双亚苄基哌啶RA190阻滞HL60细胞于G_0/G_1期并诱导细胞凋亡

<正>急性髓系白血病(acute myeloid leukemia,AML)是具有明显遗传异质性的临床侵袭性疾病。靶向异常基因治疗是当前研究热点。黏附调节分子1(adhesion regulating molecule1,ADRM1)亦被称为hRpnl3(human Rpn13),是26S蛋白酶体亚单位19S调节颗粒上两个主要泛素受体之一,决定26S蛋白酶体结构不对称性。该蛋白在多细胞真核生物内高度保守,在生命过程中可能发挥重要功能。有研究表明[1-3],ADRM1在肝癌、胃癌、急性白血病等多种恶性肿瘤中过表达,下调ADRM1蛋白水平可明显抑制肿瘤细胞增殖,促进其凋亡。因此,ADRM1可能成为肿瘤治疗靶点。     

蛋白酶体抑制剂MG132对急性髓系白血病细胞增殖与凋亡的影响

目的探讨蛋白酶体抑制剂MG132对急性髓系白血病(acute myeloid leukemia,AML)细胞增殖与凋亡的影响。方法 qRT-PCR检测9株血液肿瘤细胞株内ADRM1 mRNA表达。利用shRNA干扰HL60细胞内ADRM1表达,将不同浓度的MG132作用于ADRM1干扰前后的HL60细胞24 h,CCK-8法检测各组细胞增殖与活力;Western blot检测各组细胞内ADRM1、UCH37蛋白表达;流式细胞仪分析不同浓度MG132作用下,HL60、NB4细胞凋亡情况。结果血液肿瘤细胞株内ADRM1 mRNA表达上调。成功构建ADRM1 shRNA与scrambled shRNA HL60细胞株。ADRM1基因干扰及给予MG132后,各实验组细胞增殖抑制,活力下降,此时细胞内ADRM1、UCH37蛋白表达下调。随着MG132浓度提高,HL60、NB4细胞凋亡增加;MG132对HL60细胞的促凋亡作用强于NB4细胞。结论血液肿瘤细胞株内ADRM1 mRNA过表达;ADRM1蛋白下调后,UCH37蛋白亦下调,细胞增殖抑制;MG132通过下调ADRM1、UCH37蛋白表达,诱导AML细胞凋亡,抑制细胞增殖与活力;MG132对不同分型AML细胞的促凋亡作用存在个体差异。     

蛋白酶体抑制剂MG132对人肝癌细胞增殖和凋亡的影响

目的探讨蛋白酶体抑制剂MG-132对人肝癌BEL-7402细胞增殖、凋亡的作用。方法体外培养人肝癌细胞系BEL-7402细胞,MTT法测定细胞的生长抑制率。以终浓度为5.0μmol·L^-1的MG132作用BEL-7402细胞不同时间后用流式细胞仪检测其细胞凋亡率和细胞周期。结果流式细胞仪检测细胞周期随MG-132作用时间延长,G2/M期阻滞明显,并引起细胞凋亡。结论蛋白酶体抑制剂MG132能有效抑制人肝癌BEL-7402细胞增殖并将细胞阻滞在G2/M期,促进细胞发生凋亡。     

蛋白酶体抑制剂MG132对胃癌细胞系AGS和SNU484增殖的影响

目的研究蛋白酶体抑制剂MG132对胃癌细胞系AGS和SNU484细胞成活率和凋亡情况的影响及其可能的分子机制。方法蛋白酶体抑制剂MG132(1μM,10μM)处理胃癌细胞系AGS和SNU484。利用MTT法检测细胞生长状态,采用流式细胞仪测定细胞凋亡情况,利用Western blot法检测肿瘤抑制基因SMAD4蛋白表达水平。结果MG132能够以时间和剂量依赖的方式抑制AGS和SNU484的细胞增殖,且AGS对MG132的敏感性要高于SNU484细胞。MG132呈剂量依赖的方式诱导AGS和SNU484细胞凋亡。探讨相关分子机制发现MG132能够上调SMAD4蛋白的表达水平。结论用MG132处理胃癌细胞可引起细胞增殖抑制,其可能的分子机制为上调肿瘤抑制基因SMAD4的表达。蛋白酶体抑制剂可能会成为一类新的抗胃癌的药物。     

