小檗碱通过TGF-β/Smad通路抑制TGF-β1诱导的人肝癌HepG2细胞上皮间质转化的研究

目的探讨小檗碱(berberine)对转化生长因子-β1(transforming growth factor-β1,TGF-β1)诱导的人肝癌HepG2细胞上皮间质转化(epithelial-mesenchymal transition,EMT)的作用及其机制。方法MTT法检测小檗碱对HepG2细胞增殖活性;采用10 ng·L-1 TGF-β1诱导HepG2细胞EMT模型形成,并加入小檗碱处理;克隆形成实验、细胞划痕和Transwell小室实验分别检测HepG2细胞的克隆形成能力、迁移和侵袭能力;免疫荧光法检测EMT间质标志物Vimentin的表达;Western blot法检测EMT标志物蛋白(E-cadherin、N-cadherin、Snail)、基质金属蛋白酶(MMP-2)、TGF-β/Smad通路蛋白(Smad2、p-Smad2、Smad3、p-Smad3)的表达。结果小檗碱呈浓度时间依赖性抑制HepG2细胞活性;与TGF-β1组比较,小檗碱可以明显抑制HepG2细胞的克隆形成能力、迁移和侵袭能力;并且小檗碱可以抑制TGF-β1上调的E-cadherin蛋白表达,和TGF-β1下调的N-cadherin、Vimentin、Snail、MMP-2、p-Smad2、p-Smad3蛋白表达。结论小檗碱可能通过抑制TGF-β/Smad信号通路,干预TGF-β1诱导HepG2细胞的EMT进程,抑制HepG2细胞的迁移和侵袭能力。     

槲皮素抑制TGF-β1诱导SMMC-7721人肝癌细胞发生EMT的效果研究CSCD

目的旨在研究槲皮素抑制转化生长因子-β1(TGF-β1)诱导SMMC-7721人肝癌细胞发生上皮-间质转化(EMT)的效果。方法将肝癌细胞分为对照组(10 ng/ml TGF-β1)、低剂量组(50 nmol/l槲皮素+10 ng/ml TGF-β1)、高剂量组(10 ng/ml TGF-β1+100 nmol/l槲皮素),分别处理6 h,光学显微镜观察肝癌细胞形态学变化。6、12和24 h后,观察肝癌细胞迁移及侵袭能力。逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)测定肝癌细胞E-钙黏蛋白(E-cadherin)、N-钙黏蛋白(N-cadherin)和波形蛋白(Vimentin)mRNA表达。Western blot法测定肝癌细胞E-cadherin、N-cadherin和Vimentin蛋白。结果经TGF-β1诱导后,肝癌细胞发生明显EMT。划痕实验结果显示,12和24 h时,高剂量组和低剂量组肝癌细胞迁移划痕空隙长度明显低于对照组(P<0.05)。侵袭实验中,与对照组比较,低和高剂量组每视野穿膜肝癌细胞数明显降低,且高剂量组穿膜高于低剂量组(P<0.05)。RT-PCR实验结果显示,对照组E-cadherin mRNA表达明显低于高剂量组和低剂量组(P<0.01),N-cadherin和Vimentin mRNA表达明显高于高剂量组和低剂量组(P<0.01)。低剂量E-cadherin mRNA表达明显低于高剂量组(P<0.01),N-cadherin和Vimentin mRNA表达明显高于高剂量组(P<0.01)。Western blot实验结果显示,对照组E-cadherin蛋白表达明显低于高剂量组和低剂量组(P<0.01),N-cadherin、Vimentin蛋白明显高于高剂量组和低剂量组(P<0.01)。高剂量组E-cadherin蛋白表达明显高于低剂量组(P<0.01),N-cadherin和Vimentin蛋白表达明显低于低剂量组(P<0.01)。结论槲皮素通过增加E-cadherin蛋白表达表达,降低N-cadherin、Vimentin蛋白表达,使得TGF-β1诱导的肝癌细胞EMT得到明显抑制。     

