神经生长因子在眼科疾病中对视网膜神经节细胞的生理作用

神经生长因子（NGF）是一种在靶细胞合成,并内源性地参与交感神经和感觉神经元的发育、稳定和再生的营养因子。由于其和它的受体原肌球蛋白相关激酶受体A（Trk A）和p75被证实广泛存在于大多数的房水组织中包括晶状体、玻璃体、脉络膜、虹膜以及小梁网中,而在视网膜中,NGF被视网膜神经节细胞（RGCs）、双极神经元、胶质细胞产生并特异性地利用,因此NGF被认为在血多疾病的过程中具有关键性的保护作用。这篇综述将讨论NGF在视神经截断、缺血性损伤、眼高压以及青光眼等疾病中对视网膜神经节细胞（RGCs）的作用。     

视网膜神经节细胞的药物干预现状

视网膜神经节细胞（RGCs）是青光眼等神经退行性病变的主要损伤细胞，它的死亡常导致视功能不可逆性损害。许多人为了寻找促进RGCs存活和轴突再生的药物作了大量的研究，作者着重介绍神经营养因子、中药等对RGCs的神经保护作用，以及谷氨酸、一氧化氮对RGCs的神经损伤作用，为实验和临床研究提供参考。     

银杏叶提取物对豚鼠视神经横断伤后视网膜神经节细胞结构及功能的保护作用

目的： 探讨腹腔注射银杏叶提取物（Ginkgo biboba extract,EGb 761）对豚鼠视神经横断伤后视网膜神经节细胞（retinal ganglion cell, RGC）形态及功能的保护作用。 方法： 75只白化豚鼠随机等分为正常对照组、假手术组、模型组、生理盐水组和EGb 761组。分离暴露豚鼠的右眼视神经并于球后1.0 mm处进行横断造模,正常对照组不作任何处理,假手术组仅分离暴露视神经。生理盐水组和EGb 761组分别于实验开始前1周每日腹腔注射1次相应体积生理盐水和EGb 761（100 mg/kg）,术后继续给药4周。术后第4天,各组随机处死3只豚鼠,采用脱氧核苷酸转移酶介导的dUTP缺口末端标记（terminal deoxynucleotidyl transferase-mediated deoxyuridine triphosphate-biotin nick end-labeling, TUNEL）法检测RGC凋亡;分别于术后第14和28天进行图形视网膜电图（pattern electoretinogram, PERG）检查;摘取眼球作组织病理学检查并计数视网膜垂直经线RGC数目。 结果： 术后第4天,正常对照组、假手术组和EGb 761组均未见TUNEL阳性RGC,模型组和生理盐水组均见有TUNEL阳性RGC。术后第14和28天,模型组和生理盐水组RGC数目均少于正常对照组和假手术组（P〈0.05）,EGb 761组少于正常对照组和假手术组（P〈0.05）,但显著多于模型组和生理盐水组（P〈0.05）;术后第14和28天,EGb 761组PERG的N95振幅较模型组和生理盐水组高（P〈0.05）,与模型组和假手术组相近（P〉0.05）。RGC数目与N95振幅呈正相关（r=0.859, P=0.001 5）。 结论： 腹腔注射银杏叶提取物EGb 761能抑制豚鼠视神经横断后的RGC凋亡,对RGC的结构和功能具有保护作用。     

