瘦素对大鼠肝纤维化星状细胞的作用及相关ERK信号转导机制

目的：探讨瘦素（leptin）对大鼠肝纤维化星状细胞（HSC）的作用及相关信号转导机制。方法采用改良原位灌注、Optiprep密度梯度离心法分离纯化大鼠HSC。通过台盼蓝拒染试验评估细胞存活率,α-平滑肌肌动蛋白（α- SMA）免疫组化鉴定,光镜观察形态学变化。将40只SD大鼠分为4个处理组：对照组、血管紧张素Ⅱ（AngⅡ）组（加入10-7mol/L AngⅡ）、Leptin组（加入100ng/ml Leptin）、Leptin＋AngⅡ组（加入100ng/ml Leptin＋10-7mol/L AngⅡ）。分别采用3H- TdR和3H- Pro掺入法进行HSC增殖和胶原合成的测定。Western blot检测各处理组p- ERK1/ERK1、p- ERK2/ERK2、AngⅡ蛋白表达情况。结果大鼠HSC存活率＞90%,传代1次后HSC纯度＞95%。与对照组相比,AngⅡ组、Leptin组、Leptin＋AngⅡ组的HSC增殖和胶原合成均明显增加（均P＜0.05）;与AngⅡ组、Leptin组相比,Leptin＋AngⅡ组HSC增殖和胶原合成明显增加（均P＜0.05）。Western blot显示,AngⅡ组、Leptin组、Leptin＋AngⅡ组的p- ERK1/ERK1、p- ERK2/ERK2、AngⅡ蛋白水平均较对照组明显升高（均P＜0.05）;与AngⅡ组、Lep-tin组相比,Leptin＋AngⅡ组p- ERK1/ERK1、p- ERK2/ERK2、AngⅡ蛋白水平明显升高（均P＜0.05）。结论瘦素可通过上调AngⅡ水平,激活ERK信号转导通路,刺激HSC增殖和胶原合成,导致肝纤维化。     

血管紧张素Ⅱ通过上调富含半胱氨酸蛋白61表达诱导HEK293T细胞凋亡

目的探讨富含半胱氨酸蛋白61（Cyr61）在血管紧张素Ⅱ（AngⅡ）诱导HEK293 细胞功能中的改变及作用。方法 HEK293T细胞于体外培养,并应用CRISPR/Cas9技术敲低HEK293T细胞Cyr61基因。将细胞分为四组：（1）对照组;（2）Cyr61 敲低组;（3）AngⅡ组;（4）AngⅡ+Cyr61敲低组,以10-7 mol/L AngⅡ处理细胞,48 h收集细胞用流式细胞仪检测细胞凋亡,通过 实时荧光定量PCR(qRT-PCR)技术及蛋白质免疫印迹技术检测细胞Cyr61及Bcl-2的mRNA及蛋白表达量。结果Cyr61敲低 组Cyr61蛋白水平较正常对照组明显下降（P<0.05）,AngⅡ干预48 h 后Cyr61蛋白和mRNA表达水平显著升高（P<0.05）,Bcl-2 蛋白和mRNA表达水平明显下降（P<0.05）,敲低Cyr61 后Bcl-2 蛋白和mRNA表达水平明显升高（P<0.05）,与对照组凋亡率 （11.88±1.46）%相比,Cyr61敲低组凋亡率为（3.87±0. 83）%,AngⅡ干预组HEK293T细胞凋亡率为（26.94±3.73）%（P<0.05）,与 AngⅡ干预组相比,Cyr61 敲低+AngⅡ组凋亡率为（15.76±1.31）%（P<0.05）。结论Cyr61 表达量的上调与AngⅡ诱导的 HEK293T细胞损伤有关,下调Cyr61的表达可以有效地保护AngⅡ诱导的细胞损伤。     

