遗传学前沿领域的研究进展

(一 )于 1990年 10月正式启动的人类基因组计划 (ｈｕｍａｎｇｅｎｏｍｅｐｒｏｊｅｃｔ ,ＨＧＰ)已经取得了显著进展 ,约占整个基因组6 .3%的ＤＮＡ序列已被测定 ,已鉴定的基因 7484个 ,约 1万个人类基因的序列已经被克隆[1] 。据最新报道人类基因组全序列测定预计可以提前在 2 0 0 2年完成 ,比预计提前了一年。全球有关研究人员尝试将人类ＤＮＡ中的全部基因归类 ,这样使防治癌症、遗传性疾病成为可能。该计划的目标可概括为两点 :(1)人类 3× 10 10 ｂｐ的全序列分析 ;(2 )全部基因的识别及功能分析。人类基因组中约 5 10万个基因 ,它们…     

人类基因组计划研究进展与分子病理学

人类基因组计划 (ｈｕｍａｎｇｅｎｏｍｅｐｒｏｊｅｃｔ,ＨＧＰ)是 2 0世纪末生命科学领域的最大科学工程之一 ,对医学亦具有重大的意义。科学上的每一重大进步都和先进技术的引入密不可分。细胞的发现与研究诞生了在医学中占统治地位的细胞病理学 ,那么现代分子生物学与基因工程技术的突飞猛进将给医学带来什么影响呢 ?毋用置疑 ,2 1世纪的医学将由细胞病理学逐步走向子病理学。　　ＨＧＰ已于 1 990年 1 0月在美国正式启动 ,其目的是要阐明人类基因组 (ｇｅｎｏｍｅ)ＤＮＡ约 3× 1 0 9个核苷酸碱基的序列 ,找出全部约 1 0万个基因 ,并确…     

携带外源基因的HBV在HepG2细胞中的表达与复制

我们以体外能够表达野生ＨＢＶ的质粒ｐＨＢＶ30 91为研究对象 ,用ＧＦＰ基因替代ＨＢＶ的Ｓ读码框构建携带外源基因的重组ＨＢＶ载体ｐＨＢＶ Ｓ ＧＦＰ。为了保证重组载体中外源基因能够有效表达及整个ＨＢＶ基因读码框的顺利通读 ,在改造ＨＢＶ时保留了Ｓ基因的前 9个核苷酸使ＧＦＰ与之融合 ,从而保证Ｓ基因起始密码子附近的ＤＮＡ结构尽可能与野生ＨＢＶ一致 ,保持ＨＢＶ自身基因表达调控元件的特性。结果表明 :(1)将构建的重组ＨＢＶ基金项目 :国家自然科学基金资助项目( 30 170 85 4) ;全军医药卫生科研基金资助项目( 0 1ＭＡ0 10 )…     

PDGF-B链基因上游序列中与HMGI结合 A-T丰富区的初步分离和鉴定

一些动脉粥样硬化相关致病因素可诱导内皮细胞和单核细胞中血小板源生长因子 -Ｂ链 (ＰＤＧＦ -Ｂ)基因表达 ,这一过程涉及众多反式作用因子和基因上游调控序列之间的相互作用。染色体结合蛋白———高迁移率蛋白Ⅰ (ＨＭＧＩ)可通过与ＤＮＡ上的Ａ -Ｔ丰富区结合 ,影响多种基因的转录。目的 :分离和鉴定ＰＤＧＦ -Ｂ链基因上游序列中与ＨＭＧＩ结合的Ａ -Ｔ丰富区 ,并初步分析其功能。方法 :ＤＮＡ重组技术和凝胶迁移率改变法 (ＥＭＳＡ)。结果 :重组人ＨＭＧＩ蛋白 (ｒＨＭＧＩ)可与ＰＤＧＦ -Ｂ链基因上游序列结合。在 - 1 758/ 4 3ｂ…     

基因组学和医学生物信息学(1)

基因是遗传信息的结构与功能单位 .可指一段ＤＮＡ分子 ,也可指一段ＲＮＡ分子 .基因组是指一个物种的全部遗传信息的总和 ,可指一套染色体 ,也可指其中全部核酸 .基因组学是指从基因水平研究遗传的学科 .人类基因组计划 (ＨＧＰ)的发展、完成 ,使基因组学成为一门高度综合的 ,跨学科的科学 ,同时也促进了生物信息学的出现和发展 ,所以最初被称为基因组信息学 .同样 ,ＨＧＰ的迅速发展、取得巨大的成果 ,有赖于生物信息学和生物信息网新学科的发展 .人类后基因组研究—功能基因组时代 :在ＨＧＰ草图和精细图完成后 ,后基因组计划启动并迅速…     

