶质细胞线粒体肿胀、空泡化,胶质细胞有凋亡期表现。脑EB含量明显增高,GFAP表达增加(P<0.01)。结论:严重烫伤后星形胶质细胞活化、GFAP表达增加与血脑屏障通透性增高有关,提示GFAP在严重烫伤早期血脑屏障的损伤中起重要作用。     

实验性小鼠肺纤维化过程中IL-31mRNA的动态表达及意义

目的:探讨博莱霉素(BLM)致肺纤维化小鼠各时期肺组织中白细胞介素31(IL-31)mRNA的表达规律及其意义。方法:将48只雄性昆明种小鼠随机分为对照组(n=24)和实验组(n=24)。分别给予生理盐水和博莱霉素(5mg/kg)一次性气管内灌注,于灌注第7、14、21和28天处死小鼠,取肺组织,应用RT-PCR法测定其中的IL-31mRNA的相对转录水平。结果:1实验组肺组织中IL-31mRNA表达水平在第7、14、21天均高于对照组(P<0.05)。2实验组中IL-31mRNA表达从第7天开始升高,第21天达到高峰。结论:IL-31在肺纤维化形成过程中存在高表达,尤其在介导中后期肺纤维化进程中发挥重要作用。     

氯沙坦对心力衰竭大鼠心肌细胞Bax、Bcl-2蛋白表达的影响

目的:探讨氯沙坦对心力衰竭大鼠心肌细胞促凋亡蛋白Bax和抗凋亡蛋白Bcl-2的影响。方法:选24只雄性8周龄SD大鼠,分为对照组、心衰组和氯沙坦干预组各8只。采用阿霉素腹腔注射造模,氯沙坦干预组同时灌胃给氯沙坦连续给药6周。用原位脱氧核糖核酸酶未端标记法(TUNEL法)检测大鼠心肌细胞凋亡,用免疫组化法检测大鼠心肌Bax、Bcl-2蛋白的表达。结果:与对照组比较,心衰组心肌细胞凋亡指数升高,提示心衰组存在明显心肌细胞膜损伤。与心衰组比较,氯沙坦干预组心肌细胞凋亡指数降低。心衰组和氯沙坦干预组心肌细胞Bax和Bc1-2基因蛋白表达显著高于对照组,与心衰组相比,氯沙坦干预组明显下调Bax基因表达,上调Bc1-2基因表达。结论:氯沙坦可明显提高抗凋亡蛋白Bcl-2蛋白表达,降低促凋亡蛋白Bax蛋白表达,提示氯沙坦具有有效抑制心肌细胞凋亡,改善心衰作用。     

rhBMP_2在去势大鼠中的异位诱导成骨效应

目的:通过观察rhBMP2在去势大鼠中的异位诱导成骨效应,探讨rhBMP2与绝经后骨质疏松的关系。方法:对双侧卵巢切除和单纯行开腹术大鼠双侧股部肌袋植入1.5mg和3mgrhBMP2,于植入后1周、2周和3周取材,行组织学检查,成骨量分析,碱性磷酸酶和钙含量测定。结果:组织学检查发现rhBMP2剂量越大,成骨多,成骨早。实验组较对照组诱导成骨活性增强,表现为成骨量,碱性磷酸酶和钙含量较对照组明显增多(P<0.05)。结论:在卵巢切除大鼠早期rhBMP2表现较高诱导成骨活性,可能与机体代偿有关。     