槲皮素抑制TGF-β1诱导SMMC-7721人肝癌细胞发生EMT的效果研究

目的旨在研究槲皮素抑制转化生长因子-β1(TGF-β1)诱导SMMC-7721人肝癌细胞发生上皮-间质转化(EMT)的效果。方法将肝癌细胞分为对照组(10 ng/ml TGF-β1)、低剂量组(50 nmol/l槲皮素+10 ng/ml TGF-β1)、高剂量组(10 ng/ml TGF-β1+100 nmol/l槲皮素),分别处理6 h,光学显微镜观察肝癌细胞形态学变化。6、12和24 h后,观察肝癌细胞迁移及侵袭能力。逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)测定肝癌细胞E-钙黏蛋白(E-cadherin)、N-钙黏蛋白(N-cadherin)和波形蛋白(Vimentin)mRNA表达。Western blot法测定肝癌细胞E-cadherin、N-cadherin和Vimentin蛋白。结果经TGF-β1诱导后,肝癌细胞发生明显EMT。划痕实验结果显示,12和24 h时,高剂量组和低剂量组肝癌细胞迁移划痕空隙长度明显低于对照组(P0.05)。侵袭实验中,与对照组比较,低和高剂量组每视野穿膜肝癌细胞数明显降低,且高剂量组穿膜高于低剂量组(P0.05)。RT-PCR实验结果显示,对照组E-cadherin mRNA表达明显低于高剂量组和低剂量组(P0.01),N-cadherin和Vimentin mRNA表达明显高于高剂量组和低剂量组(P0.01)。低剂量E-cadherin mRNA表达明显低于高剂量组(P0.01),N-cadherin和Vimentin mRNA表达明显高于高剂量组(P0.01)。Western blot实验结果显示,对照组E-cadherin蛋白表达明显低于高剂量组和低剂量组(P0.01),N-cadherin、Vimentin蛋白明显高于高剂量组和低剂量组(P0.01)。高剂量组E-cadherin蛋白表达明显高于低剂量组(P0.01),N-cadherin和Vimentin蛋白表达明显低于低剂量组(P0.01)。结论槲皮素通过增加E-cadherin蛋白表达表达,降低N-cadherin、Vimentin蛋白表达,使得TGF-β1诱导的肝癌细胞EMT得到明显抑制。     

TGF-β1诱导的肝癌细胞SMMC-7721上皮间质转化对细胞Wnt/β-catenin表达的影响

目的探讨TGF-β1诱导的肝癌细胞SMMC-7721上皮间质转化对细胞信号通路蛋白Wnt/β-catenin表达的影响。方法采用5μg·mL-1 TGF-β1诱导SMMC-7721发生上皮间质转化,分别采用RT-PCR和Western blot法检测细胞中Wnt1、β-catenin、Vimentin mRNA和总蛋白的表达。结果 TGF-β1能显著诱导肝癌细胞SMMC-7721发生上皮间质转化,细胞中Wnt1、β-catenin、Vimentin mRNA和相应总蛋白的表达均显著增加(P<0.05)。结论 TGF-β1诱导肝癌细胞SMMC-7721上皮间质转化时可促进细胞Wnt/β-catenin的表达。     

杨梅素对肝癌SMMC-7721细胞迁移及侵袭影响的研究

目的探讨杨梅素对肝癌SMMC-7721细胞迁移和侵袭的影响。方法以不同浓度杨梅素处理的肝癌SMMC-7721细胞为研究对象,分别采用Wound healing实验、Transwell细胞迁移和侵袭实验检测细胞的迁移和侵袭过程,用RT-q PCR和Western blot检测E-cadherin和N-cadherin的表达。结果杨梅素呈浓度依赖性(10~40μ mol · L~(-1))抑制肝癌SMMC-7721细胞活力;杨梅素还可以抑制SMMC-7721细胞迁移和侵袭过程,并且随着杨梅素浓度的增加,细胞中丝状、片状伪足逐渐减少,细胞排列越来越紧密;RT-qPCR和Western blot结果均显示,杨梅素可以上调SMMC-7721细胞的E-cadherin表达,下调N-cadherin表达。结论杨梅素能抑制肝癌SMMC-7721细胞的迁移和侵袭过程,此作用的发生可能是通过上调E-cadherin、下调N-cadherin等EMT相关的信号通路以及肌动蛋白细胞骨架的重排实现的。     

