高血压脑出血肝阳化风证患者外周血单个核细胞的蛋白质组学研究

目的通过高血压脑出血肝阳化风证、高血压病肝阳上亢证及健康对照组外周血单个核细胞的双向凝胶电泳图谱的建立,鉴定并分析差异表达的蛋白质,以探讨肝阳上亢证与肝阳化风证证本质内涵。方法用淋巴细胞分离液分离出高血压脑出血肝阳化风证组、高血压病肝阳上亢证组及健康对照组外周血单个核细胞,采用二维凝胶电泳分离三组总蛋白质,获得差异表达蛋白质,制备蛋白质组表达图谱,PDQuest软件分析,并通过基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(MALDI-TOF)和数据库对差异表达的蛋白质分析鉴定。结果建立了高血压病肝阳上亢证,高血压脑出血肝阳化风证及健康对照外周血单个核细胞蛋白质表达图谱,经比较发现,肝阳上亢证与肝阳化风证有6个相同表达的蛋白质,18个差异表达的蛋白质。鉴定出的蛋白质涉及细胞骨架蛋白、代谢酶类、细胞信号转导蛋白、抗氧化蛋白、血液蛋白等。结论高血压病肝阳上亢证与高血压脑出血肝阳化风证具有相同和差异表达的蛋白质,提示高血压病肝阳上亢证和高血压脑出血肝阳化风证有共同的物质基础和不同的本质内涵,为"肝阳化风证"证本质的深入研究奠定了基础。     

椎动脉缺血型颈椎病肝阳化风证患者外周血淋巴细胞蛋白质组学研究

目的采用双向聚丙烯酰胺凝胶电泳技术,建立椎动脉缺血型颈椎病肝阳化风证和肝阳上亢证高分辨率的二维凝胶电泳图谱,从蛋白质组学角度探讨椎动脉缺血型颈椎病中医肝阳化风证和肝阳上亢证的本质内涵。方法设颈椎病肝阳化风证组、颈椎病肝阳上亢证组及健康人对照组3组,取外周静脉血分离淋巴细胞提取蛋白质,经双向凝胶电泳,考马斯亮蓝染色获取凝胶图谱,以PDQuestV7.3.1软件对三组表达图谱进行差异分析,选定差异蛋白点进行质谱分析和SWISS-PROT数据库检索鉴定蛋白质。结果建立了颈椎病肝阳化风证组、肝阳上亢证组、健康人组外周静脉血淋巴细胞2-DE图谱;通过分析比较,发现16个蛋白质点在肝阳化风证组中异常表达,12个蛋白质点在肝阳上亢证组中异常表达,肝阳化风证组与肝阳上亢证组比较,分析发现16个差异蛋白点,3个相同蛋白质点。结论颈椎病(椎动脉缺血型)肝阳化风证与肝阳上亢证有差异蛋白又有相同的蛋白,提示同病异证在共同的物质基础上存在着不同的本质内涵。     

脑梗死肝阳化风证患者外周血淋巴细胞凝胶图谱分析

目的建立脑梗死肝阳化风证高分辨率的二维凝胶电泳图谱,从蛋白质组学角度探讨脑梗死中医肝阳化风证的本质内涵。方法设脑梗死肝阳化风证组、健康人对照组、脑梗死阴虚生风证对照组3组,取外周静脉血分离淋巴细胞提取蛋白质,经双向凝胶电泳,考马斯亮蓝染色获取凝胶图谱,PDQuestV7.3.1软件比较分析3组图谱并识别差异表达蛋白质点。结果建立了脑梗死肝阳化风证、健康人组、脑梗死阴虚生风证患者外周静脉血淋巴细胞2-DE图谱,分别获得蛋白质点459个,552个,644个;通过分析比较,发现了脑梗死肝阳化风证与阴虚生风证的相同蛋白质点8个,差异蛋白质点23个。结论提示相类证有共同的物质基础,同病异证有不同的本质内涵,为进一步研究中医肝阳化风证本质内涵奠定了科学基础。     