川芎嗪对兔眼高压下视网膜神经节细胞和双极细胞损伤的保护作用

目的　观察川芎嗪对慢性眼高压下视网膜神经细胞损伤的保护作用 .方法　用 2 0 g· L- 1 甲基纤维素前房注射法建立兔慢性眼高压模型 .4组分别给予生理盐水、川芎嗪注射液 10 mg· kg- 1 ,2 .5 g· L- 1 噻吗心安眼液和联合应用川芎嗪与噻吗心安 ,连续用药 4wk.于 2 8d取眼球作光镜、电镜检查和光镜下细胞计数 .结果　生理盐水组模型眼节细胞数为 (7.83± 1.34 )个 /10格 ,双极细胞数为 (10 .6 6± 1.6 3)个 /格 ;川芎嗪组模型眼节细胞数为 (9.5 0± 3.87)个 /10格 ,双极细胞数为 (12 .5 0± 2 .73)个 /格 ;生理盐水组模型眼和川芎嗪组模型眼节细胞 (P<0 .0 5 )与双极细胞 (P<0 .0 5 )比较 ,有显著性差异 .生理盐水组模型眼节细胞变性、坏死 ,锥、杆细胞外节紊乱 ,色素上皮不完整 ,川芎嗪组变化比生理盐水组轻 ,联合用药组变化最小 .结论　川芎嗪对慢性眼高压下视网膜神经节细胞和双极细胞具有保护作用 .     

银杏内酯B对视神经钳夹伤后大鼠视网膜神经节细胞的保护作用

目的：探讨银杏内酯B对视神经钳夹伤后大鼠视网膜神经节细胞（RGCs）的保护作用。方法：取出生后42 d的SD大鼠36只,随机抽取12只为A组（正常对照组）;24只分离暴露视神经并进行视神经钳夹后随机分为B组（模型组）和C组（GB治疗组）,每组12只。每只鼠的右眼用于实验。A组不作任何处理,B、C组分别于实验前1周每日腹腔注射相应体积生理盐水和银杏内酯B（GB）40 mg/kg,术后继续给药1周,术后1、2周分别行闪光视觉诱发电位和HE染色光镜检查,并计数术后2周视网膜垂直经线RGCs数。结果：术后1周,A、B、C三组的LPl和APl分别为[（90±4）ms,（19±3）μV]、[（110±6）ms（,11±3）μV]和[（94±4）ms（,18±2）μV],B组与A、C组比较差异有统计学意义（P<0.05）;术后2 w,A、B、C三组的LPl和APl分别为[（92±11）ms,（21±3）μV]、[（186±15）ms,（7±2）μV]和[（104±12）ms,（14±3）μV],RGCs数目分别为（281±39）个、（112±20）个、（228±35）个,各指标A、B、C三组比较差异均有统计学意义（P<0.05）。结论：银杏内酯B能抑制部分大鼠视神经钳夹后RGCs凋亡,具有一定的视神经保护作用。     

急性高眼压对视网膜神经节细胞凋亡的影响及药物保护作用

<正> 青光眼是眼科常见致盲眼病,其病理改变特征是视网膜神经节细胞的损害,但损害机制了解甚少。本文通过制备高眼压动物模型,探索高眼压对视网膜神经节细胞凋亡的影响及药物对视网膜神经节细胞的保护作用。 选用新西兰白兔45只,雌雄兼用,体重2.0～2.5kg,随机分为药物实验组(简称实验组)和实验对照组,每组21只,     

灯盏细辛对兔高眼压视网膜神经节细胞及视神经损伤的保护作用

目的观察灯盏细辛对慢性高眼压兔视网膜神经节细胞(RGCs)及视神经损伤的保护作用。方法20只兔制成慢性高眼压模型后随机分成灯盏细辛治疗组(高眼压加灯盏细辛治疗亚组和正常眼压加灯盏细辛治疗亚组)和未治疗组(单纯高眼压亚组和单纯正常眼压亚组),治疗组于高眼压持续7 d后行灯盏细辛灌胃。60 d后取眼球和视神经标本做光镜及电镜检查,观察RGCs密度、视网膜神经纤维层(RNFL)厚度和视神经轴突,并采用计算机图像分析系统定量分析。电镜观察RGCs和视神经轴突超微结构改变。结果①高眼压两亚组与正常眼压两亚组比较,RNFL厚度、RGCs密度减小,轴突数量减少(P<0.05);高眼压加灯盏细辛治疗亚组与单纯高眼压亚组比较,RNFL厚度和RGCs密度大,轴突数量多。②高眼压两亚组胞浆内细胞器数量减少,线粒体空泡变性,轴突排列紊乱,髓鞘变性;但高眼压加灯盏细辛治疗亚组仍有散在细胞器,髓鞘相对不规则,轴突内微管和微丝肿胀,但不消失。结论灯盏细辛对高眼压后RGCs和视神经变性有一定的保护作用。     

