新城疫病毒HN基因真核表达质粒的构建及其抗肿瘤作用的初步研究

构建新城疫病毒血凝素神经氨酸酶基因真核表达质粒,并初步探索其在抗肿瘤治疗中的机制及应用价值。方法：用ＲＴ－ＰＣＲ从ＮＤＶ中克隆ＨＮ ｃＤＮＡ,并构建ＨＮ的真核表达载体,转染ＣＯＳ－７细胞表达,注射至小鼠Ｂ１６黑素瘤模型,检测其抗肿瘤作用。结果成功地克隆了ＮＤＶ ＨＮ ｃＤＮＡ,所构建的ｐｃＤＮＡ３－ＨＮ有良好的表达,动物实验显示,ｐｃＤＮＡ３－ＨＮ有增强荷瘤小鼠ＣＴＬ,ＮＫ杀伤活性的作用。结论ＮＤ     

白细胞介素-15协同新城疫病毒HN基因抗肿瘤免疫的作用

目的 探讨白细胞介素15(IL-15)质粒、新城疫病毒HN基因(PCD-HN)质粒对肿瘤免疫反应的作用。方法采用MTT法和乳酸脱氢酶释放法，检测IL-15质粒、PCD-HN质粒对小鼠抗肿瘤免疫反应作用中T淋巴细胞的增殖和NK细胞的活性。结果 IL-15质粒、PCD-HN质粒同时免疫小鼠，其淋巴细胞增殖指数和NK细胞活性的百分率明显高于其它各组。结论 IL-15质粒联合PCD-HN质粒免疫小鼠，对抑制肿瘤生长具有迭加效应。     

蛴螬提取物对人肺癌A549细胞Caspase蛋白表达的影响

目的 观察蛴螬提取物对人肺癌A549细胞凋亡时Caspase蛋白表达的影响.方法 采用MTT法检测蛴螬提取物对A549细胞增殖的抑制率,透射电子显微下观察凋亡细胞的超微结构改变,运用S-P免疫细胞化学试剂盒检测Caspase3、Caspase8和 Caspase9的表达情况.结果 蛴螬提取物对A549细胞具有明显的增殖抑制作用,并出现典型的凋亡形态变化;加药组细胞Caspase3、Caspase8和Caspase9表达均增强.结论 蛴螬提取物诱导A549细胞凋亡过程中,激活了Caspase家族.     

姜黄素对A549肺癌细胞生物学特性及YES相关蛋白1表达的影响

目的:探讨姜黄素(curcumin)对A549肺癌细胞增殖、凋亡和迁移能力以及YES相关蛋白1(YAP1)表达的影响.方法:采用CCK8法检测姜黄素对A549细胞的IC50浓度;分别用10μmol/L、20μmol/L、40μmol/L姜黄素处理A549肺癌细胞(Cur10组、Cur20组和Cur40组),CCK-8法、流式细胞术及Transwell小室实验检测姜黄素对A549细胞增殖、凋亡及迁移能力的影响;采用Western Blot检测姜黄素对YAP1蛋白表达影响.结果:姜黄素处理后,Cur10组、Cur20组和Cur40组细胞的增殖能力均显著低于BC组,增殖抑制率和凋亡率逐渐升高,迁移能力逐渐降低,且呈剂量依赖性;与对照组相比,Cur10组、Cur20组和Cur40组YAP1蛋白表达水平均显著降低,且Cur20组和Cur40组显著低于Cur10组,Cur40显著低于Cur20组.结论:姜黄素可以呈剂量依赖性抑制A549肺癌细胞增殖和迁移能力,促进其凋亡,其机制可能与对YAP1蛋白的抑制有关.     

青蒿素衍生物对非小细胞肺癌A549细胞增殖的影响

目的:观察青蒿素衍生物对非小细胞肺癌A549增殖的影响.方法:通过MTT法初步对青蒿素、双氢青蒿素和青蒿琥酯进行TC50的测定,选择低毒剂量TC10作为实验浓度,再以动态MTT法观察各青蒿素衍生物在低毒剂量下对非小细胞肺癌A549增殖的影响.结果:青蒿素、双氢青蒿素、青蒿琥酯的TC50分别为1.77 mmol/L、58.24 μmol/L、64.33 μmol/L.;在对A549细胞增殖影响中,双氢青蒿素和青蒿琥酯能延长细胞倍增时间,减缓细胞增殖周期,但青蒿素对细胞倍增时间没有影响,仅能延长细胞到达高峰期的时间.结论:青蒿素衍生物中,青蒿素抗肿瘤作用稍弱,青蒿琥酯和双氢青蒿素抗肿瘤作用较好,能同时延长细胞倍增时间和增殖周期,显示对肺癌A549细胞的增殖有直接抑制作用.     