DDCTMA阳离子脂质体对人喉癌细胞的毒性作用机制

目的研究DDCTMA阳离子脂质体对体外培养的人喉癌细胞系(Hep-2)细胞增殖和凋亡作用影响,进而分析其细胞毒性作用机制。方法采用MTT法检测不同质量浓度DDCTMA阳离子脂质体作用下的细胞存活率,据此选择适当质量浓度的DDCTMA阳离子脂质体分别处理Hep-2细胞,使用活细胞/凋亡细胞/坏死细胞鉴别试剂盒、Hoechst 33258检测法及TUNEL原位测定法进行凋亡细胞形态学鉴定。定量检测酶caspase-3和caspase-9的酶活力变化。结果随着DDCTMA阳离子脂质体质量浓度的增大,细胞存活率逐渐下降;活细胞减少,坏死和凋亡细胞数量都增加;对细胞核的染色能观察到凋亡细胞数量呈倍数增加,呈现浓度依赖性;caspase-3和caspase-9的酶活力也有相应增高。结论 DDCTMA阳离子脂质体对Hep-2细胞的毒性作用表现是:DDCTMA阳离子脂质体质量浓度在9~48mg·L-1内主要诱导部分细胞凋亡,质量浓度超过48mg·L-1主要引起细胞坏死。     

泛素蛋白酶体抑制剂MG-132对胃癌细胞增殖和凋亡的影响

目的:研究泛素蛋白酶体抑制剂对胃癌细胞增殖和凋亡的影响。方法:将泛素蛋白酶体抑制剂MG-132加入胃癌细胞SGC7901,用四氮唑蓝(MTT)法测定细胞生长抑制效应,流式细胞仪检测细胞凋亡,免疫细胞化学检测生存素的表达。结果:MG-132对胃癌细胞有显著的抑制作用,24,48h的IC50分别为80.9,9.1μmol·L-1;MG1325.0μmol·L-1作用胃癌细胞24,48,72,96h后,细胞凋亡率分别为(4.2±s0.6)%,(30±4)%,(47±6)%,(53±6)%,生存素在胃癌细胞中呈高表达,经MG132作用后,表达明显降低。结论:MG132能显著抑制胃癌细胞的增殖、诱导其凋亡,并下调生存素的表达。     

蛋白酶体抑制剂MG-132通过JNK信号通路对人脑胶质瘤细胞SHG-44内质网应激相关机制的探讨

目的探讨MG-132通过内质网应激途径在诱导人脑胶质瘤细胞SHG-44凋亡中的作用。选择内质网应激凋亡信号转导通路JNK,使用JNK特异阻断剂SP600125,观察MG-132通过JNK信号通路诱导胶质瘤细胞凋亡过程中凋亡指标的变化。方法传代法培养人脑胶质瘤细胞。选择浓度为5、10、15、50μmol/L的MG-132,分别作用于实验组,用噻唑噻(MTT)法筛选半数有效浓度后进行实验。实验分为5组:正常对照组、二硫苏糖醇(DTT)组、MG-132组、SP600125组、MG-132+SP600125组。试剂干预终止后,应用流式细胞仪和DNALadder评估肿瘤细胞凋亡,以聚合酶链反应(PCR)和蛋白印迹法检测内质网应激指标GRP78、JNK。结果5μmol/L为筛选的最佳抑制浓度,SHG-44细胞活力下降达39%(P<0.05)。MG-132干预后,与对照组比较,DNA电泳呈凋亡特征(梯状条带),细胞凋亡率显著增加(P<0.05),GRP78m RNA表达明显增加(P<0.05)。但给予DTT后,与MG-132组表现一致,差异无统计学意义(P>0.05)。SP600125+MG-132较DTT和MG-132组有所减低,但不如单独SP600125组降低明显(P<0.05)。蛋白印迹法结果显示,与对照组比较,MG-132组和DTT组内质网应激指标GRP78、JNK表达明显增加(P<0.05),SP600125+MG-132组表达有所减低,但不如单独给予SP600125组明显(P<0.05)。结论内质网应激是MG-132诱导胶质瘤细胞凋亡的主要途径之一,JNK通路抑制剂SP600125可以部分阻断内质网应激,即JNK信号通路为MG-132发挥凋亡作用的途径之一。     

