单价抗CD20抗体诱导人B细胞淋巴瘤Raji细胞的凋亡

背景与目的:抗CD20抗体和片段已应用于非霍奇金淋巴瘤的临床治疗,但仍需要开发新的抗CD20抗体和片段(未修饰的或放射性标记的),以治疗对美罗华(利妥昔单抗)无反应的患者。鼠源性抗CD20抗体HI47的嵌合抗体片段Fab和F(ab)'2已被构建。本研究目的是观察HI47(鼠抗-CD20抗体)和其嵌合抗CD20抗体片段抑制肿瘤细胞生长和诱导肿瘤细胞凋亡的作用。方法:用免疫荧光法测定抗CD20抗体与CD20+人B细胞淋巴瘤Raji细胞的结合能力;MTT法测定抗CD20抗体片段对Raji细胞生长的影响;用膜联蛋白Ⅴ染色和DNA琼脂糖凝胶电泳检测和验证抗CD20抗体片段诱导Raji细胞凋亡。结果:HI47和其嵌合的抗CD20抗体片段均可与CD20+Raji细胞结合,结合率可达90%以上;HI47不能与美罗华竞争结合Raji细胞;HI47和其嵌合的抗CD20抗体片段浓度为100μg/ml对Raji细胞的抑制率分别为:(57.0±1.5)%、(65.2±2.5)%、(77.2±3.2)%;单价的抗CD20抗体片段Fab(20μg/ml)能够诱导Raji细胞的凋亡,早期凋亡率为17%。结论:HI47的嵌合抗体片段对Raji细胞有抑制作用,能诱导Raji细胞的凋亡。     

MDM2抑制剂RG-7388诱导弥漫性大B淋巴瘤细胞凋亡和周期阻滞

目的 探讨MDM2抑制剂RG-7388对弥漫性大B淋巴瘤(DLBCL)细胞增殖、细胞周期和凋亡的影响。方法 用2、4和8μmol/L RG7388处理DLBCL细胞株SUDHL2和HBL1,CCK8法和EdU法检测细胞增殖,Annexin V-FITC/PI双染和Caspase 3/7-Glo^TM酶活法检测细胞凋亡,流式细胞术检测细胞周期,蛋白质印迹法检测细胞周期和凋亡相关蛋白表达变化。结果 RG7388抑制SUDHL2和HBL1细胞的IC₅₀分别为3.36和3.76μmol/L,且RG7388的抑制作用呈剂量依赖性。不同浓度RG7388处理SUDHL2和HBL1细胞,G₁期细胞和凋亡细胞比例均显著高于对照组(均P<0.05)。随着RG7388浓度增高,Caspase 3/7酶活性逐渐增加,p53、p27、p21、PARP表达增加,Mcl-1和Bcl-x_L表达下调(均P<0.05)。结论 MDM2抑制剂RG7388抑制DLBCL细胞增殖,通过p53通路引起G₁期细胞...     

γ-分泌酶抑制剂诱导B淋巴瘤细胞凋亡

目的： 探讨γ-分泌酶抑制剂（gamma-secretase inhibitor,GSI）对伯基特淋巴瘤（Burkitt lymphoma,BL）Namalwa细胞增殖与凋亡的影响及其可能的作用机制。方法： GSI处理Namalwa细胞后,MTT法检测细胞增殖抑制率,流式细胞术检测细胞的凋亡,Western blotting法检测凋亡相关蛋白caspase-9、caspase-3以及Notch信号通路中Notch1蛋白胞内片段的表达。建立裸鼠移植瘤模型,观察GSI对裸鼠移植瘤生长的抑制作用。结果： GSI处理Namalwa细胞48、72 h的 IC50值分别为2.14和0.61 μmol/L,GSI对Namalwa细胞的增殖抑制作用呈剂量和时间依赖性。GSI（1.25 μmol/L）处理Namalwa细胞24 h后,其凋亡率明显高于对照组\[（17.71±1.87）% vs （3.42±0.95）%,P<0.01\];处理48 h后与对照组差异更为显著\[（43.68±053）% vs （4.65±0.8）%,P<0.01\]。GSI处理Namalwa细胞24、48 h后,凋亡蛋白caspase-3、caspase-9蛋白前体表达下降,caspase-9活性片段表达上调,Notch1蛋白胞內片段表达下降。GSI处理后裸鼠移植瘤体积明显小于对照组 \[13 d时,（2.199±0.183） vs （ 1.15±0.399）cm3,P<0.01];瘤组织中Namalwa细胞的凋亡率明显高于对照组\[（5.3±0.48）% vs （2.1±0.26）%,P<0.01\]。结论： GSI能够有效抑制BL细胞株Namalwa细胞的增殖及促进其凋亡,caspase-3和caspese-9凋亡蛋白以及Notch信号通路可能参与GSI诱导Namalwa细胞凋亡的过程。     

