人胎肝细胞悬液输注治疗各型病毒性肝炎的研究

近年来,应用胎肝细胞(FLC)悬液输注治疗重型肝炎、慢性活动性肝炎(慢活肝)及肝炎后肝硬化(肝硬化)等报道较多,均取得良好的疗效。我们曾对70例各型肝炎患者进行FLC悬液输注治疗,疗效比较满意,兹将结果报道如下。     

人胎肝细胞混悬液临床应用进展

人胎肝细胞(FLC)混悬液应用于临床始于1958年,Uphoff首先提出:输注胎肝细胞可使放射元素所致骨髓再生障碍的基因小鼠的造血完全重建,而不发生移植物抗宿主病。从此很多学者对胎肝造血细胞的特征及治疗机理的研究表明:妊娠4～6个月的胎肝中存在着丰富的造血干细胞,而且这种造血干细胞的增殖能力,较成年人造血干细胞更     

胎肝细胞质液对急性肝功能衰竭大鼠红细胞免疫粘附功能的影响

作者观察了胎肝细胞质液(FLC)对D—氨基半乳糖(D—GaL)诱发的急性肝功能衰竭大鼠红细胞免疫粘附功能(RBCIA)、肝及血清脂质过氧化物(LPO)的影响。结果发现,急性肝功能衰竭时RBCIA明显受抑,随肝功能改善而逐渐回升;肝及血清LPO明显增加,随肝功改善而逐渐降低。FLC治疗可以使RBCIA回升及体内LPO清除速度加快。本文对FLC增强RBCIA的可能机制进行了探讨。     

胎肝胞质液治疗急性肝衰竭实验研究

本研究用D—Gal造成SD大鼠急性肝衰竭,24h后腹腔内注射人胎肝胞质液(FLC),进行疗效观察。结果发现,FLC能①显著提高急性肝衰大鼠的存活率;②改善肝功能,使血清ALT、GST等肝功指标很快降至正常;③刺激肝细胞DNA合成;④促进肝组织修复;⑤加速肝内LPO清除;⑥增强红细胞免疫粘附功能。经-30℃保存3个月之FLC与新鲜制备FLC作用相近。     

胎肝细胞输注对肝病患者某些肝功能的影响

为了进一步了解胎肝细胞(FLC)在受体体内的作用,我们选择了病情稳定的病人进行了FLCT,并在输注前后,对于病人的肝功能改变进行了动态观察和交叉试验,现将结果报告如下: 材料和方法     

治疗重症肝炎的新进展(胎肝细胞悬液输注)

重症病毒性肝炎的病死率一般高达80％～90％。全国重症肝炎攻关协作组即使采用优选的综合治疗方案治疗,病死率仍高达54.54％。但自1985年国内陈成伟率先使用胎肝细胞(Fetal Liver Cells,FLC)悬液于临床治疗重症肝炎以来,国内各地众多学者也先后对FLC治疗重症肝炎进行了深入的研究和临床观察。从目前全国各地的报道看,应用FLC治疗重症肝炎,均取得令人鼓舞的疗效,具有极其良好的前景。但     

脾内移植基因修饰鼠胎肝细胞的生物学特征

目的探讨基因修饰(genemodification,GM)胎肝细胞(fetallivercells,FLC)脾内移植途径介导细胞因子基因治疗的可行性和有效性,为肿瘤放疗病人免疫和造血功能的恢复提供一种治疗手段和途径.方法将经LacZ或粒/巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)基因体外修饰的小鼠FLC脾内注射后,观察其生物学行为.结果①病毒/细胞感染比率(MOI)为50,转染时间为2h时,能获得80%～85%的转染效率;②通过FACS分析,基因转移体系对FLC群体的细胞周期、凋亡细胞比例以及CD34+细胞含量无明显影响;③照射小鼠尾静脉注射FLC-GM后,其8d脾克隆形成单位(CFU-S8)数目明显升高,提示GM-CSF基因转染有助于促进FLC中较晚期定向干细胞的增殖、分化以及体内植入;④[1]1In标记的FLC脾内移植后2h即有20%～25%细胞转位于肝脏,48h肝内移入量最高,达50%～55%,并持续至检测第5天,只有22%左右的肝细胞滞留于脾脏;⑤血清分泌水平在脾内移植后48h最高,达(356±58)pg/ml,此时行脾切除,GM-CSF仍具有一定量的表达水平;⑥同种异体FLC-GM脾内移植引起的宿主迟发型变态反应(DTH)强度明显弱于同种异体脾细胞皮下致敏组(对照组).结论基因修饰的FLC能够保持其原有的生物学性质,脾内注射后能转位于肝脏,同化人宿主肝内长期存活,并发挥正常功能.     

