α7烟碱样乙酰胆碱受体调节干细胞功能的研究进展

α7烟碱型乙酰胆碱受体(alpha 7 nicotinic acetylcholine receptor,α7nACHR)作为一种神经递质受体,广泛存在于各种非神经组织,参与调节细胞增殖、分化及生存等功能。最新的研究发现：α7nACHR不仅在成熟的组织和器官,而且也在未分化的干/祖细胞中表达。作为一种重要的受体,具有调节干/祖细胞自我更新和分化的作用。本文就α7nACHR在干细胞中的表达及其作用特征,尤其与干细胞功能障碍相关疾病的关联机制进行了综述。期望以此了解α7nACHR在干细胞中的作用,并为以α7nACHR为靶点的新药研发及干细胞治疗提供可靠的依据。     

α7烟碱型乙酰胆碱受体在单核/巨噬细胞介导的炎症反应与极化调控中的作用北大核心CSCD

单核细胞和巨噬细胞在健康和疾病中均发挥重要作用,是固有免疫的重要组成,在其介导的炎症反应中保护宿主、清除病原体和调节免疫平衡,可通过清除细胞碎片、异物及调节炎症和愈合过程等维持内环境稳定。根据微环境和细胞激活状态,巨噬细胞可通过改变不同表型影响疾病转归。近二十年人们对胆碱能抗炎通路(CAP)在炎症反应中的作用及机制研究越来越深入,尤其是该通路中的重要结构——α7烟碱型乙酰胆碱受体(α7nAChR),其本质为神经免疫系统的配体门控离子通道,且在调控单核/巨噬细胞吞噬、趋化因子和细胞因子产生、细胞存活和极化等方面发挥重要作用,相关机制涉及NLRP3炎症小体,可作为多种炎症性疾病的潜在治疗靶点。本文综述α7nAChR在炎症和免疫介导的疾病中对单核/巨噬细胞功能调控和极化的作用。     

α7烟碱型乙酰胆碱受体激动剂抑制骨水泥微粒刺激小鼠外周血单核细胞分泌炎性因子

目的探讨α7烟碱型乙酰胆碱受体(α7n AChR)激动剂PNU282987对骨水泥微粒刺激小鼠外周血单核细胞分泌炎性反应因子的影响及其分子机制。方法分离培养小鼠外周血单核细胞,使用聚甲基丙烯酸甲酯(PMMA)微粒刺激后,ELISA检测培养上清液中TNF-α、IL-1β和IL-6的含量;RT-PCR检测细胞TNF-α、IL-1β和IL-6的mRNA表达;Western blot检测p-p65、p65、p-JAK2、JAK2、p-STAT3、STAT3及β-actin的表达;ELISA检测NF-κB DNA结合活力。结果单核细胞经PMMA微粒刺激后,上清液中TNF-α、IL-1β和IL-6的含量明显增高(P0.05);细胞TNF-α、IL-1β和IL-6 mRNA表达明显增高(P0.05);p65、JAK2和STAT3磷酸化明显增强(P0.05);NF-κB DNA结合活力明显增高(P0.05)。不同浓度PNU282987作用后,上清液中TNF-α、IL-1β和IL-6的含量呈浓度依耐性下降(P0.05);细胞TNF-α、IL-1β和IL-6 mRNA表达呈浓度依耐性下降(P0.05);总p65、JAK2和STAT3的表达不变;p-p65、p-JAK2和p-STAT3的表达呈浓度依耐性下降(P0.05);NF-κB DNA结合活力也呈浓度依耐性下降(P0.05)。结论α7n AChR激动剂PNU282987能显著抑制PMMA骨水泥微粒所诱导的小鼠血单核细胞炎性反应因子的分泌。     

