NGF对局灶性脑缺血/再灌注大鼠海马tau蛋白磷酸化作用的影响

目的探讨外源性神经生长因子(NGF)对局灶性脑缺血/再灌注大鼠海马神经元tau蛋白过度磷酸化的影响。方法用线栓法制作局灶性脑缺血/再灌注模型,应用免疫组织化学SABC法、Westernblot和图像分析方法检测大鼠海马CA1区tau蛋白在Ser199/202位点磷酸化程度和总tau蛋白表达,以及NGF对tau蛋白过度磷酸化的影响。结果缺血/再灌注组海马CA1区tau蛋白在Ser199/202位点磷酸化水平和总tau蛋白明显升高(P<0·05);NGF组大鼠海马tau蛋白在Ser199/202位点磷酸化水平明显低于缺血/再灌注组,总tau也下降(P<0·05)。结论NGF明显减轻局灶性脑缺血/再灌注大鼠海马tau蛋白磷酸化程度,降低tau蛋白磷酸化水平可能对缺血神经元起保护作用。     

乌司他丁对脑出血大鼠局部黏着斑激酶 /细胞外信号调节激酶信号通路及神经元凋亡的影响

目的探讨乌司他丁( UTI)对脑出血( ICH)大鼠局部黏着斑激酶( FAK)/细胞外信号调节激酶( ERK)信号通路及神经元凋亡的影响。方法建立 ICH大鼠模型,使用随机数字表法将造模成功的大鼠随机分为模型组(尾静脉注射 0.9%氯化钠溶液)、抑制剂组( FAK抑制剂 PF562271,50 mg/kg灌胃)、 UTI组(尾静脉注射 10万 U/kg UTI)、 UTI+抑制剂组( FAK抑制剂 PF562271,50 mg/kg灌胃同时尾静脉注射 10万 U/kg UTI)每组 20只,另设 20只为假手术组(尾静脉注射 0.9%氯化钠溶液)作为对照,所有处理均每天 1次,连续 7d。干湿比重法测定各,组大鼠脑组织含水率;酶联免疫吸附(ELISA)法各组大鼠血清中炎性因子含量;原位末端标记( TUNEL)法检测各组大鼠海马组织神经元凋亡;免疫组织化学分析法检测大鼠海马组织抗凋亡因子 B细胞淋巴瘤 -2(Bcl-2)和促凋亡因子 Bcl相关 X(Bax)、胱天蛋白酶 3(caspase-3)表达;尼氏染色法检测各组大鼠海马组织中神经元存活情况;蛋白质印迹法( Western blotting)法检测大鼠海马组织中 FAK蛋白表达和 ERK1/2磷酸化水平。结果与假手术组相比,模型组大鼠脑组织含水率( 84.51±7.42)%、炎性因子含量、神经元凋亡指数( 44.51±3.77)%以及促凋亡因子 Bax(3.05±0.41)、 caspase-3(3.27±0.46)表达和 ERK1/2磷酸化水平升高,神经元存活数目、抑凋亡因子 Bcl-2(1.23±0.21)表达以及 FAK(0.29±0.07)蛋白表达水平降低( P<0.05)。与模型组相比, UTI组大鼠脑组织含水率(71.43±6.11)%、炎性因子含量、神经元凋亡指数( 15.34±0.76)%以及促凋亡因子 Bax(2.03±0.15)、 caspcase-3(2.27±0.61)表达和 ERK1/2磷酸化水平降低,神经元存活数目、抑凋亡因子 Bcl-2(2.67±0.27)表达以及 FAK(0.58±0.09)蛋白表达升高( P<0.05);抑制剂组大鼠脑组织含水率( 92.83±7.56)%、炎性因子含量、神经元凋亡指数( 51.99±5.65)%以及促凋亡因子 Bax(3.73±0.37)、 caspcase-3(3.99±0.26)表达和 ERK1/2磷酸化水平升高,神经元存活数目、抑凋亡因子 Bcl-2(0.73±0.06)表达以及 FAK(0.12±0.02)蛋白表达水平降低( P<0.05)。与 UTI组相比, UTI+抑制剂组大鼠脑组织含水率( 84.16±6.76)%、炎性因子含量、神经元凋亡指数( 43.22±4.07)%以及促凋亡因子 Bax(2.98±0.35)、 caspcase-3(3.26±0.31)表达和 ERK1/2磷酸化水平升高,神经元存活数目、抑凋亡因子 Bcl-2(1.27±0.12)表达以 及 FAK(0.28±0.03)蛋白表达水平降低( P<0.05)。结论 UTI可通过促进 FAK蛋白表达,抑制 ERK磷酸化,进而抑制 ICH大鼠神经元凋亡。     