纳米氧化锌对小鼠腹腔巨噬细胞Ana-1的毒性作用及机制

目的研究纳米氧化锌(Zn O-NP)对小鼠腹腔源巨噬细胞(Ana-1)的毒性作用及机制。方法Zn O-NP 2.5~160 mg·L~(-1)与Ana-1细胞作用24 h后,MTT法检测Ana-1细胞的存活率;吖啶橙-溴化乙锭(AO-EB)染色及流式细胞术观察Ana-1细胞凋亡;流式细胞术检测细胞对Zn O-NP的摄取;锌离子荧光探针测定细胞内的锌离子;乙二胺四乙酸(EDTA)螯合锌离子,检测细胞存活率。结果 Zn O-NP在2.5,5,10和20 mg·L~(-1)浓度范围内能够浓度依赖性地抑制Ana-1细胞存活(r=0.905,P<0.05);Zn O-NP20 mg·L~(-1)组细胞存活率为细胞对照组的27.9%,细胞出现明显的凋亡样改变;Zn O-NP 40,80和160 mg·L~(-1)组细胞摄取的Zn O-NP比细胞对照组显著增加(P<0.05);EDTA 2.5 mmol·L~(-1)能够明显降低细胞内的自由锌离子,改善Zn O-NP 10 mg·L~(-1)引起的细胞存活率下降(P<0.05)。螯合锌离子后,Zn O-NP对Ana-1细胞的毒性明显降低(P<0.05)。结论 Zn O-NP可浓度依赖性增加Ana-1细胞的毒性,引起凋亡样改变,其毒性可能与其进入细胞并释放锌离子有关。     

蛇床子素对L02细胞的毒性作用及其机制研究

目的 探究蛇床子素（osthole,Ost）对L02细胞的毒性损伤和作用机制,为中药蛇床子及其制剂的安全合理应用提供实验依据。方法 以不同浓度Ost作用于L02细胞,MTT法检测细胞活性;乳酸脱氢酶（LDH）试剂盒测定细胞LDH释放率;Hoechst 33342染色法检测细胞核形态;Annexin V/PI双染法检测细胞凋亡;Western blot检测Bcl-2、Bax、pro-caspase-3、cleaved-caspase-3（p17）、p-Histon H3（Ser10）的表达。结果 L02细胞在Ost作用下活性下降,LDH释放率提高,且呈浓度依赖;Hoechst 33342染色荧光下可见细胞核皱缩碎裂;AnnexinV/PI双染法结果表明凋亡率随浓度提高而上升。与对照组比较,50,100,200 μmol·L^-1 Ost作用24 h后,Bcl-2、pro-caspase-3、p-Histon H3（Ser10）表达水平降低,Bax、cleaved-caspase-3表达水平升高。结论 Ost对L02细胞有毒性损伤作用,呈一定的时间和浓度依赖性,可促进细胞凋亡,抑制细胞增殖。     

红景天苷对人舌癌细胞的凋亡作用及机制研究

目的：探讨红景天苷对人舌癌细胞增殖和凋亡的影响,并解释其分子机制,为舌癌的临床治疗提供新的思路。方法：CCK-8法和克隆形成实验检测红景天苷药物对人舌癌细胞增殖能力的影响;Annexin V/PI双染法和TUNEL法检测细胞凋亡情况;PI染色法检测红景天苷对细胞周期的影响;细胞迁移法检测红景天苷对舌癌细胞迁移的影响;免疫印迹法和实时荧光定量PCR法检测细胞内凋亡相关蛋白Bax、Bcl-2和Caspase 3的表达水平;免疫印迹法检测细胞内ERK和PI3K/AKT信号通路关键蛋白的表达水平的变化。结果：红景天苷能显著抑制人舌癌细胞的增殖且呈剂量依赖性。Annexin V/PI双染法和TUNEL法显示,随着红景天苷浓度的增加,Tca-8113细胞凋亡明显增多。PI染色法显示,红景天苷处理细胞后,G2/M期细胞明显减少。细胞迁移实验表明,红景天苷作用于舌癌细胞后,随着给药浓度的逐渐升高,细胞的迁移能力明显降低。免疫印迹结果表明,红景天苷可以使Bax和Cleaved caspase 3蛋白表达水平升高,Bcl2的蛋白表达水平降低。同时,红景天苷可以抑制ERK和PI3K/AKT信号通路。结论：红景天苷可以明显抑制人舌癌Tca-8113细胞的增殖,诱导其凋亡,其作用机制可能与抑制ERK和PI3K/AKT信号通路有关。     

Treatment with p38 inhibitor intensifies the death of MG132-treated As4.1 juxtaglomerular cells via the enhancement of GSH depletion