层状纤维性肝细胞肝癌

肝细胞癌的预后很差.近几年来提出一种特殊类型的肝细胞癌-层状纤维性肝癌(fibrolamellar carcinoma of liver,简称FLC).它和普通型肝癌相比,具有独特的病理形态,有较高的手术切除率和较长的生存期,预后远比一般肝癌良好.FLC最早由Edmondson(1956年)在     

粒细胞集落刺激因子保护急性损伤人胎肝细胞的实验研究

目的建立D-半乳糖胺(D-galactosamine,D-GalN)对人胎肝细胞急性损伤的模型,观察粒细胞集落刺激因子(Granulocyte-colony stimulating factor,G-CSF)对人胎肝细胞损伤的保护作用。方法分别用梯度浓度的D-GalN和不同的作用时间孵育人胎肝细胞,用四唑盐比色法(MTT法)检测细胞活性,以确定最佳的人胎肝细胞急性损伤造模条件。将胎肝细胞分为4组进行不同处理:第1组为空白对照组,第2组(G组)用G-CSF处理正常细胞,第3组(ND组)和第4组(GD组)都用D-GalN进行损伤造模,但GD组加入G-CSF作为治疗,第3组加入等量的0.9%氯化钠溶液作为实验对照。最后用MTT法和乳酸脱氢酶(LDH)释放量检测各组细胞活性。结果当D-GalN浓度为10 mg/ml,作用时间为12 h时,可以杀伤90%以上的人胎肝细胞,并且可以保证有足够的药物反应时间。空白对照组和G组的细胞活性差异无统计学差异,但GD组细胞活性明显高于ND组(P0.05)。结论 D-GalN对人胎肝细胞急性损伤的造模条件为D-GalN 10 mg/ml作用12 h。G-CSF对D-GalN造成的人胎肝细胞急性损伤具有保护作用。     

人胎肝细胞治疗重症肝炎,慢活肝和肝硬化现状

现将1989年7月“全国人胎肝临床应用研讨会”有关胎肝治疗重症病毒性肝炎、慢性活动型肝炎和肝硬化的论文概述如下: 一、人胎肝细胞治疗肝病的临床应用(一)重症病毒性肝炎:由于肝细胞再生能力很强,如果是一种既能暂时替代肝细胞的功能,又能刺激肝细胞再生和调节机体免疫的方法,则有可能降低重症肝炎的病死率。近几年,人胎肝细胞     

氟致人胎肝细胞氧化应激与细胞凋亡关系的研究

目的：研究氟致人胎肝细胞氧化应激和细胞凋亡之间的关系。方法：体外培养的人胎肝细胞接触不同浓度的氟化钠24h后，检测人胎肝细胞凋亡百分率、细胞周期构成比、脂质过氧化物(LPO)、还原型谷胱甘肽(GSH)和培养液中LPO水平以及乳酸脱氢酶（LDH)、丙氨酸转氨酶(ALT)和天冬氨酸转氨酶(AST)的活性。结果：氟染毒组培养液中LDH和AST活性均显著高于对照组；细胞内和上清液中LPO水平升高，细胞内GSH则明显下降，并且二者均与氟浓度呈现明显的剂量一效应关系；氟可使人胎肝细胞凋亡百分率明显升高，S期细胞数增多。结论：氟可致人胎肝细胞氧化应激，诱导细胞凋亡，一定浓度范围内的氟所诱导的氧化应激与细胞凋亡之间呈现明显的正相关关系。     

纤维板层型肝细胞癌研究进展

纤维板层型肝细胞癌(FLC)是肝细胞癌(HCC)的一种少见组织学类型,它与普通肝癌相比,具有较高的手术切除率和较长的生存期,预后远比一般肝细胞癌良好,本文将该病研究进展作一综述。 一、发生情况 FLC常见于年青人,年龄为5～35岁之间,Craig报告的21例中,最小年龄5岁,最大69岁,平均24.6岁。一般普通HCC男性远多于女性。而FLC两性发病率无明显差异,有的报道女性多于男性,未发现与口服避孕药有关,与病毒性感染无相关。 二、临床表现 FLC与HCC在临床表现上相仿,但前者病程缓慢,症状出现平均时间为11个月,平均生存32个月,而HCC症状出现时间平均为2.8个月,平均生存为6个月左右。腹痛、右上腹不适及体重减     

