阿司匹林经核因子-κB信号通路抑制胃癌细胞株AGS生长

目的 研究阿司匹林是否通过阻断核因子-κB（NF-κB）信号通路对胃癌细胞AGS增殖及周期产生影响。 方法 培养胃癌细胞株AGS,MTT法检测阿司匹林在不同浓度和不同作用时间下对AGS细胞增殖的影响;流式细胞术检测阿司匹林对细胞周期的影响;western blotting 和免疫荧光法检测阿司匹林对AGS细胞 NF-κB p65表达的影响。 结果 阿司匹林在0.1~10 mmol/L浓度区间内,随浓度增加和时间延长,对AGS细胞的抑制率逐渐增加。细胞周期中DNA合成前期(G0/G1期)的细胞比例增加,DNA合成期（S期）细胞比例下降。随阿司匹林浓度增加和作用时间延长,AGS细胞 NF-κB p65的表达渐降。 结论 阿司匹林抑制胃癌细胞AGS的增殖, 诱导细胞G0/G1期阻滞,其作用机制可能是通过阻断NF-κB信号通路实现的。     

对白细胞介素-1β激活核转录因子-κB介导A549细胞分泌细胞间黏附分子-1作用的研究

目的 研究白细胞介素-1β(IL-1β)对A549细胞表达细胞间黏附分子-1(ICAM-1)的诱导作用及相关细胞内信号通路的激活和转导机制.方法 以1 μg/L终浓度的IL-1β刺激经SC-514[核转录因子-κB(NF-κB)的IKK-2复合物抑制物]预处理的A549细胞,用蛋白质免疫印迹法(Western blotting)检测IL-1β刺激5、10、30、60 min时细胞内磷酸化NF-κB抑制蛋白(pIκBα)和IκBα蛋白表达水平;激光扫描共焦显微镜(LSCM)显像检测NF-κB p65的核转移过程;按试剂盒说明测定NF-κB DNA结合活性;p65抗体染色质免疫沉淀结合聚合酶链反应(ChIP-PCR)技术检测乙酰化组蛋白H4和p65与ICAM-1基因启动子的结合;逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测4 h后的ICAM-1 mRNA表达;酶联免疫吸附法(ELISA)检测24 h后细胞表面的ICAM-1蛋白表达.结果 IL-1β刺激后细胞内pIκBα蛋白表达水平明显升高,IκBα蛋白表达水平明显下降;LSCM检测显示激活的p65蛋白从胞质向胞核转移,p65与DNA结合活性明显升高(P<0.01).ChIP-PCR扩增发现,IL-1β促使乙酰化组蛋白H4和p65与ICAM-1基因启动子区域的DNA片断结合.IL-1β刺激4 h后ICAM-1 mRNA表达明显升高,刺激24 h后A549细胞表面ICAM-1蛋白表达亦明显升高(P均<0.01).SC-514阻断了pIκBα蛋白的升高和IκBα蛋白的下降;减少了p65蛋白的核转移和DNA结合活性;降低了ICAM-1的mRNA及蛋白表达水平(P均<0.01).结论 IL-1β通过激活NF-κB 介导了A549细胞表达ICAM-1.     

NORE1基因调控胃癌细胞迁移、侵袭及机制研究

目的研究Ras相关区域家族5(NORE1)基因过表达对胃癌细胞迁移、侵袭的影响及其作用机制。方法采用前瞻性研究将胃癌细胞分为NORE1过表达组和对照组,分别转染人的胃癌AGS细胞和SGC7901细胞,Westren blot检测细胞转染效率;Transwell实验检测细胞迁移和侵袭的能力;Westren blot检测胃癌AGS细胞和SGC7901细胞中星形胶质细胞上调基因1(AEG-1)和基质金属蛋白酶9(MMP-9)的蛋白表达水平。结果转染NORE1过表达质粒后,胃癌AGS细胞和SGC7901细胞中NORE1表达量显著高于对照组(P0.05)。胃癌细胞AGS、SGC7901的迁移、侵袭能力减弱,与对照组具有显著差异(P0.05)。与对照组相比,NORE1过表达组胃癌细胞AGS、SGC7901中AEG-1蛋白和MMP-9蛋白的表达量显著下降(P0.05)。结论胃癌细胞中NORE1基因可以通过调节AEG-1蛋白和MMP-9蛋白的表达量影响其迁移和侵袭能力。     