氢溴酸樟柳碱对急性脑缺血再灌注损伤模型大鼠脑组织细胞凋亡及ERK1/2磷酸化水平的影响

目的:研究氢溴酸樟柳碱对急性脑缺血再灌注损伤模型大鼠脑组织细胞凋亡及细胞外信号调节蛋白激酶1/2(ERK1/2)磷酸化(p-ERK1/2)水平的影响。方法:将大鼠随机分为假手术组、模型组、阳性对照组(尼莫地平1.0 mg/kg)和氢溴酸樟柳碱高、中、低、极低剂量组(1.2、0.6、0.3、0.15 mg/kg),每组8只,采用线栓法建立大鼠急性脑缺血再灌注损伤模型。分别于脑缺血2 h和再灌注6 h时对各组大鼠尾iv给药1次,再灌注22 h后检测各组大鼠脑组织三磷酸腺苷(ATP)酶活性、Ca~(2+)含量、细胞凋亡情况、脑组织中p-ERK1/2蛋白表达和p-ERK1/2/总ERK1/2(t-ERK1/2)比例。结果:与假手术组比较,模型组大鼠脑组织ATP酶活性明显降低、Ca~(2+)含量明显增加、凋亡细胞密度明显增加,以上差异均有统计学意义(P<0.01)。与模型组比较,各给药组大鼠脑组织凋亡细胞密度均明显减小,阳性对照组和氢溴酸樟柳碱高、低剂量组大鼠脑组织Ca~(2+)含量均明显降低,氢溴酸樟柳碱高、低、极低剂量组大鼠脑组织中p-ERK1/2/t-ERK1/2比例均明显增加,以上差异均有统计学意义(P<0.05或P<0.01);其余差异均无统计学意义(P>0.05)。结论:氢溴酸樟柳碱能抑制急性脑缺血再灌注损伤模型大鼠脑组织细胞凋亡,其作用机制可能与激活ERK1/2信号通路和调节ATP酶活性,进而降低脑组织Ca~(2+)含量有关。     

缺血性脑损伤中硝酸甘油对神经元的保护及Akt信号通路的影响

目的探讨硝酸甘油（NG）对大鼠缺血性脑缺血再灌注中Akt和Bad（ser136）磷酸化的影响。方法36只健康SD（Sprague-Dawley）大鼠随机分为假手术组、缺血再灌注组（对照组）、硝酸甘油组。以大鼠四肢动脉结扎脑缺血模型为基础,应用焦油紫染色法检测海马CA1区神经元凋亡,采用免疫印迹检测Akt和Bad（ser136）的磷酸化。结果硝酸甘油组脑海马CA1区神经元凋亡显著少于对照组（P〈0.05）;硝酸甘油组Akt、Bad（ser136）的磷酸化显著高于对照组（P〈0.05）。结论硝酸甘油能显著减轻脑缺血再灌注后脑海马CA1区神经元凋亡,明显提高Akt、Bad（ser136）的磷酸化水平,对脑缺血再灌注损伤起到保护作用。     