急性肺栓塞后肺泡巨噬细胞Latexin表达上调及其对炎症的影响

目的:研究大鼠急性肺栓塞模型肺组织中羧肽酶抑制剂Latexin的表达变化及其对肺部炎症的影响。方法:建立大鼠急性肺栓塞模型,分别在急性肺栓塞后1、8、24和48 h开胸取出肺组织。常规提取肺组织的总RNA和总蛋白,以正常组为对照,采取半定量RT-PCR的方法研究Latexin在mRNA水平表达的变化;采用Western-blot方法进一步验证Latexin在蛋白水平表达的变化;采用免疫组织化学的方法检测大鼠肺组织中Latexin在肺栓塞前后表达的变化及其组织分布情况。分别在大鼠急性肺栓塞后1、8、24和48 h暴露气管,进行支气管肺泡灌洗,支气管肺泡灌洗液(BALF)上清采用放射免疫法(RIA)检测内皮素-1(ET-1)的浓度;采用ELISA法检测白三烯C4(LTC4)的浓度;细胞沉淀用于分离正常大鼠肺泡巨噬细胞(AMs),并进一步用免疫磁珠法纯化AMs。采用半定量RT-PCR和Western blot法检测AMs在急性肺栓塞后不同时间点Latexin及其作用底物羧肽酶A3(CPA3)的表达。结果:在大鼠急性肺栓塞后8h,肺组织内Latexin的mRNA水平和蛋白水平均逐渐升高。免疫组化研究表明急性肺栓塞后AMs在肺泡腔内的浸润增加,Latexin主要表达于AMs。急性肺栓塞大鼠BALF中分离的AMs无论Latexin和CPA3的表达都明显升高。随着Latexin表达的升高,ET-1和LTC4的浓度也随之升高。结论:急性肺栓塞后AMs中Latexin及其作用靶蛋白CPA3的表达均升高,二者处于一种动态的平衡。大鼠急性肺栓塞后AMs中Latexin的表达显著升高,抑制了CPA3的酶解作用,使得ET-1和LTC4的浓度增加,从而促进了肺部炎症的发展和肺血管收缩。     

托吡酯对戊四氮点燃慢性癫痫大鼠海马Fas表达的影响

目的探讨托吡酯(TPM)对戊四氮(PTZ)慢性点燃癫痫大鼠海马Fas表达的影响及其对海马神经元的保护作用。方法48只大鼠随机分为健康对照组(A组)、PTZ单纯致痫组(B组)、TPM40mg/kg干预组(C组)、TPM80mg/kg干预组(D组),通过腹腔注射PTZ建立慢性癫痫模型,观察大鼠行为、脑电图及海马组织学改变,并用免疫组化染色观察Fas蛋白的表达。结果TPM可以明显抑制大鼠的痫性放电,减少其痫性发作级别,C组、D组与B组比较重型发作率明显降低(P<0.01);此外,TPM干预组凋亡相关基因Fas表达明显减低(P<0.01)。结论在PTZ慢性点燃癫痫大鼠模型中,TPM可降低凋亡相关基因Fas表达,从而减轻海马神经元的凋亡程度。     

癫痫鼠外周血磷酸化S6蛋白检测及意义

目的: 明确癫痫发作后外周血与脑组织中核糖体磷酸化S6蛋白（P-S6）含量变化的相关性。方法: 取出生后5~6周龄的C57BL/6小鼠30只和SD大鼠22只,采用红藻氨酸腹腔注射诱导癫痫发作。建立P-S6蛋白的流式细胞术检测方法用以检测小鼠及大鼠外周血中mTOR信号通路下游P-S6蛋白的变化,同时采用蛋白质印迹法检测其脑组织中P-S6的变化。采用Pearson相关性分析法分析脑组织与外周血中P-S6蛋白表达的相关性,并对大鼠外周血P-S6蛋白的表达与癫痫发作等级进行相关性分析。结果: 癫痫小鼠外周血和脑组织中P-S6的含量明显增高,其表达量分别升高至对照组的（1.49±0.45）倍（P < 0.05）和（2.55±0.66）倍（P < 0.01）;外周血中P-S6的阳性表达率和平均荧光强度均明显升高（均P < 0.01）,与脑组织中P-S6蛋白表达具有一致性（r=0.8474,P < 0.01）。大鼠自身致痫前后外周血中P-S6含量明显增加,由14.89±9.75增加至52.35±21.72（P < 0.01）,与大鼠脑组织P-S6蛋白表达变化一致（r=0.9385,P < 0.01）,且外周血P-S6含量的变化与癫痫发作等级呈正相关。结论: 癫痫鼠外周血mTOR信号通路的变化与脑组织中的变化具有良好的相关性,提示通过检测外周血P-S6的表达水平可准确反映脑组织中mTOR信号通路的变化。     

