新型荧光试剂柱前衍生高效液相色谱定量分析小鼠脑脊液中氨基酸类神经递质

目的 采用新合成的荧光试剂柱前衍生氨基酸类神经递质,建立其测定方法,并测定小鼠脑脊液中氨基酸类神经递质的含量。方法 以1,3,5,7-四甲基-8-苯基-（4′-O-（N-琥珀酰亚胺乙酸酯））-二氟化硼-二吡咯甲烷（TMPAB-OSu）作为柱前荧光衍生试剂,在pH 8.8的硼酸-硼砂缓冲溶液中,30℃衍生反应5 min后获得稳定的荧光衍生产物,在反相色谱柱上,采用梯度洗脱进行5种氨基酸类神经递质标准品衍生物的分离检测,荧光激发波长为497 nm,检测波长为509 nm。结果 5种氨基酸类神经递质的线性范围为0.01~1.2 μmol/L,线性回归系数均大于0.998 1,检出限为1 nmol/L（S/N=3∶1）。小鼠脑脊液中天门冬氨酸、谷氨酸、谷氨酰胺、γ-氨基丁酸和丙氨酸的含量分别为0.06、0.20、0.26、0.03和0.07 μmol/L,标准加入回收率为96%~104%,RSD为0.7%~2.9%。结论 该方法的灵敏度高、重现性好,为小鼠脑脊液中氨基酸类神经递质的分析检测提供了一种新方法。     

高效液相色谱荧光法同时测定小鼠脑组织中4种氨基酸类神经递质

目的 采用高效液相-荧光检测技术建它一种稳定的用于测定脑组织中多种氨基酸类神经递质的方法.方法 用微透析技术收集小鼠脑组织中多种氨基酸类神经递质,用邻苯二甲醛(OPA)柱前衍生高效液相色谱(high perform-ance liquid chromatography,HPLC)法测定微透析液中天门冬氨酸(Asp)、谷氨酸(Glu)、甘氨酸(Gly)、r-氨基丁酸(GABA)的含量.结果 兴奋性Asp、Glu及抑制性Gly、GABA在18 min内完全分离,在0.625~5umol/L浓度范围内与峰面积有良好的线性关系.结论 HPLC法快速、准确、灵敏度高,适用于脑组织中氨基酸类神经递质含量的测定.     

持续性植物状态患者脑脊液中氨基酸类神经递质的检测

OBJECTIVE: To detect the amino acid neurotransmitters in cerebrospinal fluid of patients in persistent vegetative state (PVS) to define their relation to the clinical manifestations of the patients. METHODS: The cerebrospinal fluid from 46 patients in PVS and 20 control patients were collected for detection of glutamic acid, aspartic acid, alanine and glycine by high-performance liquid chromatography. RESULTS: All the four amino acids were separated by chromatography within 25 min. The contents of all the 4 neurotransmitters in PVS group were higher than those in the control group, and their contents were inversely correlated to PVS score of the patients. The differences in the concentration of glycine and alanine were significant between PVS patients and the control patients (P<0.05). CONCLUSION: The patient's clinical manifestations are related to the contents of amino acid neurotransmitters in the cerebrospinal fluid of PVS patients.     

持续性植物状态患者脑脊液中氨基酸类神经递质的检测

目的 应用高效液相色谱分析法检测持续性植物状态(PVS)患者脑脊液中氨基酸类神经递质,观察其与临床表现的相关性。方法 分别采集46例PVS患者与20例对照病人的脑脊液,检测谷氨酸、天冬氨酸、丙氨酸、甘氨酸的含量。结果 4种氨基酸在25min内得以较好分离。PVS组4种递质水平均高于对照组,且递质水平与PVS评分呈负相关,其中甘氨酸及丙氨酸与对照组相比差异有统计学意义(P<0.05)。结论 PVS患者脑脊液中氨基酸类递质与临床表现有一定的相关性。     

HPLC测定脑组织和脑脊液中4种氨基酸类神经递质含量的方法改良研究

谷氨酸和γ－氨基丁酸等神经递质的代谢异常是诱发多种神经系统疾病的因素之一。由于神经递;质在脑内的含量很低,改良建立了一种用ＨＰＬＣ荧光检测Ｇｌｕ,ＧＡＢＡ等４种神经递质的方法,以高丝氨酸为内标,流动相为磷酸缓冲液和甲醇,梯度洗脱２０ｍｉｎ,荧光检测。     

柱前衍生高效液相色谱法测定蚕蛹提取物中氨基酸含量

目的 用柱前衍生法测定蚕蛹提取物中氨基酸含量,方法以磺酰氯二甲胺偶氮苯(DABS-CL)作衍生剂,采用柱前衍生高效液相色谱法(RP-HPLC),YMC-Pack ODS-A柱(250mm×4.6mm,5mm),流动相A为25mol/L KH2PO2,流动相B为乙腈:甲醇=70:30;流速1.5 ml/min梯度洗脱,检测波长436nm,柱温35℃,结果各种氨基酸均具有良好的线性关系(相关系数,=0.9989～0.9999)、精密度(RSD<1.50%)、稳定性(RSD<3.50%)、平均回收率(98.83%～107.83%),测定蚕蛹提取物中氨基酸含量,其含有人体必需氨基酸占总氨基酸含量的40%以上,结论该方法简便实用,分析结果准确可靠,适用于动植物中富有氨基酸含量的测定.     