人肝细胞生长因子重组腺病毒的构建及其对人胎肝细胞细胞周期的影响

目的　利用AdEasy系统构建人肝细胞生长因子 (HGF)复制缺陷型重组腺病毒 (AdHGF) ,并观察其对人胎肝细胞细胞周期的影响。方法　将质粒 pUCHGF扩增、酶切获得人HGFcDNA片段 ,插入腺病毒穿梭载体质粒 pAdTrack巨细胞病毒 (CMV )启动子下游 ,构建重组穿梭载体pAdTrack CMV HGF ,线性化后与骨架载体AdEasy 1在细菌BJ5 183内同源重组得到腺病毒质粒 pAdHGF ,经 2 93细胞包装后得到复制缺陷型重组腺病毒AdHGF ;将AdHGF体外感染人胎肝细胞 ,以RT PCR检测HGF在胎肝细胞的表达 ;同时通过流式细胞仪测定AdHGF对胎肝细胞细胞周期的作用。结果　连接、重组后通过酶切和测序法筛选出pAdHGF ;经 2 93细胞包装 ,3d后观察到绿色荧光蛋白 (GFP)明显表达 ,氯化铯梯度离心纯化最终获得约 4× 10 10 efu/ml滴度的重组病毒 ;AdHGF体外感染人胎肝细胞 3d后 ,HGF表达明显增加 ,流式细胞仪检测结果显示感染后的胎肝细胞由G0 /G1期向S期和G2 /M期转化。结论　利用新型腺病毒载体AdEasy系统可在短期内制备同时表达GFP和HGF的重组腺病毒Ad HGF ;AdHGF体外感染胎肝细胞可显著提高HGF的表达并促进肝细胞增殖 ,这将为肝细胞移植和基因治疗肝纤维化提供新的手段。     

年轻患者纤维板层型肝细胞癌的预后因素分析

据【《J Pediatr Surg》2015年1月报道】题:年轻患者纤维板层型肝细胞癌的预后因素分析(作者Darcy DG等)纤维板层型肝癌(FLC)是肝细胞癌的一种特殊类型,多见于儿童及青少年,多无肝炎及肝硬化病史,甲胎蛋白、HBs Ag常为阴性,肿瘤发现时体积常超过10 cm,CT常能发现瘤灶中心瘢痕和钙化灶。手术切除是治疗FLC的主要办法,与普通型肝细胞癌相比,切除率高、预后相对好。该病好发于并不伴有肝硬化的青少年,来自纽约     

原代培养人胎肝细胞体外感染HBV的研究

目的建立HBV感染人胎肝细胞体外培养系统。方法 首先分离、培养人胎肝细胞，然后应用HBV阳性血清感染体外培养的人胎肝细胞；每隔2d收集上清液和肝细胞，应用ELISA,免疫组化法、原位杂交法和斑点杂交法检测上清液和细胞中HBsAg和HBV DNA。结果 上清液中HBsAg在感染后2d～20d均可测出，以感染后4d～16d达高峰(A值在0．22左右)。免疫组化检测细胞中HBsAg呈阳性表达，原位杂交和斑点杂交检测细胞和上清液中HBV DNA也呈阳性表达。结论 HBV在原代培养人胎肝细胞中能稳定复制和表达至少达16d。     

肝干细胞的分离培养

分离鼠胎肝细胞 ,观察人肝细胞生长肽 (ＨＧＰ)和小鼠白血病抑制因子 (ｍＬＩＦ)对鼠胎肝细胞生长和肝干细胞集落形成的影响。从大鼠胚胎 ( 12日龄 )肝中分离肝细胞 ,采用ＭＴＴ比色法、3Ｈ ＴｄＲ掺入法和碱性磷酸酶 (ＡＫＰ)检测法。结果表明 ,人ＨＧＰ能剂量依赖性地促进胎肝细胞的ＤＮＡ合成和增殖 ,50 0～ 2 0 0 0Ｕ/ｍｌ的ｍＬＩＦ能明显促进肝干细胞集落的生长和维持未分化状态。肝干细胞培养基的组成为 :5%ＦＢＳ(国产或进口 ) ,10 %国产ＮＣＳ ,0 .14ｍＭ的β ＭＥ ,4 0ｎｇ/ｍｌ伴白蛋白 ,10ｎｇ/ｍｌ的人ｂＦＧＦ ,0 .5～ 1.0 μ…     