灯盏细辛对兔高眼压视网膜神经节细胞及视神经损伤的保护作用

目的 观察灯盏细辛对慢性高眼压兔视网膜神经节细胞(RGCs)及视神经损伤的保护作用.方法 20只兔制成慢性高眼压模型后随机分成灯盏细辛治疗组(高眼压加灯盏细辛治疗亚组和正常眼压加灯盏细辛治疗亚组)和未治疗组(单纯高眼压亚组和单纯正常眼压亚组),治疗组于高眼压持续7 d后行灯盏细辛灌胃.60 d后取眼球和视神经标本做光镜及电镜检查,观察RGCs密度、视网膜神经纤维层(RNFL)厚度和视神经轴突,并采用计算机图像分析系统定量分析.电镜观察RGCs和视神经轴突超微结构改变.结果 ①高眼压两亚组与正常眼压两亚组比较,RNFL厚度、RGCs密度减小,轴突数量减少(P＜0.05);高眼压加灯盏细辛治疗亚组与单纯高眼压亚组比较,RNFL厚度和RGCs密度大,轴突数量多.②高眼压两亚组胞浆内细胞器数量减少,线粒体空泡变性,轴突排列紊乱,髓鞘变性;但高眼压加灯盏细辛治疗亚组仍有散在细胞器,髓鞘相对不规则,轴突内微管和微丝肿胀,但不消失.结论 灯盏细辛对高眼压后RGCs和视神经变性有一定的保护作用.     

左归丸对视神经夹伤大鼠视网膜神经节细胞的保护作用

目的：观察左归丸对视神经夹伤大鼠视网膜神经节细胞的保护作用。方法：建立大鼠单侧视神经部分损伤模型。模型大鼠分别给予左归丸液4.0g/（kg·d）（治疗组）和等量生理盐水（损伤对照组）灌胃,采用免疫组织荧光技术于损伤后第1、2、4、8和16周检测受损眼视网膜神经节细胞数目及神经上皮干细胞蛋白（nestin）、胶质纤维酸性蛋白（glial fibrillary acidic protein,GFAP）的表达情况。结果：视神经夹伤后,大鼠视网膜节细胞数目减少,细胞排列疏松紊乱,在内、外网层和内核层可见裂隙形成,视网膜厚度较正常组变薄,以伤后第4周最为严重,神经节细胞减少约50%,至第8周后神经节细胞减少缓慢。视神经夹伤第2周时,nestin和GFAP表达明显升高,持续至损伤后第8周。Nestin和GFAP在视网膜全层均有表达,但在神经节细胞层、内网层和内核层表达最强,呈条带状弯曲或蛇样匍行;伤后第4周时表达最强,此后二者表达下降,至伤后第16周时,GFAP先于nestin蛋白降至正常水平。各时间点左归丸组神经节细胞存活数比损伤对照组增加,且细胞排列相对整齐;nestin和GFAP表达强度较损伤对照组增加（P〈0.05）。结论：左归丸可能通过促进大鼠视网膜Mller细胞nestin和GFAP的表达,维持损伤后视网膜结构的完整性,从而间接减少节细胞凋亡,有效保护受损视网膜节细胞。     