白藜芦醇预处理对局灶性脑缺血/再灌注大鼠海马CA1区神经元凋亡的保护作用和机制

目的探讨白藜芦醇(resveratrol,Res)预处理对局灶性脑缺血/再灌注大鼠海马CA1区神经元凋亡的保护作用及其机制。方法♂SD大鼠60只,随机分为假手术组(Sham)、缺血/再灌注组(I/R)、白藜芦醇预处理组(Res+I/R),每组20只。采用线栓法阻断大脑中动脉血供90 min,拔出栓线造成局部脑区缺血/再灌注损伤。Res+I/R组缺血前1 h腹腔注射白藜芦醇(30 mg·kg-1)。缺血/再灌注后第5天,TUNEL法原位标记海马CA1区凋亡的神经元细胞,免疫组化法检测海马CA1区PI3K、p-Akt及Caspase-3的表达。结果 TUNEL染色结果显示,与I/R组相比较,白藜芦醇预处理明显减少脑缺血/再灌注损伤所引起的大鼠海马CA1区神经元凋亡(P<0.05);免疫组织化学结果显示,与I/R组相比,白藜芦醇预处理使海马CA1区PI3K、p-Akt表达明显增多(P<0.05),Caspase-3表达明显减少(P<0.05)。结论缺血前1 h白藜芦醇预处理对局灶性脑缺血大鼠海马CA1区神经元凋亡具有保护作用,其主要作用机制可能是通过激活PI3K-Akt信号通路进而抑制凋亡相关蛋白Caspase-3的表达有关。     

脑缺血再灌注后CIDE-B表达与神经元凋亡的关系

目的探讨大鼠脑缺血/再灌注损伤后细胞死亡DNA片段裂解因子45样因子B(CIDE-B)表达与海马神经元凋亡的关系。方法成年健康雄性Wistar大鼠,应用线栓法建立大鼠大脑中动脉缺血再灌注模型,TUNEL法染色观察海马神经元凋亡,免疫组化法和Western blot法检测海马神经元CIDE-B蛋白表达,RT-PCR检测CIDE-B mRNA表达。结果与假手术组比较,脑缺血2h再灌注6h,1d,3d,7d,14d,凋亡神经元显著增加(P0.01),CIDE-B mRNA和CIDE-B蛋白表达明显增强加(P0.01);至缺血2h再灌注28d神经元凋亡数量显著较少,CIDE-B mRNA和蛋白表达明显减弱(P0.01),细胞凋亡与CIDE-B基因表达的时相一致。结论脑缺血再灌注损伤后CIDE-B表达与神经元凋亡呈时相依赖性。     

不同时程治疗性浅低温对大鼠脑缺血再灌注损伤的影响

目的 评价不同时程治疗性浅低温对大鼠脑缺血再灌注损伤的影响.方法 健康成年雄性SD大鼠72只,体重250～300g,采用随机数字表法,将其随机分为6组(n=12):假手术组(S组)、脑缺血再灌注损伤组(IR组)、缺血后即刻治疗性浅低温组(MTH1组)、缺血再灌注即刻治疗性浅低温组(MTH2组)、缺血再灌注后1h治疗性浅低温组(MTH3组)和缺血再灌注后2h治疗性浅低温组(MTH4组).IR组、MTH1组、MTH2组、MTH3组和MTH4组采用线栓法进行脑缺血6h再灌注制备大鼠脑缺血再灌注损伤模型,S组不置入线栓.S组和IR组置于室温下,MTH1组、MTH2组、MTH3组和MTH4组分别于大鼠脑缺血后即刻、缺血再灌注即刻、再灌注后1h及再灌注后2h时进行治疗性浅低温处理并维持4h.于再灌注后24h进行改良神经系统损害严重程度评分(NSS评分),行为学测试结束后取大鼠脑组织,采用TTC染色检测脑梗死体积,TUNEL检测神经元凋亡情况,化学比色法检测脑组织超氧化物歧化酶(SOD)及丙二醛(MDA)活性,ELISA法测定脑组织肿瘤坏死因子-α(TNF-α)及白细胞介素-6(IL-6)水平,Western-blot法检测脑组织Caspase-3、Bax及Bcl-2蛋白表达.结果 与S组比较,其余5组大鼠NSS评分、脑梗死体积、梗死体积百分比、神经元凋亡指数、脑组织MDA活性、TNF-α、IL-6水平、Cas-pase-3及Bax表达均升高,脑组织SOD活性及Bcl-2表达降低(P<0.05);与IR组比较,MTH1组、MTH2组、MTH3组和MTH4组大鼠NSS评分、脑梗死体积、梗死体积百分比、神经元凋亡指数、脑组织MDA活性、TNF-α、IL-6水平、Caspase-3及Bax表达均降低,脑组织SOD活性及Bcl-2表达升高(P<0.05);与MTH1组比较,MTH2组、MTH3组和MTH4组大鼠NSS评分、脑梗死体积、梗死体积百分比、神经元凋亡指数、脑组织MDA活性、TNF-α、IL-6水平、Caspase-3及Bax表达均升高,脑组织SOD活性及Bcl-2表达降低(P<0.05);与MTH2组比较,MTH3组和MTH4组NSS评分、脑梗死体积、梗死体积百分比、神经元凋亡指数、脑组织MDA活性、TNF-α、IL-6水平、Caspase-3及Bax表达均升高,脑组织SOD活性及Bcl-2表达降低(P<0.05).结论 治疗性浅低温可减轻大鼠脑缺血再灌注损伤,且在脑缺血后即刻进行治疗性浅低温处理效果最佳.     