严重多发伤并急性胃肠损伤家兔的肠道黏膜损伤严重程度及α7烟碱型乙酰胆碱受体的变化北大核心CSCD

目的:探究严重多发伤并急性胃肠损伤(AGI)家兔的肠道黏膜损伤严重程度及α7烟碱型乙酰胆碱受体(α7-nAChR)的变化。方法:使用自制重力小型牵引式对(侧)撞机来模拟交通意外致伤以构建严重多发伤家兔模型;创伤严重程度评分(ISS)评估家兔创伤程度;AGI评分评估家兔AGI程度;ELISA法检测血浆二胺氧化酶(DAO)、内毒素及血清TNF-α含量;高压液相色谱法检测尿液乳果糖(L)、甘露醇(M)含量,并计算L/M;平板计数法检测家兔肠道细菌移位情况;HE染色及透射电镜分别观察小肠组织病理变化及超微结构损伤情况;免疫组化法及Western blot检测小肠组织α7-nAChR表达情况。结果:造模12 h后,AGI分级:Ⅰ级40只,Ⅱ级25只,Ⅲ级11只,Ⅳ级4只;与T0比较,T1、T2、T3家兔血浆DAO及内毒素、尿液L/M及血清TNF-α含量、肠道细菌移位率、肠道病理损伤程度随时间的推移依次显著升高(P<0.05),小肠组织α7-nAChR表达随时间的推移依次显著降低(P<0.05)。结论:严重多发伤家兔于早期便出现肠道功能损伤、肠道菌群移位及肠黏膜屏障功能损伤,这可能与α7-nAChR表达降低有关。     

α4亚基Arg-188和Pro-198突变促进α4β2烟碱型乙酰胆碱受体开放

目的:探讨乙酰胆碱、尼古丁、伐尼克兰和金雀花碱4种激动剂与α4β2烟碱型乙酰胆碱受体(nAChRs)及其突变体相互作用的活性关键位点.方法:体外转录法制备野生型(wt)与突变型α4亚基cRNAs,注射入非洲爪蟾卵母细胞,应用电生理方法,测定4种激动剂对α4β2 nAChRs及其突变体的门控活性.结果:乙酰胆碱对wtα4...     

α7nAchR对脓毒症患者重要器官损伤控制的研究进展

脓毒症是指因机体对感染的反应失调而导致的危及生命的器官功能障碍.其病情发展迅速,患者预后较差,及时的治疗,尽早控制器官功能损伤能够很大程度上改善患者的预后.α7烟碱型乙酰胆碱受体(α7 nicotinic acetylcholine receptor,α7nAchR)是胆碱能抗炎途径中的主要受体,在危重疾病中发挥重要作...     

用电压钳检测烟碱型乙酰胆碱受体导电孔道的重要位点

目的 利用双电极电压钳技术检测组成人烟碱型乙酰胆碱受体离子导电孔道的主要氨基酸位点.方法 用定点突变的方法将人alpha 7烟碱型乙酰胆碱受体(α7 nAChR)亚基跨膜区段M2的氨基酸(Leu248-Ala258)逐一突变为亲水性的丝氨酸,随后利用cDNA质粒体外转录获得cRNA,并将单个突变体的cRNA注射到非洲爪...     

神经型烟碱乙酰胆碱受体α7亚单位基因多态性与精神分裂症的传递不平衡研究

目的 探讨神经型烟碱乙酰胆碱受体α7亚单位基因(neuronal nicotinic acetyleholine receptor α7 subunit gene,CHRNA7)多态性与精神分裂症的关系.方法 应用聚合酶链反应及聚丙烯酰胺凝胶芯片技术检测129个精神分裂症先证者核心家系CHRNA7基因的rs2337980、rs1909884、rs883473三个单核苷酸多态性,并采用基于单倍型的单倍型相对风险检验(haplotype relative risk,HHRR)、传递不平衡检验(transmission disequilibrium test,TDT)及单倍型分析进行统计.结果 (1)HHRR分析结果显示rs2337980位点精神分裂症患者组与虚拟对照组之间等位基因频率差异有统计学意义(P=0.017);(2)TDT分析发现,rs2337980位点与精神分裂症之间可能存在传递不平衡,杂合子父母过多的传递等位基因C给患病子女(P=0.021).(3)单倍型分析发现,rs2337980、rsl909884及rs2337980、rsl909884、rs883473组成的单倍型与精神分裂症有显著相关(总体P=0.034;glohal P=0.027),其中T-C,T-C-T两个单倍型与精神分裂症可能存在传递不平衡.结论 CHRNA7 基因多态性可能与精神分裂症存在关联,rs2337980的变异等位基因T可能是精神分裂症的保护性因子.     