乙酰半胱氨酸对大鼠酒精性肝病的保护作用研究

目的:探讨乙酰半胱氨酸在改善大鼠酒精性肝损伤中的作用。方法:采用酒精灌胃法建立大鼠酒精性肝病模型,同时以乙酰半胱氨酸300mg/kg,进行干预,每日1次。第12周末处死大鼠,留取血、肝组织标本,检测大鼠血清丙氨酸氨基转移酶(ALT)、天门冬氨酸氨基转移酶(AST)、丙二醛(MDA)和超氧化物歧化酶(SOD)含量,并观察光镜下肝组织病理学改变。结果:酒精模型组动物血清ALT、AST、MDA值分别为76.50±8.70U/L,188.10±24.2U/L和20.60±3.60nmol/ml,较正常对照组升高(P<0.05),SOD值为196.12±24.03U/L,较正常对照组明显降低(P<0.01);同时模型组大鼠肝组织可见大量脂滴浸润和炎症改变。而乙酰半胱氨酸组动物血清ALT、AST、MDA值分别为49.40±9.61U/L,150.60±26.90U/L和8.90±1.41nmol/ml,较酒精模型组明显降低(P<0.01),SOD值为279.9±7.9U/L,较酒精模型组明显升高(P<0.01),乙酰半胱氨酸组肝组织仅见少数肝细胞肿胀及少量脂滴浸润。结论:乙酰半胱氨酸可通过抗氧化作用减轻酒精性肝损伤。     

大鼠阴茎组织5-HT_2受体表达及其在糖尿病ED中变化的研究

目的:观察5-羟色胺2型受体(5-HT2R)在正常及糖尿病ED大鼠阴茎组织的表达及变化情况;观察糖尿病大鼠阴茎勃起功能的变化情况及阴茎海绵体病理损伤情况。方法:设立正常对照组(NC)及糖尿病组(DM)。在糖尿病造模后第4、8、12周进行APO诱导阴茎勃起试验,记录阴茎勃起次数及勃起阳性率。将12周DM组大鼠分为未发生ED组(NED)和ED组(DED)。取阴茎组织,免疫组化法测定5-HT2R的表达情况,光镜、透射电镜下观察大鼠阴茎组织病理改变。ELISA法测定血清5-HT含量。结果:1大鼠阴茎组织中5-HT2R的阳性染色分布在阴茎血管和海绵窦的内皮及平滑肌、神经纤维中。相对于血清5-HT浓度的增高,DM组大鼠阴茎5-HT2R表达较NC组明显下调(P<0.01);DED组5-HT2R表达下调较NED组更为显著(P<0.05)。2与NC组相比,DM组大鼠阴茎勃起功能明显下降。光镜、透射电镜下观察DED组大鼠阴茎海绵体存在明显病理损伤。结论:5-HT2R主要在阴茎血管和海绵窦的内皮及平滑肌、神经纤维中表达;5-HT及其2型受体在糖尿病性ED的发生中具有一定作用;糖尿病造成阴茎组织不可逆性病理损伤,严重影响大鼠阴茎勃起功能。     

褪黑素对大鼠脑损伤的保护作用及机制研究

目的:探讨褪黑素(MT)对大鼠脑损伤的保护作用及其机制。方法:采用自由落体撞击伤方法制作创伤性脑损伤模型,致伤后连续给予褪黑素,测定脑损伤后12h、24h、48h、72h大鼠脑组织谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-PX)活性、丙二醛(MDA)和钙离子(Ca2+)含量并观察脑微细结构的变化。结果:创伤性脑损伤后脑组织GSH-PX活性降低,MDA及Ca2+含量升高,褪黑素能部分反转这种变化,脑水肿减轻。结论:褪黑素对创伤性脑损伤有保护作用,其机制可能与保护GSH-PX活性,减少脂质过氧化有关。