泛素羧基末端水解酶在肝阳化风证中的表达

目的比较泛素羧基末端水解酶在不同证中的表达及其意义。方法SD大鼠分为正常组,肝阳上亢组,肝阳化风组(包括出血性中风肝阳化风和缺血性肝阳化风)正常组不做处理,肝阳上亢组大鼠加灌附子汤4周复制肝阳上亢证动物模型,脑出血肝阳化风组大鼠加灌附子汤4周后用Ⅶ胶原酶诱导脑出血模型,复制成脑出血肝阳化风模型。脑缺血肝阳化风组大鼠加灌附子汤4周后用线栓法造成脑缺血模型,复制成缺血性肝阳化风模型。PCR法检测正常组,肝阳上亢组,肝阳化风组泛素羧基末端水解酶的基因表达情况。结果与正常组与肝阳上亢组比较,肝阳化风组泛素羧基末端水解酶表达显著下降(P<0.01)。结论泛素羧基末端水解酶在生理情况下降解突变、损伤和错误折叠蛋白质的主要途径,肝阳化风证泛素羧基末端水解酶的下降明显,提示肝阳化风证的泛素的再利用受阻,导致蛋白质异常聚积,泛素羧基末端水解酶可能成为判断疾病发展到某一阶段的标志。     

结直肠癌有无肝转移血清差异蛋白质表达的研究

目的：利用蛋白质组学技术分离、鉴定结直肠癌有无肝转移患者血清中差异蛋白质,筛选诊断肝转移的血清蛋白标志物。方法：根据入组条件,收集结直肠癌无肝转移病例、有肝转移病例,在两组中随机抽取12例血清样本,同组血清等量混合进行双向凝胶电泳,建立两组血清蛋白质双向电泳图谱,用Image—MasterV5．0软件寻找两组差异蛋白质点,MALDI—TOF—MS对差异蛋白质进行鉴定,查询生物信息数据库对差异蛋白质进行初步分析。结果：两组比较差异在2倍以上蛋白质有8种,其中5个蛋白质表达上调,3个蛋白质表达下调;两组每个差异蛋白灰度体平均值比较差异均有统计学意义（P〈0．05）。通过数据库搜索鉴定出7种蛋白质,上调的5个蛋白质分别是Transferrin、Complement component C9、RN Adirected DNA polymerase（RNA指导的DNA合成酶）、Conserved hypothetical—protein（假定蛋白质）、SEC14L17 kDa protein;下调的2个蛋白质分别是Haptoglobin和Isoform 1 of Serumalbumin。结论：结直肠癌有无肝转移患者血清中的蛋白质表达谱有一定的差异性,这些差异蛋白质可能成为诊断肝转移的血清标志物。     

终末期肾病患者血清蛋白质组二维电泳图像与正常血清蛋白图谱比较研究

目的建立和优化终末期肾病患者血清蛋白质组研究的双向电泳及相关技术,并与正常血清蛋白图谱比较。方法以固相pH梯度等电聚焦为第一向和垂直SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳为第二向,对终末期肾病患者血清蛋白质样品制备、上样量、IPG胶条、等电聚焦等进行条件优化。质谱鉴定有差异表达的其中4个蛋白点。结果成功获得终末期肾病患者血清蛋白质组电泳图谱,与正常者相比存在表达有明显差异的蛋白点。结论成功建立了终末期肾病患者血清蛋白质组研究的双向电泳技术平台。     

盆腔器官脱垂患者阴道组织比较蛋白质组学研究

目的:建立盆腔器官脱垂(pelvic organ prolapse,POP)患者及非脱垂对照者阴道组织蛋白质双向凝胶电泳图谱,并结合质谱技术分析其差异表达蛋白质,寻找POP疾病相关蛋白,以进一步阐明POP的发病机制。方法:收集绝经后年龄相匹配的POP组和对照组尿道周围阴道壁组织标本各10份,提取组织总蛋白,进行双向凝胶电泳(two-dimensional gel electro-phoresis,2-DE)得到凝胶图谱,采用Image Master 5.0 2D图象分析软件进行匹配和差异分析,识别两组间差异表达蛋白。将部分差异蛋白点胶内原位酶解后进行MALDI-TOF-MS分析,获取肽质量指纹图谱并进行生物信息学检索鉴定蛋白质。结果:得到了分辨率高,重复性好的POP组和对照组阴道壁组织蛋白双向凝胶电泳图谱,POP组的平均蛋白质点数为(871±96)个,正常对照组为(856±89)个。通过比较分析,差异表达蛋白质点数为27个。选取其中8个具有明显差异的蛋白点进行质谱鉴定,初步鉴定出5种蛋白质,其中2个蛋白质在POP组表达上调,3个蛋白质表达下调。结论:两者间存在一些差异表达的蛋白质,为阐明POP发病机制打下了坚实的基础。     