二烯丙基二硫下调TGF-β1/Rac1通路抑制人胃癌细胞β-catenin表达

目的研究二烯丙基二硫(diallyl disulfide,DADS)是否通过下调TGF-β1/Rac1通路抑制人胃癌MGC803细胞β-catenin表达。方法实验组分为6组,对照组(Control),DADS处理组,TGF-β1处理组,TGF-β1+SB431542组,TGF-β1+DADS组,TGF-β1+NSC23766组。RT-PCR、Western blot分别检测TGF-β1、Rac1、β-catenin、E-cadherin和vimentin mRNA和蛋白水平。结果DADS下调TGF-β1、Rac1、β-catenin和vimentin,上调E-cadherin表达。TGF-β1受体阻断剂SB431542和Rac1抑制剂NSC23766下调β-catenin和vi-mentin,上调E-cadherin表达。结论DADS通过下调TGF-β1/Rac1通路抑制人胃癌MGC803细胞β-catenin表达。     

贝那普利对氧化低密度脂蛋白诱导的肾小管上皮细胞间质转化及转化生长因子-β/Smad通路的影响

目的探讨贝那普利对氧化低密度脂蛋白(ox-LDL)诱导的肾小管上皮NRK-52E细胞间质转化(EMT)及转化生长因子-β(TGF-β)/Smad通路的影响。方法体外培养NRK-52E细胞,分为对照组、ox-LDL组(50μg/mL ox-LDL)、贝那普利组(50μg/mL ox-LDL+10μmol/L贝那普利)、TGF-β1组(50μg/mL ox-LDL+5 ng/mL TGF-β1)、贝那普利+TGF-β1组(50μg/mL ox-LDL+5 ng/mL TGF-β1+10μmol/L贝那普利)。高倍光学显微镜观察各组NRK-52E细胞表型变化;免疫荧光染色法检测EMT标志性蛋白α-SMA、E-cadherin荧光强度;免疫印迹法检测各组NRK-52E细胞中α-SMA、E-cadherin蛋白及TGF-β/Smad通路蛋白表达水平。结果与对照组比较,ox-LDL组梭形或不规则形细胞增多,α-SMA荧光强度及α-SMA、TGF-β1、p-Smad2/Smad2、p-Smad3/Smad3蛋白量显著升高(P0.05);E-cadherin荧光表达强度减弱,蛋白量明显降低(P0.05)。与ox-LDL组比较,贝那普利组细胞表型改变明显减轻,α-SMA荧光表达强度明显减弱,α-SMA、TGF-β1、p-Smad2/Smad2、p-Smad3/Smad3蛋白量显著降低(P0.05),E-cadherin荧光表达强度及蛋白量明显升高(P0.05);TGF-β1组细胞α-SMA荧光表达强度及α-SMA、TGF-β1、p-Smad2/Smad2、p-Smad3/Smad3蛋白量显著升高(P0.05),Ecadherin荧光表达强度及蛋白量明显降低(P0.05)。与贝那普利组比较,贝那普利+TGF-β1组细胞α-SMA荧光表达强度明显增强,α-SMA、TGF-β1、p-Smad2/Smad2、p-Smad3/Smad3蛋白量显著升高(P0.05),E-cadherin荧光表达强度及蛋白量明显降低(P0.05)。与TGF-β1组比较,贝那普利+TGF-β1组细胞α-SMA荧光表达强度及α-SMA、TGF-β1、pSmad2/Smad2、p-Smad3/Smad3蛋白量显著降低(P0.05),E-cadherin荧光表达强度及蛋白量明显升高(P0.05)。结论贝那普利可逆转ox-LDL诱导的肾小管上皮NRK-52E细胞间质转化的发生,机制可能是通过抑制TGF-β/Smad通路活化而发挥作用。     

