牛胚胎冷冻保存技术的现状与新的尝试

一、前 言 与其他任何领域相比,畜牧业能更有效地应用超低温科学技术。当前冷冻精液技术的普及,缩短了牛的世代间隔,扩大了其遗传性状。今后,逐步进入实用阶段的冷冻胚胎技术若能采用象现在冻精技术那样的简易方法,则将会进一步缩短牛的世代间隔,迅速扩大遗传性状。     

牛胚胎冷冻保存的现状及展望

牛胚胎冷冻保存的现状及展望董雅娟（黑龙江省动物胚胎工程实验室１６１０４１）自Ｗｉｌｍｕｔ和Ｒｏｕｓｏ（１９７３）以甘油为抗冻保护剂冷冻牛胚胎获得成功以来，许多专家学者对冷冻方法进行了广泛深入的研究，使牛胚胎冷冻保存技术由初始的缓慢冷冻发展到快速冷冻、...     

分割牛胚胎的方法、应用和成功率

胚胎分割的最新进展(Williams等,1982;Ozil等,1982;Willadsen等,1981)在胚胎移植领域已引起了人们的注意。这种简便方法可用于同卵双生犊牛的常规生产。此外,胚胎分割法把每头供体母牛可移植的胚胎数增加了一倍,这样就比普通的卵移方法产犊更多。     

PET技术的最近进展与今后展望

PET原理与基础正电子是电子的反粒子,它由原子核放射出来,在组织中运动数mm(正电子射程),与附近的电子相遇后发生湮没.此时它可转化为一对能量各为511keV、方向相差180°的γ线.用相对方向的γ线探测器同时计数该射线,可测出含有正电子湮没位置的方向相反的射线.PET(正电子发射断层显像)装置是在被检体周围排列多个探测器,从360°方向进行测定,与CT同样的原理重建图像,测定出示踪剂在横断面的分布并使其形成图像.     

牛胚胎的长途运输

作者于1980年从莫斯科将黑白花奶牛胚胎空运到哈萨克斯坦。在阿拉木图州江布尔地区“十月革命六十周年”国营农场以阿拉塔乌母牛为受体进行了胚胎移植。在三头经手术植入新鲜而未经保存的胚胎的母牛中,一头母牛于1981年7月4日产了两头犊牛:一头活重是24公斤的公犊,一头活重是28公斤的母犊。     

牛的冷冻胚胎

目前,养牛工业尚未广泛采用胚胎移植,但胚胎移植最适于养牛工业。为什么?因为从优良母牛冲洗得来的胚胎可以冷冻贮藏,然后解冻,把它移植到受体母牛中去。利用贮存方法可以把各种优秀母牛的胚胎长期保存,象保存优秀公牛精液那样,公牛死后还可以保存。利用冷冻胚胎方法可以全年采集优     

牛半胚分割移植技术的应用

牛胚胎移植技术已趋于成熟,其鲜胚移植妊娠率可达60％—70％,冻胚也达到45％—50％。每年黑白花牛移植的受体牛超过400头,迄今获得胚胎移植的犊牛1500多头,目前正在稳步地向奶牛户普及和推广。 过去要求进行胚胎移植的奶牛户几乎都是自己拥有优秀的供体牛,但近来的发展趋势是联合购入优秀的供体牛,集中移植给青     

牛胚胎缺陷导致的早期胚胎死亡

牛在一次配种或授精后大约有90％的卵子可以受精,但是却只有约55％的牛产犊,也就是说,在整个妊娠过程中约有35％的受精卵损失,其中约28％的损失发生在受精后25天前,特别是17天前,另有7％的损失发生在胚胎晚期或胎儿早期。在某些动物,胚胎死亡有利于保持适当的产仔间隔以保证新生或哺乳后代的存活(如兔),同时还有利于淘汰有遗传缺陷的个体(如人)。然而,发生在家畜中的胚胎死亡却是使繁殖力降低和造成经济损失的重要原因。     

牛胚胎的性别鉴定

利用H-Y抗体的胚胎性别鉴定法是根据H-Y抗原与H-Y抗体反应可使雄性胚胎发育停止的特性,H-Y抗原仅存在于雄性染色体。虽然此法始于1975年,但在实际应用中还有困难。1987年日本歧阜县肉牛试验场开始研究胚胎的性别鉴定,他们通过反复试验以确定反应时期性别鉴定的最佳条件。     

利用碘化银的植冰作用冷冻保存牛胚胎的技术

最近日本农林水产省畜牧试验场开发出一种利用碘化银的植冰作用冷冻保存胚胎的简便方法。这种方法是把碘化银以20％的浓度与家畜人工授精用的细管粉末相混合,以达到植冰和封密细管口两个目的。此法与过去的方法相比,不仅不需要人工植冰,而且也节省了细管的热封工序,以及细管粉末的     

牛早期胚胎的细胞遗传学研究及其与胚胎死亡的关系

英国奶牛配种后25天约有35％的受精卵退化。此外,配后25—80天有8—12％的胚胎死亡。在五个泌乳期以后,母牛的胚胎死亡率更高。因此,在所配母牛中产犊率很少超过55％。在人类,52.6%的早期自发流产是因染色体异常所致。在绵羊,10—18日龄的胚胎未见有染色体异常,但配后第二天的胚胎有14.6％表现异常。据报道,在牛中染色体异常的胚胎很少,12—18日龄的胚胎只有1.9％为异常,说明异常胚胎可能已经退化。     