激肽释放酶结合蛋白对大鼠视神经不完全损伤后视网膜神经细胞的保护作用及轴突再生的研究

目的 探讨激肽释放酶结合蛋白(KBP)是否对体内视网膜神经节细胞(retinal ganglion cells,RGCs)存在保护和促进其轴突再生的作用.方法 在距SD大鼠视神经球侧端0.5～1.0mm的地方夹持视神经,造成大鼠视神经不完全性损伤;在大鼠视神经损伤的模型中,行玻璃体腔分别注入KBP作为实验组和PBS为对照组;分别于损伤后7d,14d和21d取材,HE染色观察视网膜结构、测量视网膜厚度及RGCs的存活数量;提取术眼视神经行蛋白免疫印迹.根据统计学分析结果,明确KBP是否有视网膜神经节细胞保护和促进其轴突再生作用.结果 ①大鼠不完全视神经损伤模型建立成功.②通过HE染色,我们观察了视网膜各层结构变化,通过双肓法计数RGCs,和视网膜厚度测量,经统计学分析,组间差异具有统计学意义.③对神经再生的标记蛋白GAP-43进行Western-blot,统计学分析,组间GAP-43表达差异具有统计学意义.结论 ①KBP对视神经损伤后的RGCs具有保护作用.②KBP在视神经损伤后可能促进了视神经的轴突再生.     

视网膜神经节细胞与糖尿病视网膜病变

糖尿病视网膜病变(Diabetic Retinopathy, DR)是糖尿病最常见的并发症.多年来对其发病机理的研究主要集中在视网膜毛细血管微循环的改变上,对视网膜神经组织的研究较少.20世纪80年代中期已有学者提出DR的主要发病机理可能不仅是视网膜血管本身,而且与血管周围的神经元或神经胶质组织关系更为密切.视网膜的神经元和/或神经胶质可能对长期的高血糖影响特别敏感,微血管损害就成为其代谢紊乱的继发结果[1].近年大量临床电生理学研究表明,糖尿病患者在DR临床发病前,起源于神经网膜内层的振荡电位视网膜电图波振幅下降,潜伏期延长,其异常早于血-视网膜屏障通透性异常.应用持续固定聚焦视网膜电图研究发现,DR病变前期和/或早期,视网膜神经节细胞(retinal ganglion cells ,RGCs)和双极细胞功能已发生异常.实验动物研究也显示,发生DR前,视网膜神经节细胞和苗勒氏(Müller)细胞已出现凋亡[2].有学者推测,糖尿病因耗尽了神经元所依赖的神经营养因子而导致DR的发生[3],神经网膜、神经细胞与DR的关系探讨成为目前DR发病机制的研究热点.本文就与DR神经网膜关系密切RGCs的研究现状作一综述.     

神经生长因子神经保护作用的研究进展

1 神经生长因子的生物学特征 1948年Buerker发现小鼠肉瘤Sl80细胞有神经营养作用后,对神经生长因子(nerve growth factor, NGF)的研究日渐增多,其结构、功能也已基本阐明.NGF是发现最早、最典型、研究最多的一种神经营养因子,是从小鼠颌下腺中分离的分子量为140 000的糖蛋白,由α、β、γ三种肽链按α2βγ2的比例构成,肽链间以共价键结合;人的NGF受体基因位于第17号染色体,为单拷贝基因,有6个外显子,第一个外显子编码信号肽,第二、三个外显子编码膜外区,第四个外显子编码跨膜区,第五、六个外显子编码胞内区.     

神经生长因子对视网膜脱离视细胞保护作用的实验研究

目的：探讨神经生长因子(NGF)对视网膜脱离(RD)视细胞损伤的保护作用。方法：选用健康育紫蓝兔36只随机分为正常对照组、NGF治疗组和NS模型组，实验组右眼肋模型制作后，NGF治疗组每天结膜下注射NGF0．1ml(1mg／ml)，bid；MS模型组每天结膜下注射NS0．1ml，bid；动物于3天、14天后处死，取眼球壁做光、电镜检查。结果：光、电镜检查NGP治疗组内、外节损害较轻、视细胞数较多、外核层较厚、视网膜结构和层次排列较好。NGF治疗组视网膜外核层调亡细胞计数少于NS模型组。视网膜脱离后14天外核层厚度NGF治疗组厚于NS模型组；NGF治疗组视网膜外核层细胞计数多于NS模型组。结论：结膜下注射NGF对视网膜脱离后视细胞损伤有一定的保护作用。     