不同时程治疗性浅低温对大鼠脑缺血再灌注损伤的影响

目的 评价不同时程治疗性浅低温对大鼠脑缺血再灌注损伤的影响.方法 健康成年雄性SD大鼠72只,体重250～300g,采用随机数字表法,将其随机分为6组(n=12):假手术组(S组)、脑缺血再灌注损伤组(IR组)、缺血后即刻治疗性浅低温组(MTH1组)、缺血再灌注即刻治疗性浅低温组(MTH2组)、缺血再灌注后1h治疗性浅低温组(MTH3组)和缺血再灌注后2h治疗性浅低温组(MTH4组).IR组、MTH1组、MTH2组、MTH3组和MTH4组采用线栓法进行脑缺血6h再灌注制备大鼠脑缺血再灌注损伤模型,S组不置入线栓.S组和IR组置于室温下,MTH1组、MTH2组、MTH3组和MTH4组分别于大鼠脑缺血后即刻、缺血再灌注即刻、再灌注后1h及再灌注后2h时进行治疗性浅低温处理并维持4h.于再灌注后24h进行改良神经系统损害严重程度评分(NSS评分),行为学测试结束后取大鼠脑组织,采用TTC染色检测脑梗死体积,TUNEL检测神经元凋亡情况,化学比色法检测脑组织超氧化物歧化酶(SOD)及丙二醛(MDA)活性,ELISA法测定脑组织肿瘤坏死因子-α(TNF-α)及白细胞介素-6(IL-6)水平,Western-blot法检测脑组织Caspase-3、Bax及Bcl-2蛋白表达.结果 与S组比较,其余5组大鼠NSS评分、脑梗死体积、梗死体积百分比、神经元凋亡指数、脑组织MDA活性、TNF-α、IL-6水平、Cas-pase-3及Bax表达均升高,脑组织SOD活性及Bcl-2表达降低(P<0.05);与IR组比较,MTH1组、MTH2组、MTH3组和MTH4组大鼠NSS评分、脑梗死体积、梗死体积百分比、神经元凋亡指数、脑组织MDA活性、TNF-α、IL-6水平、Caspase-3及Bax表达均降低,脑组织SOD活性及Bcl-2表达升高(P<0.05);与MTH1组比较,MTH2组、MTH3组和MTH4组大鼠NSS评分、脑梗死体积、梗死体积百分比、神经元凋亡指数、脑组织MDA活性、TNF-α、IL-6水平、Caspase-3及Bax表达均升高,脑组织SOD活性及Bcl-2表达降低(P<0.05);与MTH2组比较,MTH3组和MTH4组NSS评分、脑梗死体积、梗死体积百分比、神经元凋亡指数、脑组织MDA活性、TNF-α、IL-6水平、Caspase-3及Bax表达均升高,脑组织SOD活性及Bcl-2表达降低(P<0.05).结论 治疗性浅低温可减轻大鼠脑缺血再灌注损伤,且在脑缺血后即刻进行治疗性浅低温处理效果最佳.     

益智胶囊对大鼠脑弥散性缺血再灌注后海马CA1区神经元迟发性死亡的影响

目的 :观察益智胶囊对大鼠全脑缺血后海马CA1区神经元迟发性死亡及学习功能的影响。方法 :使用四血管闭塞 (4 VO)法制成大鼠急性全脑缺血再灌注模型。采用免疫组织化学方法计数脑缺血再灌注脑损伤后 1、2、4、8及 4 0d后 ,大鼠海马CA1区正常神经元数量 ;并用Morriss水迷宫观察脑缺血再灌注脑损伤后 4 0d时各组大鼠的学习记忆功能。结果 :从缺血再灌注后d 2起 ,益智胶囊(10 0mg·kg-1)组大鼠海马CA1区正常神经元数量明显多于缺血对照组大鼠海马CA1区正常神经元数量 ,差异有明显统计学意义 (P <0 .0 1)。同时 ,Morris水迷宫法检测全脑缺血再灌注脑损伤后 4 0d时各组大鼠记忆功能 ,益智胶囊 (10 0mg·kg-1)组大鼠明显好于缺血对照组大鼠 (P <0 .0 1)。结论 :益智胶囊对全脑缺血后大鼠海马CA1区神经元具有保护作用 ,并可改善大鼠的记忆功能障碍     