CIK细胞对人肺癌细胞A549凋亡作用的影响

目的观察细胞因子诱导的杀伤细胞（cytokine induced killer cell,CIK）对人肺癌细胞A549凋亡作用的影响,并探讨机制。方法常规方法体外诱导生成CIK细胞,CIK细胞为效应细胞,人肺癌细胞A549为靶细胞,比较观察人肺癌细胞A549的凋亡情况。结果电镜法观察CIK细胞能诱导人肺癌细胞A549出现凋亡的超微结构变化,annexinV／PI流式细胞分析法检测早期凋亡率发现CIK实验组明显高于对照组。结论体外培养的CIK细胞可明显诱导人肺癌细胞A549凋亡。     

新城疫弱病毒对人体肿瘤的作用

新城疫弱病毒对人体肿瘤的作用首都医科大学细胞室潘李珍研究者们早就发现病毒作为一种抗肿瘤制剂具有治疗潜力。５０～７０年代，许多临床文献记载在感染腮腺炎病毒和新城疫病毒后肿瘤病人的肿瘤消退［１，２］。由于新城疫病毒（Ｎｅｗｃａｓｔｌｅｄｉｓｅａｓｅｖｉｒ...     

新城疫弱病毒对人肺腺癌细胞系A549多细胞球体的作用

用人肺腺癌细胞系Ａ５４９多细胞球体研究了新城疫弱病毒（ＮＤＶ）的抗癌细胞增殖作用。实验证明使用各种ＮＤＶ稀释液（１／２０、１／１００、１／５００）作用于球体３ｄ，均能使球体延缓生长，与对照组相比差异显著（Ｐ＜０．０５）。球体表面生长单层细胞能力的测定证实，用ＮＤＶ１／２０、１／１００稀释液处理后的球体，可以在２４孔盘中贴壁，但不能向外生长细胞，球体萎缩。ＮＤＶ１／５００稀释液作用后的球体能贴壁，但只向外生长部分细胞。对照组球体接种后立即贴壁，并向外生长大片细胞，形成较大的生长晕。     

α2—巨球蛋白对黑色素瘤细胞作用的体外实验研究

研究了α２－巨球蛋白对体外培养黑色素瘤细胞增殖，侵能力和组织蛋白酶Ｄ活力的影响。采用镜下计数，检测侵粘附在内皮细胞上＾３Ｈ－ＴｄＲ标记瘤细胞的放射性和比色测定组织蛋白酶Ｄ活性。结果：α２Ｍ可抑制瘤细胞生长，集落形成，侵袭能力和组织蛋白酶Ｄ活力。     

新城疫病毒疫苗对人卵巢癌细胞株治疗作用的研究

目的：研究新城疫病毒疫苗（ATV-NDV）对人卵巢癌细胞株体外生长的抑制作用.方法：制备人卵巢癌细胞株3A0 ATV-NDV瘤苗,将不同浓度的ATV-NDV、白细胞介素12（IL-12）、白细胞介素15（IL-15）、ATV-NDV＋IL-12、ATV-NDV＋IL-15分别与正常人外周血淋巴细胞混合培养,MTT法测定其刺激淋巴细胞增殖的程度及对肿瘤细胞的生长抑制率；HE染色法观察效靶比为50：1时活化的淋巴细胞与3A0细胞共同培养24～96 h后细胞形态学的变化.结果：活化的淋巴细胞与靶细胞共培养可杀死肿瘤细胞,并具有时效性（P＜0.05）；不同细胞间细胞生长抑制率（GIR）差异无显著性（P＞0.05）；IL-15、IL-12与ATV-NDV在活化淋巴细胞方面具有协同作用，与单独作用差异有显著性（P＜0.01）；IL-15与ATV-NDV作用差异无显著性（P＞0.05）。淋巴细胞作用48 h后3AO细胞即出现凋亡形态。结论：经ATV-NDV、IL-12、IL-15、ATV-NDV＋IL-12、ATV-NDV＋IL-15混合培养的正常人外周血淋巴细胞可有效地抑制3AO细胞株的生长,并具有时间、浓度依赖性,其作用机制是诱导细胞凋亡。     

