E2F-1在胃癌组织中突变与表达的研究

目的研究E2F-1在胃癌组织中的基因突变、表达情况。方法实验分为3组：胃癌组、癌旁正常黏膜组和正常对照组。采用聚合酶链式反应一单链构像多态性分析法（PCR—SSCP）对3组的E2F-1基因突变情况进行分析,采用免疫组织化学法检测三组中E2F-1的表达情况。结果PER扩增产物电泳显示胃癌组、癌旁正常黏膜组和正常对照组均未发现E2F-1基因突变或缺失,SSCP分析3组所有外显子均未出现异常条带;胃癌组中E2F-1的阳性表达率为72．5％（58／80）．癌旁正常黏膜组和正常对照组的E2F-1阳性表达率分别为30．0％（24／80）和22．5％（9／40）;胃癌组E2F-1表达率明显较其他两组高,3组间差异有显著性（P〈0．05）。结论E2F-1在胃癌的发生发展过程中是一个非常稳定、保守的基因,突变发生率极低;E2F-1在胃癌组织中呈高表达。     

E2F-1在胃癌细胞中高表达的意义

目的通过转染实验观察E2F-1高表达对胃癌细胞株的影响,了解E2F-1与胃癌之间的联系。方法构建E2F-1真核表达载体,转染MKN-45人胃癌细胞株,建立E2F-1高表达的胃癌细胞株模型;并通过克隆形成实验及绘制细胞生长曲线,观察E2F-1高表达对MKN-45细胞的影响。结果与转染空质粒组相比,转染并表达了E2F-1的MKN-45细胞生长受到明显抑制。结论E2F-1高表达能够抑制胃癌细胞MKN-45生长。     

胃癌中E2F-3的表达及意义

目的　探讨胃癌中E2F 3的表达与临床意义。方法　采用免疫组化技术对 4 9例人原发性胃癌癌组织与癌旁正常黏膜中E2F 3的表达进行检测 ,通过统计学方法研究其表达情况以及与肿瘤分期、病理分型、淋巴结转移、侵袭深度之间的相互关系。结果　E2F 3在癌组织与癌旁正常黏膜中的阳性表达率为 16 33% (8/ 4 9)和 75 5 1% (37/ 4 9) ,差异有显著性 (P <0 0 0 1)。癌组织、癌旁正常黏膜中E2F 3的表达在不同的临床病理特征之间差异无显著性 (P >0 0 5 )。结论　胃癌中E2F 3低表达 ,且E2F 3低表达是胃癌发生中的早期关键步骤。     

转录因子E2F-1在胃癌中的表达及临床意义

目的 探讨转录因子E2F-1在胃癌组织中的表达及临床意义.方法 采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)技术和免疫组化检测E2F-1在胃癌组、癌旁组和正常对照组中的表达情况,并联系临床病理特征进行分析.结果 胃癌组中E2F-1 mRNA的阳性表达率为72.4%(42/58),癌旁组为50.0%(29/58),正常对照组为27.9%(12/43),组间比较差异有显著性(P<0.05);E2F-1 mRNA在不同的临床分期、病理类型和有无淋巴结转移之间阳性表达率大致接近,差异无显著性(P>0.05).胃癌组中E2F-1 蛋白的阳性表达率为65.5%(38/58),癌旁组为43.1%(25/58),正常对照组为23.3%(10/43),组间比较差异有显著性(P<0.05);E2F-1 蛋白在不同的临床分期、病理类型和有无淋巴结转移之间阳性表达率大致接近,差异无显著性(P>0.05).结论 E2F-1 mRNA和E2F-1蛋白均在胃癌组织中具有较高的表达量,其转录表达量与各类临床病理特征之间没有必然联系,提示E2F-1的高表达可能与胃癌的发生有关.     