幽门螺杆菌阳性胃癌组织中RUNX3、NF-κB p65蛋白表达及临床意义

目的研究胃癌组织中RUNX3、NF-κB p65蛋白表达与幽门螺杆菌(Hp)感染等胃癌临床病理特征的关系。方法通过免疫组化方法检测60例胃癌组织、癌周组织中RUNX3、NF-κB p65蛋白表达水平,并分析胃癌组织中RUNX3与NF-κB p65蛋白表达水平的相关性,Hp感染、临床分期、胃癌细胞分化程度及病理分型对其影响。结果胃癌组织的RUNX3蛋白表达阳性率为35.0%,低于癌旁组织81.7%,NF-κB p65蛋白表达阳性率与癌旁组织相同,但阳性强度高于癌旁组织,差异均有统计学意义(P均<0.05)。胃癌组织中的RUNX3与NF-κB p65蛋白表达水平呈负相关。Hp阳性的胃癌组织中RUNX3的阳性率低于Hp阴性的胃癌组织(21.1%vs.59.1%,P=0.000),NF-κB p65蛋白表达阳性率高于Hp阴性的胃癌组织(94.7%vs.86.4%,P=0.000)。TNM分期为Ⅲ期的胃癌组织中RUNX3蛋白阳性表达率低于Ⅰ期和Ⅱ期(18.9%vs.76.9%、33.3%,P=0.001),NF-κB p65的蛋白阳性表达率在不同分期胃癌组织中差异无统计学意义。不同的胃癌细胞分化程度及病理分型对RUNX3、NF-κB p65蛋白表达水平未见明显影响。结论胃癌组织中存在RUNX3蛋白表达水平下降及NF-κB p65蛋白表达上调,RUNX3蛋白表达水平的下调与Hp感染及胃癌的临床分期有关。     

整合素连接激酶通过核因子κB途径介导基质金属蛋白酶9上调促进肺癌细胞迁移和侵袭

目的 探讨整合素连接激酶（ILK）促进肺癌细胞侵袭的相关分子机制.方法 通过细胞转染、siRNA干扰、细胞划痕实验、实时定量PCR、Western Blot方法探讨ILK和基质金属蛋白酶9（MMP-9）在肺癌A549细胞中的表达及相互关系.结果 在肺癌A549细胞系中,过度表达的ILK诱导MMP-9的表达（P＜0.01）;加入MMP-9抑制剂多西环素显著影响了转染组细胞划痕愈合能力（P＜0.01）,加入抗-MMP-9中和抗体则严重阻碍了细胞迁移能力（P＜0.01）,体外基底膜侵袭实验亦得到了相同的结果（P＜0.01）.ILK的过度表达促进磷酸化和核因子-κB（NF-κB）亚单位p65的核易位（P＜0.01）,并且NF-κB抑制剂BAY11-7028和NF-κBp65siRNA能抑制ILK高表达细胞系中MMP-9的上调（P＜0.01）.结论 本研究结果表明,ILK的过度表达可促进肺癌细胞迁移和侵袭,并且是通过NF-κB途径介导MMP-9上调来实现这一过程.     