熊果酸调控miR-134对人肝癌细胞增殖和侵袭的影响

目的:探讨熊果酸通过调控miR-134对人肝癌细胞增殖和侵袭的影响。方法:体外培养人肝癌细胞株SMMC-7721,CCK-8法和Transwell实验检测不同浓度的熊果酸对SMMC-7721细胞增殖和侵袭的影响;Western blot检测上皮标志物E-cadherin蛋白、间质标志物N-cadherin和Vimentin蛋白的表达和转染miR-134模拟物后整合素β1(integrin β1,ITGB1)蛋白表达水平的差异;双荧光素酶报告基因确定miR-134与ITGB1 3’-UTR的靶向结合情况;RT-qPCR法检测用0～30μmol·L^-1熊果酸处理后SMMC-7721细胞中miR-134的表达量。结果:熊果酸对肝癌细胞的生长抑制有剂量依赖性影响,80μmol·L^-1时最为明显(P<0.01);熊果酸能升高上皮标志物E-cadherin蛋白在SMMC-7721细胞中的表达(P<0.01),降低间质标志物N-cadherin和Vimentin蛋白的表达(P<0.01);熊果酸能够剂量依赖性促进肝癌细胞中miR-134的...     

整合素αvβ3抑制剂Cyclo-RGDfK对纤连蛋白诱导乳腺上皮细胞间质转化的影响

目的本研究探讨整合素αvβ3抑制剂(Cyclo-RGDfK)对纤连蛋白(fibronectin,FN)诱导人乳腺上皮细胞MCF-10A上皮间质转化的影响。方法体外传代培养MCF-10A细胞,采用FN诱导建立上皮间质转化(EMT)模型。Western blot实验检测αv integrin、β3 integrin、上皮标志物E-cadherin和间充质标志物N-cadherin、Vimentin的蛋白表达;划痕修复实验和Transwell小室实验检测细胞的迁移和侵袭能力。结果 Western blot结果显示FN作用48 h后可明显增强αv integrin、β3 integrin、N-cadherin、Vimentin的蛋白表达,下调E-cadherin蛋白表达,在给予Cyclo-RGDfK作用后,FN诱导的N-cadherin和Vimentin表达上调和E-cadherin表达下调被明显逆转;划痕修复实验和Transwell小室实验结果表明,FN能显著增强MCF-10A细胞迁移和侵袭能力,Cyclo-RGDfK能显著抑制FN的诱导作用。结论 Cyclo-RGDfK能抑制FN诱导乳腺上皮细胞MCF-10A的EMT过程,降低细胞的侵袭和迁移能力,其可能是治疗乳腺癌转移的潜在药物。     

TGF-β1诱导人肝癌细胞HepG2上皮间质转化及对JAK-STAT3信号通路的影响

目的探讨TGF-β1诱导人肝癌细胞HepG2上皮间质转化及对JAK-STAT3表达的影响。方法采用5μg·mL^-1 TGF-β1处理人肝癌细胞HepG2细胞,用倒置显微镜观察细胞形态变化,用Real time-PCR检测E-cadherin和Vimentin的mRNA表达变化;Western blot检测E-cadherin、Vimentin、JAK、p-JAK、STAT3及p-STAT3的蛋白表达变化。结果 TGF-β1可激活JAK-STAT3通路,上调Vimentin表达,同时下调E-cadherin的表达,并显著促进其上皮间质转化。结论 TGF-β1可以诱导人肝癌细胞HepG2上皮间质转化,其机制可能与JAK-STAT3信号通路激活有关。     