乙型肝炎病毒相关性肝癌患者的蛋白质组学研究

目的 初步探讨蛋白质组技术在精浆研究中的应用,建立乙型肝炎病毒相关性肝癌及健康者血清双向凝胶电泳图谱;筛查并鉴定二者间的差异表达蛋白质,期望从中发现有意义的分子标志物.方法 采用双向凝胶电泳(2-DE)分离乙型肝炎病毒相关性肝癌和健康者血清总蛋白,银染显色,PDQuest7.3.0软件分析,从中选取差异表达蛋白质,通过基质辅助激光解析电离飞行时间质谱(MALDI-TOF-MS)鉴定差异表达的蛋白质.结果 获得分辨率较好的精浆双向凝胶电泳图谱;得到8个在乙型肝炎病毒相关性肝癌与健康者血清中差异有统计学意义的蛋白质斑点,进行鉴定,结果 表明这些特异蛋白分别为肝脂肪酸结合蛋白、谷胱甘肽S转移酶A1、27×10~3热休克蛋白、黄素还原酶、假定蛋白、醛酮还原酶、乙二醛酶、细胞角蛋白18.结论 在乙型肝炎病毒相关性肝癌与健康者血清中表达蛋白质差异有统计学意义,利用蛋白质组学这一高通量的筛查技术可望从中发现与乙型肝炎病毒相关性肝癌相关的血清标志物.     

iTRAQ结合MALDI-TOF/MS检测涂阴肺结核患者血清差异蛋白

目的利用差异蛋白质组学方法检测涂阳和涂阴肺结核患者血清差异表达蛋白,以发现涂阴肺结核相关的潜在标志物,为临床治疗提供参考依据。方法分析2011年医院的住院患者39例临床资料,采用iTRAQ标记结合MALDI-TOF/MS筛选30例痰涂片阴性和9例痰涂片阳性的肺结核患者血清的差异表达蛋白,并进行生物信息学分析,数据采用SPSS 17.0软件进行统计分析。结果 3次独立重复试验一共筛选和鉴定到344种蛋白质,其中置信度在>95.0%有271种蛋白质;与涂阳肺结核患者血清蛋白多肽图谱相比,涂阴肺结核患者血清中11种蛋白表达水平显著增高,7种蛋白表达降低(P<0.05);生物信息学分析发现差异蛋白主要定位在细胞外,参与酶抑制剂活性和应激反应过程。结论涂阴和涂阳肺结核患者血清蛋白多肽图谱存在明显差异;处于关键节点上的6个蛋白可能与涂阴结核病的发生发展有密切联系。     

血清蛋白质谱结合人工神经网络在宫颈癌诊断中的应用

目的:采用蛋白质芯片表面增强激光解吸电离飞行时间质谱(SELDI-TOF-MS)技术检测宫颈癌病人血清蛋白指纹图谱,通过差异蛋白组学筛选特有的蛋白标记物。方法:应用SELDI-TOF-MS技术和WCX2(弱阳离子)芯片采集58例宫颈癌患者和57例健康人血清蛋白质指纹图谱,采用Biomarker Wizard软件筛选差异蛋白质组。将115例血清随机分为两组:以训练组30例宫颈癌患者和30例健康人建立人工神经网络(ANN)模型,以验证组28例宫颈癌患者和27例健康人血清标本用于模型的双盲法验证。结果:宫颈癌患者与对照组血清蛋白质指纹图谱有145个差异表达的蛋白质峰(P0.05),筛选出质荷比(M/Z)分别为5912、5642、8702、4320、6432的标志蛋白(P10-6),建立人工神经网络模型,其对宫颈癌的诊断敏感性为92.86%,特异性为88.89%,阳性预测值为89.66%,阴性预测值为92.31%。结论:特征蛋白在宫颈癌患者较正常人血清明显的高表达或低表达,可能对宫颈癌的早期诊断和治疗后随访具有重要的指导意义。     

