牛脑垂体提取物是角朊细胞无血清培养的重要添加成分

目的 :探讨牛脑垂体提取物对维持角朊细胞生长的重要性。方法 :采用无血清培养技术 ,以添加各种生物因子的 MCDB1 53培养基为培养液 ,在体外培养成人包皮角朊细胞。结果 :在本实验条件下 ,牛脑垂体提取物是维持皮肤表皮角朊细胞增殖不可缺少的添加成分。结论 :牛脑垂体提取物是角朊细胞无血清培养的重要添加成分     

在空气—液体交界面培养角朊细胞

为使体外培养的角朊细胞在近似体内状况下生长,本实验将人体表皮角朊细胞置于塑料培养环内的胶原基质上进行空气—液体交界面培养。培养14d后,将培养物冰冻切片,行普通细胞染色和免疫细胞化学检查,结果显示,有多层细胞形成,且在上层细胞中出现filaggrin。提示此培养技术可用于研究人体表皮细胞的生长和分化。     

培养的角朊细胞原位固定石蜡包埋技术

培养的角朊细胞原位固定石蜡包埋技术Ｉｎｓｉｔｕｆｉｘａｔｉｏｎａｎｄｐａｒａｆｆｉｎｅｍｂｅｄｄｉｎｇｏｆｋｅｒａｔｉｎｏｃｙｔｅｓｉｎｃｅｌｌｃｕｌｔｕｒｅ￥／／钟白玉，聂祝湘，刘荣卿（重庆第三军医大学附属西南医院皮肤科）重庆，６３００３８近年来，...     

热诱导培养角朊细胞表达HSP70

0　引言　热休克蛋白 (HSP)是一类当细胞受到各种有害因素刺激时合成增多的蛋白质 ,在细胞内蛋白的加工过程中具有重要作用 .我们对体外培养的角朊细胞进行热处理 ,然后观察细胞中 HSP70的表达情况 ,并对其意义进行初步探讨 .1　材料和方法1 .1　材料　角朊细胞无血清培养基 (KC- SFM) (GibcoBRL) ,鼠抗人 HSP70单克隆抗体 (Santa Cruz公司 ) ,生物素化羊抗鼠 Ig G及 SABC试剂盒 (武汉博士德生物工程有限公司 ) ,HSP70寡核苷酸探针 (上海生命技术公司合成 ) .1 .2　方法　取手术包皮 (本校西京医院门诊手术室提供 ) ,用2 .5 g·…     

人角朊细胞培养的实验研究

目的 :探讨实验室条件下人体角朊细胞的培养技术 ,观察角朊细胞培养生长过程。方法 :采用改良的有血清培养技术进行人体角朊细胞的培养。结果 :培养的角朊细胞 5天融合达 70 % ,9天达 90 % ,1 1天左右完全融合 ,细胞分裂指数高峰在 9天左右 ,可达 1 1 %。结论 :利用改良的有血清培养技术体外培养角朊细胞生长好 ,9～ 1 1天即可形成膜片 ,可达到移植条件 ,对临床上救治大面积烧伤病人具有重要意义     

rCHO细胞无血清适应及悬浮培养

考察了血清对rCHO(C28)细胞生长与产物(HBsAg)表达的影响,发现φ血清<0.01时细胞出现明显的代谢转换;考察了微量元素、氢化可的松、混合脂类与短多肽混合物(TL混合物)对细胞的影响,建立了适于rCHO(C28株)生长的无血清培养基MT-SFM;在将细胞从有血清转到无血清状态时,阶段性降血清比直接降血清更有利于rCHO(C28)细胞的无血清适应;当细胞适应了MT-SFM无血清培养基后,批培养中细胞的最大平均比生长速率可达0.65d-1,产物HBsAg的滴度在32～64之间。     

