小鼠腹腔巨噬细胞内的游离钙离子浓度 及PMA、fMLP反应性的不均一性

目的 :巨噬细胞 (Ｍ)的反应性是炎症过程中的重要问题。迄今为止绝大多数的工作是以细胞群作为研究对象。我们推测在细胞群中各个细胞的反应可能是不一样的 ,因此有必要在单细胞水平上对白细胞的反应性进行研究。本实验以细胞内游离钙离子浓度 ( [Ｃａ2 ]ｉ)为指标 ,测定了静息状态下单个腹腔Ｍ内 [Ｃａ2 ]ｉ水平及其对ＰＭＡ、ｆＭＬＰ的反应性。方法 :用生理盐水灌洗昆明小鼠腹腔获得Ｍ ,在铺有鼠尾胶的盖玻片上贴壁 30～ 90ｍｉｎ后用 2 μｍｏｌ/ＬＦｕｒａ - 2 /ＡＭ及 0 0 4 %Ｆ - 1 2 7负载 ,利用荧光显微镜成像系统检测并…     

LPS致敏巨噬细胞产生O-2及其信号机制

目的：探讨LPS诱导的巨噬细胞(MΦ)致敏及其信号机制。方法：巨噬细胞样细胞株RAW264．7以10μg/L LPS预处理1h后洗去，再以1mg／L PMA、1μmmol／L fMLP、100μg／L LPS、1g／L Zyms和15mg／L MDP攻击1h，检测上清中超氧阴离子(O2^-)的产生，并用荧光显微成像系统检测细胞内游离钙离子浓度([Ca^2 ]i)，探讨[Ca^2 ]i与LPS致敏MΦ产生O2^-的关系。结果：LPS预处理后以上述刺激剂攻击1h均能不同程度致敏O2^-的产生，且致敏程度在一定范围内与LPS剂量和作用时间相关；细胞内静息态[Ca^2 ]i也呈LPS剂量和时间依赖性升高，均显著相关。且LPS预处理后用PMA攻击，细胞内瞬时[Ca^2 ]i升高幅度明显高于LPS未处理组。用A23187使细胞内[Ca^2 ]i升高可代替LPS致敏O2^-的产生，而预先用BAPTA和EGTA降低细胞内[Ca^2 ]i则可阻断LPS致敏O2^-的作用。结论：LPS可致敏MΦ产生O2^-；LPS预处理后细胞内静态[Ca^2 ]i的升高是LPS诱导O2^-致敏的重要原因。     

ROS对小鼠腹腔巨噬细胞凋亡的影响

目的 探讨ＲＯＳ影响巨噬细胞凋亡的机制。方法 激光扫描共聚集显微术,流式细胞术和荧光标记技术等,结果（１）凋亡巨噬细胞内ＤＡＤＰＨ氧化酶活性急剧降低使得胞内ＲＯＳ水平快速上降;（２）ＲＯＳ清除剂促进地塞米松诱导的巨噬细胞凋亡;（３）ＰＫＣ促进巨细胞凋亡和ＲＯＳ急剧减少;ｃＡＭＰ抑制巨噬细胞凋亡和ＲＯＳ急剧减少。结论 （１）ＲＯＳ抑制地塞米松诱导的巨噬细胞凋亡;（２）ＰＫＣ,ｃＡＭＰ等因素通过影响地     

薄盖灵芝对小鼠腹腔巨噬细胞的作用

<正> 薄盖灵芝是祖国医学中常用的补益药之一,从薄盖灵芝菌丝体提取制成的注射液(简称薄芝液)的免疫药理我们已作过报道,但目前有关薄芝液对小鼠腹腔巨噬细胞的作用研究较少。薄芝液可促进小鼠巨噬细胞吞噬功能虽有所报道,但由于巨噬细胞是一种具有多种功能的免疫细胞,吞噬功能是巨噬细胞的基本功能之一。因此,我们采用多种测定巨噬细胞功能的方法,以分析薄芝液对巨噬细胞活性的影响。     