尖锐湿疣中E2F-1的表达及意义

目的　探讨细胞周期相关因子核转录因子E2F 1在尖锐湿疣 (CA)皮损中的变化和意义。方法　应用SP免疫组织化学技术检测 30例CA患者皮损 ,10例正常皮肤组织中E2F 1的表达与分布。结果　E2F 1在正常皮肤组织和CA中表达阳性率分别为 (6 .2 3± 2 .5 8) %和 (37.6 4± 4 .18) % ,有统计学差异。E2F 1阳性主要位于CA表皮棘细胞层。结论　E2F 1在CA中高表达可能是作为一种癌基因发挥作用 ,有待进一步研究     

转录因子E2F-1 mRNA在胃癌中的定量表达及临床意义

目的:探讨转录因子E2F-1 mRNA在胃癌组织中的表达及临床意义.方法:采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)技术检测E2F-1 mRNA在胃癌组、癌旁组和正常对照组中的表达情况,并联系.临床病理特征进行分析.结果:胃癌组中E2F-1 mRNA的阳性表达率为72.4%(42/58),癌旁组为50.0%(29/58),正常对照组为27.9%(12/43),组间比较差异有统计学意义(P<0.05);E2F-1 mRNA在不同的临床分期、病理类型和有无淋巴结转移之间阳性表达率大致接近,差异无统计学意义(P>0.05).结论:E2F-1 mRNA在胃癌组织中具有较高的表达量,其转录表达量与各类临床病理特征之间没有必然联系,提示E2F-1 tuRNA的高表达可能与胃癌的发生有关.     

E2F-1过表达对胃癌细胞生物学行为的影响

目的 探讨E2F-1对胃癌细胞生物学行为影响的分子机制.方法 分别抽取转染E2F-1的胃癌MGC-803细胞和未转染E2F-1的胃癌MGC-803细胞的总RNA.纯化mRNA,逆转录合成cDNA标记后,与22K人类基因表达谱芯片进行杂交,扫描后筛选出表达差异的基因.随机选取3个差异表达基因,分别设计引物,用半定量RT-PCR检测验证.结果 在21 522条基因中,两组细胞间的差异表达基因有740条,其中上调基因405条,下调基因335条.差异基因中有73条功能信息不明.随机选取的3个差异表达基因的RT-PCR结果与基因芯片扫描结果相似,具有相同的方向性.结论 胃癌的发生发展是多基因相互作用、多种信号通路相互调节的结果.生物信息学分析显示,E2F-1基因可以通过TP53信号传导途径影响胃癌MGC-803细胞生物学行为的改变,还与众多基因的差异性表达密切相关.     

结直肠癌组织中E2F-1、Bcl-2蛋白的表达及其临床意义

目的本研究旨在探讨转录因子E2F-1、凋亡抑制基因Bcl-2在结直肠癌组织中的表达情况及其临床意义。方法采用免疫组化技术（SP法）检测60例结直肠癌癌组织及癌旁正常粘膜中E2F-1、Bcl-2蛋白的表达情况。结果结直肠癌组织中E2F-1阳性表达率为56．7％,癌旁正常粘膜中为6．7％,二者比较有显著性差异（P〈0．01）;E2F—1在癌组织中的表达与其组织学分级、Dukes分期具有相关性（P〈0．05）。Bcl-2在结直肠癌中的阳性表达率为53．3％,在癌旁正常粘膜中为13．3％,二者比较有显著性差异（P〈0．01）;Bcl-2在癌组织中的表达与结直肠癌Dukes分期具有相关性（P〈0．05）。结论E2F—1、Bcl-2在结直肠癌细胞中共同过度表达,参与了结直肠癌的发生发展。     

E2F-1蛋白在大鼠泌乳素瘤中的表达

目的通过检测腺病毒E2启动子结合因子1（E2F-1）在大鼠泌乳素（PRL）瘤中的表达来探讨E2F-1在PRL瘤发生发展过程中的作用。方法用皮下植入17β-雌二醇的方法诱发大鼠PRL瘤;免疫组化SP方法检测两组大鼠E2F-1蛋白的表达。结果雌二醇作用10周后,据垂体重量、垂体组织学变化和血清PRL水平证实PRL瘤诱导成功。PRL瘤组中,E2F-1蛋白明显高于对照组,差异具有统计学意义（P〈0.01）。结论 E2F-1在大鼠PRL瘤中呈现高表达,提示E2F-1的高表达促进了大鼠PRL瘤的发生发展。     