体外培养妊娠早期人胎肝细胞对乙型肝炎病毒易感性的变化

目的观察妊娠早期(孕10周)人胎肝细胞在不同的体外培养条件下对乙型肝炎病毒(HBV)易感性的变化，为HBV受体的发现和鉴定打下基础。方法设计无血清培养基，分别添加不同的细胞分化诱导物，在不同时相以HBV感染原代培养10周孕龄人胎肝细胞，检测细胞形态、功能及HBV感染标志物。结果培养基中添加2．5mmol／L苯巴比妥钠，培养6d后细胞逐渐出现成熟肝细胞标志，并可被HBV感染；其他培养条件下则不能观察到HBV的成功感染。结论苯巴比妥钠可在体外培养时诱导早期人胎肝细胞分化，并出现HBV易感性。     

鼠特异性Fas抗体对人鼠嵌合肝中人肝细胞增殖的促进作用

目的: 探讨人胎肝细胞移植联合使用Jo2抗体的策略,促进人胎肝细胞在小鼠肝内存活和增殖.方法:裸鼠经脾移植1×106人胎肝细胞,移植后第1天ip JO2抗体,剂量为0.2mg/kg,1次/wk,持续12 wk为实验组,裸鼠经人胎肝细胞移植后未给予JO2抗体为对照组,建立人鼠嵌合肝动物模型.采用HE染色、原位末端标记方法(TUNEL染色)观察未经人胎肝细胞移植而给予JO2抗体24 h后处死的裸鼠肝脏组织.免疫组化、逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测不同时相点实验组和对照组嵌合肝中肝组织人白蛋白、特异人增殖细胞核抗原(PCNA)和人白蛋白mRNA表达.结果:未经人胎肝细胞移植而给予JO2抗体的裸鼠病理组织切片发现肝组织出血、坏死和细胞凋亡.实验组和对照组裸鼠均能存活至24 wk.移植后嵌合鼠肝组织表达人白蛋白和人PCNA阳性细胞的时间:实验组2-20 wk,对照组2-12 wk; 白蛋白mRNA表达:实验组4-16wk, 对照组4-8 wk:实验组与对照组移植后8、12 wk PCNA表达差异有显著性(25.7%±8.5% vs 13.4%±7.8%, 29.4%±5.0% vs 8.5%±2.3%,均P<0.05).结论:人肝细胞异种移植于裸鼠体内能够存活,经小剂量JO2抗体ip裸鼠,使人鼠嵌合肝中人肝细胞得以增殖,存活时间延长.     

大鼠肝干细胞的分离培养

目的 分离大鼠胎肝细胞,观察人肝细胞生长肽(HGP)和小鼠白血病抑制因子(mLIF)对其生长和肝干细胞集落形成的影响。方法 从大鼠胚胎(12日龄)肝中分离肝细胞,采用MTT比色法、~3H-TdR掺入法和碱性磷酸酶(AKP)检测法。结果 人HGP能剂量依赖性地促进胎肝细胞的DNA合成和增殖,500～2000u/ml的mLIF能明显促进肝干细胞集落的生长和维持未分化状态。肝干细胞培养基的组成为:5％FBS(国产或进口),10％国产NCS,0.14mM的β-ME,40ng/ml伴白蛋白,10ng/ml的人bFGF,0.5μg～1.0μg/ml的HGP,1000u/ml mLIF,1％非必需氨基酸的高糖DMEM培养基。AKP染色阳性细胞在上述培养基中传至6代仍生长良好和保持未分化状态。结论 从胎鼠肝中能分离到肝干细胞,人HGP能促进鼠胎肝细胞的生长,而mLIF对促进肝干细胞生长和维持未分化是必要的。     

体外培养人胎肝细胞色氨酸吸收试验——测定培养肝细胞功能的新方法

为了提高和确保培养人胎肝细胞对治疗重症肝病的疗效,我们用体外人胎肝细胞色氨酸吸收试验,来检测胎肝细胞的生物功能,取得了满意的结果。