MG132, as a proteasome inhibitor, has been shown to induce apoptotic cell death through the formation of reactive oxygen species (ROS). In this study, we investigated the effects of MG132 and/or MAPK inhibitors on As4.1 juxtaglomerular cells in relation to cell growth, cell death, ROS, and glutathione (GSH) levels. MG132 inhibited the growth of As4.1 cells and induced cell death, accompanied by the loss of mitochondrial membrane potential (MMP; ΔΨ_m) and activation of caspase-3 and -8. MG132 increased ROS levels, and GSH depleted cell numbers. The MEK inhibitor slightly reduced cell growth and caspase-3 activity in MG132-treated As4.1 cells and mildly increased MMP (ΔΨ_m) loss and O₂^?- level. However, it did not increase apoptosis and GSH depletion. The JNK inhibitor did not strongly influence cell growth, cell death, and GSH depletion by MG132, but increased caspase-3 activity, MMP (ΔΨ_m) loss, and O₂^?- level. Treatment with the p38 inhibitor magnified cell-growth inhibition and apoptosis by MG132. This agent also strongly increased caspase-8 activity, MMP (ΔΨ_m) loss, O₂^?- level, and GSH depletion. Conclusively, the p38 inhibitor strongly intensified cell death in MG132-treated As4.1 cells. The changes of GSH content by MG132 and/or MAPK inhibitors were closely related to the death of As4.1 cells.     

原花青素提高人舌癌细胞系放射敏感性及机制研究

目的 探讨原花青素(grape seed proanthocyanidins,GSP)提高人舌癌细胞系放射敏感性及机制.方法 2019年3月至2020年2月,将对数期生长的人舌癌Tca8113细胞分为对照组(Tca CON),Tca8113细胞加10 mg/L GSP组(Tca GSP-10 mg/L)、Tca8113...     

山萘酚对卵巢癌细胞增殖、凋亡的影响及机制研究

目的：考察山萘酚对人卵巢癌SKOV-3细胞生长、凋亡的影响及作用机制。方法：采用CCK-8法检测山萘酚对SKOV-3细胞增殖的影响;流式细胞术和AnnexinV-FITC/PI凋亡试剂盒检测SKOV-3细胞的凋亡情况;RT-PCR检测NICD mRNA的表达;Western Blot方法检测Notch1蛋白的表达。结果：山萘酚对卵巢癌SKOV-3细胞有显著的增殖抑制作用,且呈一定的剂量依赖性;凋亡检测结果表明,山萘酚能够促进卵巢癌SKOV-3细胞凋亡的发生; RT-PCR结果显示山萘酚干预组（80 μmol·L^-1） NICD mRNA的表达水平明显降低（P<0.05）,Western Blot结果显示山萘酚干预组（80 μmol·L^-1） Notch1蛋白表达水平显著降低（P<0.05）。结论：山萘酚能明显抑制卵巢癌SKOV-3细胞的体外增殖,诱导细胞凋亡其机制可能是通过干预Notch1的表达。     

MG132, a proteasome inhibitor,enhances LDL uptake in HepG2 cells in vitro by regulating LDLR and PCSK9 expression

Aim:

Expression of liver low-density lipoprotein receptor (LDLR), a determinant regulator in cholesterol homeostasis, is tightly controlled at multiple levels. The aim of this study was to examine whether proteasome inhibition could affect LDLR expression and LDL uptake in liver cells in vitro.

Methods:

HepG2 cells were examined. Real-time PCR and Western blot analysis were used to determine the mRNA and protein levels, respectively. DiI-LDL uptake assay was used to quantify the LDLR function. Luciferase assay system was used to detect the activity of proprotein convertase subtilisin/kexin type 9 (PCSK9, a major protein mediating LDLR degradation) promoter. Specific siRNAs were used to verify the involvement of PCSK9.

Results:

Treatment of HepG2 cells with the specific proteasome inhibitor MG132 (0.03–3 μmol/L) dose-dependently increased LDLR mRNA and protein levels, as well as LDL uptake. Short-term treatment with MG132 (0.3 μmol/L, up to 8 h) significantly increased both LDLR mRNA and protein levels in HepG2 cells, which was blocked by the specific PKC inhibitors GF 109203X, Gö 6983 or staurosporine. In contrast, a longer treatment with MG132 (0.3 μmol/L, 24 h) did not change LDLR mRNA, but markedly increased LDLR protein by reducing PCSK9-mediated lysosome LDLR degradation. Furthermore, MG132 time-dependently suppressed PCSK9 expression in the HepG2 cells through a SREBP-1c related pathway. Combined treatment with MG132 (0.3 μmol/L) and pravastatin (5 μmol/L) strongly promoted LDLR expression and LDL uptake in HepG2 cells, and blocked the upregulation of PCSK9 caused by pravastatin alone.