胎膜早破孕妇胎膜组织中NF-κB和MMP-9的表达及意义

目的通过检测胎膜组织中NF-κB和MMP-9蛋白的表达,分析其在胎膜早破(PROM)发病中的作用及相关性。方法①胎膜病理切片HE染色镜检,将病例分为绒毛膜羊膜炎组和非绒毛膜羊膜炎组;②采用免疫组化SP法检测32例PROM和20例正常孕妇胎膜组织中NF-κB和MMP-9的表达。结果①所有PROM胎膜标本,诊断为绒毛膜羊膜炎者占46.88%,正常组胎膜感染占10.00%。②PROM组胎膜组织中NF-κB、MMP-9表达明显高于对照组孕妇(P<0.05);绒毛膜羊膜炎组胎膜NF-κB、MMP-9表达明显高于非绒毛膜羊膜炎组(P<0.05);胎膜中MMP-9阳性表达与NF-κBP65亚单位阳性表达采用线性相关分析成明显正相关关系(P<0.01)。结论NF-κB、MMP-9均参与了PROM的发病。MMP-9基因的表达受多功能核转录因子κB的调控。NF-κB活化可能是PROM发生的关键点。     

失血性休克肝枯否氏细胞I-κB激酶的表达及意义

目的探讨IκB激酶-β(IKK-β)在失血性休克继发肝脏损伤中的作用.方法采用失血性休克家兔模型;分离培养肝脏枯否氏细胞(KC),用原位杂交方法(ISH)、凝胶电泳迁移率改变分析法(EMSA)和酶联免疫吸附实验(ELISA)分别检测KC中IKK-β mRNA表达、核因子(NF)-κB活性和KC培养液上清中TNF-α含量.并进行肝脏组织的病理学光镜检查.结果模型组KC中IKK-β的mRNA表达(0.17±0.04)、NF-κB活性(1.72±0.36)和培养液上清中TNF-α含量(300.05±30.86) ng/L较对照组[IKK-β(0.02±0.01)、NF-κB(0.31±0.10)、TNF-α(134.85±12.09) ng/L]明显增高(P均＜0.01).模型组肝脏组织病理损伤严重.结论 IKK-β介导NF-κB活化诱发细胞因子释放在失血性休克诱发肝脏损害的病理机制中发挥重要作用.     

胎膜早破孕妇胎膜组织中NF—κB和MMP-9的表达及意义

目的通过检测胎膜组织中NF-κB和MMP-9蛋白的表达，分析其在胎膜早破（PROM）发病中的作用及相关性。方法①胎膜病理切片HE染色镜检，将病例分为绒毛膜羊膜炎组和非绒毛膜羊膜炎组；②采用免疫组化SP法检测32例PROM和20例正常孕妇胎膜组织中NF-κB和MMP-9的表达。结果①所有PROM胎膜标本，诊断为绒毛膜羊膜炎者占46．88％，正常组胎膜感染占10．00％。②PROM组胎膜组织中NF-κB、MMP-9表达明显高于对照组孕妇（P〈0．05）；绒毛膜羊膜炎组胎膜NF-κB、MMP-9表达明显高于非绒毛膜羊膜炎组（P〈0．05）；胎膜中MMP-9阳性表达与NF-κBP65亚单位阳性表达采用线性相关分析成明显正相关关系（P〈0．01）。结论NF-κB、MMP-9均参与了PROM的发病。MMP-9基因的表达受多功能核转录因子出的调控。NF-κB活化可能是PROM发生的关键点。     

脂多糖对血管平滑肌细胞表达MMP-9的影响及可能机制

目的探讨脂多糖(lipopolysaccharides,LPS)对培养的大鼠血管平滑肌细胞(vascular smooth musch cell,VSMC)表达基质金属蛋白酶-9(matrix metalloproteinase-9,MMP-9)的影响及可能的分子机制。方法贴块法进行血管平滑肌细胞培养,细胞免疫化学检测MMP-9的蛋白表达及核因子NF-κB激活情况,原位分子杂交分析MMP-9mRNA表达。结果LPS是MMP-9的强诱导物,可在蛋白及mRNA水平诱导MMP-9的表达,LPS对其诱导作用强度与LPS的浓度呈正相关。与正常组比较LPS刺激15min即有NF-κB p65核转移,30min达高峰,1h后减弱。结论LPS诱导平滑肌细胞MMP-9表达,其作用呈浓度时间依赖性,MMP-9表达升高可能与LPS激活NF-κB有关。MMP-9表达升高和NF-κB激活提示LPS在动脉粥样硬化发病过程中可能起一定作用。     