门静脉高压症性血管病变中局部肿瘤坏死因子-α、血管紧张素原与核因子-kappa B的相关研究

目的 探讨肝硬化门静脉高压症(portal hypertension, PHT)时局部肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis-alpha, TNF-α)、血管紧张素原与核因子-kappaB(nuclear factor-kappaB, NF-κB)在门静脉高压症性血管病变中的作用.方法 采用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)方法检测肝硬化PHT病人脾脏动、静脉组织和正常血管TNF-α mRNA及局部血管紧张素原mRNA的表达情况,用化学发光凝胶电泳迁移率实验(electrophoretic mobility shift assay, EMSA)方法检测局部NF-κB的活性.结果 对照组内脾脏动、静脉组织TNF-α mRNA与局部血管紧张素原mRNA分别为(0.24±0.08)、(0.21±0.12);(0.23±0.09)、(0.18±0.05),显著低于肝硬化PHT组脾动脉、脾静脉组织TNF-α mRNA及局部血管紧张素原mRNA的表达(0.38±0.11)、(0.36±0.16);(0.48±0.12)、(0.43±0.10)(P＝0.025;0.029);对照组脾动、静脉局部NF-κB未被检测到明显的活性,而于肝硬化PHT组检测到显著具有活性的NF-κB表达(P＝0.031),且PHT组脾脏动、静脉TNF-α mRNA表达与NF-κB的活性显著的正相关(r=0.796,P=0.035;r=0.849,P=0.041).结论 肝硬化PHT病人局部TNF-α、血管紧张素原表达增强,NF-κB的活化,三者相互作用,可能是肝硬化门静脉高压症时内脏血管病变形成和发展的原因之一.     

血管紧张素Ⅱ通过下调血管外膜过氧化氢酶促进血管重塑的研究

目的 探讨血管紧张素Ⅱ（AngiotensinⅡ,AngⅡ）是否通过调控血管外膜过氧化氢酶（Catalase,CAT）促进血管重塑.方法 培养大鼠胸主动脉外膜成纤维细胞,分为对照组、AngⅡ组、PD98059（ERK1/2抑制剂）组、AngⅡ＋PD98059组,取4～7代用于实验;使用含107mol/L Ang Ⅱ的DMEM培养液分别刺激成纤维细胞0、0 5、2、6、12、24h,研究Ang Ⅱ对CAT作用的时间关系;分别以0、10^8、10^7、10^6、10^5mol/L的AngⅡ刺激成纤维细胞24h,研究Ang Ⅱ对CAT作用的浓度关系;采用PD98059（ERK1/2抑制剂）,研究ERK1/2信号通路对CAT表达的影响.结果 AngⅡ能够显著下调CAT的表达,并呈时间和剂量依赖性;AngⅡ能够通过ERK1/2信号通路下调血管外膜CAT的表达,阻断ERK1/2信号通路能够恢复CAT的表达.结论 AngⅡ可能通过ERK1/2信号通路下调血管外膜CAT的表达,进而促进血管重塑的发生,导致血管病理性重塑发生.     

磁共振血管造影对门静脉高压症的应用研究

目的：探讨磁共振血管造影对门静脉高压症的临床应用价值。方法：门静脉高压症组27例与正常对照组15例行磁共振增强血管造影，门静脉肝内分支显示按Nordinger分级法进行对照，测量2组门静脉主干、脾静脉及肠系膜上静脉直径，同时相位对比法测量血流速度、流量及血流方向。结果：（1）门静脉高压症组门静脉肝内分支显示低于对照组，前者多为Nordinger分级Ⅱ、Ⅲ级水平，后者多为Ⅰ、Ⅱ级水平，2组差异有统计学意义（Hc=10．76，P〈0．05）。（2）门静脉高压症组中门静脉、脾静脉及肠系膜上静脉的直径平均值均大于对照组，且其血流速度下降、血流量增加。结论：磁共振血管造影既能显示门静脉及其侧支循环的解剖结构，又能测量其血流动力学的改变，对外科手术设计、风险预测及疗效评价具有重要价值。     

COPD合并肺间质纤维化患者血清TGF-β_1及AngⅡ的变化

目的探讨慢性阻塞性肺疾病（COPD）合并肺间质纤维化患者血清中转化生长因子β1（TGF-β1）、血管紧张素Ⅱ（AngⅡ）的变化。方法纳入COPD合并肺间质纤维化患者60例（观察组）和单纯COPD患者28例（对照组）,检测采用双抗体夹心ELISA法测定TGF-β1水平;采用竞争放射免疫分析法测定AngⅡ水平。结果 COPD观察组患者TGF-β1为（580±150）ng/L,对照组为（496±122）ng/L,2组相比差异有统计学意义（P〈0.05）;观察组AngⅡ为（58±21）ng/L,对照组为（46±17）ng/L,2组相比差异有统计学意义（P〈0.05）。结论 TGF-β1可以介导肺间质纤维化的发生、发展,AngⅡ可以促进肺间质纤维化的发展。     