伊维菌素对人胃癌细胞BGC-823、MGC-803迁移和侵袭的影响及机制研究

目的:研究伊维菌素对人胃癌细胞BGC-823、MGC-803迁移和侵袭能力的影响及其作用机制。方法:0、2.5、5、10、20、40μmol/L伊维菌素分别作用于BGC-823、MGC-803细胞24 h后用MTT法检测细胞抑制率,再采用Transwell小室侵袭实验观察5μmol/L伊维菌素和含0.67‰二甲基亚砜的磷酸盐缓冲液(对照组)作用24 h对BGC-823、MGC-803细胞迁移和侵袭的影响,Western blot法分别检测5、10μmol/L伊维菌素和含0.67‰二甲基亚砜的磷酸盐缓冲液(对照组)作用于BGC-823、MGC-803细胞24 h后上皮-间质转化(EMT)标记物E-cadherin、N-cadherin、Vimentin、Snail和EMT转导通路转化生长因子β(TGF-β)/Smad中TGF-β1、TGF-βR、Smad2、Smad3蛋白的表达水平。结果:伊维菌素对BGC-823、MGC-803细胞生长均有抑制作用,其细胞抑制率与其浓度呈正相关。与对照组比较,5μmol/L伊维菌素作用后BGC-823、MGC-803细胞的迁移数和侵袭数均明显减少(P<0.01或P<0.001);5、10μmol/L伊维菌素作用后BGC-823、MGC-803细胞中E-cadherin蛋白表达明显增强(P<0.05或P<0.01或P<0.001),N-cadherin、Vimentin、Snail、TGF-βR、Smad2、Smad3蛋白表达均明显减弱(P<0.05或P<0.01或P<0.001),TGF-β1蛋白仅在10μmol/L伊维菌素作用后明显减弱(P<0.05)。结论:伊维菌素能显著抑制BGC-823、MGC-803细胞的迁移和侵袭,其可能与抑制TGF-β/Smad活性从而影响EMT过程有关。     

白藜芦醇对胃癌细胞上皮间质转化作用及其机制的研究

目的 探讨白藜芦醇（RSVL）对胃癌细胞上皮间质转化（EMT）的影响并分析其作用机制。方法 胃癌细胞SGC-7901分为空白对照组、转化生长因子β1(TGF-β1)组和TGF-β1+RSVL组三组。MTT实验检测增殖情况;Transwell实验检测迁移、侵袭情况;q RT-PCR检测EMT相关转化因子的mRNA表达水平;Western blot检测E-cadherin、Vimentin、N-cadherin、Snali 1、YAP蛋白表达水平;免疫荧光观察YAP蛋白表达及细胞核内YAP蛋白表达。结果 与空白对照组相比,TGF-β1组24、48、72、96 h细胞增殖率增加（P<0.05）;与TGF-β1组相比,TGF-β1+RSVL组24、48、72、96 h细胞增殖率降低（P<0.05）,均呈时间依赖性。与空白对照组相比,TGF-β1组0、48 h的细胞迁移数、侵袭数增加（P<0.05）;与TGF-β1组相比,TGF-β1+RSVL组0、48 h的细胞迁移数、侵袭数降低（P<0.05）。与空白对照组相比,TGF-β1组E-cadherin mRNA、蛋白表达水...     

小檗胺对肝癌SMMC-7721细胞侵袭转移的影响

目的 研究小檗胺对人肝癌SMMC-7721细胞侵袭转移作用的影响及其可能的机制。方法 在体外用不同浓度小檗胺处理肝癌SMMC-7721细胞,采用MTT法检测细胞活力的变化;采用细胞划痕试验、Transwell迁移和侵袭试验检测肿瘤细胞侵袭转移能力;采用Western blot法检测细胞上皮间质转化相关蛋白E-cadherin和Vimentin的表达。结果 MTT结果显示浓度<20 μmol·L^-1的小檗胺对SMMC-7721细胞存活率无显著影响。划痕试验和Transwell结果显示,小檗胺呈浓度依赖性抑制肝癌SMMC-7721细胞迁移和侵袭过程。Western blot结果表明,小檗胺显著增强SMMC-7721细胞中E-cadherin表达,而减弱Vimentin表达。结论 人肝癌SMMC-7721细胞侵袭转移能力可被小檗胺抑制,其机制可能与其调控上皮间质转化相关蛋白的表达有关。     