转录因子E2F-1在胃癌中的定量和定性表达及临床意义

目的 探讨转录因子E2F-1在胃癌组织中的表达及临床意义。方法 采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)技术和免疫组化检测E2F-1在胃癌组、癌旁组和正常对照组中的表达情况,并联系临床病理特征进行分析。 结果 胃癌组中E2F-1 mRNA的阳性表达率为72.4%（42/58）,癌旁组为50.0%（29/58）,正常对照组为27.9%（12/43）,组间比较差异有显著性（P<0.05）;E2F-1 mRNA在不同的临床分期、病理类型和有无淋巴结转移之间阳性表达率大致接近,差异无显著性（P>0.05）。胃癌组中E2F-1 蛋白的阳性表达率为65.5%（38/58）,癌旁组为43.1%（25/58）,正常对照组为23.3%（10/43）,组间比较差异有显著性（P<0.05）;E2F-1 蛋白在不同的临床分期、病理类型和有无淋巴结转移之间阳性表达率大致接近,差异无显著性（P>0.05）。结论 E2F-1 mRNA和E2F1蛋白均在胃癌组织中具有较高的表达量,其转录表达量与各类临床病理特征之间没有必然联系,提示E2F-1的高表达可能与胃癌的发生有关。     

转录因子E2F-1在梗阻性肾组织中的表达及其意义

目的 探讨转录因子E2F-1在梗阻性肾病的发病机制中作用。方法 应用免疫组化方法检测E2F-1和增殖细胞核抗原（PCNA）在43例梗阻性肾组织和12例正常肾组织中的表达。分析E2F-1表达与梗阻性肾积水和肾纤维化程度之间关系。结果 正常肾组织中E2F-1阳性表达率为41．7％，显著低于梗阻肾组织的79．1％（P〈0．05）。梗阻肾组织E2F-1表达与肾纤维化程度及PCNA指数密切相关（P〈0．05）。但与肾积水程度无显著相关性（P〉0．05）。结论 E2F-1异常表达参与梗阻性肾病的发病过程，尤其在肾纤维化过程中发挥重要作用。     

P73、E2F-1、Bcl-2蛋白表达与胃癌生物学行为关系研究

目的本研究旨在探讨P73、转录因子E2F-1、凋亡抑制基因Bcl-2在胃癌组织中的表达情况及其临床意义。方法采用免疫组化技术(SP法)检测46例胃癌癌组织及癌旁正常黏膜中P73、E2F-1、Bcl-2蛋白的表达情况。结果胃癌组织中P73蛋白的阳性表达率为69.6%,癌旁正常黏膜组织中为4.3%,两组比较具有统计学意义(P<0.01);P73蛋白的表达与胃癌组织学分级、淋巴结转移、肿瘤浸润深度有关(P<0.05)。胃癌组织中E2F-1阳性表达率为73.9%,癌旁正常黏膜中为8.7%,两者比较有显著性差异(P<0.01);E2F-1在癌组织中的表达与TNM分期、组织学分级、淋巴结转移及肿瘤浸润深度无相关性(P>0.05)。Bcl-2在胃癌中的阳性表达率为52.2%,在癌旁正常黏膜中为15.2%,两者比较差异显著(P<0.01);Bcl-2在癌组织中的表达与胃癌组织学分级具有相关性(P<0.05)。结论P73、E2F-1、Bcl-2在胃癌细胞中共同过度表达,参与了胃癌的发生发展。     

应用基因芯片研究E2F-1过表达对胃癌细胞免疫相关基因表达的影响

目的利用基因表达谱芯片技术筛选过表达E2F-1的胃癌MGC-803细胞与对照组间差异表达的免疫相关基因,初步探讨E2F-1对胃癌细胞免疫功能影响的机制。方法分别抽取转染E2F-1的胃癌MGC-803细胞和未转染E2F-1的胃癌MGC-803细胞的总RNA．纯化mRNA,逆转录合成cDNA标记后,与22K人类基因表达谱芯片进行杂交,扫描后筛选出与免疫相关的差异表达基因,半定量RT-PCR方法验证差异表达基因。结果在21522条基因中,两组细胞间差异表达的免疫相关基因有10条,其中上调基因2条,下调基因8条。上调基因中有1条功能信息不明。其中myc的RT-PCR结果与基因芯片扫描结果相似,具有相同的方向性。结论利用基因芯片技术筛选出E2F-1过表达影响胃癌细胞免疫功能的相关基因,为今后更深入的研究E2F-1对胃癌免疫功能的影响奠定了基础。     