葛根素对大鼠脑缺血再灌注后Caspase-3表达的影响

目的:研究葛根素对缺血再灌注大鼠海马神经元Caspase-3表达的影响。方法:用插线法制作大鼠大脑中动脉闭塞(middlecerebralarteryocclusion,MCAO)局灶性脑缺血再灌注模型,左侧MCAO1h,再灌注23h后处死,对照组给予生理盐水,葛根素组给予葛根素。苏木精-伊红染色观察缺血侧海马区组织形态学改变,海马区Caspase-3的表达通过免疫组化来测定。结果:对照组、葛根素组、假手术组缺血侧海马区平均密度值分别为0.13±0.01、0.07±0.01、0.05±0.01。对照组大鼠缺血侧海马区Caspase-3的表达较假手术组显著增强(P<0.01),给予葛根素处理后,Caspase-3的表达减弱(P<0.01)。对照组缺血侧海马区许多神经元有凋亡现象,葛根素组凋亡神经元减少,假手术组偶见凋亡神经元。结论:脑缺血再灌注损伤可致海马区Caspase-3的表达增加,凋亡神经元增多。葛根素可下调海马区Caspase-3的表达,抑制神经元的凋亡,对脑组织可能有保护作用。     

Effects of huperzine A on memory deficits and neurotrophic factors production after transient cerebral ischemia and reperfusion in mice

This study is to investigate the effects of huperzine A on memory deficits, neuronal damage and neurotrophic factors production after transient cerebral ischemia and reperfusion in mice, as well as the potential downstream signaling pathway. Bilateral common carotid occlusion (BCCAo) combined with systemic hypotension induced severe memory deficits in a water maze task and neuronal degeneration in cerebral cortex and hippocampus in mice. Oral administration of huperzine A (0.2 mg/kg, once per day, started 2 days before surgery and lasted for 7 days after surgery) markedly attenuated the memory deficits and neuronal damage. Meanwhile, huperzine A significantly increased the mRNA and protein levels of NGF, BDNF and TGF-beta(1), and potentiated phosphorylation of MAPK/ERK 1/2 in both cerebral cortex and hippocampus compared with transient cerebral ischemia and reperfusion group. This study provides evidence for the protective effects of huperzine A against transient cerebral ischemia and reperfusion in mice, and suggests potentially important roles that neurotrophic factors might play in these effects. It also indicates that the MAPK/ERK pathway might be involved in the in vivo neurotrophic effects of huperzine A against transient cerebral ischemia and reperfusion.     

Lithium regulates hippocampal neurogenesis by ERK pathway and facilitates recovery of spatial learning and memory in rats after transient global cerebral ischemia

Recent studies have demonstrated that lithium has a neuroprotective effect against brain ischemia. Whether this effect is mediated by hippocampal neurogenesis remains unknown. The ERK (extracellular signal-regulated kinase) pathway plays an essential role in regulating neurogenesis. The present study was undertaken to investigate whether lithium regulates hippocampal neurogenesis by the ERK pathway and improves spatial learning and memory deficits in rats after ischemia. Rats were daily injected with lithium (1 mmol/kg) and 2 weeks later subjected to 15-min ischemia induced by four-vessel occlusion method. 5-bromo-2'-deoxyuridine (Brdu; 50mg/kg) was administrated twice daily at postischemic day 6, or for 3 days from postischemic day 6 to 8. We found that lithium increased the ERK1/2 activation after ischemia by western blotting analysis. There was a significant increase in Brdu-positive cells in the hippocampal dentate gyrus after lithium treatment, compared with ischemia group at postischemic days 7 and 21; furthermore, the survival rate of Brdu-positive cells was elevated by lithium. Inhibition of the ERK1/2 activation by U0126 diminished these effects of lithium. The percentages of Brdu-positive cells that expressed a neuronal marker or an astrocytic marker were not significantly influenced by lithium. Moreover, lithium improved the impaired spatial learning and memory ability in Morris water maze, and U0126 attenuated the behavioral improvement by lithium. These results suggest that lithium up-regulates the generation and survival of new-born cells in the hippocampus by the ERK pathway and improves the behavioral disorder in rats after transient global cerebral ischemia.     