甲亢肝阳上亢证大鼠肾上腺组织蛋白质组的双向电泳分析

目的观察甲亢肝阳上亢证大鼠与正常大鼠肾上腺中蛋白质的差异表达，以期发现诊断甲亢肝阳上亢证的标志物，为进一步探讨甲亢肝阳上亢证的分子机制提供依据。方法左旋甲状腺素（L-T4）和附子汤灌胃造成甲亢肝阳上亢证模型，应用蛋白质组学技术比较模型组与正常组中肾上腺的差异蛋白质，结合生物信息学对其进行分析鉴定。结果模型组与正常组相比有33个蛋白质上升和6个蛋白质下降，进一步质谱鉴定，其中6个蛋白质为GrpE蛋白同系物1、60kDa热休克蛋白、脂酰辅酶A脱氢酶、钙网织蛋白前体、醛脱氢酶、异戊酰辅酶A脱氢酶。结论甲亢肝阳上亢证大鼠肾上腺中具有特异表达的蛋白质，经质谱鉴定后发现，其蛋白质的变化可能与甲亢肝阳上亢证的形成密切相关。     

高血压脑出血的内镜下外科治疗进展

高血压性脑出血病在临床中属于高血压疾病中最严重的一种并发症。高血压性脑出血并在临床中会导致患者出现剧烈头痛、恶心以及呕吐的情况,甚至出现昏迷、偏瘫、颅内压增高、呼吸障碍等,会为患者带来较为严重的影响。所以,高血压性脑出血病患者在临床中必须要得到及时的治疗,以确保患者不会因为治疗不及时而出现死亡现象。随着如今医疗技术的快速发展,高血压脑出血患者的临床治疗也得到了不断的发展,并且在发展的过程中已经可以更好地为患者减少术后并发症的发生,可以有效地减少患者的病死率,帮助患者可以更好地脱离疾病危险。     

三邻甲苯磷酸酯染毒鸡大脑组织中迟发性神经毒性相关蛋白的筛选

目的 从三邻甲苯磷酸酯(TOCP)染毒鸡大脑组织中筛选迟发性神经毒性(OPIDN)相关差异表达蛋白,为进一步探讨OPIDN机制提供靶标蛋白.方法 成年罗曼鹤母鸡32只随机分成1000mg/kg TOCP组(染毒组)、先给40mg/kg PMSF后24 h再给予1000 mg/kg TOCP组(PMSF干预组)、给予40 mg/kg PMSF组(PMSF组)和给予生理盐水的对照组,每组8只.一次性染毒后第5天处死动物,低温环境下分离大脑,匀浆,高速离心提取总蛋白.通过双向凝胶电泳获得完整的全蛋白质图谱,运用图像分析软件(Image Master 2D)对银离子染色的电泳图谱进行分析,并对所选取的蛋白点进行质谱鉴定.结果 染毒组、PMSF干预组和PMSF组鸡大脑组织总蛋白中,分别检测到1185、1294和1063个蛋白点,对照组检测到1332个蛋白点.与对照组比较,染毒组、PMSF干预组和PMSF组匹配率分别为78.32%、79.56%、80.93%.与对照组比较,染毒组差异表达蛋白点有235个,其中,上调点有158个,下调点有77个.根据PMSF的作用特点,在TOCP组中选择与对照组比较差异明显且与PMSF干预组无明显差异的蛋白匹配点,共获得有102个.其中差异表达4倍以上且与PMSF组二次匹配差异无统计学意义的蛋白点有13个.对这些蛋白点做进一步质谱分析和鉴定,获得7个蛋白:homer-1b、Destrin蛋白、热休克蛋白70、真核翻译起始因子、蛋白酶体α1亚基、乳酸脱氢酶B、代谢性谷氨酰胺合成酶.结论 TOCP染毒鸡大脑组织中有112个差异表达蛋白点,可能与OPIDN诱发有关,其中13个差异表达蛋白点可能与OPIDN诱发有密切的关联性.质谱鉴定出7个可能与OPIDN机制关联的蛋白.