视网膜神经节细胞的损伤机制

视网膜神经节细胞(retinal ganglion cells，RGCs)的进行性死亡是许多视网膜和视神经疾病发展到最后的必经之路。RGCs的死亡存在两种方式：细胞坏死和细胞凋亡。两者是相互重叠的死亡过程。RGCs损伤既可引起细胞坏死，又可引起细胞凋亡。近年来，随着对细胞凋亡研究的深入，人们对RGCs损伤机制的认识也有一定程度的提高。目前认为     

BDNF对实验性急性高眼压兔眼视网膜神经节细胞的保护作用

目的探讨脑源性神经营养因子(Brain-Derived Neurotrophic Factor,BDNF)对实验性急性高眼压(Hyper-intraocular Pressure,HIOP)兔眼视网膜神经节细胞(RGCs)的保护作用。方法将16只健康中华大耳白兔随机等分为实验组(BDNF)和空白对照(PBS)组,用前房灌注法建立右眼实验性急性HIOP模型,左眼作为正常对照。于灌注前,在BDNF组和PBS组右眼玻璃体腔内分别注射BDNF 3.75μg或等量0.1 mol/L磷酸缓冲液(PBS),第14d让实验兔安乐致死。实验兔致死前48 h以辣根过氧化物酶(HRP)逆向标记双眼RGCs,视网膜铺片后以3,3’,5,5’-四甲基联苯胺(TMB)法呈色,计数下半视网膜距视盘边缘2 mm、4 mm、6 mm处的RGCs密度。结果距视盘边缘2 mm4、mm、6 mm处,正常对照组的RGCs密度分别为1619±377个/mm2、771±232个/mm2、358±122个/mm2;BDNF组的RGCs密度为1304±246、669±283、283±93个/mm2,距视盘边缘2 mm6、mm处,BDNF组与正常对照组RGCs密度的差异有非常显著性意义(均P<0.01);PBS组的RGCs密度分别为1002±410个/mm2、627±211个/mm2、264±107个/mm2,与正常对照组RGCs密度的差异均有显著性意义(均P<0.05);距视盘边缘2 mm处,BDNF组与PBS组的RGCs密度的差异有显著性意义(P<0.05)。结论BDNF可提高实验性急性高眼压兔眼RGCs的存活率,对RGCs具有保护作用。     

神经生长因子对小鼠颈上神经节和大鼠腓神经损伤后修复的影响

目的 应用形态学方法观察研究神经生长因子（NGF）对长春新碱（VCR）损伤的小鼠颈上神经节和钳夹损伤的大鼠腓神经修复再生作用。方法 颈上神经节：出生2d的昆明种小鼠随机分为实验组、对照组和空白对照组。实验组皮下注射VCR（0.2mmol/L～10ul/g体重）和NGF（2、5、10ug/g体重）,对照组仅注射VCR,每天1次,连续4d。光镜下测量颈上神经节横径并且观察神经节细胞形态变化。周围神经：将钳夹损伤腓神经的SD大鼠随机分为实验组和对照组,并从损伤后第1天在近损伤处分别肌注NGF（2、4、8ug/kg体重）和生理盐水,每天1次,连续12d。取腓神经和趾长伸肌,光镜观察,并计数损伤处远端和近端神经纤维数量。结果 VCR可损伤颈上神经节,神经节横径缩小,节细胞凋亡解体;NGF则可改善VCR的损害作用,神经节横径增大61%～95%,节细胞数明显增多59%～70%,细胞凋亡现象显著减轻,改善程度与NGF剂量相关。NGF对排神经再生和趾长伸肌形态变化也有明显改善作用,尤以大剂量NGF的作用更显著。结论 NGF对长春新碱损伤的小鼠颈上神经节和经钳夹损伤的大鼠腓神经有明显的促修复作用。     