血管紧张素Ⅱ及氯沙坦对小鼠足细胞葡萄糖转运蛋白4表达的影响

目的：观察血管紧张素Ⅱ（AngiotensinⅡ,AngⅡ）对足细胞葡萄糖转运蛋白4（GLUT4）表达的影响,及血管紧张素1型受体阻断剂氯沙坦（Losartan,Lo）能否抑制AngII对足细胞GLUT4的作用。方法将小鼠MPC5足细胞分成对照组、AngⅡ10^-6 mmol/L组、AngⅡ10^-8 mmol/L组、AngⅡ10^-10 mmol/L组、Lo10^-6 mmol/L＋AngⅡ10^-6 mmol/L组,半定量聚合酶链反应（RT-PCR）检测足细胞GLUT4mRNA的水平,间接免疫荧光检测GLUT4蛋白的表达。结果与对照组相比,AngⅡ10^-6 mmol/L组能够显著抑制GLUT4的表达及蛋白合成,GLUT4 mRNA的表达下降了56.1%（P=0.041）,间接免疫荧光表达下降了54.9%（P〈0.05）。AngⅡ10^-8 mmol/L组及AngⅡ10^-10 mmol/L组GLUT4的表达与对照组相比有所下降,但差异无统计学意义（P〉0.05）,AngⅡ10^-8 mmol/L组对GLUT4抑制强于AngⅡ10^-10 mmol/L组,两组间差异无统计学意义（P〉0.05）。Lo 10^-6 mmol/L＋AngⅡ10^-6 mmol/L组GLUT4的表达显著升高,与AngⅡ10^-6组相比,mRNA升高176.3%（P=0.006）,蛋白表达升高87.8%（P〈0.05）。结论 AngⅡ能够显著抑制足细胞GLUT4的表达及合成,具有浓度依赖性,这种作用能被氯沙坦所阻断。     

局部血管紧张素原mRNA的表达与核因子-κB的活化在门静脉高压症性血管病变中的意义

目的探讨肝硬化门静脉高压症(PHT)时局部血管紧张素原mRNA表达与核因子-κB(NF-κB)的活化在门静脉高压症性血管病变中的意义。方法采用逆转录聚合酶链反应(RT-0PCR)方法检测肝硬化门静脉高压症病人脾脏动、静脉组织和正常血管局部血管紧张素原mRNA的表达情况,用化学发光凝胶电泳迁移率实验(EMSA)方法检测局部NF-κB的活性。结果对照组内脾脏动、静脉组织局部血管紧张素原mRNA分别为0.23±0.12、0.18±0.10,显著低于肝硬化门静脉高压症组脾动脉、脾静脉组织局部血管紧张素原mRNA的表达0.48±0.21、0.43±0.16(P<0.05);对照组脾动、静脉局部NF-κB未被检测到明显的活性,而于肝硬化门静脉高压症组检测到显著具有活性的NF-κB表达(P<0.05)。结论肝硬化门静脉高压病人局部血管紧张素原mRNA表达增强,NF-κB的活化,可能是肝硬化门静脉高压症时内脏血管病变形成和发展的原因之一。     