小鼠腹腔巨噬细胞凋亡时线粒体的改变及其调控

目的：研究小鼠腹腔巨噬细胞凋亡过程中线粒体和磷酸烟酰胺腺嘌呤（NADPH）氧化酶活性的变化以及信使分子对线粒体膜电位,细胞内活性氧（reactive oxgen species,ORS)和凋亡的影响。方法：激光扫描共聚焦显微术、流术细胞术和荧光标记技术等。结果：1地塞米松诱导巨噬细胞快速凋亡;2例粒体膜电位快速去极化,NADPH氧化酶活性剧降,ROS快速减少,ROS清除剂促进凋亡,3－蛋白激酶C（protein kinaseC,PKC)促进凋亡,ROS急剧减少、线粒体膜去极化;环腺苷酸（cAMP）抑制凋亡、ROS急剧减少,线粒体膜去极化;环鸟苷酸（cGMP),酪氨酸蛋白激酶（TPK）略抑制凋亡,不影响ROS变化,但影响线粒体膜去极化,结论1：地塞米松处理使线粒体内NADPH氧化酶活性剧降,生成ROS迅速减少从而促进巨噬细胞凋亡,2信使分子影响线粒休生成ROS的变化以及线粒体膜去极化从而影响巨噬细胞凋亡,提示线粒体变化,尤其是ROS和膜电位的变化影响巨噬细胞凋亡。     

清开灵对小鼠腹腔巨噬细胞内游离钙及活性氧的作用

目的：动态观察清开灵（QKL）对小鼠腹腔巨噬细胞内活性氧及游离钙的作用。方法：原代培养小鼠腹腔巨噬细胞，分别以荧光探针二氯荧光素二酯（H2 DCFDA）和Fluo-3-AM标记细胞内活性氧及游离钙，通过激光共聚焦系统动态观察QKL的作用。     

淋巴因子增强小鼠腹腔巨噬细胞功能的组织化学研究

以3％硫代乙醇酸钠培养基刺激,获取C57BL/6小鼠腹腔巨噬细胞(Mφ),在含有两种不同浓度(3％、50％)的粗制淋巴因子的培养基中培养24小时后,分别观察测定Mφ的组织化学变化及对P815肥大细胞瘤细胞的抑制生长作用。结果显示,在Mφ对瘤细胞增殖的抑制作用增强的同时,酶活性增强非常显著,细胞代谢旺盛,表现为AcP、NsE、LDH、SDH和β-G酶活性高度增强,PAS反应明显减弱。未经淋巴因子作用的Mφ,则无上述显著变化。本文表明,组织化学反应的结果,可作为评价淋巴因子对Mφ代谢作用变化的指征。     

香菇多糖对小鼠腹腔巨噬细胞一氧化氮生成的影响及其机理

为进一步探讨香菇多糖（Lentinan,LTN）的免疫调节和抗肿瘤作用机理,本实验研究了LTN对小鼠腹腔巨噬细胞一氧化氮（NO）生成和诱导型一氧化氮合酶（iNOS）的影响。结果显示,LTN能明显促进小鼠腹腔巨噬细胞NO生成,并且同干扰素-γ（IFN－γ）具有协同促进作用。结果还表明,LTN的这一促进作用能被RNA转录抑制剂放线菌素D、蛋白质合成抑制剂放线菌酮和一氧化氮合酶（NOS）抑制剂L－NMA所抑制。提示LTN的免疫调节和抗肿瘤作用机理可能与其诱导巨噬细胞iNOS合成、促进NO生成有关。     

量子点体外对小鼠腹腔巨噬细胞细胞化学的影响

目的 探讨量子点(QDs)体外对巨噬细胞细胞化学及酶活性的影响.方法 用倒置相差显微镜、荧光显微镜、细胞化学方法,在细胞水平观察QDs对巨噬细胞的生物相容性及对PAS反应、Feulgen反应、ATP酶、酸性磷酸酶(AcP)、碱性磷酸酶(ALP)、α-醋酸萘酚酯酶(ANAE)、琥珀酸脱氢酶(SDH)、乳酸脱氢酶(LDH)活性的影响.结果 3.125mg/L剂量的QDs对巨噬细胞的结构没有影响,但细胞内的细胞化学及酶活性发生了不同的变化,即PAS反应、Feulgen反应、AcP、ALP、ANAE和Mg2 -ATP酶表现为阳性,而SDH、LDH则为阴性.阳性结果中,Feulgen反应、ANAE、ALP和Mg2 -ATP组中QDs组与空白组比较,有统计学意义(P＜0.05),而PAS反应、AcP组中QDs组与空白组比较,无统计学意义(P＞0.05).结论 在细胞学水平上,QDs虽然可以使巨噬细胞内的某些酶发生变化,但不影响其结构及吞噬功能.3.125mg/L剂量的QDs可以很好地应用于生物医学领域标记活细胞,对细胞没有明显的影响.     