三氧化二砷诱导人类B细胞性淋巴瘤细胞凋亡及机制探讨

目的 研究Ａｓ２Ｏ３在体外对人类Ｂ淋巴瘤细胞株ＭＢＣ－１细胞增殖的影响,并探讨其作用机制。方法 采用细胞形态学,ＤＮＡ凝胶电泳,流式细胞术等多参数观察。结果 （１）（０．５～２）ｍＭ／Ｌ,Ａｓ２Ｏ３对ＭＢＣ－１细胞有增殖抑制作用,并呈时间和剂量相关,（２）证实诱导细胞凋亡是Ａｓ２Ｏ３增殖抑制作用的主要机制之一;（３）Ａｓ２Ｏ３能够上调ＭＢＣ－１细胞ｐ５３的蛋白表达,结论Ａｓ２Ｏ３能有效地通过诱导人     

三氧化二砷诱导人类B细胞性淋巴瘤细胞凋亡及机制探讨

目的研究Ａｓ２Ｏ３在体外对人类Ｂ淋巴瘤细胞株ＭＢＣ－１细胞增殖的影响,并探讨其作用机制。方法采用细胞形态学、ＤＮＡ凝胶电泳、流式细胞术等多参数观察。结果（１）（０．５～２）ｍＭ／ＬＡｓ２Ｏ３对ＭＢＣ－１细胞有增殖抑制作用,并呈时间和剂量相关;（２）证实诱导细胞凋亡是Ａｓ２Ｏ３增殖抑制作用的主要机制之一;（３）Ａｓ２Ｏ３能够上调ＭＢＣ－１细胞ｐ５３的蛋白表达。结论Ａｓ２Ｏ３能有效地通过诱导人类Ｂ淋巴瘤细胞株ＭＢＣ－１细胞凋亡而起到增殖抑制作用,而ｐ５３基因可能参与了对该凋亡过程的调控。     

抗癌药物诱导人B淋巴细胞白血病细胞的凋亡及周期特异性

目的探讨抗癌药物对人Ｂ淋巴细胞白血病细胞株Ｎａｌｍ－６细胞凋亡（ａｐｏｐｔｏｓｉｓ）的影响及周期特异性。方法临床常用的抗癌药物与Ｎａｌｍ－６细胞相互作用８～２４小时后,利用低倍体ＤＮＡ－ＦＣＭ测定法和ＴｄＴ测定＋ＤＮＡ染色法进行检测。结果ＡＤＲ、ＶＰ１６、ＣＰＴ、ＭＴＸ和Ａｒａ－Ｃ能明显诱导细胞凋亡,主要作用于Ｓ期。ＣＰＭ、６ＭＰ和ＰＲＤ则有较低的凋亡细胞诱导率,ＣＰＭ在大剂量时主要引起细胞坏死。６ＭＰ诱导Ｇ１和Ｓ期细胞凋亡,ＰＲＤ诱导Ｇ１期细胞凋亡,ＣＰＭ诱导凋亡作用无明显的周期特异性。结论抗癌药物能诱导人Ｂ淋巴白血病细胞株Ｎａｌｍ－６细胞凋亡。低倍体ＤＮＡ－ＦＣＭ测定法能检测细胞的凋亡率,ＴｄＴ测定＋ＤＮＡ染色法能呈现凋亡细胞与细胞周期的关系。临床上可利用此两种方法检测肿瘤细胞的凋亡率,抗癌药物的疗效及其周期特异性。从而有助于化疗方案的设计及预后的评估。     