二乙酰胺三氮脒对肢体缺血再灌注模型小鼠肾损伤的保护作用及其机制

目的：观察血管紧张素转换酶2（ACE2）激动剂二乙酰胺三氮脒（DIZE）预处理肢体缺血再灌注（LIR）小鼠肾组织中血管紧张素Ⅱ（AngⅡ）、血管紧张素（1-7）[Ang（1-7）]水平和血管紧张素Ⅱ1型受体（AT1R）及Mas受体（MasR）蛋白表达水平,探讨DIZE对LIR小鼠肾损伤的保护作用及其机制。方法：8周龄雄性ICR小鼠18只,随机分为对照组、LIR组和LIR+DIZE组。LIR组和LIR+DIZE组小鼠采用肢体缺血2h再灌注4h方法制备LIR模型,LIR+DIZE组小鼠于LIR前皮下注射DIZE（10mg·kg^-1·d^-1）预处理14 d。采用组织学技术观察小鼠肾组织形态表现并对病理损伤进行评分,化学比色法检测小鼠血清中尿素和血肌酐（Scr）水平,酶联免疫吸附测定（ELISA）法检测小鼠肾组织中AngⅡ和Ang（1-7）水平,蛋白免疫印迹法检测小鼠肾组织中AT1R和MasR蛋白表达水平。结果：与对照组比较,LIR组小鼠肾组织出现炎细胞浸润和上皮细胞变性等不同程度肾损伤改变,肾病理损伤评分升高（P<0.05）;与LIR组小鼠比较,LIR+DIZE组小鼠肾组织中肾损伤表现明显减轻,肾病理损伤评分降低（P<0.05）。与对照组比较,LIR组小鼠血清中尿素和Scr水平升高（P<0.05）;与LIR组比较,LIR+DIZE组小鼠血清中Urea和Scr水平降低（P<0.05）。与对照组比较,LIR组小鼠肾组织中AngⅡ和Ang（1-7）水平均升高（P<0.05）,且AngⅡ/Ang（1-7）比值升高（P<0.05）;与LIR组比较,LIR+DIZE组小鼠肾组织中AngⅡ水平降低（P<0.05）,Ang（1-7）水平升高（P<0.05）,AngⅡ/Ang（1-7）比值降低（P<0.05）。与对照组比较,LIR组小鼠肾组织中AT1R蛋白表达水平降低（P<0.05）,MasR蛋白表达水平升高（P<0.05）,AT1R/MasR比值降低（P<0.05）;与LIR组比较,LIR+DIZE组小鼠肾组织中AT1R和MasR蛋白表达水平均升高（P<0.05）,AT1R/MasR比值明显升高（P<0.05）。结论：LIR后小鼠肾组织中AngⅡ/Ang（1-7）和AT1R/MasR表达失衡可能参与LIR后肾损伤的发生,ACE2激活剂DIZE可能通过改善AngⅡ/Ang（1-7）和AT1R/MasR表达失衡发挥对肾脏的保护作用。     

老年糖尿病合并高血压患者血清瘦素与肾素血管紧张素系统的关系

目的研究血清瘦素（leptin）水平变化在老年糖尿病（DM）合并高血压（HT）发病中的可能作用,探讨合并HT老年DM患者血清leptin水平变化与肾素血管紧张素系统（RAS）活性的关系。方法选择50例合并HT老年2型DM患者（合并HT老年DM组）、50例血压正常老年2型DM患者（血压正常DM组）以及50名血压正常老年人（对照组）为研究对象,检测各组血清leptin、血浆AngⅡ水平,观察应用血管紧张素转换酶抑制剂（ACEI）马来酸依那普利（Enaiapril）治疗后,合并HT老年DM组患者血清leptin、血浆AngⅡ水平的变化,并分析其血清leptin水平与平均动脉压（MAP）、血浆AngⅡ水平的相关性。结果合并HT老年DM组患者血清leptin、血浆AngⅡ水平分别为（25.84±5.17）μg/L、（146.87±22.04）ng/L,均明显高于血压正常老年DM组患者[（17.63±4.26）μg/L、（98.74±13.63）ng/L]和对照组[（9.16±2.07）μg/L、（57.26±9.91）ng/L],差异均有高度统计学意义（P〈0.01）。合并HT老年DM组患者血清leptin水平与MAP、血浆AngⅡ水平呈明显正相关（r=0.675、0.634,P〈0.01）。应用ACEI Enaiapril治疗后,合并HT老年DM组患者血清leptin、血浆AngⅡ水平明显降低（P〈0.01）。结论血清leptin水平升高在老年DM合并HT的发病中可能发挥重要作用,合并HT老年DM患者血清leptin水平影响患者血浆AngⅡ水平,RAS活性影响合并HT老年DM患者血清leptin水平。     