一株HIV1变异株的发现

我们在进行序列分析过程中发现一株不同于以往国内外报道的新型ＨＩＶ1的变异毒株。现报道如下 :1　材料和方法1.1　前病毒ＤＮＡ的提取　某ＨＩＶ1感染者 30 0 μｌＥＤＴＡ抗凝血 ,使用Ｐｒｏｍｅｇａ公司的ＤＮＡ提取试剂盒 (ＷｉｚａｒｄＧｅｎｏｍｉｃＤＮＡＰｕｒｉｆｉｃａｔｉｏｎＫｉｔ)提取ＨＩＶ1前病毒ＤＮＡ。1.2　ＨＩＶｅｎｖ基因ｃ2 -ｖ3区的套式ＰＣＲ扩增　以所提的ＨＩＶ1前病毒ＤＮＡ为模板 ,利用一对外侧引物ＥＰ1,ＥＰ2 (序列为 ,ＥＰ1:5′ -ＧＧＣＡＧＴＣＴＡＧＣＡ ＧＡＡＧＡＡＧＡＧＧ - 3′ ;ＥＰ2 :5′ -ＣＣ…     

乙、庚型肝炎病毒重叠感染患者血清HBV DNA定量测定及意义

乙型肝炎病毒 (ＨＢＶ)和庚型肝炎病毒 (ＨＧＶ)主要由胃肠道外途径传播 ,并可由相同的途径发生混合或重叠感染 ,为了明确在ＨＢＶ和ＨＧＶ重叠感染状态下ＨＧＶ对ＨＢＶ是否存在抑制作用 ,我们用荧光定量聚合酶链反应 (ＦＱＰＣＲ)技术对ＨＢＶ、ＨＧＶ重叠感染患者血清中ＨＢＶＤＮＡ和ＨＢｓＡｇ进行了检测 ,并和单纯ＨＢＶ感染者进行了比较分析。1　材料和方法1 1　研究对象　 5 2例ＨＢＶ、ＨＧＶ重叠感染者血清采自本院 1998年 1月至 2 0 0 0年 4月期间的住院患者。其中男性 39例 ,女性 13例 ;年龄 2 9～ 6 5岁。 6 1例单纯ＨＢＶ感染…     

分子伴侣基因的克隆及表达

用聚合酶链反应方法从大肠杆菌染色体ＤＮＡ中扩增得到２０００ｂｐ的ＤＮＡ片段，并克隆到ＰＧＥＭ３ｚｆ（＋）载体中，经限制性图谱分析和部分ＤＮＡ序列测定，证实２０００ｂｐ的ＰＣＲ产物为ＧｒｏＥ基因全部编序列。将ＰＣＲ产物构建在ＰＬＰＲ启动子控制下的ＰＢＶ２２０表达质粒中，转入大肠杆菌ＤＨ５ａ，经４２℃热诱导，获得ＧｒｏＥ基因的表达产物，在ＳＤＳ－ＰＡＧＥ上出现分子量约６００００（ＧｒｏＥＬ）及１５００     

120例女性医疗科技人员血清骨钙素水平观察

骨钙素 (ＢＧＰ)是构成骨基质的有效成份 ,据文献报道 ,ＢＧＰ与诸多激素 (如甲状腺素、雌激素、ＧＨ、ＢＧＨ、ＦＳＨ、ＬＨ)的代谢状态有着紧密的内在联系。在此基础上我们对本院 12 0例女性医务人员不同年龄分组进行ＢＧＰ浓度变化分析观察。材料和方法一、观察对象 :育龄组 40例 ,年龄 2 0～ 35岁 ,平均 2 5 1岁 ;围绝经组 40例 ,年龄 45～ 5 5岁 ,平均 5 0 3岁 ;绝经组 40例 ,年龄 5 5～ 6 5岁 ,平均 6 0 4岁。二、方法 :血标本均为新鲜空腹血清。ＢＧＰ试剂盒由中国原子能科学研究院提供 ,批内ＣＶ %≤ 5 0 % ,批间ＣＶ %≤10 %。…     

环境基因组学和环境基因组计划

环境基因组 (ＥｎｖｉｒｏｎｍｅｎｔａｌＧｅｎｏｍｉｃｓ)和环境基因组计划 (ＥｎｖｉｒｏｎｍｅｎｔａｌＧａｎｏｍｉｃｓＰｒｏｊｅｃｔ,ＥＧＰ)是在人类基因组 (ＨＧＰ)基础上发展的功能基因组内容之一 .人类疾病的发生发展与环境因素及环境因素相关疾病的遗传敏感性有关 .通过环境基因组研究可寻找到环境因素的易敏感基因 ,在遗传和物理图谱的建立和测序基础可发现和分离出大批新基因 .环境基因组计划 (ＥＧＰ)是研究与环境因素相关疾病的遗传敏感性 ,寻找对环境因素损伤易感的基因 .区别易感人群 ,研究易感性基因产物及其对环境暴露…     