椒苯酮胺对全脑缺血/再灌注损伤大鼠的保护作用

目的:探讨新型钙增敏剂椒苯酮胺(piperphentonamine,PPTA)对全脑缺血/再灌注损伤大鼠的保护作用。方法:采用四血管阻断法建模。造模成功后,SD大鼠随机分为正常组、模型组、低、中和高剂量PPTA组(2.5,5,10 mg.kg-1)。Morris水迷宫测定大鼠学习记忆能力;Nissl染色观察海马神经元丢失情况;LDH试剂盒检测LDH活力;real-time PCR检测海马bax/bcl-2,caspase-3和iNOS mRNA的表达。结果:与模型组比较,5和10 mg.kg-1PPTA组大鼠逃避潜伏期显著缩短;细胞损伤减轻和LDH的释放减少;bax/bcl-2,caspase-3和iNOS基因表达下调。结论:PPTA能显著减轻脑缺血损伤大鼠海马神经元的凋亡和细胞损伤,并能有效改善其学习记忆能力。     

缺血性脑损伤中HSP72对神经元保护作用的实验研究

目的探讨缺血性脑损伤中HSP72对大鼠神经元的保护作用及其分子机制。方法将SD大鼠随机分为假手术组、缺血再灌注对照组、热休克处理组、HSP72反义寡核苷酸组及溶剂组。采用焦油紫染色、免疫印迹检测大鼠缺血再灌注后海马神经元损伤和脑组织AKT、Bad（Ser136）的磷酸化情况。结果热休克处理组与缺血再灌注对照组、HSP72反义寡核苷酸组和溶剂组相比海马神经元损伤减轻,脑组织AKT和Bad（Ser136）磷酸化升高（P〈0.05）。结论HSP72可能通过升高脑组织中AKT和Bad（Ser136）的磷酸化程度起到海马神经元保护作用。     

芬太尼后处理联合缺血后适应对心肌缺血再灌注兔超氧化物歧化酶酶蛋白活力浓度和丙二醛浓度的影响

目的：观察芬太尼后处理联合缺血后适应对心肌缺血再灌注兔超氧化物歧化酶（ SOD）酶蛋白活力浓度、丙二醛（ MDA ）浓度的影响。方法32只日本大耳白兔采用随机区组法随机分为四组（每组8只）,采用结扎兔左冠状动脉前降支30 min、复灌120 min建立心肌缺血再灌注模型。假手术组：动脉下仅穿线不结扎;缺血再灌注组：直接恢复再灌注;缺血后适应组：缺血后30 min即刻给予3轮复灌30s/缺血30s作为后适应,后恢复再灌注120 min;芬太尼后处理＋缺血后适应组：缺血28 min给予芬太尼5μg/kg后处理后,30 min予以缺血后适应后恢复再灌注。检测各组SOD酶蛋白活力浓度、MDA浓度。结果芬太尼后处理＋缺血后适应组较缺血后适应组外周血MDA（mmol/mL）[（3．52±0．45）比（4．42±0．47）]明显降低（F＝81.619,P＜0．01）,SOD酶蛋白活力浓度（U/mL）[（178．38±20．32）比（130．18±20．44）]明显升高（F＝59.359,P＜0.01）。结论芬太尼后处理联合心肌缺血后适应显著降低心肌缺血再灌注兔外周血MDA浓度,提高SOD酶蛋白活力浓度,具有减轻心肌缺血再灌注损伤的作用。     