鱼藤素对淋巴瘤Daudi细胞株细胞增殖细胞凋亡的影响及其机制

目的观察鱼藤素对人Burkitt淋巴瘤Daudi细胞株细胞增殖、细胞凋亡和细胞周期的影响,并探讨其分子机制。方法四甲基偶氮唑蓝(MTY)法检测细胞增殖活性,Hoechst 33258染色和Annexin-V／PI双标法检测细胞凋亡,流式细胞仪检测细胞周期分布,Western blot检测细胞内cyclin D1和pRb的蛋白表达。结果鱼藤素对Daudi细胞具有明显的增殖抑制作用,而对正常人外周血单个核细胞(PBMC)抑制作用不明显。鱼藤素可以诱导Daudi细胞凋亡,Hoechst 33258染色可见典型凋亡小体。Annexin V／PI双标法显示,鱼藤素诱导细胞发生早期凋亡,并呈剂量依赖性,20、40、80 nmol／L鱼藤素作用24 h时,凋亡率分别为15．46％±0．62％、18．48％±2．98％和31．42％±1．43％。鱼藤素作用Daudi细胞后,主要使细胞周期聚积于G0／G1期,G0／G1期细胞比例随鱼藤素剂量增大而逐渐增高,40 nmol／L鱼藤素作用24 h达56．56％;相反,S期细胞比例随鱼藤素剂量增大而逐渐降低,对G2／M期细胞作用不明显。鱼藤素使cyclin D1及pRb蛋白表达降低,呈剂量依赖关系。结论鱼藤素抑制Daudi细胞增殖,使细胞阻滞于G0／G1期,并诱导细胞凋亡。其抗肿瘤机制可能与下调cyclin D1和pRb蛋白表达有关。     

Anti—μ诱导人类B淋细胞淋MBC—1凋亡的研究

研究抗人ＩｇＭ在体外对表面ＩｇＭ阳性的人类Ｂ淋巴瘤细胞株ＭＢＣ－１细胞及Ｍｏｒａ细胞增殖活性的影响，并探讨可能的作用机制。方法应用细胞形态学，流式细胞仪分析及ＤＮＡ凝胶电泳等。     

边缘带B细胞淋巴瘤

边缘带Ｂ细胞淋巴瘤纪小龙，林汉良边缘带淋巴瘤，可以说是老形态新名词。在１９９４年的Ｈｉｓｔｏｐａｔｈｏｌｇｙ和Ｂｌｏｏｄ两份杂志上相继发表了由ＣｈａｎＪＫＣ牵头、来自欧美及香港９个国家和地区的１７所大学、医院、研究所的１９位血液病理专家组成的淋巴瘤研...     

恶性淋巴瘤细胞对TRAIL诱导凋亡的抵抗及其分子机制

目的:探讨在体外恶性淋巴瘤细胞对TRAIL(TNF-related apoptosis-inducingligand)诱导凋亡的抵抗作用及其分子机制.方法:TRAIL处理恶性淋巴瘤U937细胞后,在不同的时间采用MTT法检测药物时细胞的毒性作用:流式细胞术检测细胞周期;Western-blot法检测Bax蛋白质水平变化;实时荧光定量RT-PCR法检测BaxmRNA的表达情况.结果:TRAIL的浓度在5000μg/L时可抑制U937的细胞生存,但其抑制率低于正常对照细胞Hmy2.ciR;TRAIL阻滞U937细胞周期于G0/G1期;但这种阻滞效应较Hmy2.ciR细胞明显减弱.Western-blot法检测TRAIL处理的U937细胞Bax蛋白表达水平下降;实时荧光定量RT-PCR法检测BaxmRNA的表达水平却未见差异性改变.结论:TRAIL在诱导恶性淋巴瘤细胞凋亡过程中出现抵抗,这种作用可能与促凋亡蛋白Bax表达水平下降有关.Bax蛋白表达水平的下降可能是由于翻译后修饰导致Bax蛋白降解.     