HMGI高表达促进单核细胞PDGF-B链基因转录

血管内皮细胞与循环血细胞 ,如单核细胞之间的相互作用 ,在动脉粥样硬化等重要心血管疾病发生和发展过程中具有极其重要的意义。众多的动脉粥样硬化相关因素也同时作用于这些细胞。我们曾发现高迁移率蛋白Ⅰ (ＨＭＧⅠ )能促进ＥＣＶ30 4细胞核转录因子ＮＦ -κＢ与ＰＤＧＦ -Ｂ链基因上游切应力反应元件 (ＳＳＲＥ)的结合。目的 :观察在整体细胞水平 ,ＨＭＧＩ对单核细胞系Ｕ937细胞ＰＤＧＦ -Ｂ链基因转录的影响及蛋白激酶Ｃ磷酸化的调节作用。方法 :( 1 )利用ＰＣＲ技术和ＤＮＡ重组技术构建正义和反义ＨＭＧＩ表达载体 ;( 2 )脂质体法将…     

6种真核表达质粒作为HBV-DNA疫苗免疫小鼠的研究

将编码ＨＢＶ表面抗原的Ｓ基因分别克隆到 6种不同的真核表达质粒上 ,包括两种真核质粒载体 (ｐｃＤＮＡ3.1,ｐＣＩ ｎｅｏ) ,两种逆转录病毒载体 (ｐＸＴ1,ｐＬＸＳＮ)和两种ＥＢ病毒载体 (ｐＣＥＰ4,ｐＭＥＰ4) ,构建不同的真核表达重组体 ,经酶切鉴定符合要求。将重组体用电转染法导入人肝癌细胞系ＨｅｐＧ2获得稳定分泌ＨＢｓＡｇ的抗性细胞系。不同重组体表达ＨＢｓＡｇ的滴度 ,以逆转录病毒重组基金项目 :国家自然科学基金资助项目(36930 2 80 ,3957660 )作者单位 :重庆医科大学肝病研究所通信作者 :叶珈 30 0 0 70天津医科大学免疫教…     

preS2反义寡核苷酸降低端粒酶活性及诱导肝癌细胞凋亡的作用

反义核酸技术从分子水平破坏靶基因 ,已用于多种抗病毒的试验。我们以人工合成的硫代反义寡核苷酸研究针对ＨＢＶ不同区段反义寡核苷酸ＨＢＶ的抑制作用 ,从中筛选了效果最好的针对ＨＢＶｐｒｅＳ2的反义序列 (ａｓ ｐｒｅＳ2 )。为进一步探讨ａｓ ｐｒｅＳ2在肝癌治疗中的应用价值 ,以ＨＢＶＤＮＡ整合的肝母细胞瘤细胞ＨｅｐＧ2 .2 .15为研究对象 ,采用ＦＡＣ ＳＣＡＮ流式仪检测细胞凋亡率 ,ＴＲＡＰ银染测定细胞端粒酶活性 ,同时以ＲＩＡ法检测培养上清中的血清铁蛋白浓度。设计合成针对ｐｒｅ Ｓ2基因 (ｐｅｒ Ｓ2 )翻译起始区 (32 0 3…     

基因组学和生物信息学

基因 (ｇｅｎｅ)的现代定义为 :遗传信息的结构与功能单位 ,可指一段ＤＮＡ分子 ,也指一段ＲＮＡ分子 一个物种的全部遗传信息总和称为基因组 (ｇｅｎｏｍｅ) ,可指一套染色体 ,也可指其中全部核酸 1986年美国著名人类遗传学家和内科教授Ｍｅｋｕｓｉｃｋ创立了基因组学 (Ｇｅｎｏｍｉｃｓ)这一名词 ,意指从基因组水平研究遗传的学科 这一词即被广泛接受 ,基因组学成为最活跃 ,最有影响的重大的前沿学科 人类基因组计划 (ＨｕｍａｎＧｅｏｍｅＰｒｏｊｅｃｔ,ＨＧＰ)自 1990年正式启动以来 ,迅速发展成为一个国际性大协作项目 其规模和…     

肝炎患者外周血单个核细胞IL-18 mRNA和蛋白水平与HBV感染的关系

检测了慢性乙型病毒性肝炎患者外周血单个核细胞(ＰＢＭＣ )ＩＬ 18基因及蛋白表达水平 ,以探讨ＩＬ 18在乙型肝炎病毒 (ＨＢＶ )感染中的作用。1　材料与方法1 1　病例　慢性乙型肝炎 30例 ,排除合并感染其他病毒性肝炎 ,近 6月无应用影响免疫功能的药物。所有病例均检测血清ＨＢＶＤＮＡ水平 (斑点杂交法 )。1 2　方法　分别以逆转录 聚合酶链反应 (ＲＴ ＰＣＲ )技术 ,流式细胞术检测ＩＬ 18基因的转录及表达水平。方法见文献[1]。ＰＢＭＣ内ＨＢＶＤＮＡ检测 ,抽提细胞内ＤＮＡ后采用ＰＣＲ法扩增。所得实验结果采用ＳＰＳＳ 8 0软件进…     