Netrin-1对活体大鼠心肌缺血再灌注损伤影响的实验研究

目的：研究Netrin-1对活体大鼠心肌缺血再灌注损伤（Ischemia reperfusion injury,I/R）的影响及机制。为临床上提供体外循环（Cardiopulmonary bypass,CPB）下心肌保护新的策略。方法雄性Spraghe-Dawley（SD）大鼠20只,体重450-500g,随机分成2组,体外循环预充液中添加Netrin-1（10只）[I/R＋Netrin-1组],体外循环预充液中不添加Netrin-1（10只）[I/R组]。建立无血预充大鼠深低温停循环（Deep hypothermic circulatory arrest,DHCA）的心肌缺血再灌注的模型。实验结束2h后处死大鼠留取心脏标本。在CPB前、CPB75min （复温后15min）,CPB后2h留取大鼠动脉血测定心肌损伤指标[心肌肌钙蛋白I （cTn I）和心型脂肪酸结合蛋白（HFABP）]。实验结束取大鼠心脏标本用TUNEL法检测心肌细胞凋亡;用Western-blot法测定局部心肌组织直肠癌结肠癌缺失基因（Delete in colorectal carcinoma gene,DCC）蛋白指标。大体光镜下观察心脏组织病理形态学改变;大鼠CPB 前、CPB 15min、CPB 45min （停循环15min）以及 CPB 90min （复温30min）监测血气分析。结果 I/R＋Netrin-1组较I/R组：血清中心肌肌钙蛋白I（cTn I）和心型脂肪酸结合蛋白（HFABP）含量明显减少;心肌缺血再灌注后心肌凋亡明显减少27.5%（P〈0.05）;DCC表达增加（P〈0.05）。HE染色镜下观察发现I/R＋Netrin-1组心肌细胞损伤程度明显减轻。结论Netrin-1对心肌缺血再灌注损伤有保护作用,其机制可能与DCC有关。     

咖啡酸对全脑缺血再灌注模型大鼠脑损伤的保护作用研究

目的:探讨咖啡酸对全脑缺血再灌注模型大鼠脑损伤的保护作用及其机制。方法:将大鼠随机分为假手术组(生理盐水)、模型组(生理盐水)和咖啡酸低、中、高剂量组(咖啡酸溶液,10、30、50mg·kg-1),每组7只,分别腹腔注射相应药物后建立全脑缺血再灌注模型,以寻台潜伏期为指标,用Morris水迷宫检测大鼠空间学习记忆能力,其后,采用苏木精-伊红染色法观察各组大鼠海马组织病理学变化和固定视野内神经元细胞计数,并考察海马组织中超氧化物歧化酶(SOD)活性、丙二醛(MDA)含量及核转录因子NF-κBp65阳性细胞的表达。结果:与模型组比较,咖啡酸低、中、高剂量组大鼠5d内的寻台潜伏期明显缩短(P<0.05或P<0.01),海马CA1区神经元损伤程度降低、神经元细胞数目明显增加(P<0.05或P<0.01),海马组织中SOD活性明显增加、MDA含量和NF-κBp65阳性细胞表达明显降低(P<0.05或P<0.01)。结论:咖啡酸可能通过降低NF-κBp65阳性细胞表达,抑制中枢神经系统炎症反应和氧化应激来实现对全脑缺血再灌注模型大鼠脑损伤的保护作用。     

DADLE对大鼠急性全脑缺血再灌注Bax、Bel-2蛋白表达的影响

目的观察急性全脑缺血再灌注大鼠脑组织Bax、Bcl一2蛋白表达情况,研究8阿片受体激动剂DADLE对急性全脑缺血再灌注脑组织凋亡途径的影响以及其与脑保护作用的关系。方法将健康雌性sD大鼠50只（180—220g）随机分为5组：假手术组（Sham组,n=10）：只暴露血管而不夹闭;缺血再灌注组（I／R组,n=lO）：采用改良的二血管阻断加低血压法建立全脑缺血再灌注模型,缺血15min后给予再灌注;DADLE处理组分为DADLE2mg／kg组（A组,n=10）、DADLE3mg／kg组（B组,n=10）、DADLE5mg／kg组fc组,n=10）：在I／R组的基础上于再灌注前经颈外静脉注射DADLE。手术结束后,采用免疫组化法检测脑组织Bax、Bcl一2蛋白表达情况。结果Sham组Bax与Bcl-2阳性细胞数显著少于其他各组（P〈0．05）,分别为（20．38±2．84）与（9．624-2．10）;I／R组Bax与Bcl-2阳性细胞数为（52．73±6．08）与（19．49±2．35）;而DADLE处理组中Bax阳性细胞数分别为：A组（43．71±3．85）、B组（37．92±4．08）、C组（36．20±3．94）;Bcl-2阳性细胞数分别为：A组（28．744-2．41）、B组（33．584-2．16）、C组（34．96士1．98）。Bcl-2／Bax的比值,Sham组显著高于I／R组[（49134-3．4）％VS．（35．84-3．2%,P〈0．05];DADLE处理组中,A组为（66．4±6．8）％、B组为（85．7±7．3炀、C组为（92．6±6．9）％。结论在大鼠急性全脑缺血再灌注损伤中,Bax与Bel-2蛋白的表达均明显上调,而DADLE可以通过影响Bax与Bel一2的表达程度减少细胞凋亡,发挥脑保护的作用;由Bel-2／Bax的比值可发现,该作用与使用剂量呈现“S型剂量效应曲线”。     