Conclusion:

Inhibition of proteasome by MG132 in HepG2 cells plays dual roles in LDLR and PCSK9 expression, and exerts a beneficial effect on cholesterol homeostasis.     

拓扑替康对肺癌细胞生长周期的影响及诱导凋亡的作用机制

目的　研究拓扑替康 (topotecan ,TPT)对人肺癌SPC A 1细胞生长周期的影响及诱导凋亡的作用 ,并探讨Caspase 3及Bcl 2在此过程中的作用。 方法　体外培养肺癌细胞 ,分为对照组 (未处理组 )、TPT(5、10、15和 2 0mg·L-1)组、半胱天冬酶 3 (Caspase 3 )特异性拮抗剂Ac DEVD CHO +TPT组 ,加药后培养 2 4h ,TUNEL法观察肺癌细胞凋亡形态学特征 ;流式细胞仪观察细胞生长周期变化并检测凋亡率和肺癌细胞Bcl 2蛋白的表达。结果　TPT (5mg·L-1)处理细胞 2 4h ,流式细胞仪未检测到凋亡峰 ,随着TPT浓度增大 ,凋亡率显著增高 ,各浓度组间差异具有显著性 (P<0 0 1) ;TUNEL及透射电镜检测到典型的凋亡细胞形态学特征 ,凋亡细胞DNA呈梯状电泳 ;流式细胞仪检测到细胞周期发生改变 ,G1期细胞较对照组增多 (P <0 0 1) ,S期细胞减少 (P <0 0 1) ;TPT(2 0mg·L-1)处理细胞后肺癌细胞凋亡率为 11 9%± 2 6% ,高于对照组细胞 (P <0 0 1) ;Bcl 2蛋白阳性表达细胞率为 7 9%± 1 2 % ,较对照组 (44 7%±7 1% )降低 (P <0 0 1) ;Ac EDVD CHO (5 0 μmol·L-1)和TPT(2 0mg·L-1)共同处理细胞 2 4h其凋亡率为 6 1%±1 8% ,较单纯TPT作用组降低 (P <0 0 1) ;Bcl 2蛋白阳性表达率为 3 3 4%± 5 2 % ,较单纯TPT作用组增高     

Safrole induces cell death in human tongue squamous cancer SCC-4 cells through mitochondria-dependent caspase activation cascade apoptotic signaling pathways

Safrole is one of important food-borne phytotoxin that exhibits in many natural products such as oil of sassafras and spices such as anise, basil, nutmeg, and pepper. This study was performed to elucidate safrole-induced apoptosis in human tongue squamous carcinoma SCC-4 cells. The effect of safrole on apoptosis was measured by flow cytometry and DAPI staining and its regulatory molecules were studied by Western blotting analysis. Safrole-induced apoptosis was accompanied with up-regulation of the protein expression of Bax and Bid and down-regulation of the protein levels of Bcl-2 (up-regulation of the ratio of Bax/Bcl-2), resulting in cytochrome c release, promoted Apaf-1 level and sequential activation of caspase-9 and caspase-3 in a time-dependent manner. We also used real-time PCR to show safrole promoted the mRNA expressions of caspase-3, -8, and -9 in SCC-4 cells. These findings indicate that safrole has a cytotoxic effect in human tongue squamous carcinoma SCC-4 cells by inducing apoptosis. The induction of apoptosis of SCC-4 cells by safrole is involved in mitochondria- and caspase-dependent signal pathways.     

姜黄素抗胃癌药理作用机制研究进展

胃癌是一种严重威胁人类生命健康的恶性肿瘤。姜黄素（curcumin）提取自姜黄Curcuma longa根茎,在体内外药理实验中表现出良好的抗胃癌作用,且具有较高的安全性。姜黄素抗胃癌作用机制主要包括抑制胃癌细胞增殖、阻滞细胞周期、诱导细胞凋亡及自噬、调控相关信号通路及基因表达、抑制细胞侵袭及迁移、诱导活性氧产生、抑制肿瘤血管及淋巴管生成、化疗增敏及逆转化疗耐药、减少胃酸分泌等。就姜黄素抗胃癌药理作用机制进行综述,为其进一步研究及抗胃癌新药研发提供参考。