人参皂甙和TNF对小鼠腹腔巨噬细胞ADCC活性的影响

人参皂甙和ＴＮＦ对小鼠腹腔巨噬细胞ＡＤＣＣ活性的影响陆平成，杨进，马健，马登尚（南京中医药大学南京２１００２９）人参皂甙（ＲＳ）和肿瘤坏死因子（ＴＮＦ）在小鼠实验性肿瘤的治疗上有明显的协同作用［１］，为进一步研究其机理，本文研究了人参皂甙和ＴＮＦ对小...     

雌酮诱导小鼠胸腺细胞和腹腔巨噬细胞凋亡

研究雌酮对培养的小鼠胸腺细胞和腹腔巨噬细胞的影响，发现雌酮能够诱导胸腺细胞和巨噬细胞产生典型凋亡的形态学改变和特征性ＤＮＡ“梯形”结构。用２０μｍｏｌ／Ｌ，６０μｍｏｌ／Ｌ和８０μｍｏｌ／Ｌ的雌酮处理胸腺细胞２小时，或用２０μｍｏｌ／Ｌ和４０μｍｏｌ／Ｌ雌酮处理巨噬细胞２４小时，均可出现典型的ＤＮＡ“梯形”结构。２０μｍｏｌ／Ｌ雌酮介导巨噬细胞出现ＤＮＡ“梯形”结构的效应呈时间依赖性。１０μｍｏｌ／Ｌ的它莫西芬能够有效抑制由２０μｍｏｌ／Ｌ雌酮诱导胸腺细胞和巨噬细胞产生凋亡的特征性ＤＮＡ片段；这种抑制效应具有剂量依赖性。Ｓｔａｕｒｏｓｐｏｒｉｎｅ和放线菌酮亦能够抑制雌酮诱导胸腺细胞和巨噬细胞产生ＤＮＡ“梯形”结构的作用。     

Amitriptyline modulates calcium currents and intracellular calcium concentration in mouse trigeminal ganglion neurons

Migraine is increasingly recognized as a channelopathy, and abnormalities of voltage-activated ionic channels could represent the molecular basis for the altered neuronal functioning. The high-voltage-activated (HVA) Ca²⁺ channels in the trigeminovascular system play a role in the pathophysiology of migraine. In the present study, effects of amitriptyline (AMT), a commonly used migraine prophylactic drug, on the HVA calcium currents (I_Ca) were examined in mouse trigeminal ganglion neurons using whole-cell patch clamp technique. AMT produced concentration- and use-dependent inhibition of HVA I_Ca. Bath application of GÖ-6983 (a selective protein kinase C inhibitor) or H89 (a protein kinase A inhibitor) did not reduce the AMT-induced inhibition of HVA I_Ca. A similar inhibition was observed when calcium imaging was used to directly monitor the effects of AMT on KCl-induced increments of intracellular Ca²⁺ concentration ([Ca²⁺]_i). By blocking HVA Ca²⁺ channels and Ca²⁺ entry into cells, AMT could prevent the release of neurotransmitters and help restore the neuronal threshold for excitation. Our findings suggest interesting therapeutic mechanisms for AMT in migraine prevention.     

Cyclic-GMP-dependent refilling of calcium stores in macrophages

The effects of cyclic GMP on the release of calcium from intracellular stores, induced in murine peritoneal macrophages by either ATP or platelet-activating factor, were studied by microfluorimetry with fura-2. When macrophages were incubated for 10–20 min with 10 M LY83583, an inhibitor of guanylate cyclase, the rise in intracellular calcium induced by agonist application was strongly depressed. This inhibition of the response to platelet-activating factor could be reversed by the addition of 0.1 mM cyclic 8-bromo-GMP. In the presence of cyclic 8-bromo-GMP, the decay of the calcium transient was speeded. Furthermore, when two calcium transients were evoked within 1 min by stimulating the cells with 10 M ATP, the second calcium transient was more depressed than the first one in the presence of LY83583. These findings are compatible with the hypothesis that cyclic GMP is necessary for the activation of the calcium pump of the intracellular stores.     