蛇葡萄素对人前列腺癌DU145细胞增殖、迁移和侵袭的影响

目的：探讨蛇葡萄素（AMP）对人前列腺癌DU145细胞增殖、迁移和侵袭的影响,研究其对转化生长因子β（TGF-β）诱导的上皮间质转化（EMT）模型的作用。方法：用不同浓度的AMP处理DU145细胞,采用CCK-8法和克隆形成实验检测细胞增殖情况;Transwell法检测细胞的迁移和侵袭能力;细胞免疫荧光实验表征不同浓度TGF-β处理后细胞内E-cadherin和Vimentin表达情况,确定EMT模型最佳诱导浓度;Western blot法进一步检测加药后EMT模型E-cadherin和Vimentin表达情况。结果：AMP对DU145细胞增殖具有显著的抑制作用,24、48、72 h的IC50分别为35.62、32.71、28.43 μg·mL-1;Transwell实验显示AMP处理后穿膜细胞数明显减少,显著抑制细胞的迁移和侵袭能力;细胞免疫荧光实验表征发现TGF-β诱导后细胞内E-cadherin表达下调,Vimentin表达上调,确定10 ng·mL-1为TGF-β诱导EMT模型的最佳浓度。Western blot法检测显示,与对照组相比,TGF-β组和TGF-β+AMP组的细胞内E-cadherin表达下调,Vimentin表达上调,此外,与TGF-β组相比,TGF-β+AMP组细胞内E-cadherin表达变化无统计学差异,但Vimentin表达降低（P<0.05）,表明AMP具有逆转EMT过程的作用。结论：AMP不仅能够抑制人前列腺癌DU145细胞的增殖,还可抑制其迁移和侵袭能力,这可能与逆转EMT过程有关。     

雷公藤内酯醇减少放射性肺纤维化中肌成纤维细胞活化与抑制TGF-β1/ERK/Smad3通路相关

目的通过体内外实验,观察雷公藤内酯醇(TPL)减少放射性肺纤维化中肌成纤维细胞(MFBs)活化与TGF-β1/ERK/Smad3通路的相关性。方法以TGF-β1刺激成纤维细胞建立体外MFBs活化模型,C57BL/6小鼠胸部照射形成体内MFBs活化、放射性肺纤维化模型。MFBs活化状态通过检测小鼠成纤维细胞中α-SMA(RT-PCR、Western blot方法)和ColⅠ(RT-PCR、ELISA方法)的表达,通路活性采用Western blot法检测p-ERK、p-Smad3(Ser208)、p-Smad3(Ser423)的水平。ERK siRNA及Smad3 siRNA观察ERK、Smad3在MFBs活化中的地位。结果 TGF-β1激活p-ERK/p-Smad3(Ser208)及p-Smad3(Ser423),诱导成纤维细胞表达α-SMA,活化为MFBs,合成Col I明显增多;使用ERK siRNA及Smad3 siRNA确定了ERK及Smad3均参与α-SMA、ColⅠ的表达,其中ERK可能通过磷酸化Smad3连接区(Ser208)起相关作用。小鼠胸部照射可致肺组织中p-ERK、p-Smad3(Ser208)、p-Smad3(Ser423)的水平上调,α-SMA表达增加,显示多量MFBs活化。TPL对体内和体外实验中ERK、Smad3(Ser208)、Smad3(Ser423)的磷酸化活化均有明显抑制作用,可明显下调α-SMA表达及ColⅠ合成,减少MFBs的活化。结论 TPL可通过抑制TGF-β1/ERK/Smad3通路,减少肺部照射后MFBs活化,从而抑制放射性肺纤维化进展。     