PLGA微球载NGF联合超声对视神经节细胞的保护作用

目的：探讨乳酸-羟基乙酸共聚物（ploy lactic-co-glycolic acid,PLGA）微球联合神经生长因子（nerve growth factor,NGF）对视神经损伤大鼠视神经节细胞（retinal ganglion cells,RGCs）的保护作用。方法：PLGA 为原料制备包载有NGF的PLGA微球。检测载药微球的载药量和包封率,观察其形态特点测量粒径分布。将Sprague-Dawley（SD）雄性成年大鼠69只随机分为5个组,正常组（A组）和假手术组（B组）各9只大鼠,生理盐水注射组（C组）、神经生长因子注射组（D组）、PLGA微球联合NGF注射组（E组）各17只大鼠,B～E组大鼠均行超声辐照处理。各组分别于0.5、1、3、7 d取样行视网膜切片免疫组化染色和和苏木精-伊红染色（hematoxylin-eosin staining,HE）,观察视网膜上葡萄糖钙调蛋白（glucose regulated rrotein 78 kD,GRP78）表达和组织病理的变化,并采用荧光金（fluorogold,FG）逆行标记视神经节细胞于视神经钳夹损伤造模后第7 d取样计数各组RGCs数量。结果：PLGA载药微球包封率68.4%,载药量0.032 3%,体外7 d的累计释放率82.6%,微球粒径（3.17±0.6） μm。FG逆行标记RGCs计数5组间差异有统计学意义（F=65.858,P=0.000）,A组与B组间差异无统计学意义（P=0.862>0.05）,其它各组间差异均有统计学意义（P<0.05）。免疫组化染色A组、B组未见阳性细胞,RGCs的GRP78阳性细胞率显示,C～E组不同时间各组间差异有统计学意义（F组别=184.330,P组别=0.000）,各组在各时间点间差异亦有统计学意义（F时间=21.472,P时间=0.000）。HE染色提示第7天时E组视网膜水肿较C、D组减轻。结论：NGF-PLGA微球联合超声治疗视神经损伤大鼠能提高对RGCs的保护作用。     

大鼠视神经挫伤后视网膜神经节细胞形态改变及GFAP表达的变化

目的 研究大鼠视神经夹挫伤后视网膜神经节细胞（RGCs）形态学及其神经胶质原纤维酸性蛋白（GFAP）表达的变化。方法 采用大鼠球后视神经钳夹伤模型，动物分别于损伤后1、3、5、7、9、14、21d处死，苏木精-伊红染色观察视神经组织及RGCs的动态变化，免疫组化方法检测视网膜组织GFAP的表达水平。结果 视神经损伤后，RGCs数目明显下降，14d内降低速度较快，14d后下降速度减慢；与正常大鼠视网膜相比，GFAP表达明显增加，伤后7d达峰值，14d时降至正常水平。结论 视神经损伤后RGCs数量减少是其视功能下降的病理基础之一，视网膜Muller细胞GFAP表达增加是Muller细胞损伤修复的一种表现。     

视神经损伤细胞凋亡与神经保护的实验研究进展

视神经损伤常导致视网膜神经节细胞的凋亡,其有关机制及如何抑制凋亡,从而保护损伤视神经的研究逐渐受到重视,相关体内、体外实验取得一定成果,本文加以阐述。     

睫状神经生长因子对视网膜神经节细胞凋亡的影响

目的研究睫状神经营养因子(CNTF)对视神经损伤后视网膜神经节细胞(RGCs)凋亡的影响。方法取雌性SD大鼠36只,随机分为两组,每组各18只。麻醉后于眶内距视神经根部1.5 mm处切断左侧视神经,眶侧残端留置浸有荧光金的明胶海绵以逆行标记RGC。术前30 min及术后每天腹腔注射CNTF和生理盐水(对照组),分别于术后2 d、7 d及14 d各处死6只大鼠。动物处死后,将视网膜平铺,计数每只动物荧光金标记的存活RGC并得出存活RGC的平均密度。比较各组RGC密度。结果睫状神经营养因子(CNTF)组视神经切断后7 d RGC平均密度为1 727 mm±71 mm,显著高于同一时间点对照组RGC密度1 086 mm±91 mm。结论睫状神经营养因子(CNTF)在大鼠视神经切断后7 d,可促进RGC的存活。