葡萄糖氧化酶诱导的氧化应激抑制α4β2烟碱型乙酰胆碱受体电流

目的探究葡萄糖氧化酶(GO)引起的氧化应激对α4β2烟碱型乙酰胆碱受体(nAChR)电流的影响。方法在HEK293T细胞共转染α4和β2质粒48 h后进行实验。分为对照组(control组)、3.5 k U/L的GO处理组(GO组)、3.5 k U/L的GO与450 k U/L的过氧化氢酶(CAT)共处理组(CAT组)。使用DCFH-DA荧光探针以及激光共聚焦显微镜来检测活性氧(ROS)的产生;采用全细胞膜片钳检测α4β2 nAChR的电流变化,给予1、10和30μmol/L ACh检测受体功能,给予10μmol/L ACh检测电流变化。结果全细胞膜片钳记录到呈ACh剂量依赖性的电流;GO处理HEK293T细胞1 h后可显著地增强细胞活性氧的水平(P0.001);对照组电流在10次给药中均保持稳定,GO组的电流在连续10次的ACh给药下逐渐降低(P0.01);CAT组反转GO引起的α4β2 nAChR电流下降(P0.01)。结论GO引起的氧化应激状态导致α4β2 nAChR电流逐渐下降,α4β2 nAChR电流的下降与ROS的增多密切相关。     

rL-RVG通过α7烟碱型乙酰胆碱受体诱导胃癌细胞系SGC凋亡的机制

目的探讨表达狂犬病毒疫苗糖蛋白的重组新城疫病毒(rL-RVG)通过乙酰胆碱受体诱导胃癌细胞凋亡的可能机制。方法将对数增殖期的胃癌细胞系SGC随机分成rL-RVG、新城疫病毒(NDV)组、PBS组,并同时分别设α7烟碱型乙酰胆碱受体(α7-nAChR)抑制剂(MLA)及激动剂(ACB)预处理组。病毒感染24 h后,CCK8法测定病毒对SGC增殖影响;蛋白印迹检测α7-nAChR、RVG、NDV;凋亡蛋白cleved-caspase-3、BAX/BCL-2;P-ERK、ERK的表达。免疫荧光法测定P-ERK表达。结果随着rL-RVG、NDV病毒液浓度增加,胃癌细胞活力下降,rL-RVG在10~(-2)稀释倍数时抗增殖作用显著(P0.05);病毒组凋亡相关蛋白cleved-caspase-3、BAX/BCL-2相对表达量较PBS组明显升高,且rL-RVG组较NDV组及PBS组升高明显,乙酰胆碱受体抑制剂预处理后rL-RVG组、NDV组及PBS组凋亡蛋白水平明显增高,胆碱受体激动剂预处理组凋亡蛋白表达水平明显下降(P0.05);P-ERK在病毒组表达下降,且rL-RVG组较NDV组更低,乙酰胆碱受体抑制剂、激动剂预处理后分别下降、上升(P0.05)。结论rL-RVG通过α7-nAChR诱导胃癌细胞系SGC凋亡的机制之一是抑制ERK通路。     

EphB/Ephrin-B1信号对睫状神经节α7-尼古丁乙酰胆碱受体电流的影响

目的 探讨EphB/Ephrin.B1信号对鸡胚睫状神经节(CG)神经元上α7-尼古丁乙酰胆碱受体(α7-nAChRs)电流的影响. 方法用膜片钳技术分别在培养的和急性分离的CG神经元上记录α7-nAChRs电流.细胞被随机分为:对照组、Ephrin-BlFc处理组、IgG处理组和Ephrin-B1处理组,观察电流的变化. 结果对照组、lgG组和Ephrin-B1处理组之间α7-nAChRs电流无显著差异(P>0.05),而这3组与Ephrin-BlFc处理组之间有显著差异(P<0.05).Ephrin-BlFc可浓度依赖性抑制α7-nAChRs电流,该过程可在数分钟内发生,并呈现可逆性.培养的和急性分离的CG神经元Ipeak/Cm的IC50分别为0.032mg/L和1.4mg/L. 结论 Eph/Ephrin-Bl信号町影响CG神经元α7-nAChRs的电流,提示Eph/Ephrin-Bl可能参与交感神经系统功能的调控.     