去甲斑蝥素对TGF—β1诱导的人近端肾小管细胞上皮细胞转分化及信号蛋白Smad2／3表达的影响

目的探讨去甲斑蝥素对体外人源性肾小管细胞株（HK－2）上皮细胞间质转分化（epithelial—mesenchymal transition,EMT）以及信号蛋白Smad2／3的影响。方法体外培养HK2细胞,分为对照组、TGF-β1组和去甲斑蝥素组（NCTD组）。对照组为无血清DMEM培养,TGG-β1组为TGF-β1 5ng·mL^-1诱导,NCTD组为不同浓度NCTD（0．5、1．0、2．5μg·mL^-1）与TGF-β1（5ng·mL^-1）共同作用,各组作用时间48h。使用半定量RT-PCR法检测α-平滑肌肌动蛋白（α-SMA）、上皮性钙黏附蛋白（Ecadherin）与Smad2、Smad3mRNA表达;采用Western blot检测α-SMA、E-cadherin、Smad2／3、p-Smad2／3蛋白质表达。结果与对照组相比,TGF-β1组α—SMAmRNA及其蛋白表达明显上调（Pd0．05）,E-cadherin mRNA及其蛋白表达显著下调（P〈0．05）;与TGF-β1组相比,NCTD干预组α—SMAmRNA及其蛋白表达明显下调（P〈0．05）,而E-cadherin mRNA及其蛋白表达显著上调（P〈0．05）,且均呈剂量依赖性。与对照组相比,TGF-β1组Smad2、Smad3rnRNA和Smad2／3、p-Smad2／3蛋白表达上调（P〈0．05）;与TGF-β1组比较,NCTD干预组Smad2、Smad3mRNA和Smad2／3、p-Smad2／3蛋白表达下调（P〈0．05）,具有剂量依赖关系。结论去甲斑蝥素具有抑制肾小管上皮细胞EMT的作用,该作用可能与其下调信号蛋白Smad2／3的表达有关。     

miR-144通过TGF-β/Smad通路抑制前列腺癌细胞的增殖侵袭

摘要：目的:观察微小RNA（miR）-144对前列腺癌细胞增殖侵袭的影响及其对转化生长因子-β（TGF-β）/Smad信号通路的影响。方法:采用实时荧光定量聚合酶链反应（qRT-PCR）检测LNCaP、PC-3、SW1990人前列腺癌细胞和RWPE-1人正常前列腺上皮细胞中miR-144的表达水平;以miR-144表达量最低的PC-3细胞和表达量最高的LNCaP细胞作为研究对象,转染miR-144 mimics-NC序列为NC组,转染miR-144 mimics序列为miR-144过表达（mimics）组,荧光显微镜观察转染情况; qRTPCR检测转染后miR-144的表达水平,细胞活力检测试剂盒（CCK-8）检测细胞增殖,Transwell实验检测细胞侵袭能力,生物信息学预测及荧光素酶报告基因检验miR-144的潜在靶基因,蛋白免疫吸附法（Western Blot）检测TGF-β/Smad通路蛋白表达水平。结果:与正常前列腺上皮细胞RWPE-1比较,LNCaP、PC-3、SW1990前列腺癌细胞中miR-144的表达水平均显著降低（P<0.05）,miR-144 mimics转染后细胞转染效率均达到90%以上。与NC组比较,mimics组细胞中miR-144的相对表达水平显著升高,细胞的增殖活性和侵袭能力显著降低（P<0.05或P<0.01）。与TGF-β-Wt+miR-144 mimics-NC共转染组比较,TGF-β-Wt+miR-144 mimics转染组荧光素酶活性显著降低（P<0.05）。TGF-β转录本3’UTR区域具有miR-144的潜在靶点,miR-144潜在靶基因为TGF-β,在24～120 h,与miR-144 mimics-NC组相比,miR-144 mimics、miR-144 mimics+TGF-β组细胞活性显著降低（P<0.05）;与miR-144 mimics组相比,miR-144 mimics+TGF-β组细胞活性显著升高（P<0.05）。与NC组比较,mimics组细胞中p-Smad2/Smad2、p-Smad3/Smad3水平及TGF-β、TGF-βR蛋白表达水平显著降低（P<0.01）。结论:miR-144可能通过TGF-β/Smad信号通路抑制前列腺癌细胞的增殖及侵袭。     