克霉唑诱导人结肠癌细胞CCL229凋亡的实验研究

背景与目的：国外有研究表明克霉唑可通过持续耗竭细胞内钙库来抑制肿瘤细胞生长,本研究旨在研究克霉唑诱导人结肠癌细胞凋亡的作用。方法：将不同浓度的克霉唑作用于体外培养的人结肠癌CCL229细胞。利用荧光显微镜,电子显微镜观察细胞的形态变化,流式细胞仪检测细胞周期变化及亚二倍体比例,并利用TUNEL法进行凋亡的分子生物学检测。结果：25－35μmol/L的克霉唑均可诱导CCL229细胞凋亡,其诱导作用表现为时间和剂量依赖性,荧光显微镜及电镜下观察到凋亡小体形成等典型的形态学改变,DNA直方图上显示亚二倍体峰,亚二倍体比例随剂量及时间的增加而增加,相应地,G1期细胞比例下降,TUNEL法观察到棕褐色着染的凋亡阳性细胞。结论：克霉唑对人结肠癌细胞系CCL229有明显的凋亡诱导作用,并且能特异地诱导G1期细胞凋亡。     

顺铂对肝癌细胞凋亡及其细胞周期的影响

目的：探讨顺铂对Hca-F细胞凋亡及细胞周期的影响。方法：采用荧光，透射电镜及流式细胞术分析法检测肝癌细胞凋亡，细胞周期和增殖指数（PI）的变化。结果：CDDP可引起肿瘤细胞凋亡，并随着给药时间的延长，药物浓度的增高，细胞凋亡率随之增高，细胞凋亡形态结构越发典型，表现为核固缩，染色质边集，核小体形成等，同时药物浓度的升高，细胞周期S期比例下降，G0/G1期比例上升，PI增殖指数下降。结论：CDDP可引起细胞凋亡，细胞周期G0/G1期阻滞，使细胞分裂增殖活动受到抑制。     

氨氯吡咪诱导卵巢癌细胞凋亡

目的 观察利尿药氨氯吡咪诱导卵巢癌细胞凋亡及其可能的机理。方法 用光镜及荧光显微镜从形态上了解凋亡的发生,用琼旨糖凝胶电泳进一步检测发生凋亡的特征性ＤＮＡ降解。流式细胞术定量分析用不同剂量氨氯吡咪处理的卵巢癌细胞诱导的凋亡发生率。同时检测被处理细胞细胞内ｐＨ。结果 氨氯吡咪处理的卵巢癌细胞在形态学上显示出凋亡细胞的特征,琼脂糖凝胶电泳显示特征性ＤＮＡ阶梯图。流式细胞术检测表明,０．０１￣５μｍｏｌ     

Apoptosis induced by hyperthermia in Dunn osteosarcoma cell line in vitro

The effect of hyperthermia at 43.5^oC for 1h on Dunn osteosarcoma cells was studied. With sham-heated cells (37^oC, 1h) as the control, the hyperthermia treated cells were divided into five groups. Time 0 group was the cells that were harvested immediately after heated at 43.5^oC for 1h. Whereas time 3, 6, 12, and 24h groups were the cells that were collected respectively after reincubation at 37^oC for the above different time periods. The appearance of hyperthermiainduced apoptosis of Dunn osteosarcoma cells was demonstrated to be time dependent. With the confocal microscopic study and TUNEL staining, the morphological characteristics of apoptosis, condensed nuclei and fragmented nuclei were obvious when reincubated at 37^oC for 6h after hyperthermic treatment. This hyperthermia-induced apoptosis was further confirmed by flow cytometric analysis on DNA contents. The sub-G₁ region that was proposed as a marker of apoptotic cells was most significantly elevated at 6h after hyperthermic treatment and, thereafter, decreased to the levels of control values by 24h, as the apoptotic cells underwent secondary necrosis and degraded to debris. The DNA strand breaks, considered as the key biochemical event of apoptosis, were detected by the TUNEL assay. This study indicated that hyperthermia (43.5^oC for 1h) can induce apoptotic changes on osteosarcoma cells in vitro very rapidly (within 6h after treatment), and its occurrence might not be detected if the samples are not taken at several early time points after hyperthermia.     