替米沙坦阻断血管紧张素Ⅱ作用促进骨骼肌细胞糖摄取

目的 研究替米沙坦和血管紧张素Ⅱ对小鼠骨骼肌成肌细胞C2C12的葡萄糖摄取和胰岛素信号传导途径的影响,探讨替米沙坦影响糖代谢的可能机制.方法 诱导成熟的C2C12细胞分为对照组(C组)、胰岛素组(Ins组)、胰岛素+血管紧张素Ⅱ组(Ins+AngⅡ组)、胰岛素+血管紧张素Ⅱ+替米沙坦组(Ins+AngⅡ+Tel组).经相应药物干预后测定细胞2-脱氧葡萄糖摄入率,并用Western印迹法检测磷脂酰肌醇3激酶(P13-K)p85α、丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶(AKT)1、P38、胞外信号调节激酶(ERK)1蛋白表达.结果 Ins组胰岛素信号转导通路的信号分子P13-K p85α、AKT1、P38、胞外信号调节激酶(ERK1)的蛋白表达均较C组显著升高(P值均<0.05);Ins+AngⅡ组P13-K p85α和AKT1的蛋白表达较Ins组显著下降(P值均<0.05),而两组间P38和ERK1蛋白表达的差异则无统计学意义(P值均0.05);Ins+AngⅡ+Tel组P13-K p85α和AKT1的蛋白表达较Ins+AngⅡ组显著增加(P值均<0.05),两组P38和ERK1蛋白表达的差异则无统计学意义(P值均0.05).结论 替米沙坦逆转血管紧张素Ⅱ对骨骼肌细胞葡萄糖吸收和抑制胰岛素信号转导P13-K途径的作用,可能是其影响糖代谢的机制之一.     

核因子-кappaB的活化在门脉高压性血管病变中的意义

目的 探讨脾脏动、静脉组织核因子-кappaB(nuclear factor-кB,NF-кB)的活化在门静脉高压症(portal hypertension,PHT)性血管病变中的作用及意义.方法 采用化学发光凝胶电泳迁移率实验(chemiluminescent electrophoretic mobility shift assay,EMSA)方法检测肝硬化PHT患者脾脏动、静脉和正常血管NF-кB的活性.结果 对照组脾动、静脉NF-кB未被检测到明显的活性,其相对表达值分别为(0.19±0.12)和(0.25±0.16);而于肝硬化PHT组脾动、静脉内检测到显著具有活性的NF-кB表达(1.44±0.23)和(1.38±0.18),P＜0.05.结论 肝硬化PHT血管组织NF-кB的活化可能是肝硬化P-HT时内脏血管病变形成和发展的始动原因之一.     

门脉高压症患者门静脉系统血流动力学的变化

目的探讨肝硬化门脉高压患者门脉系统血流动力学参数变化及其临床意义。方法应用多普勒超声检测50例肝硬化门脉高压症患者门脉系统血流动力学参数,并以18例正常体检患者对照研究。分析两组间门脉系统相关血管血流动力学参数差异。结果病例组门静脉、脾静脉和脾动脉血管内径及其血流量较对照组均呈显著性增大（P〈0.01）,血流速度亦有增加,但无统计学显著意义（P〉0.05）。病例组脾静脉血流量/门静脉血流量（Qp/Qsv）为82.4%（1360.60/1650.57）,而对照组脾静脉血流量/门静脉血流量（Qp/Qsv）仅为37.7%（364.31/965.69）,两组间比较具有统计学显著性意义（P〈0.01）。结论门静脉高压患者存在门静脉系统血流动力学变化。提示其在门静脉高压症的发病机制中起重要作用。     

血红素氧合酶在门静脉高压症患者脾动脉中的异常表达

目的研究血红素氧合酶(HO)在门静脉高压症患者脾动脉的表达,探讨血红素氧合酶-内源性一氧化碳系统(HO-CO)在门静脉高压症演进过程中的作用。方法收集门静脉高压症并行择期脾切除加贲门周围血管离断术患者18例,同期外伤性脾破裂行脾切除术患者12例为对照,取脾动脉组织,应用半定量逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测HO-1、HO-2 mRNA表达,Western blot检测其蛋白表达。结果HO-1 mRNA和蛋白表达的吸光度比值在对照组为(0.03±0.00)、(0.04±0.01),均明显低于门静脉高压组(0.81±0.12)、(1.56±0.25),差异均有极显著性意义(P<0.01);HO-2 mRNA和蛋白表达在对照组为(0.64±0.12)、(0.84±0.14),在门静脉高压组为(0.58±0.09)、(0.92±0.12),差异均无显著性意义(P>0.05)。HO-1表达与肝功能分级相关,肝功能Ⅱ级患者其脾动脉HO-1 mRNA和蛋白表达均明显高于肝功能Ⅰ级患者(P<0.01);HO-2表达与肝功能分级无相关关系(P>0.05)。结论HO-CO系统,尤其是HO-1在门静脉高压症演进过程中起重要作用。     