α3β2与α3β4烟碱型乙酰胆碱受体α和β亚基不同配比的药理活性研究

目的:比较α和β亚基不同配比形成α3β2和α3β4烟碱型乙酰胆碱受体(nAChR)敏感性的差异。方法:体外转录获得α和β亚基的cRNA,采用显微注射将3种不同配比(α∶β分别为1∶10、1∶1和10∶1)的cRNA注入非洲爪蟾卵母细胞,利用双电极电压钳检测受体表达情况。利用激动剂乙酰胆碱(ACh)和拮抗剂α-芋螺毒素Reg IIA(α-CTx Reg IIA)检测在3种配比条件下形成受体药理活性的差异。结果:对于α3β2 nAChR亚型,在3种配比情况下,ACh的半数有效浓度(EC50)分别为91.2μmol/L、104.4μmol/L和130.6μmol/L,α-CTx Reg IIA的半数抑制浓度(IC50)分别为40.2 nmol/L、36.4 nmol/L和42.3 nmol/L。对于α3β4 nAChR亚型,在3种配比情况下,ACh的EC50分别为44.0μmol/L、110.0μmol/L和230.0μmol/L,α-CTx Reg IIA的IC50分别为226.8 nmol/L、71.5 nmol/L和49.4 nmol/L。结论:α3和β4亚基比例的改变会导致α3β4 nAChR结构和药理活性的改变。α3和β2亚基比例的改变对α3β2 nAChR结构和活性没有影响。     

黄精对AD模型大鼠空间学习记忆及α7 nAChR表达的影响

目的:探讨黄精对AD模型大鼠空间学习记忆能力及前额叶皮质和海马α7 n AChR表达的影响。方法:成年雄性SD大鼠随机分为四组:对照组、模型组、黄精低剂量组、黄精高剂量组。皮下注射D-半乳糖联合双侧海马注射Aβ25-35构建AD模型大鼠,黄精低、高剂量组同时每天分别给予低剂量(15 g/kg/d)或高剂量(30g/kg/d)的黄精水煎剂灌胃治疗,连续6周。Morris水迷宫测试大鼠的空间学习和记忆能力;免疫组织化学技术检测大鼠前额叶皮质和海马α7 n AChR的表达。结果:Morris水迷宫结果显示,模型组大鼠的逃避潜伏期(EL)与对照组相比明显延长(P0.01),在目标象限游泳时间和穿越站台次数减少(P0.01);与模型组比较,黄精低剂量组、高剂量组的EL缩短(P0.01),在目标象限游泳时间和穿越站台次数增多(P0.01);黄精高剂量组的EL较低剂量组缩短(P0.05或P0.01),在目标象限游泳时间和穿越站台次数差异无统计学意义(P0.05)。免疫组化结果显示,模型组大鼠前额叶皮质和海马α7 n AChR表达水平较对照组明显降低(P0.01);黄精低剂量组、高剂量组大鼠前额叶皮质和海马α7n AChR表达水平较模型组明显上调(P0.05或P0.01);黄精高剂量组大鼠α7 n AChR表达水平较低剂量组大鼠增多(P0.05)。结论:黄精可以明显改善AD模型大鼠的空间学习记忆能力,其作用机制可能与调节α7 n AChR表达有关。     

脓毒症相关性脑病雄性小鼠学习记忆障碍与海马区α7nAChR表达及M1/M2型小胶质细胞比例有关

目的 探索脓毒症相关性脑病(SAE)雌雄小鼠认知差异及其内在机制.方法 6～8周龄雌雄小鼠分别进行盲肠结扎穿刺术(CLP)诱导SAE模型,通过新物体识别和恐惧记忆实验检测小鼠学习记忆功能.采用免疫荧光组织化学染色法检测SAE雌雄小鼠海马区域α7烟碱型乙酰胆碱能受体(α7nAChR)表达和分布,M2型小胶质细胞比例,We...     

副交感神经对支气管哮喘模型Th17型免疫反应的作用及其机制

为探讨副交感神经对卵清蛋白(ovalbumin, OVA)诱导哮喘小鼠气道炎症和Th17型免疫反应的影响和可能机制,将BALB/c小鼠随机分为正常对照组、哮喘组、GTS-21[α7烟碱型乙酰胆碱受体(α7 nicotinic acetylcholine receptor, α7nAChR)激动剂]干预组和α-银环蛇毒素(α-bungarotoxin, α-BGT)(α7nAChR拮抗剂)干预组。除对照组外,其余各组采用OVA构建小鼠哮喘模型,每次激发前GTS-21干预组经静脉注射GTS-21, α-BGT干预组皮下注射α-BGT。ELISA检测支气管肺泡灌洗液(bronchoalveolar lavage fluid, BALF)中TGF-β1和IL-6的浓度;H-E染色观察肺组织病理学变化;RT-PCR检测肺组织中c-Rel和IL-17的mRNA表达水平;Western blotting检测肺组织中c-Rel、IL-17和RORγt蛋白的表达水平;FACS检测各组小鼠脾脏单细胞悬液中Th17占CD4⁺T细胞的百分比。结果显示,OVA刺激后肺组织中有大量炎症细胞的...     