表皮细胞生长因子对培养表皮角朊细胞DNA合成的影响

目的 :选择培养表皮角朊细胞时添加表皮细胞生长因子 ( EGF)及小牛血清的最适浓度。方法 :添加不同浓度的 EGF及小牛血清 ,测定 3 H- Td R掺入量。结果 :添加 2 0μg· L-1EGF时3 H- Td R掺入量明显高于添加 5和 1 0 μg·L-1EGF时。结论 :2 0 μg·L-1EGF、2 0 %小牛血清为培养表皮角朊细胞的最适浓度。     

hEGF cDNA导入培养的人角朊细胞及其表达

目的 观察外源性人表皮细胞生长因子（ｈＥＧＦ）基因导入正常导入正常角朊细胞后,能否表达及分泌ｈＥＧＦ;为深入探讨ｈＥＧＦ的作用机制及临床应用奠定物质基础。方法 脂质体包埋ｈＥＧＦ－ｃＤＮＡ的真核表达质粒ｐｃＤＮＡ３－ｈＥＧＦ转染人角朊细胞,经Ｇ４１８筛选,克隆,扩大及传代培养转基因的角朊细胞,特异性ｎｃｏ探针原位杂交显示转基因细胞内的质粒载体,ｈＥＧＦ抗体免疫细胞化学法观察转基因细胞内ｈＥＧＦ的表     

表皮角朊细胞的分离、培养和鉴定

表皮角朊细胞的分离、培养和鉴定马刚１，２陈世义２刘晋宇１敖艳霞＊张林２（１应用基础医学研究所２第一临床学院皮肤科）关键词Ｄｉｓｐａｓｅ角朊细胞免疫组织化学中图号Ｒ３２９．３４表皮角朊细胞培养技术正越来越广泛地应用于医学领域的科研工作中〔１〕。我们已开...     

HPV感染阳性角朊细胞的原代培养及生物学特性研究

目的 培养人原代乳头瘤病毒（ＨＰＶ）感染阳性皮肤角朊细胞,观察其生物学特性。方法 取患者新鲜疣体及正常包皮皮肤组织,用胰酶消化法培养角朊细胞,观察其生长情况,绘制细胞生长曲线图,用ＰＣＲ及原位杂交方法检测上述细胞。结果 ＨＰＶ阳性角朊细胞（ＰＫ）在１６４０液中生长情况良好,增殖速度较正常角朊细胞快。结论 ＰＫ细胞在１６４０液中生长情况良好,适合作为ＨＰＶ感染动物模型用于进一步研究。     

人皮肤角质形成细胞的分离与原代无血清培养

目的：建立一种体外人皮肤角质形成细胞分离与原代培养的方法。方法：采用两步消化法对皮肤进行消化，获取角质形成细胞进行体外无血清培养基培养，进行细胞形态学观察、免疫组织化学、透射电镜鉴定及生长曲线的绘制与分析。结果：该方法可获取较多高纯度的角质形成细胞，且在体外可快速稳定增殖。结论：两步消化法和体外无血清培养是一种理想的皮肤角质形成细胞分离培养的方法。     

无或低血清条件下高压培养促进平滑肌细胞和内皮细胞生长

目的观察高压培养对无或低血清条件下平滑肌细胞和内皮细胞生长的影响。方法用无或0.5%血清培养基,在高于1个标准大气压（标准大气压设定为0 mmHg）30-180 mmHg压力下培养人脐静脉内皮细胞和大鼠血管平滑肌细胞。用台盼蓝染色细胞计数法和MTT评价细胞的生长情况。结果在低血清条件下,高压培养的血管内皮细胞生长速度明显快于标准大气压培养的血管内皮细胞,细胞计数和MTT结果显示高压培养比大气压培养细胞生长增加约30%。无血清大气压培养平滑肌细胞2天后,未见明显的活细胞,而高压培养大鼠平滑肌细胞仍能保持生长。结论无或低血清条件下,高压培养能保持血管平滑肌和血管内皮细胞的生长。     