川崎病并发冠脉损伤患儿血清活化HUVECs NF-κB促使MMP-9 mRNA水平上调的实验研究

目的 探讨脐静脉内皮细胞(human umbilical vein endothelial cells,HUVECs)在川崎病(kawasaki disease,KD)并发冠状动脉损伤(coronary artery lesions,CALs)患儿血清作用下,核因子-κB(nuclear factor-kappa B,NF-κB)对基质金属蛋白酶9(matrix metalloproteases 9,MMP9)mRNA转录的影响。方法将HUVECs分为4组,分别为正常血清组(control组)、一般发热血清组(F组)、无冠脉损伤组(non-CALs组)和冠脉损伤组(CALs组)。免疫共沉淀(co-immunoprecipitation,ChIP)检测HUVECs中NF-κB p65与MMP-9启动子结合情况,RT-PCR检测HUVECs MMP-9mRNA水平。结果 与对照组相比,经KD患儿,特别是并发CALs患儿血清作用后,HUVECs NF-κB p65可直接结合在MMP-9启动子上,同时MMP-9 mRNA呈高表达。结论 HUVECs在KD并发CALs患儿血清作用下,NF-κB p65可直接结合在MMP-9启动子上促进其转录。     

共生菌对小鼠肺脏组织核转录因子κB与抑制性κB激酶α/β及磷脂酰肌醇3-激酶表达的调控作用

目的 研究共生菌对小鼠肺脏组织中核转录因子κB(NF-κB)、抑制性κB激酶α/β(IKK-α/β)及磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)等信号通路分子表达的调控作用.方法 用Western blot方法检测共生菌缺失小鼠(Abx鼠)及正常小鼠(WT鼠)肺脏组织中NF-κB、IKK-α/β及PI3K等的表达量及其磷酸化水平,...     

NF-κB p65与ICAM-1在食管鳞癌中的表达及临床病理意义

目的:探讨核转录因子-κB(NF-κB)p65和细胞间黏附因子-1(ICAM-1)在食管鳞癌组织中的表达及意义.方法:应用免疫组化SP法检测NF-κB p65与ICAM-1蛋白在49例食管鳞癌、33例癌旁不典型增生组织和32例正常食管黏膜组织中的表达情况.结果:正常食管黏膜组织、癌旁不典型增生组织及食管鳞癌组织中NF-κB p65及ICAM-1蛋白的阳性表达率逐渐增高,且组间比较差异有统计学意义(P均＜0.05),同时两者的表达均与食管鳞癌浸润深度和淋巴结转移密切相关(P＜0.05).NF-κBp65和ICAM-1蛋白表达与食管癌患者的性别、年龄均无显著相关关系(P均＞0.05).NF-κBp65和ICAM-1蛋白表达间呈正相关关系(P＜0.05).结论:NF-κBp65及ICAM-1在食管鳞癌的浸润、转移及黏膜上皮癌变中起重要作用.     

TFF3和 NF-κB 在幽门螺杆菌相关性胃病中的表达及意义

[目的]探讨三叶因子3（TFF3）和核转录因子-κB NF-κB）在胃癌中表达的意义与幽门螺杆菌（Hp）感染的关系。[方法]胃癌组（GC组）70例,肠上皮化生组（IM 组）30例,浅表性胃炎组（CSG组）30例,应用免疫组化方法测定TFF3和NF-κBp65的表达,同时检测Hp感染。[结果]CSG、IM、GC各组织中 TFF3和NF-κB表达水平呈逐渐增强趋势,GC组中 TFF3和 NF-κBp65表达水平均高于CSG 组（ P ＜0．01或0．05）。IM组中 Hp阳性感染率高于CSG组（ P ＜0．05）。IM组中Hp感染者NF-κBp65、TFF3表达显著高于Hp阴性病例（ P ＜0．05）,CSG组、GC组中Hp阳性和阴性病例NF-κBp65、TFF3表达差异无统计学意义（ P ＞0．05）。[结论]NF-κB、TFF3高表达可能是胃癌发生的早期事件,联合检测NF-κBp65、TFF3和 Hp感染对胃癌预防及早期诊断有重要的提示作用。     