左旋精氨酸对大鼠大脑皮质和海马α7 nAChR表达的影响

目的:探讨不同时间应用一氧化氮(nitric oxide,NO)前体左旋精氨酸(L-arginine,L-Arg)对大鼠学习记忆功能及大脑皮质和海马α7烟碱型乙酰胆碱受体(nicotinic acetylcholine receptor,α7 nAChR)表达的影响。方法:Wistar雄性大鼠随机分为6组,分别为连续3、7和14 d侧脑室注射L-Arg(0.5μmol/d,每日1次)的3个实验组,和在相同时间给予同剂量生理盐水的3个对照组。用Y型迷宫刺激器对大鼠进行学习和记忆能力的行为学检测;用NO试剂盒和免疫组化分别检测大鼠大脑前额叶皮质和海马NO含量以及α7 nAChR的表达。结果:大鼠的学习和记忆行为能力、大脑前额叶皮质和海马NO含量以及α7 nAChR阳性细胞数,在三个实验组分别与各自对照组比较均明显增加;在3个实验组之间比较,7 d组较3 d组,14 d组较7 d组比较均明显增加。3个时间点的对照组之间相比较上述指标均没有明显差异。结论:大鼠学习记忆行为改善以及大脑前额叶皮质和海马NO含量和α7 nAChR的表达随着应用L-Arg的延长而增加,NO对学习记忆的影响具有时间依赖性。     

C5a受体的作用位点及信号传导

C5aR(CD88)属G蛋白偶联/STR超家族起成员,它至少具两个配体结合位点:一个位于N末端,另一个可能为第二细胞外环上的Glu~(199)。C末端和第三胞浆内环与G蛋白偶联。与C5aR偶联的G蛋白有Giα2、Giα3、G16和Gz,已知涉及的信号传导通路为PI-PLC、Ras/Raf/MAPK、cAMP。C5aR分子及基因结构已阐明,各功能位点、信号传导还有待深入研究。     

人TRIM 5α基因改构体的表达、纯化及其体外免疫活性研究

构建TRIM5α改构体TRIM5αH(R328-332)的原核表达载体pET28a。转化大肠杆菌BL21 codon plus(DE3),获得重组表达质粒pETTRIM5αH(R328 332),30℃下经IPTG诱导,该融合蛋白在大肠杆菌BL21 codon plus(DE3)中表达。获得的重组的蛋白再经过纯化,用SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)分析重组蛋白,并用免疫其沉淀和ELISA等对重组蛋白进行功能研究。结果构建的重组质粒在大肠杆菌中获得表达,经纯化后的重组pETTRIM5αH(R328 332)蛋白纯度可达90%以上,并且证实其在体外与HIV-1gag有结合作用。     

Toll 样受体7及Ⅰ型干扰素通路在系统性红斑狼疮中的作用研究

探讨Toll样受体7(TLR7)及Ⅰ型干扰素(IFN-α)通路在系统性红斑狼疮(SLE)发病中的作用.采用实时荧光定量PCR方法检测42例SLE患者和34例正常人外周血TLR7mRNA以及4个干扰素调节基因mRNA的表达水平,同时观察TLR7mRNA的表达量与SLE疾病活动相关指标和干扰素积分(IFN score)的关系.结果,SLE患者外周血TLR7mRNA的表达水平显著增高;TLR7mRNA的表达水平与SLEDAI积分,肾脏损伤指数、抗双链DNA(dsDNA)抗体、抗RNA相关抗体水平及干扰素积分呈正相关;与补体C3、C4、白细胞数呈负相关.TLR7-IFN-α通路可能参与了SLE的病理过程.     

Toll样受体7及I型干扰素通路在系统性红斑狼疮中的作用研究

探讨Toll样受体7(TLR7)及I型干扰素(IFN-α)通路在系统性红斑狼疮(SLE)发病中的作用。采用实时荧光定量PCR方法检测42例SLE患者和34例正常人外周血TLR7mRNA以及4个干扰素调节基因mRNA的表达水平,同时观察TLR7mRNA的表达量与SLE疾病活动相关指标和干扰素积分(IFN score)的关系。结果,SLE患者外周血TLR7mRNA的表达水平显著增高;TLR7mRNA的表达水平与SLEDAI积分、肾脏损伤指数、抗双链DNA(dsDNA)抗体、抗RNA相关抗体水平及干扰素积分呈正相关;与补体C3、C4、白细胞数呈负相关。TLR7—IFN-α通路可能参与了SLE的病理过程。