DADLE对大鼠急性全脑缺血再灌注损伤脑组织ERK信号转导通路影响的研究

目的探讨DADLE对急性全脑缺血再灌注损伤大鼠脑组织中ERK信号转导通路的影响及其与脑保护作用的关系。方法将健康雌性SD大鼠50只（1800220g）随机分为5组：假手术组（Sham,n=10）：只暴露血管而不夹闭;缺血再灌注组（I／R,n=10）：采用改良的二血管阻断加低血压法建立全脑缺血再灌注模型,缺血15min后再灌注120min;DADLE处理组分为DADLE2mg／kg组（A,n=10）、DADLE3mg／kg组（B,n=10）和DADLE5mg／kg组（C,n=10）：在FR组的基础上于再灌注前经颈外静脉注射DADLE。HE染色观察各组海马CAl区神经元病理变化情况,westernblot测其脑组织内非磷酸化ERK与磷酸化ERK（P-ERK）的表达状况。结果Sham组ERK与P-ERK蛋白表达水平显著低于其他各组（P〈0．05）;DADLE处理组与I／R组相比,ERK、P-ERK蛋白的表达水平上调（P〈0．05）,其中B组、C组ERK与P-ERK蛋白表达水平显著高于A组（P〈0．05）,而B组、C组之间ERK、P-ERK表达则无显著性差异（P〉0．05）。结论在急性大鼠全脑缺血再灌注损伤中,ERK信号转导通路的活性明显上调,DADLE可以通过增加ERK的活化而达到降低神经元细胞的损伤,发挥脑保护的作用;同时,该作用呈剂量相关性和有“天花板效应”。     

迷迭香酸对大鼠抑郁样行为的作用及其机制研究

目的：探讨迷迭香酸（ RA）对慢性不可预见应激（ CUS）抑郁模型大鼠抑郁样行为的改善作用及机制。方法将大鼠随机分为6组,每组16只。 A组：生理盐水组;B组：低剂量RA组;C组：高剂量RA组;D组：CUS＋生理盐水组;E组：CUS＋低剂量RA组;F组：CUS＋高剂量RA组。建立CUS抑郁大鼠模型,干预结束后对部分大鼠（每组8只）进行旷场实验、强迫游泳行为学测试后,取海马组织蛋白样品,酶联免疫吸附法（ ELISA）检测脑源性神经营养因子（BDNF）水平,免疫印迹（Western-blot）法检测细胞外调节蛋白激酶（ERK1/2）、磷酸化细胞外调节蛋白激酶（pERK1/2）的蛋白表达水平。各组其余8只大鼠进行水迷宫实验。结果行为学实验、海马组织BDNF的ELISA检测、pERK1/2及ERK1/2蛋白定量及水迷宫实验目标象限停留时间百分比结果D组与A、B、C组比较均存在显著差异（P〈0.05）,F组与D组存在显著差异（P〈0.05）,而E组与D、F组之间无显著差异（P〉0.05）,A、B、C组之间差异也无统计学意义（P〉0.05）。结论 CUS模型大鼠会表现出类似于抑郁症患者的抑郁样行为,而一定剂量的RA干预能改善这一行为,其机制可能为RA通过上调抑郁大鼠海马星形胶质细胞中ERK1/2的磷酸化,促进其释放BDNF,进而发挥抗抑郁效应。