高效液相色谱法测定兔脑中的氨基酸

采用反相高效液相色谱柱前衍生法测定兔脑匀浆液中氨基酸的含量。衍生试剂是异硫氰酸苯酯（ＰＩＴＣ）。１７种氨基酸衍生物在ＵｃｔｒｏｓｐｈｅｒｅＣ１８柱上经０．０５ｍｏｌ／Ｌ醋酸铵（ｐＨ６．６７）和乙腈的梯度淋洗而分离。包括兴奋性氨基酸递质Ａｓｐ，Ｇｌｕ，ＧＡＢＡ在内的８种氨基酸在２０～３０８ｍｍｏｌ／Ｌ的范围内线性关系良好。保留时间和峰面积的变异系数分别小于２％和０．５％．方法准确，重现性好。定量测定了兔脑中含量较高的上述８种氨基酸     

癫痫发作与脑脊液中氨基酸类神经递质含量变化的关系

采用高效液相色谱仪荧光法测定癫痫全面性大发作及复杂部分性发作患者脊液中谷氨酸（Ｇｌｕ）、甘氨酸（Ｇｌｙ）、γ－氨基丁酸（ＧＡＢＡ）的含量。全面性大发作患者的Ｇｌｕ、Ｇｌｙ含量显著高于对照组（Ｐ〈０．０５）,而ＧＡＢＡ较对照组无显著差异;复杂部分性发作患者的Ｇｌｕ、Ｇｌｙ、ＧＡＢＡ含量较对照组显著增加（Ｐ〈０．０５）。从而说明Ｇｌｕ是诱发癫痫发作的主要兴奋性神经递质,而ＧＡＢＡ有阻抑中枢神经元异常放     

脑瘫患儿脑脊液氨基酸类神经递质的变化

目的：研究痉挛型脑瘫患儿肌痉挛形成的机制。方法：采用丹酰氯-聚酰胺薄膜层析法,测定45例痉挛型脑瘫患儿和30例非神经系统疾病儿童脑脊液中兴奋性及抑制性氨基酸水平。结果：脑瘫组脑脊液中γ-氨基丁酸明显低于对照组,谷氨酸、天冬氨酸明显高于对照组,甘氨酸与对照组比较差异无显著性;谷氨酸的水平与患者肌张力呈等级正相关(rs=0.642, P<0.05)。 结论：兴奋性突触功能上升,突触前抑制和突触后抑制下降,脊神经后根传入侧支出芽突触重建可能在痉挛型脑瘫肌痉挛的形成中起重要作用。     

Clinical observation on the changes in excitatory amino acids content in cerebrospinal fluid following acute spinal cord injury

Theprimarylossofneuronsresultingdirectlyfromtraumaatthetissuedamagesiteisfollowedbyasecondaryneuronalnecrosisextendingtoaconsiderabledistancefromthelesionepicenter.ThissecondaryInjurycausedmoreneuronallossthaninitialtraumaLIJ.Butthemechanismofsecondaryinjuryhasbeenelusive.Manyfactorsmaybeinvolved.Recently,theneurotoxicltyofexcitatoryamlnoacids(EAA)onneuronshasbeenrecognizedandmayplayanimportantroleinsecondaryinjury.Increasedextracellularlevelsofexcitatoryaminoacidswerefoundfollowingexperim…     

急性脊髓损伤后脑脊液中兴奋性氨基酸含量变化的临床观察

目的；探讨脑脊液中兴奋性氨基酸（ＥＡＡ）含量性急性脊髓损伤的关系。方法；采用氨基酸自动分析仪检测２６例生脊髓损伤患者脑脊髓（ＣＳＦ）中天门冬氨基酸（Ａｓｐ）、谷氨酸（Ｇｌｕ）等ＥＡＡ含量的动态变化。结果；脊髓损伤后２４ｈ内ＣＳＦ中Ａｓｐ、Ｇｌｕ显著升高，其升高幅度与脊髓损伤的程度成正相关，即脊髓损伤越重；Ａｓｐ、Ｇｌｕ升高越显著，且预后就越差；结论；伤后ＣＳＦ中ＥＡＡ含量可作为衡量脊髓损伤程度和预     