膝关节炎治疗仪治疗对兔膝骨性关节炎关节软骨形态结构及NF-κB炎症通路的影响

目的:探讨膝关节炎治疗仪(KATA)治疗对兔膝骨性关节炎关节软骨形态结构及NF-κB炎症通路的影响。方法:24只新西兰大白兔按照随机数字表分为正常组、模型组和实验组,每组8只。正常组和模型组不予任何治疗;实验组给予KATA治疗,每次30 min,每日2次,连续治疗16周。HE染色观察软骨组织形态变化,Mankin评分分析软骨退变程度,免疫组化观察NF-κB p65、IKK-β、IκB-α阳性表达。结果:HE染色和Mankin评分发现,KATA组能改善关节软骨形态结构,减缓软骨退变。免疫组化显示,与模型组相比,KATA治疗后NF-κB p65、IKK-β表达显著降低(P0.05),IκB-α表达显著升高(P0.05)。结论:KATA可通过调节NF-κB炎症通路中NF-κB p65、IKK-β、IκB-α的表达,进而缓解关节软骨退变,起到治疗膝骨性关节炎的作用。     

NF-κB/IκB信号通路在阿霉素肾病发病机制中的作用

目的:探讨阿霉素肾病大鼠肾组织中核因子-κB(NF-κB)活化及其抑制因子IκB表达.方法:阿霉素肾病模型采用尾静脉注射阿霉素制备.应用凝胶电泳迁移率(EMSA)和Western Blot检测阿霉素肾病大鼠肾组织中NF-κB活化、p65亚基核转位以及IκBα和IκBβ的表达.结果:阿霉素肾病肾组织中NF-κB活化显著增强,p65由胞浆转移至胞核,胞浆内IκBα和IκBβ表达明显降低.结论:NF-κB/IκB信号通路在非免疫、非炎症性肾小球疾病发病机制中发挥重要作用.     

p62参与人恶性黑色素瘤细胞NF-κB活性调控

目的探讨多功能蛋白p62参与调控人恶性黑色素瘤细胞NF-κB活性的机制。方法选取人恶性黑色素瘤标本20例,免疫组化方法检测p50、p65、p62表达。人黑色素瘤A375细胞,转染p62-siRNA特异性表达载体。MTT法检测细胞生存率,western blot检测p62蛋白表达,NF-κB荧光素酶报告基因分析检测NF-κB活性。结果 Spearman等级相关性分析p50与p65、p65与p62表达呈正相关均有统计学意义（P〈0.05）。与对照组相比,A375细胞转染p62-siRNA特异性表达载体24h、48h和72h,p62蛋白表达、细胞生存率和NF-κB活性均明显降低（P〈0.05）。结论人恶性黑色素瘤中p62表达与NF-κB高表达呈正相关,降低p62表达能通过抑制NF-κB活性降低A375细胞存活率,表明p62参与NF-κB活性调控。     

NF-κB与蛋白激酶CβⅡ在胃癌中的表达及意义

目的检测143例胃癌组织中NF-κB和PKCβⅡ的表达情况,探讨二者在胃癌组织中表达的相关性,以及与胃癌临床病理的关系。方法采用免疫组化(SP)法,检测143例手术切除胃癌及癌旁正常胃组织中NF-κB、PKCβⅡ的表达情况,并与临床病理特征结合进行综合分析。结果 NF-κB在胃癌组织中表达率(67.1%)高于癌旁正常组织(21.6%),二者之间差异具有统计学意义(P<0.05);PKCβⅡ胃癌组织中表达率(58.4%)高于癌旁正常组织(30.8%),二者之间差异具有统计学意义(P<0.05);二者表达呈正相关,与胃癌的组织学类型、浸润深度及淋巴结转移具有相关性。结论 NF-κB与PKCβⅡ在胃癌组织中高表达,并且与胃癌的发生、恶性程度、浸润深度、淋巴结转移和TNM分期有一定的关系,二者在胃癌的发生发展中可能具有协同作用。联合检测两种指标有望对胃癌发生发展的研究、判断预后及靶向治疗提供依据。     