The distribution of intracellular calcium concentration in isolated single fibres of mouse skeletal muscle during fatiguing stimulation

Fluorescence microscopy has been used to examine the distribution of intracellular calcium concentration ([Ca²⁺]_i) in isolated single fibres from the mouse flexor brevis muscle during fatiguing stimulation. Under control conditions there was a virtually uniform distribution of [Ca²⁺]_i in fura-2 loaded fibres either at rest or during short (0.35 s, 100 Hz) tetani. Fatigue produced by repeated short tetani was accompanied by an early rise, followed by a marked fall, in tetanic [Ca²⁺]_i. Throughout the period of fatiguing stimulation the distribution of [Ca²⁺]_i remained uniform with no detectable gradients observed. In contrast, when fatigue was produced by continuous 100 Hz stimulation, a small gradient of [Ca²⁺]_i developed across the fibre with the [Ca²⁺]_i in the centre of the fibre lower than that at the edge of the fibre. This gradient was apparent after 1.7 s, persisted for at least 11 s and was superimposed on a rise followed by a fall in spatially averaged [Ca²⁺]_i. Reduction of the extracellular Na⁺ to 50% caused reduced force production and a reduced [Ca²⁺]_i in the centre of the fibre. To assess the contribution of reduced response of the myofibrillar proteins to [Ca²⁺]_i during continuous tetani, the relation between [Ca²⁺]_i and force throughout the long tetanus was compared with that obtained in short, unfatigued tetani. These results show that in long tetani, reduced tetanic [Ca²⁺]_i and reduced responsiveness of the myofibrillar proteins to [Ca²⁺]_i each make important contributions to the decline of force, whereas the gradients of [Ca²⁺]_i make only a small contribution.     

当归与硝苯吡啶对慢性支气管炎肺泡巨噬细胞胞浆游离钙水平的影响

目的:探讨当归与硝苯吡啶对慢性支气管炎(慢支)肺泡巨噬细胞胞浆游离钙水平的影响。方法:对慢支缓解期患者7例和正常对照者6例进行支气管肺泡灌洗获得的肺泡巨噬细胞经分离、纯化后,加Fura-2/AM负载,以Fura-2荧光比值法测定加当归、硝苯吡啶及LPS后胞浆游离钙的水平。结果:慢支组肺泡巨噬细胞胞浆中基础钙水平(189.47±23.69)nmol/L较正常对照组(99.65±32.21)nmol/L明显增高(P＜0.01);LPS促进慢支组肺泡巨噬细胞包括胞内钙库释放引起的胞浆游离钙水平升高(基础钙189.47±23.69nmol/L;LPS组235.53±30.30nmol/L)(静息钙228.41±27.36nmol/L;氯化钙+LPS组288.47±43.68nmol/L)(P均＜0.01);当归及硝苯吡啶均抑制LPS对慢支组肺泡巨噬细胞胞浆游离钙水平的升高作用(静息钙228.41±27.36nmol/L;氯化钙+当归+LPS组236.68±28.60nmol/L;氯化钙+硝苯吡啶+LPS组252.64±37.05nmol/L)(P均＞0.05)。结论:当归与硝苯吡啶通过抑制慢支患者肺泡巨噬细胞胞浆游离钙水平升高,影响肺泡巨噬细胞的活化,对于慢支气道内的非特异性炎症可能具有抑制作用。     

过氧化氢对乳鼠心肌细胞内游离钙浓度的影响及牛磺酸的拮抗作用

目的:研究过氧化氢(H₂O₂)对心肌细胞i的影响,以及牛磺酸对H₂O₂诱导钙超载的拮抗作用。方法:采用SD大鼠乳鼠进行心肌细胞培养,实验分4组:①正常对照组;②H₂O₂组:加入终浓度为100μmol/L的H₂O₂;③H₂O₂＋牛磺酸(同时)组:牛磺酸30mmol/L与H₂O₂100μmol/L同时加入;④H₂O₂＋牛磺酸(先后)组:先加入终浓度为100μmol/L的H₂O₂,2min后再加20mmol/L的牛磺酸。以Fluo-3/AM荧光指示剂负载,应用激光共聚焦显微镜技术,分别于加入H₂O₂后即刻与15min,检测i变化。结果:对照组心肌细胞内荧光强度和荧光光密度值较低。H₂O₂加入后即刻,细胞内荧光光密度值开始增加,15min后细胞内荧光强度和荧光光密度值显著高于对照组(P＜0.05)。而H₂O₂＋牛磺酸(同时)组细胞内荧光光密度值显著低于H₂O₂组(P＜0.05vsH₂O₂组);H₂O₂＋牛磺酸(先后)组细胞内荧光光密度值显著低于H₂O₂组(P＜0.05vsH₂O₂组)。结论:H₂O₂可引起心肌细胞内钙超载;牛磺酸能显著减轻H₂O2诱导的心肌细胞内Ca²⁺超载。     