外源性NGF对脑脊液中氨基酸含量的影响

目的 观察外源性神经生长因子（NGF）对实验动物脑脊液中氨基酸含量的影响,用以探讨NGF对脑神经细胞生物效应的作用机制。方法 应用反相高效液相色谱（HPLC）荧光检测方法,测量经不同途径（Vi、M、鼻饲）供给外源性NGF1周后,家兔脑脊液中氨基酸含量的变化。结果 试验组脑脊液中的兴奋性氨基酸（AST、Glu）明显减少（P＜0.01）,抑制性氨基酸（Ala、Gly）差异不显著（P＞0.05）。而营养性氨基酸,特别是具有生物效应的His、Ser、TyT等均有明显增加（P＜0.05）。结论 NGF进入体内可分解成小分子,并可通过血脑屏障调节脑内氨基酸浓度和神经细胞功能,达到保护和促进脑细胞生长的作用。     

脑梗塞患者脑脊液中氨基酸代谢研究

采用高效液相色谱法测定脑梗塞患者脑脊液中的 15种氨基酸 ,同时测定脑梗塞体积 ,并对神经功能缺损程度进行评分。结果表明 :脑梗塞组天冬氨酸、谷氨酸均较对照组显著性增高 (分别为P <0 .0 1,P <0 .0 5 ) ;γ 氨基丁酸较对照组显著降低 (P <0 .0 5 ) ,此外 ,丙氨酸和亮氨酸较对照组亦明显升高 (分别为P <0 .0 1,P <0 .0 5 )。天冬氨酸、谷氨酸水平与脑梗塞体积呈正相关 (分别r天 =0 .5 6 ,P <0 .0 5 ;r谷 =0 .5 2 ,P <0 .0 5 ) ;所有氨基酸与神经功能缺损程度相关性不明显。本文结果提示 ,兴奋性氨基酸在脑梗塞中参与了神经损害作用 ,而抑制性氨基酸是否具有保护作用值得进一步研究     

多发性硬化脑脊液之特点

目的探讨多发性硬化(MS)脑脊液(CSF)的特点,为MS提供可靠的有价值的诊断资料。方法采用临床病例分析统计方法,归纳、分析51例MS患者的临床和CSF资料。结果MS的CSF外观正常;压力大多正常;白细胞数正常或轻度升高;有些CSF蛋白轻度升高,以IgG升高为主;血脑屏障(BBB)多数正常,部分被破坏;脑脊液寡克隆区带(CSF-OCB)和IgG指数(IgGI)的阳性率分别为35.3%、54.9%。国内MS患者CSF-OCB阳性率较低可能与国内视神经脊髓炎(ON)所占比率较高有关;CSF-OCB的呈现还受到MS活动性的影响,激素等免疫抑制剂的作用亦可能参与其中。结论在临床资料的基础上,再结合CSF的检查有助于MS诊断及指导临床治疗;CSF-OCB和IgGI的阳性结果(尤其是前者)对此意义更大。     

反相高效液相色谱法测定野生四叶参中氨基酸

目的:建立测定野生四叶参中氨基酸含量的反相高效液相色谱法(RP-HPLC).方法:用盐酸水解大别山区野生四叶参中的蛋白质.采用反相高效液相色谱法,色谱条件为:色谱柱:Hypersil ODS-BP C18柱(4.6 mm×250 mm,5 μm);流动相A:醋酸-醋酸钠缓冲液(pH=7.2);流动相B:甲醇,流速1.0 mL/min,流动相采用梯度洗脱方式,荧光检测波长为450 nm.分析四叶参中各种氨基酸含量.采用外标法定量.结果:氨基酸在25.0～800.0 μmol/L范围内浓度与色谱峰面积有良好的线性关系(r≥0.993),该方法的回收率在89.5%～109.2%,RSD在3.2%～9.0%,检测限在1.0～3.7 μmol/L.野生四叶参中含有12种氨基酸,总氨基酸含量为51.49 mg/g,必需氨基酸含量为6.95 mg/g.结论:建立的分析方法精密度好、准确度高,适用于野生四叶参中氨基酸含量的分析.     

脑脊液寡克隆区带测定诊断多发性硬化

目的　探讨脑脊液寡克隆区带检测诊断多发性硬化 (MS)的价值。方法　应用PAGE法测定已确定MS诊断的 4 6例脑脊液寡克隆区带。结果　 4 6例患者标本中寡克隆区带检测阳性者 4 3例 (占 93.4 8% )。结论　脑脊液寡克隆区带检测有助于MS的早期诊断和治疗。