杂交瘤细胞的无血清低蛋白培养

实现了杂交瘤细胞的体外无血清低蛋白培养。考察了血清浓度、基础培养基和接种密度对细胞生长的影响。在含5%血清培养基、1%血清培养基和无血清低蛋白培养基中适应生长的细胞,μ分别为0.68、0.45、0.44d-1,qGlc分别为13.4×10-9、13.1×10-9、19.2×10-9mmol/(cell·分别为39.4×10-9、44.1×10-9、37.7×10-9mg/(cell·d),YMAb/Xv分别为52.6×10-9、d),qMAb57.8×10-9、54.4×10-9mg/cell,YLac/Glc分别为2.0、1.95、2.0mmol/mmol。无血清培养中葡萄糖代谢途径不变,参与细胞维持代谢的葡萄糖比例增大。血清浓度降低,延迟期变长,最大活细胞密度下降。基础培养基影响细胞的最大活细胞密度,不影响生长速率。无血清培养基中细胞的接种密度选择在0.2×106～0.3×106cells/mL。     

人皮肤角质形成细胞的胰蛋白酶消化分离及无血清培养

目的 探索用DMEM—SF培养基对经胰蛋白酶两步消化分离的人角质形成细胞进行培养的方法和条件。方法 取临床整形外科手术后剩余皮肤，用0．25％的胰蛋白酶经冷和温两步消化分离后，用DMEM—SF、完全培养基于5％CO2、37℃培养，绘制生长曲线，并用单克隆抗角蛋白抗体和鼠—IgG免疫组化试剂盒进行细胞鉴定。结果 用胰蛋白酶两步消化分离的角质形成细胞在：DMEM—SF、培养基中可正常生长2周以上，生长曲线显示细胞在第4天进入对数生长期，第10天进入停滞期。鉴定显示角质形成细胞占95％以上。来源于3个不同个体的皮肤角质形成细胞经等量混合后培养与单独培养相比，细胞生长无统计学差异。结论 用胰蛋白酶对人皮肤进行冷和温两步消化分离的角质形成细胞，在DMEM—SF完全培养基中生长状况良好，其他细胞污染少，实验成本低廉，操作简单。     

茶多酚对原代培养的大鼠皮肤角朊细胞和成纤维细胞生长的 …

目的 探讨茶我酚对原代培养的皮肤角朊细胞和成纤维细胞生长作用的影响。方法 利用原代２的两种主要的皮肤细胞－－角朊细胞和成纤维细胞,采用丙酮酸比色法、ＴＢＡ比色法和ＤＴＮＢ（双硫代对硝基苯甲酸）法测定细胞２的上清液胞浆酶（ＬＤＨ）释放情况,脂质氧化产物（ＭＤＡ）、谷胱甘这氧化物酶（ＧＳＨ－ＰＸ）,并测定培养细胞的生长情况,对茶多酚在皮肤中可能起到的作用进行评价。结果 在加入茶多酚后不同时间地多数发现     

表达vWF蛋白的重组BHK细胞的无血清培养

采用HADAMARD统计设计方法建立了适于重组BHK细胞培养和vWF蛋白表达的无血清培养基SFMA。用SFMA进行重组BHK细胞的批培养，细胞生长明显优于有血清培养(DMEM FBS(φPRS=0．05))和无血清培养基SFM-Ⅱ的培养，最大细胞密度可分别提高16．7％和40%。同时，在培养的96h，蛋白的表达水平比有血清培养提高了18．7%，SFMA维持培养48h的vWF蛋白的表达水平比SFM-Ⅱ提高了50％。     

白癜风皮损区角朊细胞对黑素细胞影响的观察

采用细胞培养的方法，观察了角朊细胞（ＫＣ）对黑素细胞（ＭＣ）的影响以及白斑区ＫＣ对正常ＭＣ的可能作用．结果发现，只有当ＫＣ与ＭＣ发生接触时ＫＣ对ＭＣ才发生显著的影响，支持ＫＣ与ＭＣ接触是两者发生相互影响前提的观点．未发现节段型白癜风不同病期白斑区的ＫＣ对正常ＭＣ有明显的异常作用