促红细胞生成素对血管紧张素Ⅱ诱导的系膜细胞增殖及Ⅰ/Ⅳ型胶原和纤维连接蛋白表达的影响研究

目的 探讨促红细胞生成素（EPO）对血管紧张素Ⅱ（Ang Ⅱ）诱导的系膜细胞增殖及Ⅰ型胶原（ColⅠ）、Ⅳ型胶原（Col Ⅳ）和纤维连接蛋白（FN）表达的影响。方法 将体外培养大鼠肾小球系膜细胞分为4组：对照组,AngⅡ组（0.1、1.0、10.0 μmol/L）,EPO组（1、10、100 U/L）,AngⅡ+EPO组（EPO 1、10、100 U/L预处理1 h后加AngⅡ 1.0 μmol/L）。各组处理0、24、48 h时,CCK-8法检测系膜细胞增殖情况,免疫印迹法检测系膜细胞ColⅠ、Col Ⅳ和FN蛋白表达水平,ELISA法检测系膜细胞培养上清液中ColⅠ、Col Ⅳ和FN蛋白水平。结果 单独给予AngⅡ或EPO均可刺激系膜细胞增殖,AngⅡ组亚组和EPO组亚组24、48 h时系膜细胞增殖水平均高于对照组,且48 h时高于24 h时,24 h时高于0 h时,差异均有统计学意义（P＜0.05）;单独给予AngⅡ或EPO均可促进系膜细胞合成及分泌ColⅠ、Col Ⅳ和FN,除EPO 1 U/L亚组Col Ⅰ蛋白表达水平与对照组间差异无统计学意义（P＞0.05）外,AngⅡ组亚组和EPO组其他亚组ColⅠ、Col Ⅳ和FN蛋白表达水平均高于对照组,差异有统计学意义（P＜0.05）。与AngⅡ1.0 μmol/L+EPO 1 U/L亚组比较,AngⅡ1.0 μmol/L+EPO 10 U/L亚组和AngⅡ1.0 μmol/L+EPO 100 U/L亚组在24、48 h时系膜细胞增殖水平及ColⅠ、Col Ⅳ和FN蛋白表达水平均下降,差异有统计学意义（P＜0.05）,但与对照组及同浓度单纯EPO亚组比较,AngⅡ1.0 μmol/L+EPO组各亚组24、48 h时系膜细胞增殖水平及ColⅠ、Col Ⅳ和FN蛋白表达水平均增高,差异有统计学意义（P＜0.05）。结论 Ang Ⅱ能刺激系膜细胞增殖,促进系膜细胞合成及分泌ColⅠ、Col Ⅳ和FN,EPO亦有一定程度类似作用,但两者同时存在时,EPO可拮抗AngⅡ诱导的系膜细胞增殖及ColⅠ、Col Ⅳ和FN的合成及分泌,提示EPO除可纠正肾性贫血外,可能对AngⅡ诱导的肾小球硬化具有抑制作用而保护肾功能。     

miR-155抑制AngⅡ诱导的主动脉血管平滑肌细胞周期转换

目的： 观察转染miR-155后对血管紧张素Ⅱ（angiotensinⅡ,AngⅡ）诱导小鼠主动脉血管平滑肌细胞（vascular smooth muscle cell,VSMC）细胞周期转换的影响并探讨其机制。方法：原代培养小鼠VSMC,用1×10-6 mol/L AngⅡ作用于VSMC 48 h后,采用实时荧光定量PCR（quantitative real-time PCR,q-RT-PCR）检测空白对照组及AngⅡ组miR-155表达水平。用q-RT-PCR及Western blot检测分别转染miR-155及阴性对照后各组AngⅡ 1型受体（angiotensin Ⅱ type 1 receptor,AT1R）的mRNA及蛋白表达水平;用Western blot检测转染miR-155 mimic及阴性对照后对AT1R下游细胞外信号调节激酶1/2（extracellular signal-regulated kinase 1/2,ERK1/2）、核糖体蛋白S6激酶（P70S6K1）通路的影响。分别检测转染miR-155 mimic及使用血管紧张素受体阻滞剂缬沙坦、mTOR通路抑制剂雷帕霉素、ERK1/2抑制剂U0126对细胞周期素D1（Cyclin D1）的表达影响,并使用流式细胞分析检测细胞周期变化,探讨miR-155对细胞周期的影响及其机制。结果：AngⅡ可显著降低miR-155的表达。miR-155可从mRNA及蛋白水平抑制AT1R表达,并抑制AngⅡ促AT1R表达的作用。转染miR-155 mimic后可显著抑制AngⅡ促进ERK1/2、P70S6K1通路激活的作用。转染miR-155 mimic、使用缬沙坦、雷帕霉素、U0126抑制AngⅡ促Cyclin D1表达的作用,并使细胞周期阻滞在G0/G1期。结论：miR-155可通过抑制AT1R间接抑制AngⅡ促进ERK1/2、P70S6K1通路激活及Cyclin D1表达的作用,抑制AngⅡ促进细胞周期转换的作用。     