FLIP、NF-κB在胃癌及癌前病变中的表达及其与细胞增殖凋亡的关系

[目的]研究FLIP、NF-κB在胃癌及癌前病变中的表达并观察其与细胞增殖、凋亡的关系.[方法]运用免疫组化检测FLIP、NF-κB与PCNA在45例胃癌与60例癌前病变组织中的表达,并应用TUNEL法检测细胞凋亡情况.[结果]胃癌组织FLIP、NF-κB表达率分别为82.2%（37/45）、62.2%（28/45）明显高于肠化30.0%（9/30）、23.7%（7/30）与非典型增生40.0%（12/30）、33.3%（10/30）（P〈0.05）.FLIP表达与胃癌分期（早期与进展期）及淋巴结转移相关,与肿瘤分化程度无明显相关性;NF-κB表达与胃癌分化程度、临床分期及淋巴结转移相关（P〈0.05）.胃癌阶段,FLIP表达与细胞凋亡指数（AI）成负相关（r=-0.865,P〈0.01）;而NF-κB在整个胃癌形成过程中均与AI指数成负相关（r=-0.57,P〈0.05）; FLIP、NF-κB表达与PI呈正相关（r=0.86,P〈0.05）;NF-κB与FLIP呈正相关（r=0.52,P〈0.05）.[结论]FLIP与NF-κB异常表达与胃癌的发生发展及预后密切相关,其主要作用是抗细胞凋亡与促进细胞增生;NF-κB与FLIP在胃癌形成中可能起协同作用.     

胃癌组织中核因子-кB的活化及其临床意义

目的：分析胃癌组织中核因子-κB（NF-κB）-p65成分的表达与临床病理特征的关系，从而探讨NF-κB在胃癌的发生、发展中的意义。方法：收集1999年3月至2003年6月我院普外科手术切除并经病理组织学证实的胃癌标本92例，胃镜下活检的慢性胃炎标本50例。采用免疫组化SABC法检测组织标本中的NF-κB—p65，比较两组表达的差异及研究NF-κB与临床病理特征的关系。结果：在92例胃癌标本中70例NF-κB—p65表达阳性（76．1％），可见明显的核移位现象，高于癌旁组织、炎症组织。癌旁组织、炎症组织阳性率分别为40．2％（37／92），54．0％（27／50）。胃癌的病理分级低分化组的NF-κB-p65阳性表达率为63．3％（19／30），高中分化组阳性率为82．3％（51／62），两者差异有统计学意义（P〈0．01）。在胃癌中，年龄、性别、浸润深度、淋巴结有无转移等分组之间NF-κ-p65阳性率及DNA结合活性差异无统计学意义（P〉0．05）。结论：NF-κB在胃癌组织中明显活化，与肿瘤的分化程度具有相关性     

NF—κB／ⅠκB信号通路在阿霉素肾病发病机制中的作用

目的：探讨阿霉素肾病大鼠肾组织中核因子-κB(NF-κB)活化及其抑制因子IκB表达。方法：阿霉素肾病模型采用尾静脉注射阿霉素制备。应用凝肢电泳迁移率(EMSA)和western Blot检测阿霉素肾病大鼠肾组织中NF-κB活化、P65亚基核转位以及IκBβ和IκBβ的表达。结果：阿霉素肾病肾组织中NF-κB活化显著增强，P65由胞浆转移至胞核，胞浆内IκBα和IκBβ表达明显降低。结论：NF-κB／IκB信号通路在非免疫、非炎症性肾小球疾病发病机制中发挥重要作用。