Abstract：

Objective To screen the proteins with differential expression levels in the cerebral tissue of hens exposed to tri-ortho-cresyl phosphate (TOCP),and to provide target proteins for studying the mechanism of organophosphoms ester-induced delayed neurotoxicity (OPIDN). Methods Thirty two adult Roman hens were randomly divided into four groups: TOCP group was exposed to 1000 mg/kg TOCP, PMSF group was exposed to 40 mg/kg PMSF, PMSF plus TOCP group was exposed to 40 mg/kg PMSF and after 24 h exposed to 1000 mg/kg TOCP, control group was exposed to normal saline. All hens exposed to chemicals by gastro-intestine for 5 days were sacrificed, and the cerebral tissue were dissected and homogenized in ice bath. Total proteins extracted from the cerebral tissue were separated by isoelectric focusing as the first dimension and SDS-PAGE as the second dimension. The 2-DE maps were visualized after silver staining and analyzed by Image Master 2D software. At last ,the expressed protein spots were identified by Mass spectrometry. Results From total proteins in TOCP group, the PMSF plus TOCP group and PMSF group, 1185, 1294 and 1063 spots were detected, respectively. One thousand three hundred thirty two spots from total proteins in control group were detected. The match rates of protein spots in TOCP group, the PMSF plus TOCP group and PMSF group were 78.32 %, 79.56 % and 80.93%, respectively. There were 235 protein spots with differential expression levels between TOCP group and control group, which included 158 up regulation spots and 77 down regulation spots. According to the PMSF features, there were 102 spots with differential expression levels between TOCP group and control group and without differential expression levels between TOCP group and PMSF plus TOCP group, among them there were 13 spots with 4 fold differential expression levels between TOCP group and control group and without differential expression levels between TOCP group and PMSF group. Seven protein spots (homer-1b, Destrin, heat shock protein 70, eukaryotic translation initiation factors, proteasome α1 subunit, lactate dehydrogenase B, glutamine synthetase) were detected by Mass spectrometry. Conclusion There are 112 protein spots with differential expression levels of the cerebral tissue in TOCP group,which may be related to OPIDN,among them 13 protein spots with differential expression levels are associated closely with OPIDN.Seven protein spots detected by Mass spectrometry may be related to the mechanism induced by OPIDN.     

三氯乙烯药疹样皮炎差异血清蛋白的筛选及鉴定

目的 筛选并鉴定三氯乙烯(trichloroethylene,TCE)暴露者、TCE药疹样皮炎急性期及恢复期差异血清蛋白.方法 收集TCE暴露者血清(Ⅰ组)、TCE药疹样皮炎急性期患者血清(Ⅱ组)和TCE药疹样皮炎恢复期患者血清(Ⅲ组)各5份,各组血清样本等量混合,去除白蛋白、IgG等高丰度蛋白后经除盐处理并定量.采用双向凝胶电泳技术对上述3组混合血清分别进行蛋白分离,银染后扫描成像,用ImageMaster Platinum 2D 5.0软件进行分析,筛选差异蛋白,并应用基质辅助激光解析电离飞行时间质谱(MALDI-TOF-MS)进行鉴定.结果 经去除高丰度蛋白和除盐处理后获得了分辨率高、重复性好的双向电泳图谱,处理后血清蛋白检出量增至(300±12)个.经MALDI-TOF-MS鉴定得到5个差异蛋白,分别为:补体4b、载脂蛋白A-Ⅰ、载脂蛋白C-Ⅲ、载脂蛋白C-Ⅱ和转甲状腺素蛋白.补体4bⅢ组相对Ⅰ组表达量为1.352 88,表达上调.Ⅱ组相对Ⅰ组血清中载脂蛋白C-Ⅱ相对表达量为1.512 14,表达上调;载脂蛋白A-Ⅰ、载脂蛋白C-Ⅲ和转甲状腺素蛋白相对表达量分别为-1.601 17、-1.034 49、-1.313 35,表达有所下调.结论 筛选的差异蛋白功能与机体免疫及肝功能异常有关,为阐明TCE致TCE药疹样皮炎作用机制及筛选相关生物标志物提供了重要信息.     