老年高血压合并心力衰竭患者血清神经内分泌激素水平的表达及与心力衰竭严重程度的相关性研究

目的探讨老年高血压合并心力衰竭患者神经内分泌激素水平及其与心力衰竭严重程度分级的相关性。方法选择2010年8月～2012年2月广东省廉江市人民医院治疗的老年高血压合并心力衰竭患者57例为观察组,选择同期单纯高血压患者57例为对照组。比较两组患者血清血管紧张素Ⅱ（AngⅡ）、内皮素-1（ET-1）、皮质醇（Cor）、β-内啡肽（β-EP）、脑钠肽（BNP）、促肾上腺皮质激素（ACTH）及去甲肾上腺素（NE）水平;观察组中NY-HA分级Ⅱ、Ⅲ及Ⅳ级者的上述指标进行比较,对其相关性进行分析研究。结果①观察组血清AngⅡ[（101.34±9.45）ng/L]、ET-1[（100.26±9.56）ng/L]、Cor[（272.86±16.32）μg/L]、β-EP[（96.33±8.21）ng/L]、BNP[（341.51±16.27）ng/L]、ACTH[（30.14±4.52）ng/L]及NE[（1.15±0.11）μg/L]水平均明显高于对照组[（68.36±6.36）ng/L、（70.34±7.02）ng/L、（202.17±12.25）μg/L、（56.29±5.48）ng/L、（132.18±11.07）ng/L、（19.45±3.31）ng/L、（0.37±0.07）μg/L],差异均有统计学意义（P〈0.05）。②观察组中NYHA分级Ⅳ级者血清AngⅡ[（123.57±10.48）ng/L]、ET-1[（118.84±11.23）ng/L]、Cor[（307.63±17.26）μg/L]、β-EP[（110.37±10.12）ng/L]、BNP[（338.26±19.25）ng/L]、ACTH[（43.62±5.17）ng/L]、NE[（1.98±0.18）μg/L]水平高于Ⅱ级[（75.26±7.46）ng/L、（81.72±8.14）ng/L、（229.43±13.54）μg/L、（74.92±6.93）ng/L、（181.35±13.37）ng/L、（22.33±4.22）ng/L、（0.86±0.10）μg/L]及Ⅲ级[（100.42±9.29）ng/L、（99.28±9.34）ng/L、（268.84±15.92）μg/L、（93.18±7.95）ng/L、（296.42±15.77）ng/L、（32.54±4.65）ng/L、（1.23±0.14）μg/L]患者,Ⅲ级患者AngⅡ、ET-1、Cor、β-EP、BNP、ACTH、NE水平高于Ⅱ级患者,差异均有统计学意义（P〈0.05）。③血清AngⅡ、ET-1、Cor、β-EP、BNP、ACTH及NE水平均与心功能分级密切相关（P〈0.05）。结论老年高血压合并心力衰竭患者神经内分泌激素水平与心力衰竭严重程度分级存在密切相关性,对其检测有助于了解患者的心功能状态。     