蛇床子素通过抑制小鼠心肌成纤维细胞TGF-β1/Smad信号通路降低胶原表达的研究

目的 研究蛇床子素降低真核载体pcDNA3.1(+)-TGF-β1转染的小鼠心肌成纤维细胞(cardiac fibroblasts，CFs)胶原的表达是否与抑制TGF-β1/Smad信号通路相关。方法 用真核表达载体pcDNA3.1(+)-TGF-β1转染小鼠CFs，然后在TGF-β1受体抑制剂SB431542预处理或不预处理的情况下，用不同浓度的蛇床子素处理CFs 24 h。ELISA检测上清TGF-β1水平，Western blotting检测细胞内α-SMA、collagen Ⅰ、collagen Ⅲ、Smad2/3、p-Smad2/3、Smad4和Smad7的蛋白表达。结果 真核表达载体pcDNA3.1(+)-TGF-β1转染CFs后，TGF-β1释放量增加，提示建立了TGF-β1过表达的细胞模型。TGF-β1过表达的CFs经蛇床子素(5~20 μmol·L^-1)处理24 h后，TGF-β1、α-SMA、collagenⅠ、collagenⅢ、p-Smad2/3和Smad4蛋白表达降低，Smad7蛋白表达上升。TGF-β1受体抑制剂SB431542预处理2 h后，蛇床子素对α-SMA、collagen Ⅰ、collagen Ⅲ、Smad2/3、p-Smad2/3和Smad4蛋白表达的抑制作用进一步增强。结论 蛇床子素可以通过直接抑制TGF-β1的产生和Smad通路下调α-SMA和胶原蛋白的表达，这可能是其抗纤维化的机制之一。     

缬沙坦对人肾近端小管上皮细胞TGF-β/Smad信号途径的影响

目的观察缬沙坦对TGF-β刺激人肾近端小管上皮细胞表达Smad的影响。方法以人肾小管上皮细胞(HKC)为对象,分为正常对照组;TGF-β1刺激组;缬沙坦组。Western blot检测p-Smad2/3、smad2/3、Smad7以及细胞上清ColⅠ蛋白含量;RT-PCR检测Smad2 mRNA和Smad7 mRNA水平。MTT法检测刺激组及缬沙坦组在不同时间、不同药物浓度对细胞增殖状态的影响。结果①Western blot显示,与TGF-β1刺激组相比,缬沙坦使Smad2/3、p-Smad2/3蛋白的表达下降,ColⅠ分泌显示相同趋势,而Smad7蛋白的表达没有变化。②半定量RT-PCR显示,与TGF-β1刺激组相比,缬沙坦组Smad2 mRNA降低,Smad7 mRNA无变化。③MTT法检测显示不同浓度缬沙坦对TGF-β1刺激所引起的细胞增殖受抑制现象均有改善,并且随药物浓度的增加该作用增强。结论提示缬沙坦的肾脏保护作用可能部分是通过抑制TGF-β/Smads信号途径实现的。     

褐藻聚合酚下调TGF-β1/Smads信号通路抑制大肠癌细胞增殖与侵袭

目的 探讨褐藻聚合酚(PFFE-A)对大肠癌细胞增殖与侵袭的影响,以及其对转化生长因子β₁(TGF-β₁)及母体抗生物皮肤生长因子同源物2/3(Smad2/3)通路的调控作用。方法 细胞分组：依次以50、100、150μmol·L^-1的小、中、大剂量的PFFE-A干预细胞,另设立正常对照组细胞。5-乙炔基-2’脱氧尿苷(EdU)染色检测细胞的增殖;Transwell小室检测细胞的侵袭能力;异种种植结肠癌裸鼠模型检测细胞的体内生长与转移能力;实时荧光定量聚合酶链反应(RT-qPCR)检测细胞中上皮间质转化(EMT)相关基因的表达;Western blotting检测细胞中TGF-β₁、p-Smad2/3的表达水平。结果 与正常对照组比较,PFFE-A小、中、大剂量组细胞的增殖率、侵袭细胞数、肿瘤瘤体质量、病灶转移比例、神经型钙黏附蛋白(N-cadherin)的mRNA的表达、TGF-β₁和p-Smad2/3的表达明显下降(P<0.05),E-钙黏蛋白(E-cadherin)...