RNA干扰沉默IGF-I R表达对非小细胞肺癌细胞生物学特性及化疗敏感性的影响

目的:评价RNA干扰(RNA interference,RNAi)技术,对人肺癌A549细胞系中胰岛素样生长因子Ⅰ类受体(IGF-I R)表达的阻断效应,和IGF-I R基因沉默后细胞增殖、凋亡等生物学特性及肿瘤细胞对化疗药物敏感性的改变.方珐:应用U6启动子,介导DNA模板转录生成短发夹样RNA(shRNA),并转染人肺癌A549细胞株,从而产生IGF-I R特异性小干扰RNA(siRNA),经RT-PCR和Western blot检测IGF-I R表达的改变;联合应用化疗药物顺铂(DDP),通过MTT法和流式细胞技术等,观察细胞生长、细胞周期、细胞凋亡及DDP半数致死量(IC50)的变化.结果:IGF-I R表达水平明显下降(抑制率高达89.8%),肿瘤细胞增殖能力明显减弱,细胞滞留于G0期的比例上升;DDP对肿瘤细胞24 h、48 h、72 h的IC50均明显减少,IGF-I R siRNAl组DDP作用72h的IC50为0.92 mg/L,明显低于control-siRNA组的3.77 mg/L,0.5 mg/L DDP联合IGF-I R siRNAl作用48 h后,A549细胞的生长抑制率达32.1%,明显高于control-siRNA组的18.9%,细胞凋亡率从27.8%上升至44.2%.结论:运用RNAi技术能有效抑制A549细胞IGF-I R的表达,使细胞增殖能力减弱,化疗敏感性增加.     

新城疫病毒NP蛋白的真核表达载体的构建

目的 研究新城疫病毒核衣壳蛋白基因的生物学作用及其抗人喉鳞癌的作用。方法 利用含有新城疫病毒Ｖ４株核衣壳蛋白基因ｃＤＮＡ的原核质粒ｐＵＶＮＰ４及真核质料ｐｃＮＤＡ３,采用基因重组技术构建了含有ＣＭＶ含动子、ＢＧＨｐｏｌｙＡ信号序列的表达新城疫病毒核衣壳蛋白的真核表达质粒。结果 酶切分析表明重组质粒中含有新城疫病毒Ｖ４株核衣壳蛋白基因。结论 重组质粒为表达新城疫病毒核衣壳蛋白基因的真核质粒。     

4-HPR体外诱导A549细胞凋亡与Bax/Bak蛋白相关性研究

目的:观察4-HPR对肺腺癌细胞A549凋亡的影响并探讨其机制。方法:不同剂量4-HPR处理A549细胞,倒置显微镜观察A549细胞形态学变化和对细胞生长的抑制作用,Hoechst33258染色观察凋亡情况,Western Blot分析凋亡相关蛋白Bax/Bak等的表达。结果:细胞数目随药物浓度增加而减少,失去正常生长,光泽度下降,变小变圆;细胞凋亡程度随药物浓度增加而增强,细胞核肿胀变圆,致密浓染或碎裂;凋亡过程,Bax/Bak、P53表达明显增加。结论:4-HPR可明显抑制肺腺癌A549细胞的增殖,增加Bax/Bak、P53的表达,促进A549凋亡,为进一步探讨4-HPR治疗肺腺癌的机制提供实验依据。     

4-HPR体外诱导A549细胞凋亡与Bcl-2家族蛋白相关性研究

目的研究4-HPR对肺腺癌细胞A549体外生长的影响及机制的初步探讨。方法MTT法观察4-HPR对肺腺癌细胞株A549的生长抑制作用,流式细胞术观察4-HPR诱导A549细胞凋亡作用和对细胞周期的影响,Western blot分析凋亡相关蛋白表达。结果4-HPR抑制A549的增殖呈剂量依赖性;4-HPR诱导A549细胞凋亡,凋亡过程伴随Bcl-2、Bcl-xS/L表达下降,而Caspase-3、Caspase-9的表达无明显变化。结论4-HPR可明显抑制肺腺癌细胞的增殖,通过降低Bcl-2和Bcl-xS/L促进A549细胞凋亡,为进一步探讨4-HPR治疗肺腺癌的机制提供实验依据。     