三七提取物对小鼠淋巴细胞活化、增殖和腹腔巨噬细胞产生NO的影响

目的 分析三七提取物（SE）对小鼠淋巴细胞体外活化、增殖以及对巨噬细胞产生NO的影响，探讨其免疫抑制作用的机制。方法 以多克隆刺激剂刀豆蛋白A（ConA）刺激淋巴细胞活化和增殖，利用荧光标记的单克隆抗体双染技术和流式细胞术检测SE对小鼠CD3^＋T细胞CD69表达的影响；通过CFSE染色流式细胞术检测SE对淋巴细胞增殖的影响；用脂多糖（LPS）或淋巴细胞培养上清液（lymphocytes culture supernate，LCS）体外诱导小鼠腹腔巨噬细胞分泌NO，采用Griess试剂盒检测NO的水平。结果 在ConA刺激6h后小鼠T细胞活化率为59．79％，50、100μg／ml的SE可显著降低其活化率，分别为46．50％和37．73％（P〈0．01）。在培养72h后，不同浓度SE能明显抑制ConA诱导T细胞的增殖。SE在12．5～100μg／ml的浓度范围内对淋巴细胞培养上清和LPS诱导小鼠腹腔巨噬细胞NO的释放具有抑制作用（P〈0．01）。结论 三七提取物对小鼠淋巴细胞的活化、增殖有明显抑制作用，并能抑制巨噬细胞产生NO（P〈0．01）。     

抑制Mcl-1表达调控结核感染的小鼠腹腔巨噬细胞凋亡的机制初探

目的:应用Mcl-1-shRNA质粒抑制不同毒力结核分枝杆菌(MTB)菌株感染的小鼠腹腔巨噬细胞中Mcl-1的表达,通过观察Bcl-2和Bax表达的变化探讨其调控机制。方法:制备不同毒力MTB菌株悬液,分别感染BALB/c小鼠,再用Mcl-1-shRNA质粒处理感染小鼠模型,并同时设立对应的对照组,于处理后1 d、3 d、5 d和7d处死小鼠并收集腹腔巨噬细胞。应用流式细胞术检测不同处理时间、不同毒力菌株感染时小鼠腹腔巨噬细胞的凋亡率,real-time PCR和Western blot检测Bcl-2和Bax的表达。结果:Mcl-1-shRNA质粒处理后,不同毒力MTB菌株感染的小鼠巨噬细胞凋亡率均比对照组有不同程度的增高,其中以BCG和H37Ra组最明显(P 0. 05); Bcl-2的mRNA和蛋白水平显著减少,而Bax的mRNA和蛋白的表达均显著增加,以BCG感染组较为显著,且二者mRNA的比值与菌株毒力呈负相关(P 0. 05)。结论:抑制Mcl-1的表达可显著促进不同毒力MTB菌株感染的小鼠腹腔巨噬细胞凋亡,其调控机制可能与Bcl-2和Bax蛋白的表达及MTB菌株毒力密切相关。     

慢性缺氧对大鼠肺动脉平滑肌细胞胞内钙的影响及其机制研究

目的:研究慢性缺氧对大鼠肺动脉平滑肌细胞(PASMCs)胞内钙浓度(［Ca²⁺］_i)的影响及L-型钙通道和胞内钙库的作用,为缺氧性肺动脉高压(HPH)发病机制的进一步研究提供理论依据。 方法:复制大鼠缺氧性肺动脉高压动物模型，利用Fura－2/AM钙离子成像方法测定PASMCs在不同钙离子浓度细胞外液及L-型钙通道阻滞剂nifedipine和IP3R钙通道抑制剂肝素干预前后 ［Ca²⁺］_i变化。 结果:(1)缺氧＋含钙外液组PASMCs ［Ca²⁺］_i 显著高于对照＋含钙外液组（P<0.05）。缺氧＋含钙外液组PASMCs ［Ca²⁺］_i显著高于缺氧＋无钙外液组（P<0.05）。(2)缺氧nifedipine组PASMCs［Ca²⁺］_i在加药前后无显著差异（P>0.05）。（3）缺氧未干预组与缺氧肝素组PASMCs ［Ca²⁺］_i无明显差异（P>0.05）。 结论:慢性缺氧可使PASMCs的［Ca²⁺］_i增加。慢性缺氧引起［Ca²⁺］_i增加可能与细胞外钙内流有关，L-型钙通道和IP3R钙通道在调节［Ca²⁺］_i的过程中可能不独立发挥作用。