牛胚胎的玻璃态冷冻保存

在我们的实验室,玻璃态作为一种常规的技术,已被用于冷冻保存转基因的鼠胚和克隆化的兔胚。本研究的目的在于建立直接可靠的冷冻保存技术,以便在缺少冰冻的条件下保存牛胚胎。首先从超排卵的供体母牛采集第6天的胚胎,此时的胚胎处于晚期桑椹胚和早期囊胚的发育阶段。用杜氏磷酸盐缓冲液(DPBS)冲洗胚胎,按形态学特征     

牛胚胎的冷冻保存和移植

本试验研究了牛胚胎在冶冻及解冻后的成活,以确定胚胎冶冻最适宜的发育阶段及成功的移植所需的受体与胚胎的同步条件。 发情后7或8天取出的有透明带的囊胚,其冷冻和解冻后的成活无显著差异。与胚龄同期或比胚龄早一天的受体,其妊娠率相同。总之,有52％的冶冻胚胎在体外能继续正常发育;当移植给受体后有40％妊娠。脱离透明带(已孵化)的8日龄胚胎冶冻后少数在体外能发育(25％),10个胚胎移植至受休后没有妊娠。     

牛胚胎的多代克隆

牛胚胎多代克隆的目的是通过重复细胞核移植产生大量的胚胎和牛犊。现已建立了一些重要的方法 ,例如 :采用体外成熟的卵母细胞为胞质受体 ;第二次减数分裂末期去核的先进技术 ;采用体外成熟、体外受精和体外培养形成的胚胎以及经冷冻保存的胚胎为核供体 ;核移植胚体外培养可发育至囊胚期 ;克隆胚可冷冻长期保存等。迄今已连续克隆 6代获得囊胚期胚胎 ,移入受体母牛产生了第 1至 3代的克隆牛。从 1枚牛胚胎通过 3代克隆获 43枚胚胎 ,通过 4代克隆获 54枚胚胎。由此可见 ,在不久的将来通过多代细胞核移植将实现牛胚胎克隆的商业性生产     

奶牛胚胎分割移植试验研究

用简单方法(即胚胎透明带不经链霉蛋白酶软化处理)直接分割7—8日龄新鲜胚胎(一分为二)。裸半胚成对移植给66头受体,90天妊检,移植妊娠率为56.1％(37/66)。除6头流产和尚有5头待产外,已有26头受体产犊35头,其中有9对同卵双胎,双胎率为34.6％(9/26),半胚产犊率为29.2％(35/120)。对影响成对半胚移植妊娠率和半胚产犊率的因素如胚胎质量、胚胎在体外停留时间、胚胎发育阶段、黄体状况、受体牛品种等进行了较系统的研究。此外对冷冻胚胎进行了分割试验,移植妊娠率为45.5％(5/11)产3头犊牛。对快速冷冻和常规冷冻胚胎分割后的移植妊娠率进行了比较,分别为25.0％(1/4)和57.4％(4/7)。     

牛体外受精胚胎一步细管冷冻解冻技术的研究

本试验探讨 1.4M、1.0M或 0 .7M三个不同浓度的甘油冷冻牛体外受精胚胎 ,解冻采用 0 .5M或0 .2 5M蔗糖液细管内一步除甘油的方法。结果 6种组合中 ,以 1.0M甘油配 0 .5M蔗糖为最好 ,同 1.4M甘油配 0 .2 5M或 0 .5M蔗糖和 0 .7M甘油配 0 .5M蔗糖这三种组合比 ,胚胎的孵化率差异显著 (84 .35 %vs6 6 .6 7%、71.4 3%、73.98% ,P <0 .0 5 ) ;与另两个组合比 ,胚胎的孵化率差异不显著 (84 .35 %vs 75 .0 %、75 .4 % ,P >0 .0 5 )。三个甘油浓度之间 ,1.0M的冷冻效果最好 ,而 1.4M的效果最差 ,且二者之间胚胎的孵化率差异显著 (79.6 5 %VS 6 9.4 8% ,P <0 .0 5 )。以上结果表明 ,不同甘油浓度对冷冻牛体外受精胚胎有明显的影响。细管内的组合以含 1.0M甘油为冷冻液 ,两端装 0 .5M蔗糖为最佳     

用玻璃化超低温保存牛胚胎

近几年报道了将哺乳动物胚胎直接投入液氮的快速冷冻法以及在各种条件下所做的研究。其中之一是采用2～4M甘油与蔗糖的混合液,用于小鼠胚胎(Takeda等,1984)和牛胚胎(Chupin,1986)。此外,还有使用高浓度防冻剂、使细胞内外不出现冰晶化的所谓玻璃化保存法,此法用于小鼠胚胎(Rall和Fahy,1985)和牛胚胎(Massip等,1986),并得到了后代。这些快速冷冻法可以大大缩短冷冻所需时间,同时也无需价格昂贵的自动程控冷却器等仪器设备,     

苏联牛胚胎移植技术研究现状

苏联牛胚胎移植起步较晚,直到1980年才通过手术移植的方法获得第一头冻胚犊牛,但近年来这项技术进展较快。据H CepreeB等(1983)报道,用手术法给183头青年母牛移植不同日龄胚胎,妊娠率为48.1％(88/183);118头母牛移入冷冻胚胎,妊娠率为44.1％(52/118)。苏联在超数排