汉黄芩素对肺癌细胞株A549的体外作用研究

目的:探讨体外汉黄芩素对肺癌细胞株A549增殖、侵袭及凋亡的影响。方法:应用MTT(噻唑蓝)法检测汉黄芩素对于A549细胞增殖活性;用形态学方法观察汉黄芩素对A549细胞的促凋亡作用;应用Transwell法观察细胞侵袭能力。结果:汉黄芩素对A549细胞增殖和侵袭活性具有明显抑制作用,对肺癌细胞有明显促凋亡作用,镜下可见染色体聚集及细胞核碎裂。结论:汉黄芩素对肺癌A549细胞的增殖迁移均有明显抑制作用并可促进肿瘤细胞凋亡。     

新城疫病毒诱导人自然杀伤细胞杀伤喉癌细胞株Hep-2的体外研究

目的研究新城疫病毒（NDV）和紫外线灭活的新城疫病毒（NDV-UV）在体外诱导人外周血自然杀伤细胞（NK）对喉癌细胞株Hep-2的杀伤作用。方法用淋巴细胞分离液从外周血中分离单个核细胞，经贴壁黏附法去除Mφ小，尼龙毛柱去除B细胞，补体裂解法去除T细胞，得到富集的NK细胞后，用NDV和NDV—UV分别诱导NK细胞16h作为效应细胞，Hep-2细胞作为靶细胞，然后用MTT法测定NK细胞杀瘤活性，并进一步比较NDV和NDV-UV对NK细胞杀瘤活性的影响。结果NDV和NDV—UV诱导的NK细胞对Hep-2细胞的杀伤率高于未诱导组（P〈0．01），而NDV诱导组的杀瘤率高于NDV—UV诱导组（P〈0．05），随着效应细胞数量增大，NK细胞杀瘤活性逐渐增强（p〈0．01）。结论NDV和NDV—UV能在体外诱导人外周血NK细胞，使之杀瘤活性增强，NDV的诱导作用较NDV-UV强。     

新城疫病毒对裸小鼠人肺腺癌移植瘤的抑瘤作用

目的 观察新城疫病毒（NDV）对裸小鼠人肺腺癌移植瘤的抗肿瘤作用。方法 建立人肺腺癌细胞系在裸小鼠体内移植瘤动物模型,瘤体内1次局部注射NDV病毒作抗肿瘤研究,同时设PBS对照。观察5周,绘制肿瘤生长曲线,处死后量瘤并作光电镜观察其病理学改变。结果 NDV对裸小鼠人肺腺癌移植瘤的生长有明显地抑制作用（抑瘤率为71.62%)。NDV组与对照组瘤重均值之间差异显著（P＜0.01）。对照组14％的肿瘤发生肝及肺的转移。电镜下可见肿瘤细胞内NDV粒子出芽。结论 NDV对裸小鼠有俩腺癌移植瘤有明显地抑瘤作用。其抑瘤作用与NDV选择性地在肿瘤细胞内增殖并导致肿瘤细胞凋亡及溶解肿瘤细胞有关。     

不同碘制剂对人皮肤成纤维细胞黏附和增殖的影响

目的 研究碘化钾(KI)和碘伏(PI)对人皮肤成纤维细胞(HSF)的影响,初步探索碘对HSF的作用机制.方法 体外培养HSF,实验分为9组:空白对照组、3 mg/L KI组、30 mg/L KI组、300 mg/L KI组、3 000mg/L KI组、1 mg/L PI组、2 mg/L PI组、3 mg/L PI组、4 mg/L PI组分别加入不同浓度碘化钾和碘伏作用分别于第2、4、6天采用MTT检测HSF黏附和增殖情况;免疫荧光细胞化学方法观察增殖细胞核抗原(PCNA)表达.结果 3 mg/L KI组、30 mg/L KI组、300 mg/L KI组细胞黏附和增殖活性明显增强,PCNA表达增强,与对照组差异有显著性,3 000 mg/L KI组和含碘伏组细胞活性明显减弱.其中含碘伏组随碘浓度增加细胞活性越差,甚至脱水、死亡.结论 适当浓度碘化钾使体外培养HSF黏附和增殖活性增强,高浓度的碘化钾导致细胞凋亡;稀释浓度的碘佚对体外培养HSF有明显毒性作用.