1 596例脑出血临床分析研究

[目的]探讨不同发病原因脑出血的临床特点。[方法]研究分析1596例脑出血的发病原因与年龄、出血部位、并发症和预后的关系。[结果]有明确病因者1401例(87.78%),病因不明者195例(12.22%)。其中,中老年患者常见原因是高血压(83.92%),青年患者脑出血以不明原因(48.73%)和脑血管异常(17.26%)多见;高血压最常见的出血部位是基底节出血(91.06%);脑血管异常多见的出血部位是脑叶出血(82.35%);血液系统疾病和高血压合并内科疾病出现并发症几率较高(分别为26.32%,21.74%);血液系统疾病引起的脑出血预死亡率最高(73.68%)。[结论]脑出血的病因以高血压最常见,不同发病年龄病因不同;高血压最常见的出血部位是基底节,脑血管异常多见的出血部位是脑叶出血;血液系统疾病引起的脑出血出现并发症几率高,预后不良。     

HIF-1α、VEGF在高血压脑出血灶周的表达和意义

目的观察血肿周边脑组织中HIF-lα和VEGF的表达情况并探讨二者表达的相关性。方法应用免疫组织化学技术、RT-PCR和Western蛋白印迹技术检测39例脑出血灶周脑组织中HIF-lα和VEGF的表达。结果脑出血灶周脑组织中HIF-lα、VEGF蛋白和mRNA的表达均随时间进行性增加,与正常脑组织组比较差异有统计学意义(P﹤0.01)。脑出血后不同时间HIF-lα、VEGF蛋白表达阳性率和mRNA分别比较,差异均有统计学意义(P﹤0.05);脑出血后HIF-1α和VEGF蛋白及mRNA的表达均呈正相关。结论 HIF-lα与VEGF在血肿周边脑组织中均有表达并具有一致性,可能与脑出血后微循环的重建有关。     

高血压脑出血急性期性激素水平变化与预后的相关性研究

目的探讨高血压脑出血急性期性激素水平变化与预后的关系,为临床有针对性地治疗高血压脑出血,改善患者预后提供指导和依据。方法本研究选取我院2016年1月—2018年10月收治的220例高血压脑出血患者作为研究对象,所有患者按照预后不同分为预后良好组(137例)和预后不良组(83例);对两组患者[孕酮(Progesterone,P)、睾酮(Testosterone,T)、雌二醇(Estradiol,E2)]水平进行比较。结果预后良好组急性期第1、3、7 d血清E2及P水平均高于预后不良组(P<0.05),T水平低于对照组(P<0.05)。结论高血压脑出血患者急性期性激素水平与预后有一定关系,血清E2及P水平越高,T水平越低,预后越好。     

高血压脑出血患者院前急救与护理

目的探讨院前急救与护理对患者预后的影响。方法院前急救为观察组、未经院前急救为对照组进行对比分析。结果脑出血患者经过院前急救的病死率明显低于未经院前急救的。结论积极有效的院前急救与护理能提高病人的抢救成功率,减少伤残率,已成为急诊医疗体系的重要组成部分。     

直切口小骨窗开颅治疗老年高血压脑出血48例分析

目的：探讨直切口小骨窗开颅治疗老年高血压脑出血的手术方法及疗效。方法：对直切口小骨窗开颅治疗老年高血压脑出血48例临床病例资料进行回顾性分析。结果：术后12h内复查头颅CT,血肿清除均达80%以上。根据日常生活能力评分（activitiesof daily living,ADL）分级,手术后随访3～6个月,I级10例,II级14例,III级10例,IV级4例,V级2例,VI级8例。结论：老年高血压脑出血病情严重,但是高龄不是手术禁忌,采用直切口小骨窗开颅治疗老年高血压脑出血可以降低病死率,提高生活质量。