E2F-1在结直肠癌中的表达及意义

目的探讨结直肠癌中E2F-1表达的意义。方法采用免疫组化SP法检测35例结直肠癌、35例癌旁正常组织和12例正常结肠黏膜标本中E2F-1的表达情况,并分析E2F-1与结直肠癌的相关性。结果 E2F-1的表达率在结直肠癌组织(60.0%)明显高于癌旁正常组织(5.7%)和正常大肠黏膜(16.7%),差异均有统计学意义(P<0.05)。E2F-1在肿瘤组织中的表达情况与病人年龄、性别、分化程度及部位等因素无相关性,与淋巴结转移及TNM分期均显著相关(P<0.05)。结论 E2F-1表达与结直肠癌发生密切相关。     

E2F-1过表达对胃癌细胞中癌基因和抑癌基因表达的影响

目的：了解E2F-1过表达对胃癌细胞中癌基因和抑癌基因表达的影响,探讨E2F—1影响胃癌细胞侵袭能力的作用机制。方法：从胃癌细胞MGC-803和MGC803／E2F-1中提取总RNA,纯化mRNA,逆转录将Cy3和Cy5两种荧光素标记到两组逆转录合成的第一链cDNA。与22K人类基因组寡核苷酸芯片进行杂交,采用LuxScan 10K／A双通道激光扫描仪扫描芯片上两种荧光信号,应用LuxScan3．0图像分析软件对图像处理分析,筛选出差异基因。结果：在21522条基因中,MGC-803／E2F-1和MGC-803细胞差异表达的癌基因和抑癌基因有39条,其中上调基因19条（49%）,下调基因20条（51%）。结论：过表达E2F-1在胃癌细胞MGC803中影响了众多癌基因和抑癌基因的表达变化,表明胃癌侵袭能力的变化是多基因相互作用,多种信号传导途径相互影响的结果。     

转录因子E2F-1过表达抑制胃癌细胞MGC-803的增殖

目的 了解E2F-1过表达对胃癌细胞MGC-803增殖、生长和细胞周期的影响。方法 PCR扩增E2F-1基因片段;然后经限制性内切酶 EcoRⅠ和HindⅢ双酶切后将E2F-1定向克隆到真核表达载体pCMV-HA2中转化筛选。用脂质体Lipofectamine2000将该载体转染MGC-803胃癌细胞,然后用含G418的培养基筛选获得具Genectin抗性的过表达E2F-1的胃癌细胞株。RT-PCR和Western blotting技术检测MGC-803/E2F-1细胞内E2F-1表达情况。对稳定转染E2F-1的胃癌MGC-803/E2F-1细胞(实验组)、转染空载体的MGC-803/EV(阴性对照组)及未转染的MGC-803细胞进行MTT法检测,绘制生长曲线和计算细胞增殖率;流式细胞仪检测各组细胞周期分布。结果 RT-PCR和Western blotting 实验证实重组载体pCMV-E2F-1-HA2成功转入胃癌细胞内,并稳定过表达E2F-1。MTT法检测发现,与MGC-803/EV细胞组和MGC-803细胞组相比,胃癌MGC-803/E2F-1细胞的生长受到明显抑制,增殖率下降(26.61±5.19)% vs （93.4±10.29）%、（100±0.00）%,均P <0.01);细胞周期分析显示MGC-803/E2F-1组的细胞在G0/G1期所占比例为70.63%,高于MGC-803/EV组（60.03%,P<0.01）和MGC-803细胞组（60.43%,P<0.01）;MGC-803/E2F-1组的细胞在S期所占比例为(11.27%),明显低于MGC-803/EV组（28.70%,P<0.01）和MGC-803细胞组（29.70,P<0.01）。结论 E2F-1基因过表达抑制胃癌细胞的增殖和生长,细胞周期停滞在G0/G1期。     

子宫腺肌病组织中Bcl-2、E2F-1蛋白的表达及其意义

目的 探讨凋亡抑制基因Bcl-2、转录因子E2F-1在子宫腺肌病发生发展中的作用.方法 用免疫组化技术(SP法)检测58例子宫腺肌病组织和30例正常子宫内膜组织中Bcl-2、E2F-1蛋白的表达情况.结果 子宫腺肌病组织中Bcl-2、E2F-1蛋白的表达较正常子宫内膜组织均明显增加,两组比较有显著性差异(P＜0.05).异位内膜组与在位内膜组间Bcl-2、E2F-1的表达差异无统计学意义(P＞0.05).结论 子宫腺肌病组织中Bcl-2和E2F-1的过度表达与异位内膜组织的过度增生有关.提示Bel-2和E2F-1参与了子宫腺肌病的发生发展.     