血管紧张素Ⅱ对大鼠血管平滑肌细胞T型钙通道及其信号转导通路的影响

目的 研究血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)对血管平滑肌细胞Cav3.1表达的影响及其作用机制.方法 酶消化法原代培养大鼠主动脉血管平滑肌细胞,应用第5代传代细胞,实验随机分为7组:对照组(不加任何药物)、AngⅡ组[加入AngⅡ(0.1μmol/L)培养24 h]、AngⅡ+氯沙坦钾组[加入氯沙坦钾(1μmol/L)培养1h,再加入AngⅡ(0.1 μmol/L)共同培养24 h]、AngⅡ+PD98059组[加入PD98059(10 μmol/L)预刺激1h,再加入AngⅡ(0.1 μmol/L)共同培养24 h]、PD98059组[加入PD98059(10 μmol/L)培养1h]、AngⅡ+氯沙坦钾+PD98059组[先加入氯沙坦钾(1μmol/L),PD98059(10 μmol/L)培养1h,再加入AngⅡ(0.1 μmol/L)共同培养24 h]、氯沙坦钾组[加入氯沙坦钾(1μmol/L)培养4h].RT-PCR、Western blot方法测定各组T型钙通道的表达.结果 PCR结果显示:与对照组(1.000±0.315)比较,AngⅡ组Cav3.1表达量(17.930±0.954)明显增加(P＜0.01);PD98059组、氯沙坦钾组Cav3.1表达量为0.928±0.262、0.978±0.292,与对照组比较差异无统计学意义(P＞ 0.05);AngⅡ+氯沙坦钾组、AngⅡ+PD98059组、AngⅡ+氯沙坦钾+PD98059组的Cav3.1表达量分别为0.125±0.007、0.066±0.015、0.109±0.018,明显低于AngⅡ组(P＜0.01).Western blot结果显示:与对照组比较,AngⅡ+氯沙坦钾组、AngⅡ+PD98059组及AngⅡ+氯沙坦钾+PD98059组Cav3.1蛋白表达明显降低(P＜0.05);而PD98059组及氯沙坦钾组Cav3.1蛋白表达与对照组比较差异无统计学意义(P＞0.05).结论 AngⅡ通过Ras/PKCξ/MEK/ERK 1/2路径增加血管平滑肌细胞Cav3.1的表达.     

N-乙酰基-丝氨酰-天门冬氨酰-赖氨酰-脯氨酸对肌成纤维细胞分化的作用

目的矽肺是我国最严重的职业病之一。文中研究N-乙酰基-丝氨酰-天门冬氨酰-赖氨酰-脯氨酸(N-acetyl-seryl-aspartyl-lysyl-proline,Ac-SDKP)对血管紧张素(angiotensin,Ang)Ⅱ诱导的细胞外信号调节激酶信号(extracelluler signal-regulated kinase,ERK1/2)信号和Jun氨基末端激酶信号(Jun N-terminal kinase,JNK)的调控,抑制人胚肺MRC-5成纤维细胞向肌成纤维细胞的分化。观察AngⅡ是否经由ERK1/2和JNK信号诱导人胚肺MRC-5成纤维细胞向肌成纤维细胞分化以及Ac-SDKP对此过程的调节作用。方法实验分为5组:对照组(无血清培养基培养)、AngⅡ诱导组(采用100 nmol/L AngⅡ诱导MRC-5细胞)、SP600125干预组(予以JNK信号阻断剂SP600125预处理)、PD98059干预组(ERK1/2信号阻断剂PD98059预处理)和Ac-SDKP干预组(Ac-SDKP预处理)。MTT法检测细胞增殖,免疫细胞化学法检测α-平滑肌肌动蛋白(α-smooth muscle actin,α-SMA)及其上游转录因子血清反应因子(serum response factor,SRF)、p-ERK1/2和p-JNK的定位及表达;Western blot法检测Ⅰ型胶原、α-SMA、SRF和p-ERK1/2、p-JNK的表达水平。结果 AngⅡ诱导组A值(0.56±0.08)为对照组(0.27±0.05)的2.07倍;SP600125干预组、PD98059干预组和Ac-SDKP干预组A值分别为(0.39±0.02)、(0.40±0.03)、(0.36±0.05)与AngⅡ诱导组(0.56±0.08)比较,差异均具有统计学意义(P<0.05);AngⅡ诱导组的Ⅰ型胶原、α-SMA、SRF蛋白水平明显上调,分别是对照组的4.50、3.50和3.00倍;AngⅡ诱导组能够上调p-JNK和p-ERK1/2的表达,分别是对照组的6.71和7.90倍;而Ac-SDKP干预组能够抑制p-JNK和p-ERK1/2的表达,分别是AngⅡ诱导组的29.79%和46.84%。结论Ac-SDKP能够通过对AngⅡ介导的ERK1/2信号、JNK信号的调节,抑制肺成纤维细胞向肌成纤维细胞的分化。