人淋巴细胞免疫反应性生长激素基因调控序列的克隆与鉴定

目的：克隆和鉴定人淋巴细胞免疫反应性生长激素（ｉｒＧＨ）基因调控序列的核苷酸顺序。方法：通过ＰＣＲ扩增出人淋巴细胞ｉｒＧＨ基因５＇近端的调控序列,然后将其与质粒ＰＧＥＭ７Ｚｆ（＋）连接,经转化蓝白斑筛选、酶切鉴定,获得ＰＧＥＭ７Ｚｆ（＋）－ｉｒＧＨ ＤＮＡ（－４８４－＋２ｂｐ）重组质粒,进行序列测定。结果：显示ｉｒＧＨ基因５＇近端的调控序列与垂体细胞ＧＨ基因的５＇近端调控序列的核苷酸顺序完全相同。     

生长激素调节T淋巴细胞的功能

目的：探讨生长激素（ＧＨ）对Ｔ淋巴细胞功能的影响。方法：构建ＧＨ ｃＤＮＡ表达质粒ＰｃＤＮＡ－ＧＨ ｃＤＮＡ，然后将其转染入Ｔ淋巴细胞系－Ｊｕｒｋａｔ细胞中，观察过度表达的内源ＧＨ和加入外源基因重组人ＧＨ对Ｔ淋巴细胞功能的影响。结果：过量表达的内源ＧＨ使Ｊｕｒｋａｔ细胞表达ＩＬ－２Ｒ和分泌ＩＬ－２，ＩＦＮ－γ分别增加１．４０倍，１．６０倍和１．９８倍，而在培养液中加入抗ＧＨ血清后，ＧＨ的这种作用消     

Pfeiffer综合征的遗传异质性研究

目的为揭示Ｐｆｅｉｆｅｒ综合征的分子病理缺欠。方法采用ＳＳＣＰ－ＤＮＡ直接测序及ＰＣＲ－限制性内切酶酶切技术，对４个Ｐｆｅｉｆｅｒ综合征家系的外周血ＤＮＡ进行了分析。结果２个家系是由ＦＧＦＲ２基因突变所致：１例发生在ＦＧＦＲ２基因第８内含子３′剪切位点部位Ａ→Ｇ突变；１例为ＦＧＦＲ２基因第９外显子Ａｓｐ３２１Ａｌａ突变。另外１个家系是由ＦＧＦＲ１基因第５外显子Ｐｒｏ２５２Ａｒｇ突变所致。结论该项研究结果表明了Ｐｆｅｉｆｅｒ综合征的遗传异质性，为该病的病因学研究和临床研究提供了有用的资料     

血型糖蛋白AcDNA的克隆及其酵母双杂交系统BD端 pGBkT1—GPA质粒的构建

目的 :检测红细胞膜跨膜蛋白质———血型糖蛋白Ａ(ＧＰＡ)对酵母细胞是否有毒性及其能否激活检测基因 ,以进一步揭示ＧＰＡ与带Ⅲ蛋白的相互关系。材料与方法 :培养红白血病细胞 (Ｋ562 )直到细胞总数达到1 0 9以上 ,收获细胞 ,用于粗提核内容物的制备。收集增殖状态Ｋ562细胞 1 0ｍＬ ,提取总ＲＮＡ以ｏｌｉｇｏ(ｄＴ)为引物反转录合成ｃＤＮＡ。参照ＧＰＡＧＥＮＢＡＮＫ数据库中检索到的序列设计引物 ,ＰＣＲ扩增ＧＰＡｃＤＮＡ。ＰＣＲ产物纯化后 ,进行补平 ,平端连接于ＰＵＣ1 9质粒上。将经过阳性选择的重组质粒纯化、测序。双酶切Ｐ…     

成人型多囊肾病的基因诊断：PKD1基因与其两侧四种基因…

采用位于ａ３＇ＨＶＲ同侧与成人型多囊肾病基因更加接近的ＰＧＧＧ１及另一侧的２４－１和２１ＥＰ６等探针对正常人基因组ＤＮＡ进行限制性片段长度多态性分析，分别检测各等位片段的频率，在此基础上，应用这三个基因探针与３＇ＨＶＲ一起对２个成人型多囊肾病家系成员进行单体型分析，在在这个家系中，５个ＡＰＫＤ患者的ＲＦＬＰ单体型被证明与ＰＫＤ１基因相连锁，发现一个重组体，并检测出二个症状前个体。