单克隆抗体PD4诱导人胃癌细胞系MGC-803的凋亡

目的凋亡（Ａｐｏｐｔｏｓｉｓ）是一种区别于坏死的细胞生理性死亡方式。肿瘤发生与凋亡的异常有十分密切的关系。单克隆抗体ＰＤ４能识别胃癌细胞表面的分子量为４００００的分子（Ｐ４０）。本研究是为了观察单抗ＰＤ４是否具有诱导胃癌细胞凋亡的作用。方法我们应用流式细胞术和末端脱氧核苷酸标记及ＤＮＡ电泳法观察单抗ＰＤ４对胃癌细胞ＭＧＣ－８０３增殖周期的影响以及对细胞杀伤作用的方式,并检测了ＭＧＣ－８０３细胞表面Ｆａｓ抗原的表达情况。结果ＰＤ４有阻滞细胞周期、通过诱发凋亡而抑制肿瘤细胞生长的作用,且ＭＧＣ－８０３细胞Ｆａｓ抗原表达为阴性。结论Ｐ４０是一个与细胞凋亡或增殖有关、且不同于Ｆａｓ的肿瘤相关抗原,他的分子克隆有助于抗体诱导细胞凋亡机制的阐明。     

苦参碱诱导HL-60细胞株凋亡作用的实验研究

 目的　研究苦参碱（MAT）诱导HL-60细胞株凋亡的作用及其机制。方法　采用 CCK-8法检测不同浓度MAT对HL-60细胞的增殖抑制作用;流式细胞术检测细胞凋亡以及线粒体跨膜电位的变化;分光光度法检测Caspase-9活性。结果　0.25～2.0 mg／ml MAT对HL-60细胞有生长抑制作用,与对照组相比差异有统计学意义（F＝67.83,P＜0.05）;MAT处理48 h后,细胞凋亡率明显增高,并呈剂量依赖性（t值分别为4.685、6.300、9.641、6.786,均P＜0.05）;1.0 mg／ml MAT处理后48 h内,细胞线粒体跨膜电位逐渐降低（F＝54.83,P＜0.05）,Caspase-9活性逐渐升高,呈时间依赖性（F＝72.31,P＜0.05）。结论　MAT可能通过降低细胞线粒体跨膜电位、激活Caspase-9而诱导HL-60细胞凋亡。     

外源性PTEN增强乏氧诱导胰腺癌细胞系ASPC-1的凋亡

目的 研究外源性PTEN对乏氧胰腺癌细胞系ASPC-1细胞周期、血管内皮生长因子（VEGF）和表皮生长因子受体（EGFR）蛋白表达及细胞增殖能力的影响。方法将质粒pEAK8和pEAK8-PTEN分别转染ASPC-1细胞,获得ASPC-1-pEAK8（A-pE）细胞和ASPC-1-pEAK8-FFEN（A-pE-P）细胞,给予乏氧（1％O2）处理,并应用RT-PCR、Western印迹杂交、流式细胞术、成克隆分析及观察裸鼠移植瘤生长等方法进行检测。结果A-pE-P细胞PTEN mRNA及其蛋白表达明显高于ASPC-1细胞和A-pE细胞。与ASPC-1细胞相比,常氧时,A-pE-P细胞VEGF蛋白表达量下降了23．4％,EGFR蛋白表达量无明显变化,细胞克隆形成率降低了28．0％（F=4．283,P〈0．05）,荷瘤裸鼠5周时,A-pE-P细胞组和ASPc-1细胞组瘤结节体积比较,差异有统计学意义（t=4．834,P〈0．01）,A-pE-P细胞组的抑瘤率为42．4％。乏氧时,A-pE-P细胞VEGF蛋白表达量下降了31．4％,EGFR蛋白表达量降低了25．0％,细胞克隆形成率降低了33．2％（F=9．152,P〈0．01）。A-pE-P细胞较ASPC-1细胞G2／M期阻滞明显,乏氧培养8h时可引起细胞大量凋亡。结论外源性PTEN使ASPC-1细胞阻滞在G2／M期,增强乏氧诱导细胞的凋亡,抑制乏氧诱导VEGF、EGFR表达的增加,抑制肿瘤细胞的增殖。