年轻女性宫颈鳞癌组织E2F-1和e-Myc的表达分析

摘要：目的研究核转录因子（E2F_1）和原癌基因（c-Myc）在年龄在35岁以下宫颈上皮内瘤病变（CIN）和宫颈鳞癌（scc）中的表达及其相关性,探讨E2F-1和c-Myc在SCC发生发展中的关系与临床病理关系。方法选择手术切除的SCC组织标本40份、CIN标本31份,正常宫颈组织（NCE）10份,采用免疫组化sP法检测各组E2F-1和c-Mye的表达情况,并通过统计学方法分析其表达情况以及与肿瘤分期、病理分型、淋巴结转移等之间的相互关系。结果SCC组中E2F-1阳性表达率为77．5％（31／40）,显著高于CIN组和NCE组（P〈0．01）,E2F-I的表达与SCC的分期及淋巴结转移有相关性（P〈O．01）。c-Myc在SCC中的阳性表达率为62．5％（25／40）,显著高于CIN组和NCE组（P〈0．01）,c-Myc在SCC中的表达与分化及淋巴结转移有关（氏0．01）,但其与分期无关。通过相关性分析发现两者在SCC组织中表达呈正相关。结论E2F-1和c-Myc在SCC发生、发展中起重要作用,E2F-1和c-Myc上调表达可作为SCC预后的判断指标。     

E2F-1过表达对胃癌细胞生物学行为影响的分子机理初步研究

目的 利用基因表达谱芯片技术筛选过表达E2F-1的胃癌MGC-803细胞与对照组间的差异表达基因,探讨E2F-1对胃癌细胞生物学行为影响的分子机理。方法 分别抽取转染E2F-1的胃癌MGC-803细胞和未转染E2F-1的胃癌MGC-803细胞的总RNA。纯化mRNA,逆转录合成cDNA标记后,与22K人类基因表达谱芯片进行杂交,扫描后筛选出表达差异的基因。随机选取3个差异表达基因,分别设计引物,用半定量RT-PCR检测验证。 结果 在21522条基因中,两组细胞间的差异表达基因有740条,其中上调基因405条,下调基因335条。差异基因中有73条功能信息不明。随机选取的3个差异表达基因的RT-PCR结果与基因芯片扫描结果相似,具有相同的方向性。结论 胃癌的发生发展是多基因相互作用、多种信号通路相互调节的结果。生物信息学分析显示, E2F-1基因可以通过TP53信号传导途径影响胃癌MGC-803细胞生物学行为的改变,还与众多基因的差异性表达密切相关。     

转录因子E2F-4在中低位直肠癌组织中的表达及意义

目的 检测中低位直肠癌组织中转录因子E2F-4的表达,并分析其与临床病理学参数和预后的关系.方法 选取临床资料与肿瘤病理标本完整的60例中低位直肠癌患者,所有患者均行直肠癌根治术,另以肠镜活检30例慢性结肠炎的直肠黏膜组织作为对照.免疫组织化学法检测直肠癌组织、癌旁组织及对照直肠黏膜的E2F-4表达,分析其与患者性别、年龄、肿瘤大小、肿瘤分化程度、淋巴结转移、TNM分期和术后转移复发等临床病理参数以及预后的关系.结果 直肠癌组织E2F-4表达显著高于癌旁组织和对照直肠黏膜(P<0.05);直肠癌组织E2F-4表达与肿瘤分化程度、TNM分期、淋巴结转移和术后转移复发有关;直肠癌组织E2F-4表达阴性者术后平均无瘤生存时间显著大于阳性者(P<0.05).结论 转录因子E2F-4与直肠癌生物学行为密切相关,在中低位直肠癌的发生发展中可能发挥癌基因的作用.